Traducción:En laboratorio
Proteínas se utilizan el reactivo de biuret, que es un método de
RNAm a ––––––––––> Proteínas
Recordemos que los ácidos nucleicos, son macromoléculas que
contienen la secuencia precisa de aminoácidos y así la estructura y
función de todas las proteínas de una célula.
Traducción: es un proceso de síntesis de proteínas y se forma enlace
peptídicos. Posteriormente tenemos procesos postraduccionales.
Por ejemplo: Hidroxile un grupo funcional de la cadena R.
La adición de un grupo carboxilo: la importancia de la carboxilación en
fijar el Ca+ (Factor de coagulación) ademas de la dependencia de la
vitamina K.
Proteínas son macromoléculas mientras que los aminoácidos AA son
biomoléculas.
En las células Eucariontes también están los hongos aquí:
Ribosomas: encargados de la síntesis de proteínas donde encontramos
las ribosomas en células eucarionte:
RER (Cara externa de la Membrana del RER )
Citoplasma (ribosomas libres y poliribosomas)
Mitocondria (matriz mitocondrial)
*Núcleo (ribosomas: solo se ensamblan las proteinas, no hay traducción)
RNAribosomales
En procariontes: citoplasma.
Recordemos que están formados por dos subunidades:
Subunidad mayor, subunidad menor.
Los ribosomas tienen funcion de peptidasa (formar enlaces péptidicos)
otro elemento necesario son las enzimas específicamente
Biomoléculas necesarias para la traducción de proteínas: (alfa
aminoácidos, RNAm, RNAt (transferencia), ATP, ribosomas.
Respuesta fisiológica que involucra la síntesis de proteína (EXPRESIÓN
GÉNICA) partimos desde : que el activador se una al sitio de activación
del ARNm, se sintetice el ARNm, que el ARNm salga, y que se sintetice
una proteína y ella adquiera su conformación nativa (aquí recién
produzca una respuesta)
Siempre que exista una síntesis de proteína la respuesta es más lenta,
en cambio cuando la respuesta es la activación de una enzima la
respuesta es rápida.
Importancia del enlace peptídico: es la conformación de las proteínas,
es dado que se forma un doble enlace entre el carbonilo, y se genera
un enlace amida. (Enlace coplanar están en el mismo plano).
Mayor a 10 oligopeptidos se conocen como proteínas
Los péptidos van a tener una conformación espacial, cuando un péptido
no posee esta conformación especial entre en un sistema de energía
del sistema de proteínas. (Chaperonas).
Enzimas encargadas de degradar proteínas: PROTEASAS, existen otras
ademas como las proteínasas, y peptidasas todas tienen la misma
funcion que es romper en enlace péptidico.
cuantificación de proteínas. (Solución de Sulfató de Cobre (II) en
medio alcalino (OH-)
El cobre forma un enlace de coordinación con los enlaces peptídicos
de las proteínas o peptidos. Una vez que se forma este enlace cambia
el espectro de absorción de luz. (Al igual que sucede con el Yodo y el
almidón). Esta propiedad de cambio de coloración se utiliza para
cuantificar proteínas. 280 nanómetros es la longitud de onda que
absorbe las proteínas..
Minhidrina cuantificamos a través de la detección del geos Amino.
Se nombra de izquierda a derecha.
Cómo se sintetizan las proteínas?
1. Inicio de la traducción
2. Proceso de Elongación de proteínas y los péptidos
3. Terminación de la traducción.
Para que pueda ocurrir la traducción necesitamos al ARNm, previo
debe existir traducción y no necesariamente puede ocurrir la
traducción. Puede existir solamente transcripción y traducción, la
Replicación ocurre cuando la célula se va a dividir.
El ARNm nos dar el molde de nuestra proteína, pero antes que se
sintetice la proteína necesitamos eliminar los intrones, en los
eucariontes existen intrones, en procariontes normalmente no lo
tienen.
Recordemos que el ARNm en el eucariontes recibe un proceso de
maduración que consiste en: eliminación de intrones, en la adición de
un CAP y la adición de una cola poli A.
En el caso de eucariontes, el ARNm será más corto que el ARMm no
maduro e incluso puede sufrir el splacing alternativo (se eliminan
algunos exones y queda una proteína distinta a la original a la que
esta codificada en el gen) Ej: Apolipoproteina B (proteína que
transporta colesterol en el intestino B48, y el hígado B100 ambas
están codificadas por el mismo gen pero una proteína es mas corta
que otra).
También existen procesamientos en donde el ARNm maduro posee
un triplete de termino anticipado, y la proteína queda más corta.
En el proceso de traducción una vez que tenemos el ARNm maduro,
entonces se va a unir ARNm maduro se va a ensamblar en sus dos
subunidades el ribosomas. Se ensamble el codón de inicio de la
traducción?
Triplete de metionina UAA, UAG, o UGA (tres posibilidades de
colocones de termino)
AUG (solo un codón de inicio de traducción)

Entonces cuando el ribosoma se ensambla en el ARNm
maduro y se mueve el ribosoma, encontrara un triplete que
codifica para metionina (AUG), que corresponde al codón
de inicio de la traducción.
PARA QUE SE ESAMBLE EL RIBOSOMA NECESITA
ENCONTRAR DONDE ANCLARSE:
Hay dos teorías de procariontes (Secuencia chainlandgan?
Es una secuencia en donde se unen las dos subunidades y
saben que tantas bases mas abajo está el codón de inicio)
Teoría de eucariontes: se posicionan en una secuencia
parecida pero que no es igual, se encuentra en el codón de
inicio, la particularidad es que el ribosoma lleva un
ARNribosomal chiquito, que es complementario a esa zona
al ARNm. Entonces se detiene y comienza la traducción.
RNAr varia en tamaño: (definido por el coeficiente de
sedimentación).
RNAr 70s
DNA 80s
Cada unidad hay RNAr procariontes el 16S (Bacterias) y en aminoácidos. Por lo tanto significa que podemos tener más de
el eucariontes es el 18S (hongos, células animales) son los un codón que codifique a un aminoácido. (Que sea degenerado
más importantes de los RNAr. Porque son importantes? Pues significa lo anterior).
estos permiten separar géneros de procariontes o géneros
en especie de eucariontes .
Ribosoma esta compuesto por muchas proteinas, y posee
muchos RNAr no solamente los mencionados anteriormente
tenemos 23s, 5s, en ambos células.
Una célula que requiere constamente estar sintetizando
proteínas es rica en RER, y por la membrana del RER en la
cara externa muchos ribosomas, posteriormente viene el
golgi.
Las proteínas que se sintetizan en el RER son de
exportación o de membrana.
En el caso de los RNAr de los eucariontes tenemos el 5s
ñor sirven para que se enganche al ribosoma en el RNAm, y
RNAr 5s se transcribe gracias al ARN polimerasa 3.
La RNA polimerasa que esta en núcleo transcribe los otros
RNAr ribosomal, por ej el RNAr 18S.
Entonces cuando una célula que tiene un núcleo activo,
significa que esta sintetizando ARNr por lo tanto se esta
activando el proceso de traducción.
RNAm que está modificado en los eucariontes, lo que
necesitamos encontrar un sitio de inicio de la traducción AUG
y una señal de unión del ribosoma (el cual se debe anclar al
ARNm, en eucariontes es una secuencia especifica que es
guanina).
Tenemos dentro de nuestra célula proteínas que se denominan
constitutivas (esta siempre presente en una concentración x)
por lo tanto deriva de un gen constitutivo y proteínas
inducidas (solo cuando se requiere su presencia se activa el
proceso de traducción)
En el caso de las hormonas peptídicos son indecibles
( oxicitocina, folículo estimulante, insulina.)
Hormona de crecimiento por ejemplo es una hormona
constitutiva en niños.
Proceso de traducción necesitamos:
Factores de iniciación: factores sericos, y una enzima muy
importante que es la Aminoacil ANRt sintetasa que es la que
produce la activación del aminoácido (une al ARNt que lleva
un anticodon, el AA correcto en la secuencia del codón
(triplete). Podemos tener más de un triplete para cada
aminoácido, hay 64 combinación de triplete y solamente 20
Excepto el codón de inicio que esta metionina, que solo existe
ella solamente.
Marco de lectura: es cerrado: Hay mas de lo que necesitamos
pero no hay ambigüedad no hay duda que entra solo un AA.
 Proteína sitio de síntesis:
Cuando hablamos de traducción nos referimos a expresión
génica
El sitio de síntesis de proteínas secundarias en eucariontes
se realiza en el citoplasma, Ribosomas aislado, RER (cara
externa del ribosomas) también esta relacionado en el golgi.
Pensando que las proteínas que se sintetizan en el retículo
son de exportación, pueden sufrir glicosilaciones en el A.G y
ser transportadas en vesículas hacia la membrana.
También se pueden transportar a otros organelos.
La mitocondria también puede sintetizar proteínas, y
expresar genes, y expresan proteínas relacionadas con la
función de la mitocondria. (Ej el citocromo)
Funciones de las proteínas
Funciones estructural:
1. Estructura primaria: Secuencia de
AA, esta dada por la secuencia de
nucleótidos del DNA. No es
funcional
2. Estructura secundaria: existen a
su vez dos tipos alfa hélice
(resorte) y beta sheet, sabana
picada. Puede tener una sección
de la secuencia de AA que posee
una zonza rica en una estructura
secundaria (alfa o beta) ej la
Hemoglobina (alfa hélice), y por lo
tanto aún no es funcional.
3. Estructura terciaria: en este nivel
la proteína puede ser funcional. Y
es la conformación espacial
(nativa)que adquiere una proteína
en el espacio.
4. Estructura Cuaternaria: no todas
lo poseen, sucede cuando poseen
más de dos subunidades
Grupo prostético (grupo hem) sin el no tiene función la
hemoglobina.
Como las proteínas mantiene su estructura
La estructura primaria esta estabilizada por el enlace
peptidico
Estructura secundaria: mantiene su estructura
principalmente por puentes de hidrógenos
Estructura terciaria: principalmente por:
Puentes de hidrógenos (entre los residuos de los AA)
Interacciones hidrofóbicas (AA hidrofóbicos yéndose hacia el
interior de la proteína) generando conformación nativa.
Puentes salinos, algunas tienen Puentes disulfuro S-S
Fuerzas de vander Walls
Estructura cuaternaria:
Interacciones hidrofóbicas
Puentes disulfuros S-S (unión covalente) para desarmarlo
debemos aplicar calor con Ag. Reductor (ditiotreitol beta-
mercaptoetranol)
Electroforesis
Técnica de laboratorio usada para separar ADN, ARN o
proteínas en función a su tamaño y carga eléctrica.
Movimiento de moléculas que están cargadas hacia un polo
positivo o negativo.
 Esta proteina es funcional con una subunidad y un grupo
hemo. Es rica en estructura secundaria pero no lo es
completamente estructura secundaria.

Por ejemplo en fibrinógeno es una proteina de la coagulación,

tiene dominios alfa hélices son más bien fibrilares (largos)
que largos. Estructura 3°, pero rica en estructura 2° (alfa y
beta).

Recordemos que para que una estructura sea funcional debe

adquirir una conformación espacial. (Estructura terciaria)
Colágeno es rica e estructura alfa (formado por 3 unidades de
proteinas formando una tres subunidades) dandole una
estructura cuaternaria, si tiene más de dos subunidades de
proteínas se considerar estructura 4°.

Esta es una proteína con estructura compuesta 4 unidades
de proteínas, sosteniéndose por puentes disulfuro S-S y
interacciones hidrofóbicas. Estructura 4°
Papaina (Proteasa)
Posee un nivel estructural 3° (alfa y beta) todas deberían tener
nivel estructural terciario.
Ruptura de estructura de nivel terciario, vamos a
DESNATURALIZAR la proteína y pierde su función.
Epítope (dominios en el espacio)
Integrina (dominio b y dominio alfa)
Agentes desnaturalizante
Corresponde a la perdida de la estructura nativa ya sea
cuaternaria o terciaria. Por la accion de un agente físico o
químico
Agente físico: calor (rompe puentes H-H), radiación
ionizante (gamma) rompe proteínas
Agente químico: son de uso más común para
desnaturalizar una proteína como: DETERGENTES, estos
rompen interacción hidrofóbicas por loo tanto rompen
nivel estructurales de tipo 3° y 4°.
Detergente aniónico
En este caso el SDS mete su cola en el interior y rompe
las interacciones hidrofóbicas. Desnaturizando la proteína,
ademas entregamos carga negativa a la proteína, y esto
genera que ella se encuentre cargada negativamente.
Electroforesis
Tenemos proteína I y proteína II ambas
desnaturalizadas, y podemos comparar los tamaños
moleculares. Ellas se mueven de acuerdo a su tamaño,
la mas grande quedará más arriba, mientras que la
pequeña quedará más abajo, y esto dependerá de su
tamaño molecular.
La fuerza de la fricción al contrario a la fuerza del
movimiento en el caso de la proteína con más peso
molecular. Método de separación de proteínas y el
Tamaño molecular de las proteínas.
En que condiciones podemos observar dicho movimiento.
Exclusivamente en condiciones desnaturalizante, sino dependería
de la carga de la proteína, del tamaño y la forma.. como
eliminamos la carga y la forma: utilizando SDS y nos quedamos
solamente con el tamaño molecular.
Otra forma de desnaturalizar:
Salting out: añadir sal para que pueda precipitar, para sacar la
sal hay que hacer una diálisis
Ph: si le cambiamos el pH a una proteína que esta en solución
esto porque cambia el estado de ionización, dado por la
estabilización (puentes de hidrógeno, enlace salinos).

Generalmente son post traduccionales.