Proteinas Patogénicas Hemoglobinas * 4 globinas unidas por ligagdes nao covalentes. Cada globina pode ser de um tipo diferente. No bolsao do heme se acomoda o gupamento heme, que possui ferro necessario para carregar uma molécula de 02. As globinas podem ser diferentes (muito parecidas por ter um ancestral comum) e geralmente est&o em pares. HbA1 (2 alfa e 2 beta) HbA2 (2 alfa e 2 delta). * Ferro do grupamento heme se liga de um lado a um residuo de histidina PROXIMAL, e do outro se liga a uma molécula de 02. Estrutura é de 8 alfa-hélices conectadas por algas. Nessa conformagao, 7 desses segmentos delimitam uma fenda, aonde se localiza o heme. Histidina PROXIMAL F8 é 0 aminoacido que se liga covalentemente ao heme. * Globinas possuem cerca de 30 aminoacidos sempre idénticos em todas elas, ao passo que a estrutura é a mesma. Dessa forma, poucos aminoacidos participam da estrutura espacial da familia das globinas. Dessa maneira, como eles so sempre idé! icos, indica que ao longo da evolugao das proteinas esses residuos nao toleram alteragdes. * Mioglobina (armazenamento de 02 nas fibras esqueléticas vermelhas) é formada por apenas uma globina e nao possui os mecanismos de regulagao como a hemoglobina, resultando em uma afinidade naturalmente muito maior pelo 02, o que é importante para sua fungdo de armazenamento. No bolsdo do heme, é provavel que existam aminoacidos positivos e neutros pois o heme apresenta uma porcao polar negativa e uma por¢do apolar Hemoglobina possui alleragdes na sua estulura na sua forma oxigenada ou desoxigenada. Esse mecanismo de alteragao de estrutura é importante para a regulagdo de sua afinidade. * Curva de saturagao da hemoglobina é sigmoide, ao contrario do da mioglobina, que é hiperbolico. Essa curva é resultante da afinidade variavel da hemoglobina por conta do efeito bohr e efeito BPG. Alem disso, a cooperatividade influencia no aumento da afinidade em baixas pressées. Cooperatividade ocorre pois uma molécula de Hb oxigenada ajuda a estabilizar esse estado oxigenado.Vara aas se mover Estado T da hemoglobina significa estado DESOXIGENADO, enquanto estado R significa estado OXIGENADO. 4 Efeito Bohr: Afinidade da Hb diminui com a diminuigao do pH, pois 0 aspartato tende a ficar em sua forma nao-ionizada, perdendo pontes de hidrogénio. Nos tecidos, o pH é mais baixo e, por isso, a HbO2 libera 02 e vira HDH+. No pulmao, 0 pH é mais alto, pela constante liberagao de C02, favorecendo a captura do 0? pela Hb. 0 CO? alto nos tecidos é um dos fatores do aumento de pH, pois ele é transportado em sua maioria na forma de bicarbonato, que é conjugado com H+. Pode ser transportado na porgao N-terminal da hemoglobina, formando carbamino-hemoglobina. 4 J 80+60) >< omens A importancia da anidrase carbénica oe em) se da pois com a mudanga de pH do meio dos tecidos dos pulmées, a hemoglobina “sente" a alteragado no equilibrio muito mais rapido, pois ocorre uma maior eficiéncia na movimentagao de prétons a pkteoetie+a, seo: Efeito BPG: Diminui a afinidade da Hb com 02 por alterar a conformagao quando se liga no meio da hemaglobina. Curva sem BPG quase nao tem sigmoide. BPG é 0 2,3 - bifosfoglicerato, resultante da mutase do 1,3 - bifosfoglicerato proveniente da glicdlise. A enzima mutase é presente so em hemacias e é indutivel por fatores de transcric¢ao. Essa enzima geralmente é induzida em pessoas que moram em altas altitudes para aumentar a quantidade de oxigénio efctiva que vai para os tecidos. Mas se o BPG diminui a afinidade, como ele é responsavel por aumentar ooxigénio que é liberado nos tecidos? Isso ocorre pois ao mesmo tempo em que o BPG diminui a quantidade de oxigénio capturado pelo sangue nos pulmées, ele diminui mais ainda a quantidade que o sangue segura nos tecidos, resultando em uma liberagéo maior. BPG é formado por dois fosfatos, portanto possuindo carga negativa. Se algum aminodcido de carga positiva estiver apontado para o centro da hemoglobina (das 4 globinas) ele vai aumentar a afinidade por BPG e, por consequéncia, diminuir a afinidade por 02. No geral, a fungao do efeito Bohr é garantir o transporte dos tecidos, enquanto 0 efeito BPG é para regular a quantidade de 02 que chega aos tecidos, de acordo com a quantidade que chega aos pulmées. Outra alteragao fisioldgica se trata do aumento do numero de hemacias, no entato esse processo é mais lento, apesar de mais efetivo. A one gaan renown Meet Seem 08m) net 90" Som et ¢ 7 + 40 60 po, (kra) is POULT * Hb fetal 6 composta de duas cadeias alfa e duas cadeias gamas. Durante a vida embrionaria/fetal, diferentes genes sao expressos sucessivamente. A Hb embsondrias Ho Gomer Gt Ho Gower? as, HbPortind cs 15 Tot Hamectain Hb Fetal Hbaduto af as, © griico mostra a sucessde de derentes hemoglbinas ea sua composigdo em cadeias, lbinicas presentes no embido, fet (apts @ 12a semana) eno aduto. Apos 0 nasc ‘ent, oom a represses de sintese a cade © aumento da sintese de caacia focor® Soca dar al HA. que Se cone ete 03 ets de via, Nesa ese 3 ‘muito importantes os bares dea" Inibig&o da expresso da globina gama, e aumento da expresso da globina beta, caracterizando uma troca de HbF para HbA. Lisina da cadcia beta é substituida por serina na cadcia gama. A lisina é uma molécula positiva, que possui afinidade com BPG. Portanto, diminuiafinidade com BPG e, nos mesmos niveis de pO2, apresenta mais saturagao de 02 * HbF tem muito mais afinidade pelo 02 (por ter menor afinidade com BPG) do que a HbA, por isso O2 vai para o HbF na placenta. A cers Hemoglobin 8 Cte] a / rn ae p02 (torr) A.curva sigmoide da hemoglobina é consequéncia da cuoperatividade existente em suas globinas, na qual uma estar oxigenada favorece o encaixe de moléculas de 02 no grupo heme das outras. Também ocorre por consequéncia dos mecanismos regulatérios (efeito Bohr ¢ efeito BPG) * Hemoglobinopatias: Mutagdes na hemoglobina. 50% na cadeia beta e 25% na cadeia alfa. 1) Hemoglobinas M: Substituig6es nas histidinas que permitem a oxidacao do ferro da forma ferrosa (Fe+2) para a forma ferrica (Fe+3). A ligagdo covalente da histidina promove um efeito protetivo quanto a oxidagao. O ambiente oxida espontaneamente o ferro das hemoglobinas, tornando-as em metahemoglobina (incapaz de transporte) no entanto o organismo possui Meta-Hb redutase, que pode reverter essa situagao com agentes redutores como vitamina C. No caso da hemoglobina M, a falta da ligagao covalente da histidina impede a possibilidade de redugao. 0 acumulo de meta Hb é toxico pois pode levar a acimulos de corptisculos de Heinz nas hemaceas. 2) Hemoglobina S (HbS): Ocorre substituigdo de um residuo de glutamato por um resfduo de valina. O efelto hidrofébico gerado promove o dobramento das hemacias, por aproximar essa valina de residuos de fenilalanina e leucina de outra molécula. Essa interagado promove a aglomerag4o das hemoglobinas em fibrilas. A interagdo ocorre entre cadeias beta. * O maior problema do dobramento nao sao alteragées na afinidade damolécula de Hb pelo 02 (nem no efeito Bohr, BPG ou cooperatividade), mas sim que as hemacias dobradas sao mal-reconhecidas pelo bago e sao quebradas com mais seletividade, resultando em quadro anémico. * Outro ponto a se considerar é que o dobramento s6 ocorre em Hb desoxigenadas, pois 0 oxigénio afasta os residuos. Portanto, um aumento normal de pO2 resulta no desdobramento. Resisténcia 4 Malaria: O Plasmodium Sp., quando infecta uma hemacia, promove uma leve diminuig&o do pH. Essa diminuigao do pH gera uma maior desoxigenagao das Hb, que, em caso de HbS, gera um dobramento. Assim, 0 baco vai acabar quebrando a maior parte das hemacias infectadas, pois a tendéncia é que a maior parte das hemacias dobradas estarao infectadas. 4 hes 3) Hemoglobina Porto Alegre: Substitui¢ao de uma serina por uma cisteina. Em ambiente oxidante, essas cisteinas podem formar pontes dissulfetos e gerar tetrameros de Hb. Essa polimerizagao ocorre mais em sangue armazenado, pela perda do ED" " OD poder redutor (nao pode doar sangue). § § Tetramero de HbPADoengas Conformacionai * Afetam a fungao de proteinas através do dobramento e nao por mutagdes na sequéncia primaria. Prions: Proteinas que agem como agentes infecciosos. Causam encefalopatias esponiformes transmissiveis. Scrapie, nas avelhas e doenca da vaca louca. O contato com essas proteinas alteradas é contagioso. Afetam prioritariamente tecido nervoso. Sintomas séo deméncia, paralisia, placas amildides e vacuolizagao dos tecidos do cérebro. Dificil diagndéstico (sintomas caracteristicos aparecem em estagios avangados) e nao existe tratamento que atrase a neurodegeneragao. * Ocorre o mal dobramento da proteina PrPc (alfa-hélices) em proteinas PrPsc (folhas beta). * Proteinas PrPc se encontram na membrana neuronal com uma ancora de glicosifosfoinositol (GPi), com fungées de defesa contra o estresse oxidalivo, metabolism do Cut2 e sinalizayao celular. * Proteinas PrPsc possuem a mesma sequéncia primaria, no entanto em sua estrutura secundaria prevalecem folhas beta e ela se agrega no sistema endossomo-lisossomo. Sendo insoltiveis e neurotéxicos. Camundongos knockout (sem o gene da PrPc) provaram-se imunes a infeccgao. * A doenga pridnica e outras doengas amiloides sao prevalentes em mais velhos por dois motivos: As chaperonas vao perdendo a fungao e vao deixando passar cada vez mais proteinas mal-dobradas; a degradagao por ubiquitina-proteossomas também perde sua fungao com o tempo, nado conseguindo lidar com a proteinas mal-dobradas e favorecendo seu acumulo. Degradagao proteolitica é dificultada pela sequéncia primaria idéntica * A descoberta dos prions quebrou paradigmas: 1) A conformagao nativa nao é necessariamente a mais energeticamente favoravel, alguma determinada energia pode direcionar o dobramento para uma posicdo mais estavel ainda. pres 4 PipeDoenga de Alzheimer: Actimulos de placas amiloides. Ocorre pela clivagem anormal de uma proteina de membrana gera beta-amiloides, que promove o acumulo de placas insoltiveis nos neurénios. Mal dobramento da proteina TAU também gera fibrilas insoluveis. 4 TABLE 1 Common neurodegenerative diseases characterized by deposition of aggregated proteins Microscopie Iesion | Loco Aggregated proven Amyloid plage Extncelaar Ampoul (AB) ‘Neurol rangle [Intype To > Supennide dimers GOD) Traracyroplasmic (curons Te olgedendrogha a atrocyes) Pick bodies Tu Spinocerebellar sania | Neuronal nclesions | Tneranuclear (neurons) Araxin (containing polyglotamine Evolugao das Proteinas * Visualizagao da estrutura espacial das proteinas e nocdo de que proteinas novas se originam de proteinas ja existentes * Foi percebido que a estrutura primaria de algumas proteinas sao extremamente Parecidas umas com as outras, variando em poucos aminoacidos. Dessa maneira, da mesma forma que espécies evoluem de um ancestral comum, as proteinas devem seguir essa linha de raciocinio. Citocromo C: Presente na membrana interna da mitocéndria, e associando ao complexo IV da cadeia respiratoria. No centro do citocromo C existe um grupamento heme. Proteinas sao geralmente incolores por nao interagirem com comprimento de luz visivel, porém o citocromo C interage com essa faixa, provavelmente pela quantidade de ressonancia.