1SOLASI DAN KARAKTERISASI ENZIM RESTRIKSI

BAM HI DART BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS H

 ABSI'FLAK

Enzim Bam HI diisolasi dari biakan bakteri BacilIus

amklcriiquefacierrs H pada waktu pertumbuhan akhir fase
logaritma, melalui tahapan kerja sebagai berikut : pemecahan

sel digerus dengan serbuk alumina; isolasi enzim dari ekstrak

kasar dengan pengendapan amonium sulfat pada kejenuhan 50-

GO'!.; tahap pemurnian dengan kolom Sephadex G-25, menghasilkan

Bam HI dari fraksi ke-13 , 14 dan 15; dan pengerjaan pemurnian

lebih lanjut dengan kolom DEAE-Cellulose , menghasilkan Bam HI

yang ditunjukkan oleh puncak ke-1 dari lima puncak yang

diperoleh.

Pengujian aktivitas enzim endonuklease Bam HI pada semua

tahap isolasi, dilakukan dengan reaksi restrik.si terhadap

substrat DNA, dan hasilnya dimonitor dengan elektroforesis
gel agarose. Uji kemurnian dilakukan dengan elektroforesis
gel poliakrilamid menunjukkan bahwa, hasil pengerjaan dengan

kolom Sephadex 6-25 memberikan lima pita protein pada kolom

elektroforesis.
 ABSTRACT

Bam HI restriction endonuclease was isolated from

culture of Bacillus amyloliquefaciens at its late logaritmic

growth phase. The cells were disrupted grinding with

alumina. Precipitation of protein from the solution mixture
was carried out by ammonium sulphate method with 50-80 %
saturation, which showed highest enzyme activity.
A column of Sephadex G-25 was applied for purification
of the precipitate. The endonuclease test indicated that
enzyme activities were found in column fractions number 13,
14 and 15. The endonuclease activities were tested and then
chromatographed with DEAE-Cellulose .
The activity test were carried out to each enzyme
fraction of the isolation steps. Its purity was performed by
poliacrilamide gel electrophoresis. The result indicated five
protein bands on the electrophoretic gel.