DOZAREA TRIGLICERIDELOR IN SER (metoda enzimatica)

Trigliceridele sunt esteri ai acizilor grasi cu glicerol,fiind considerate lipide simple si

avand urmatoarea structura:

Grăsimile naturale sunt constituite aproape exclusiv din TG. Mono și di gliceridele
sunt intermediari în cursul degradării și sintezei TG, găsindu-se în cantități mici în țesuturi.

Prin hidroliza trigliceridelor sub actiunea lipazei pancreatice se elibereaza 2 molecule

de acid gras si 2-monoacil – glycerol (monoglicerid). (vezi imaginea ).
 biology/nutrition-and-digestion/chemical-digestion/example-fat-lipid-digestion.html

Sursa trigliceridelor este fie exogena din absorbtia lipidelor (alimentare), fie endogena,
pornind de la glicerol-3-fosfat si acizi grasi activati (Acil-CoA). (se va discuta la curs)
In ficat si tesutul adipos are loc cea mai importanta sinteza de trigliceride.
Trigliceridele sintetizate in ficat sunt incorporate in VLDL (structuri de lipoproteine) si
transportate prin sange.

Lipidele alimentare (exogene)

circula in sange sub forma de
chilomicroni , iar cele endogene
sunt transportate de VLDL.

Trigliceridele sintetizate in tesutul adipos reprezinta forma de depozit si constituie

principala sursa de acizi grasi ce va fi eliberata in conditii de nevoi energetice. (v.fig.1)
 Fig.1Țesut adipos

Principiul metodei de dozare:

Trigliceridele (TG) sunt hidrolizate la acizi grasi (AG) si glicerol in prezenta lipazei.
Urmeaza o succesiune de reactii enzimatice astfel :

TG AG + Glicerol (lipaza)
Glicerol + ATP Glicerol-3-P + ADP (reactie catalizata de glicerol kinza
GK)
Glicerol-3-P + O2 DHAP + H2O2 (reactie catalizata de glicerolfosfat-
oxidaza, GPO)
H2O2 + 4- Clorfenol + PAP* compus quinoniminic (rosu) + H2O
(reactie catalizata de peroxidaza POD)

PAP*= 4- amino-antipirina
Intensitatea coloratiei compusului obtinut este direct proportionala cu concentratia de
trigliceride din ser. Se efectuează măsurarae absorbanței standardului și probei față de martor
la 500 nm.

Reactivi (gata preparati):

1. Solutie tampon
2. Reactiv enzimatic gata preparat
3. Solutie etalon (standard) TG 200mg/dl (2.26 mmol/l)

Proba de analizat : ser recoltat pe vacutainer fara anticoagulant, cu/fara gel

separator. Pentru dozarea TG serice recoltarea sangelui se face a jeun, fiind indicat un repaus
alimentar de 10-12 ore.
Nu sunt acceptate spre analiza seruri intens hemolizat / sange recoltat interprandial
care pot modifica valoarea rezultatului.
 Aspect ser recoltat interprandial (intens lactescent ) – criteriu de respingere proba.

Mod de lucru :

Reactivi (µl) Martor (µl) Standard (µl) Proba (µl)

ser - - 10
standard - 10 -
reactiv de lucru 1000 1000 1000
H2O distilata 10 - -

Se lasa in repaus la temperatura camerei 15 minute si se citesc absorbanta

standardului si probei fata de martor la 500 nm.

Calcule :
Ap/As x Cs = conc. de TG (mg/dl)

Valori de referinta :

Optim (normal)
<150 mg/dl

Borderline (valori de graniță)

150-199 mg/dl

Crescut
200-499 mg/dl

Foarte crescut
≥500 mg/dl

Valori de alerta clinica - >500 mg/dL in prezenta pancreatitei diagnosticate; >1000

mg/dL risc de pancreatita. Pancreatita- afecțiune caracterizată prin inflamarea
pancreasului și care apare atunci când sucurile şi enzimele digestive atacă
pancreasul (organ aflat în partea superioară și central-profundă a abdomenului, care
produce enzime digestive (funcție exocrină) și insulină (funcție endocrină).

Interpretare rezultate:

Valori crescute (Hipertrigliceridemie):

A. Izolata- la adulti valori 200 mg/dl constituie hipertrigliceridemie si poate aparea in
pancreatita, guta, ateroscleroza, hipotiroidism, diabet zaharat, alcoolism, boli hepatice.
B. Cu determinism gentic (hipertrigliceridemia familială):
a. Hipertrigliceridemie familiala, afectiune cu transmitere autosomala dominanta in care
apar cresteri ale VLDL.
b. Deficit familial de lipoprotein lipaza- determina acumulare de chilomicroni in plasma.

Valori scazute:

Malabsorbtie, malnutritie, abetalipoproteinemii

Exceptii : rezultate fals pozitive pentru hipertrigliceridemie pot aparea in post prelungit

Limite si interferente:
Variatia intraindividuala este de 12-40% (valori minime dimineata si valori maxime in jurul
pranzului).
Cresteri tranzitorii pot aparea dupa un pranz bogat si ingestie de alcool. Valori crescute pot
fi intalnite in sarcina, obezitate, lipsa activitătii fizice, fumat.

Pot determina valori scazute efortul intens (scadere tranzitorie), modificarea dietei (in
interval de trei saptamani), pierderea ponderala (scadere permanenta).

Obs. dozarea TG se face alaturi de alti parametri biochimici constituind examenul de

evaluare a profilului lipidic, atfel ca dozarea individuala a TG nu poate oferi informatii
suficiente in stabilirea unui diagnostic.Alaturi de alti constituienti ai metabolismului lipidic
(colesterol, fractiuni de colesterol etc.) nivelul crescut al TG este asociat cu afectiunile
coronariene ( ex. IMA), ateroscleroza, accident vascular etc.