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Washington, D.C. 1 Determinactén de Safmonstfa spp. en al eauetivos: Analizar la noma rricrobiolagicn causante de toxi Conocer las mei aliments, GENERALE 2 ia familia d fac animales, espe Jocalizar este micro Industria vansform: animales, ‘menolonar solamen's algunas. Las espaci estudiadas como agenies patigenos’ cuando se alimentos. Der fentos asociados transm microorganismo, los ya mencionadas con a de res y aves crudas productos ldcteos, pescado, lancas de ranas, coco, salsas y srerezos para ensaladas, mezclss ps postres rellenos oar i vo, crema és cocoa, chocolat ¥ ge cascarén de las nuevas, esta nse compl prese ‘enteritidis que slgunas veces se localiza en la yeme de los huevos : | inforrtaciones, sugiaren uns ftuene ovidencis de tran ‘entrada del microorg raves de la gall antes de la foracin dot c genes, después de 3.2 4 semanas de haberse astablecido los si liempo de incubacién de este microorganisma an ei humane as de 6 no abstante existen otras variedades de salmanelosis que presentan c bbenignos. La duracion de los sintomas puede sor de 12 2 dias o dependiendo de faclores como ef huesped, dosis infective y cara tiva, es baja aproximadamente de 15 a 20 células bac obstante también devende de uésped, ssi biotipas de fae especies de SaiEste microorganismo fue inicialmente identficado en hospitales y laboratorios icos y los métodos empleados para su deteccién, se adaplaron po: andlisis. de aspectos pi los protocaios para el imiento de Salmonella (ver apéndice A), todos elias son esencialmente fen principio -y emplean las etapas de _preenriquecimicnto, ato. seleclivo, aistamiento en medios de cullivo selectivos y les, identifeacién bioquimica y canfirmacion seroldgica de los microorganismos, Un método general para la determinacién de Salmonella en alimentos, describe un esquema general que cansiste en 5 pasos bssicos .) Preenriquecimiento, es el paso en donde la muestra es enriquecida en un medio nutriivo no selective, que permite reslaurar las células de Salmonella daadas, logrando de esta manera una condicion fsiologica estable del ‘microorganism | Enriquecimiento selectivo, se logra a partir de un modio de cultivo que conjunts dos condiciones, por un lado debe incrementar les poblaciones de Salmonella y Por oro inhibir otros microorganisms presentes en la muestra, 1 Este punto se deriva directamente det anterior y consiste en la seleccién de medios de culivo sélidos, que rest iferentes 3 Salmonella y que permitan colonias sospechosas, -acién serologica, es una écnica a -acién espocifica de un miccoorganismo, MEDIOS DE CULTIVO 1 matraz Exlenmeyer de 600 mi de capacidad, conteniendo 225 mi de caldo lactosado estéril o butter de agua peptonada’ tubo de ensayo de 16x150 mm conteniendo 10 ml de caldo selenito-cistina® lubo de ensayo de 16150 mm conteniendo 10 ml de calda tetrationato” 1 caja de Petri estéril con 20 ml de agar xlosa lsina dasoxicolato (XLD)* 4 caja de Petri esterl con agar bils verde brilante (VB)« 1 caja de Petri ester con agar enterica de Hekiden (HE) 4 caja de Peiri esteril con ager sulfito ce bismuta (Si 4 caja de Petn estén con agar para Safmonelia y Shigells ($8) 2 tubos de ensayo de 13x100 mm conteniendo 3 mi de agar (TSI) inciinado estéri® ple azucar 2 tubos de ensayo de 13x100,mm con 3 mi de agar hiero-lsina (LIA ester de ensayo de 13x100 mm con 3 mde caida urea 0 Surraco est 108 de ensayo de 13x190 mm con 3 ml de medio sulturc-indelsma de Simmon ;ayo de 13x100 mm con 3 mide caldo manitol estéil® 2 tubos de ensayo de 13x100 mm con 3 mide caldo malonato esis 2 tubos de ensayo de 13x100 mm con 3 mi de caldo rojo de me Proskawer (RM-VP) est SOLUCIONES 41-1 frasco gotero con 100 mi de solucion salina isoténica (NaCI 0.85%) 2. 1 frasco gotero con 100 ml de solucién salina tormalizada formaldehido al 36% y 8.5 g de clorura de sodio en 1000 mide agua des 3-1 frasca gotero con 100 mi de reactiva de Kovacs (p-dim ‘benzaldehigo 6 g; alcoho! isoamilica 75 mi; cido clothidrico cencentradc 4= 1 frasco gotero con 100 mi de solucién de roja de metio (ojo de me etanal 300 ml, agua destiada 500 mi 5.- 1 frasco gotero con 100 mi de ‘attol §g; etanal 100 rn 5-1 frasco gotero con 100 mi de solucién re: (hidroxido de potasio 40 g, agua dest lucién reactive de Vogues Prosk 0 de Vogues Prosks BIOLOGICOS Aatisuero Antisuero Antisuero (*V somatico (O"}* lente Nagelar ("H")* MATERIAL balanza granatariat caja de Petri de vidrio estérit 1 boisa de stomacher 6 un vasa de lcuadora ester Utensios necesarios pars ls menipulacion de muestras: cucharas tenedores, estériies* ‘Stomacher 0 motor para licuadorat 1 pipeta de vidrio de 1 mi estén. 1 asa microbiol6gica** 1 mechera de Bunsi 3 Portaobjetos®, 3 pipetas Pasteur es Microscopio éptico3. Posteriormente incubar la caja con agar XLD en pasicién invertida 2 35 £2°C durante 24 horas. 4. Realizar los pasos 1, 2 y 3 para cada una de las cajas Pt conteniendo los siguientes medias de cultvo selectivos: a) Agar VB. ‘Agar $8. d) Ager SS 5. Homogeneizar el tubo con cela tetrationata, 6 Tomar una muestra del cutiiva anterior, Iicrobioldgica estéri y sembrar por estria y agotar operacién con agar VB, agar HE, agar SB y por iilimo agar SS; terminada Ia operacion incubar todas las cajas Petri a 35 + 2°C durante 24 horas, a termino de este tiempo: 7. Observar el desarrollo colonial en forma macroscbpicas de las caract obtenidas en los medins sdlidos selectivos ya mencionados, jas sospechosas, de acuerdo a las especificas de desariolo de este microorganisme en cada uno de las medios, snleriores (ver el cuadro uno), 9. Registrar las ceracteristicas morfoldgicas tanto macroscépicas como rmicroscdpicas; en este Ultimo aspecto sera después de hacer una tincidn de Gram yobservar al mictoscopia, anotando la forma de la colonia, el color de la misma, el ‘olor del medio circundante, Gram. forma de las bacterias en el frotis, etc. (ver el uadro uno} Cuadro 1, Colonias tipicas de Salmonella spp. en medios sélidos selectivos. ‘MEDIO SELECTIVO Color antes de la Caracteristicas inoculacion coloniales de Salmonella spp. fAgar Verde Brillante |Oscuro, color marion | Rosas o rojas pueden ser ve) fransparentes, odeadas de medio enrojecico. [Agar Sulfito Bismuto |Opaco. verde paido _ |Café, qrises 0 negras, con \(sB) Jo sin bilo metalica, ‘Algunas veces presencia Ide halo café o negro. ‘Agar Xilosa Lisina [Ciaro, calor Tajo brifante [Rosas o rojas pueden ser| Desoxicolato (XLD) snsparentes, con o sin z [centro negro ‘Agar para Salmonollay_|Clavo, color rosa Translicidas ‘Shigella (SS) Jocasionaimente opacas _ | Algunas can centro negro ‘Agar entérico Hektoen |Oscuro, colar verde Verdes 6 azul verdes con a sin centro negro. Material necesario alas 72 horas de iniciada Material necesario a as 96 horas de iniciada | Material necesario a las 120 horas de PROCEDIMIENTO A) Preenriquecimiento. * Pesar en una caja de Petn est * Verier ef contenido de vyaso de licuadors este * Verter 225 mi de caldo lactosada estéri en la bolsa o vaso de lieuadora, + Homogeneizar la muestra con el diuyente durante 30 segundos @ velocidad media en el Stomacher, 6 10 segundos en motor para licuadora a le mas baja jocidad * Incubar la muest homogenea a 35 £2°C durante 24 horas. Enriquecimlono selective Pecan a calle lctsado o ber de agua peptonade después del oma i ecto an Transeo ante eet Goi el cld atsado pata a ube de 16X80 rm que conan to mide cats tata cubs ambos. tubos noculads en call slo {grt guano 24 hes 1, de caldo lactosado, con una pipeta de vidrio de ne 10 mi de cal al tubo de 16x150 mm que con istina y caldo t NOTA: / En la actuelidad, dado que se sabe que la Salmonella spp. no fermenta la lactoss ‘50 propone para un enriquecimiento general utilizar en lugar de caldo lactosadc buffer de agua peptonada (no confundir con diluyente de agua pentoneda « 0.1%), Consultar el APENDICE A para conocer las variaciones a la teenica desc ‘conforms al tio de muestra trabajada C} Aistamiento iferencial 1 Homogeneizer el tubo con caldo seteni 2. Tomar una muestra Gel culo anterior con as@ mi for agetamiento en agar XLD. estén y es2 Incubar a 352°C durante 40 horas, 3. Interpretar los cesultados después de incubsr. recimiento del tubo 2. Incubar a 3542°C: durante 24h 3. Interpretar resultados £).Caldo urea o Surraco, 1. Con asa microbiologica recta estén, tomar crecimiento del tubo TSWKIA 6 LIA & inocular en e! tubo con caldo urea 2.tncubar a 362°C durante 24 h 3, Interpretar resultados NoTA Las pruobas bioquimicas se pueden interpretar en al cuadro dos, sin embargo se sugiere que se consullen otras referencias, ademas de las ya expresadas aqui, in de determinar la especie del género en cuestién, asto quiere deci que no nacesariamenta se encuenire en el alimento analizado la Salmonella, pero si puede encontrarse otro coliforme, el que es indispensable identiicar. En 1adro solamente se encuentran las bioquimicas de una de las especies de Salmonella. En medio de cultivo colar rojo), se pude identifica la glucosa, en el fondo: {do tuto, la lactosa en la superficie y el acido sulfhidrico por ennegrecimiento en cualquier parte det tubo En la prueba biequlmica de LIA se puede apreciar la enzima descarboxilasa si es {que el medio intensifica el color morado o bien la desaminasa cuando el medio cambia @ color amariio verdoso El citrato de Simmons es un medio de cultivo de color verde obscura, que cuando el medio se alcaliniza vira a color azul abscuro. En al madio de SIM, se pueden leer 3 pruebas: movilidad, produccién de Acido sutfhidrico e indol En caldo RMVP se observan 2 pruebas, después de la incubacion como se ‘mencioné en las pruebas bioquimicas, el medio se divide en 2 tubos, 3 uno se le a {color rojo) pe orden de 0) Pruebas biequimicas ‘Tomar con ase microbiolégics 1 fe inocular por picadure y 2 LUA inoculer por estria en 2. Incubar a 362°C durante 96 horas. 3. Interpretar los resultados. ) Medio SIM (Sulfuro-indol-Movitidad) 1. Con asa micrabiolégica recta esti tomar crecimiento del tubo T inocular por puncidn vertical en el tubo con medio de SIM. 2, Incubar a 352°C durante 24 horas. 3. Interpretar resultados. ©) aldo RMVP 1. Gon asa microbiolégica recta est ingeular el tubo con caldo RM-VP- 2. Inoubar a 3522°C durante 48 horas para r la prueba de RM fa pruaba de Voges-Proskawer (VP). Transferir 1 ml del de ensayo de 13X100 mm, limp tomar crecimisnto del tubo TSIKIA 6 LIA lzar la pruea de VP y 96 h auevamente y dejar repossr el Lubo e reaccién se leve a cabo en presencia ds itados después de 2 horas de incubacion La prueba de Rojo de Met (RM), se hace al horas de incubacién, dos a tres gotas de solu interpretan los resultados en forma inmediata Jo Malo Con asa microb ulate en egica recta es se contione calCuadro 2. Reacciones bioquimicas y serolégicas de Salmonella. Prueba sustrato| Positive | ‘Salmonelia® Glucosa (TSI) 0 | ~Tando amarila 1090 _ (KA) pendiente moja | Lisina purpura | amarillo F descarboxilasa ( a _ HS (TSUKIAy nears | no negro + LUA) | Ureasa Tojo-parpure | nohay cambio de color Caldo de lisina purpura amarifo —S |_descarboxilasa_| Caldo duicitol_ | amariloo gas | no hay cambio de eT rojo de fenol color ni gas. Caldo KCN Grecimianto [no hay crecimiento | : aldo malonate” rio hay cambio de = - color Prueba de indol ‘Suparfcie color - Prueba dol ‘Ulutinacion” | no Ray aglutinacion | ¥ antigono flagelar - Prueba del ‘agiutnacion [no hay aghutinacion oO ‘amarifoo gas | no hay cambio de =a | color ni gas ‘amarilioo gas | no hay cambio de ; |__rojo de feno! calor ni gas Prueba Voges- | deiosa aro} | nohay cambio de = Proskaw color 7 Prueba rojo de | ojo dfuso aus ae ‘metilo - Grecimiento color [nahay crecimiento | SY Citrato de azul ‘no hay cambio de y Simmons | color 77.90% 0 mas poslives en 102 dias variable, ‘DO% 6 mas egaivos en 102 dias, v, El caldo malonato, originsimente es de color verdoso, si el el matonato el medio vis Calor azul El caido manitol al igual que cualquies © observada indicador, uno de los mas usados es el roja de fencl, e! cual es amari 4 ino, al conirario indicador se observa el ar con production de acidez, «i io metab En el medio de Surraco se pueden observar 2 prusbas: una es la hidrbisis de urea intansificandose el color rojo violacea, a otra prueba es la fermentacson de ssacarosa en la que En ccasiones, no se pueds establecer de for mas adecuado es recurir a pruebas seroky continuacion, los subtipos y se describen 5 lentifieacién serologica. \sayo do los antigenos somatices de Saimoneila (antisuero polivaler i 4, Colocar con una asa microbiologica, dos golas separadas de solucién sal estéril (NaCl 0.85%) sobre un portaobjetos. 2, Suspender en cada una de las gotas, une porcién de! cultivo desarrollado TstokiA, 3, Agregar 2 una de lias una gota del antisuero polivalente somatico “0” ‘mezclar con el canto del asa, 4, Agitar inclinando la témina hacia atrés y hacia adelante dura aproximadamente un minuto. 5. Observar bajo uns buena iluminacién y sobre un fondo oscuro la reaccién, 6. Considerar cualquier grado de aglutnacién como po NOTAS: + Cuando la aglutinacion es positiva con el suero polivalente "0", pus feterminarse | subgrupo empleando antisueros para los ciferentes subgrup ios grupo mas frecuentes son B,C, Dy E} inacién con ol antisuero “0” es negativa, utilizar el antisuero ” ndiciones ya descritas. Si hay agltin nuevamente fe prueba con el a polivalente "O*SO 6579, ( Salmonella, Internati Mi biology General guidance on methods for detection of al organization for Standarization. 2” ed xamination of Dairy Washington, D.C tados y reactivos pare igan USA, Décima ed. p.p. 765 948, 1042, 1044 y 1128. Norma Oficial Mexicana. NOI la determinacion de Salmonel 194, Bienes y Servicios. “Método para | Methods of Analysis, Association of Official Analytical Chemists (AOAC). ). Vol. |. 18" ed. USA. pp, 4874 pep. 301-228. ‘Secretarla de Comercio y Fomento Industrial (1992). 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Observer e 8 9.la Reaccionas bioquimicas | Reaccions seroldgicas | Interpretacion Tipica ‘Anligeno 0, VidH_ [Gapas consideradas con postive | Salmanel Tinea Todas las j FS To probada Puade ser Salmons Frligena 0, Vid # positive “Todas las reacciones _ | No debe ser considera: nogativas Salmonells rpretacion de resultados. : feridos en los cuadros para la identificacién de | éneros y especies de las bacterias investigadas, G) Informe de resultados, Reportar presencia 0 ausencia de Salmonella spp. o la espacie identficada en g 6 mide alimento. BIBLIOGRAFIA ‘Amador, LR. cal. (1992). Manuat de laboratorio de Microbiologia Sani IPN-ENCB. 2a. ed. p.p. 139-183. erobacteriaceao. 4” Ewing, W. W. y Ewing's. (1988). Identification of Elsevier. New York.Detemninacion de Shigella spp. en alimentos. portancia en salud publica de este micraor ‘especies estan can E.coli compartiendo ai incipaimente el tipo "O' (somatico ile. Algunos tipos de Shigellas producen (oxinas, una es muy similar ala verotoxina de E, coli El antigana somatica de las Shigellas esié constitvico dependiando del polisacériéo es su especiicidad serologica. Existen mas de se7otipos conocidos en la actualidad, a menudo surgen mutantes de las cepes s, con propiedades bioquimicas, a i6n de las colonias desde fa forma lisa (S) hasta la forma rugosa acomparta de pérdida de la invasivided La enfermedad provocada por la Shigella las brotas de enfermedades de origen alimentano y esta clésicamente asociada a los brates de disenteria bacilar. La Shigella rara vez se presenta en los excepto en primates tales como manos, chimpancés y al y el hombre, jallosis) contribuye con ef 10% de fa es de 10 células aproximadament condiciones del huésped. ‘Ademas pueden quedar seguelas tales como la enfermedad de f reactiva y el sindrome hemaltica urémico, Los menores y ancianos mas susceplible de adquirr esta enfermedad, aunque todos fos hum ‘estar expuestos en cierto grado. La shigelosis es muy comun en in presentan SIDA. haces humanas, en Shigellas de persone 8 1d88 (papa, atin, camarén, macatron y pol leche y dervados si como aves. La contaminac ya que el feria fecal, en gene cualquier tipo de manipulacién, 0 que s inadecvado antes de su consumo ya sean productos de origen anin de especial manera cuando estos uitimos se consumen crudos; en agua contaminada con heces fecales y el manejo no higé ‘manipuladares, son las fuentes principales de la contaminacién, ‘es el huésped principal reconocido de | se medidas importantes de control sanitar alimentos y la leche, el 1010s pacientes y desinfeccién de las excretas, icacién de los casos subclinicas de portadores, en | 1s de alimentos. La Shigella dysenteriae del tipo 1 (bacilo de shiga) produce termolabil que afecta tanto ino come al sistema nervioso exoloxina que es una proteina antigénica produce diatres al ioxina termolabil de E. cali, quiza por e! mismo mecanismo. la exotoxina inhibe también la absorcién de azdcares y aminoacids « delgado, Al actuar como “neurotoxina’ este material puede ct gravedad extrema y la naturaleza mortal de las infecciones por S adems de las reacciones adversas sobre sistema nervioso cer fel huésped. La toxina produce una diarrea profusa no sanguinolent la subsecuente invasion del intestino delgado da por resultado la api de disenteria con sangre y pus en el excremento, Para demostrar la presencia de Shigelas, se usan muestras prepa de los alimentos materia fecal de los pacientes o bien ¢ sospechosos de ser portadores sano. Las mu placas con agar selective © se pasan primero a uscimiento en un caldo selecthvo y se siembran luego en 9 cults cuyas colanias pre fe s@ han observado en el micros al Gram y se caracterizan por ser bacios Gram-negativos, se utlizartinacion (antigeno-anticuerpo) y si se 28, métoda de recuper mediante cultve convencional especialmente formulado para Shigella, asi cor adision de novobiocina, incubacion anaerdbica y estriado en agar Mac Conk es aplicable a cualquier alimento o trots en el cual la Shigells esté viable y presente, El principio de la técnica de aistamiento consiste en a) Enriquecimiento de Shigella sonnei Colocar 25 g de la muestra en 225 mi de ccaldo GN adicionado da 0.5 mgiml de novobiocina, seguide de incubscion anaerdbica a 44 = 2°C / 20 horas y después es sembrado por estria en agar Mac Conkey ’) Enriquecimiento de oras especies de Shigella Proceder como en el incisa "a", pero adicionar 3 mg/ml de novobiocina, incubar anaerdbicamente a 42 © 2°C y estiar en agar Mac Conkey. MEDIOS DE CULTIVO 4 matraz Erlenmeyer con 225 mi de caldo para Gram-negativos con 0.5 mg ylo 3 ‘mg de novobiacina (segin Ia especie que se desee aislar) cuyo pH final sea 7.0 0.2 (caldo GN#novobiecina)’ 2 cajas Petri con 20 ml de agar Mac Conkey (MC) 2 tubos de 13X100 mm con 3mi de agar ados* 2 tubos de 13X100 mm con 3 mi de agar hietro isina (LIA) incinados* 2 tubos de 13X10 mm con 3 mi de caldo rojo de metlo Voges Proskauer(RMVP)* 2 tubos de 13X100 mm con $ mi de medio suluro indol moviidad (SIM) 2 tubos de 13X100 mm con 3 mi de caldo glucosa mas rojo de fenol y conteniendo ‘campana de Durham* 2 tubos de 13X100 mm con 3 mide caldo surraco o caldo ureat 2 tubos de 13X100 rm con 3 ml de caldo malonatot 2 tubos de 13X100 mm con 3 mi de agar cirato de Simmons* 2 tubos de 13X100 mm con 3 ml de caldo KCN* 2 tubos con caldo sacarosa mas rojo de fenol” 2 tubos con caldo adonitol mas royo de fen” 2 tubos can caldo inositol mas rojo de fenol* 2 tubos con caldo salicina mas rojo de fenof* 2 tubos con caldo mucaio (s6lo en el aislamiento de otras especies diferentes a S. ‘sonnei 2 tubos con agar aoetalo de sadia(s6lo en el aislamiento de ottas especies ‘iferentes a S. sonnei Tiras API 20 E (en sustitucion de bioqulmicas en tubo) NOTAS: Las cantidades de las pruebas bioquimicas en tubo se duplicaran sonnel y de las demas SOLUGIONES, 1 frasco gotero con 100 mi de soluci salina (NaCl 0.85%)! frasco gotero con 100 5.g; alcohol isoamilico 75, 1 frasca gotaro can 100 ml de solucién reactivo “Voges Proskauer 4 {; etanol 100 mit 1rasco gotero con 100 mi de solucion reactive Voges Proskauer 2 potasio 40 g; agua destilada 100 1 juego de colorantes para la tincién de Gram* BIOLOGICOS Antisuero polivalente somatico (O"y MATERIAL, +1 balanza granataria* 1 caja Pete est - 1 bolsa para Stomacher 0 vaso de licuadora de vidrio este Utensilios necesarios para la manipulacion de muest tenedores estériest ‘Stomacher 0 motor pars licuadora® = 1 asa microbiologica’ = 1 mechero Bunsen***** -3 portaobjetos® = Pipetas graduadas de 1 y 5 miestériles" ~ Cajas de Petr ester 3 pipetas Pasteur estérles” + Incubadoras mantenidas a 42 4 2 y 44.0 + 2°C* Jarra para anaerobipsis con catalizador. “lncubadara a 35 + 2°08 cuchar NoTAS: * Material necesaro al inicio de la préctica " Material necesaro a las 24 horas de iniciada la préctica «Material necesario 2 las 48 horas de iniciada la practica “ Material necesario a las 72 horas de iniciada la préctica, * Material necesario a las 96 horas de iniciada la practicaPROCEDIMIENTO Método convencional de eultiv Aj Enriquecimiento de S. sonn 1 Pesar en una caja de Pein est 2. Verter et ct liouadora est 3, Adicionar a la muestra, 225 ml de calda GN estérl més 0.5 mg de novodiocina 4. Homogeneizat la muestra con el dilyyente durant= 20 segundos a velocidad ‘media en Stomacher 0 10 segundos en la icuadora a la mas baja velocidad. 5.Mantener la suspension 10 min. a temperatura ambiente y agitar periédicamente, 6. Incubar en jatra de anaerobiosis con catalizador en incubadore a 4412°C durante 20 horas. 7. Agitar y estriar en placas de agar Mac Conkey. 8. Incubar 2 3522°C durante 20 horas, rea aséptioa 25 g de muestra Yenido de la caja Pelri en una bolea de Stomacher 0 vaso de 8) Enriquecimiento de otras especies de Shigella Proceder cama en el inciso “a” utlizando 3 mg de novabiocina, 2 Incubarla muestra homogénea snasrbbicamente a 422°C durante 20 horas. (0 de S. sonnel o cualquier otra especie de Shigella, war las placas de agar Mac Conkey (colonias ligeramente rosas y icidas, con 0 sin bordes rugosos). ias sospechosas en agar TSI y en agar LIA. 3. Incubar todas las medias a 35 + 2°C durante 20 a 24 horas, 4 Descartar los cultivos que muestren motlidad, H,S, formacién de gas. descarboxilacién de la lsina y fermentacidn de la lactosa 0 sacarosa, D) Caracterizacién fisiolégica. Realizar tincién de Gram e inocular los culivos sospechosos en diferentes pruebas biequimicas, en tis de API 20 E © convencionales. Las caracteristicas, de Shigella se resumen en: bacilos Gram-negativos, negative para H,S (acido sulthidrico), ureasa, glucosa (gas), motlidad, descarboxllacion lisina, sacarosa, jactosa (2 dias), KCN (caldo cianuro de potasio), malonato, Citrato, salcina y acetato. Es positivo para rojo de metilo en caldo RMIVP. Utilzar antisuero para identificar el serotipo, Las especies de Shigella tienden 2 dar negativas las reaccionas de acetato de sodio, ctrata y mucalo, mientras que la E col, anaerogena tiende a dar positivas al menos una de estas 3 citimas reacciones £) Pruebas bioqui 1 Medio 2. Medio icas: (descrita en a técnica analitics de Salmonella spp ) 3. Medio de SIM (sulfhidieo,ndal, moviidad ; daserta en la téenicd Salmonella spp.) 4. Caldo RMVP (descrta en la técnica anaitca de Salmonella spp.) 5, Pruebas de fermentacion de carbahidratos mas roja de fenol Con el asa, tomar in6culo de los medios Kigler, TSI 0 LIA y sembra ensayo que contenga el caldo con el carbohidrato mas rojo de feng luna campana de Durham (segun sea el caso), para poder observ produccién de gas y cambio de pH. Incubar a 35 x 2°C durante ur 24 horas. Nota: En el caso de la fermentacion de lactosa los tubos se incubaran dur de Salmonella spp.) ade Salmonella spp 8. Agar etrato de Simmons (deserta en la técnica an 9. Caldo KCN ylo caldo mucato Con asa esteril tomar un inaculo de Kligler, TSI 0 LIA y sembrar ¢ antes mencionados (segin sea el caso), incubar a 36 + 2°C durd horas, 10. Con asa estén tomar un indculo de Kliglor, TSI o LIA y sembrar el agar acetato de sodio e incubar 3 35 + 2°C durante 20 a 24 horas loterpretar los resultados de las pruebas bioquimicas con! caracterizacion fisildgica en el inciso “O°. En caso de no ai especie del género Shigella, es recomendable identifcar oo los micr coliformes que estan presentes en el alimento analizado Wgica, 2 gotas separadas de solucién cont 2. Suspender en cada una de las gotas, una porcién del cultwo de: agar Kligler. 3. Agregar @ una de las, una gota de antisuero polvalente sot alras y hacia adelante, durante aproxi para posteriormente abservar bajo buena luminacién y fondc resultados de esta prueba 5. Considerar el grado de aglutinacién de acuerdo @ O= no agiulinacion 1 = agiutinacion escasa 2x = agltinacion con un 50% de claridad ‘3+ = aglutinacion con 75% de claridad [4 = aglutinacion total