MICROBIOLOGIA E

PARASITOLOGIA

PRO F. DANIELABARROS
 Microbiologia e Imunologia

REVISÃO

◾Microbiologia:
• Ciência que estuda microrganismos
◾Importância:
• Saúde,Meio Ambiente e tecnologia

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REVISÃO

◾Eucariontes e
Procariontes:
• DNA!
◾Tamanhos
• Fungos > Bactérias > Vírus
◾Nomenclaturas
• Gênero e espécie (S.aureus)
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REVISÃO
◾Morfologia
:
• Cocos
• Bacilos
• Outros
• Vibrião

• Espirilo
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• Espiroqueta
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REVISÃO

◾Parede celular: Forma e Proteção

• Peptideoglicano
• Gram+ e Gram-

* Atípicas
(Mycoplasma)
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REVISÃO

◾Glicocálice:
Resistência a fagocitose
• Cápsula (Compacta e bem aderida)
• Camada Limosa (Desorganizada e frouxa)
• Substância polimérica extracelular:Biofilme

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REVISÃO

◾Flagelos:
Movimentação
◾Filamentos axiais:
Movimentação (Espiroquetas)

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REVISÃO

◾Fímbrias e pili:
Adesão tecidual
• pili
 Movimentação pulsante

 Troca de material genético

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REVISÃO

◾Outras estruturas:
Nucleoide
Plasmídeos
Inclusões
Endosporos

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REVISÃO

◾Reprodução:
• Divisão Binária
• Crescimento exponencial (2n)
• Fase lag
• Fase log
• Fase estacionária
• Fase de morte 10
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Como podemos observar

microrganismos?

Quais ferramentas e técnicas

podem nos auxiliar?

Como ocorre o metabolismo

microbiano??
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Microrganismos
:

 Invisíveis a olho nu.

 Microscópio!
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Microscópios:
 Ópticos
 Luz visível para iluminar as estruturas
celulares.
(Campo claro,campo
escuro, fluorescência etc.)
 Eletrônicos
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Microscópio:
Lente Ocular (10x)
Lentes Objetivas (10, 40, 100x)
Ampliação de Imagem
(100 a 1000x)

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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Microscópi
o óptico:

 Óleo de Imersão
Lentes objetivas de
100x

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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Outros tipos:
Microscopia de campo
escuro:
◾ O disco opaco bloqueia a luz
que poderia entrar na lente
objetiva diretamente.
Somente a luz que é refletida
pela amostra entra na lente
objetiva.
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Outros tipos:
Microscopia de
contraste de fase:
◾ Anel de fase (Diafragma
anular):Amplifica a diferença
entre a luz que atravessa a
célula em relação à luz que
atravessa o líquido
circundante.
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Outros tipos:
 Microscopia de fluorescência:
◾Fluorocromos:Substâncias que
absorvem ultravioleta e
produzem luz.
 Imunofluorescência
Anticorpo fluorescente
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Outros tipos:
 Microscopia eletrônica:
◾Elétrons: Comprimento de onda
100.000 vezes menores que o da
luz.
 Examinar estruturas muito
pequenas para os microscópios
tradicionais
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Outros tipos:
 Microscopia eletrônica:
◾Transmissão: Feixes de elétrons passam
através da amostra.
◾Varredura:Feixes de elétrons são
refletidos pela amostra

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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Outros tipos:
Microscopia de varredura por
sonda:

◾De Tunelamento:Sonda de tungstênio.

◾ForçaAtômica:Sonda de diamante.

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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Otimização:
 Células bacterianas = Difícil
visualização (Sem pigmento,
sem contraste com o meio)
 Contrastes

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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Coloração:
• Simples:
Destacar todos os microrganismos.
• Diferencial:
Distinguir grupos bacterianos.
• Especial:
Corar porções específicas.
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Corantes:
◾Compostos orgânicos
• Ácidos (-):Citoplasma
• Básicos (+): D N A

Afinidades variadas
 Colorações diferenciais
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Técnica deTransferência Asséptica:

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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Coloração de Gram
Distinção pela Parede Celular
◾Gram +
(roxo, azul, violeta)
◾Gram –
(vermelho ou cor-de-rosa)

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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Coloração de Gram
◾1º Corante - Cristal violeta S

◾Mordente/fixador - Lugol
(Iodo)

◾Solvente
◾ orgânico
2º Corante -
- Safranina ou
fucsina
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

3-Fixar o conteúdo passando

1-Coletar a *Se as células estiverem em placa de 2-Semear a
a lâmina levemente e
amostra bacteriana agar,utilizar a alça para aplicar uma amostra em lâmina
rapidamente sobre a chama
do meio líquido gota de água estéril sobre a lâmina de vidro estéril e
do bico de Bunsen;
com alça estéril*; de vidro e coletar uma pequena deixar secar;
(Não deixar esquentar muito)
amostra da colônia no agar; 28
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

5-Sutilmente lavar a 7-Sutilmente lavar a

4-Aplicar o primeiro 6-Aplicar o mordente
amostra com água para amostra com água para
corante (Cristal violeta) (Lugol) sobre a
remover excesso de remover excesso do
sobre a amostra,deixando amostra, deixando
corante; mordente;
permanecer por cerca de permanecer por cerca
1 minuto; de 1 minuto;
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

11-Sutilmente lavar a
9-Sutilmente lavar a 10-Aplicar o segundo amostra com água para
8-Gotejar o solvente amostra com água para corante (Fucsina ou remover excesso do
(Etanol ou Acetona) até remover excesso do Safranina) sobre a amostra, corante,secar e
que a gota que passe pela solvente; deixando permanecer por observar no
amostra saia transparente; cerca de 1 minuto; microscópio.
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Coloração de Gram (Algumas Exceções):

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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Coloração de Gram
(Algumas Exceções):
◾Bacilos Álcool-Ácido Resistentes
(BAAR)
o Camada cerosa
Coloração de Ziehl-Neelsen
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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Coloração de Gram (Algumas Exceções):

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ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Colorações Especiais:
◾Coloração negativa
para cápsulas:
 Cápsulas = solúveis em água;
 Tinta da China, tinta nanquim.

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 Microbiologia e Imunologia

ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Colorações Especiais:
◾Coloração para endósporos:
Não é corada por métodos
comuns;
 Verde malaquita + Calor.

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 Microbiologia e Imunologia

ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Colorações Especiais:
◾Coloração dos flagelos:
 Estruturas muito finas;
 Ácido tânico é usado
para aumentar o
diâmetro dos flagelos.
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 Microbiologia e Imunologia

ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Coloração de Gram:

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 Microbiologia e Imunologia

ESTUDO E OBSERVAÇÃO DE MICRORGANISMOS

◾Coloração de Gram:

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 Microbiologia e Imunologia

METABOLISMO MICROBIANO

◾Crescimento depende do:

Metabolismo
Acumulação e degradação de nutrientes para
fornecer energia e sintetizar substâncias

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 Microbiologia e Imunologia

METABOLISMO MICROBIANO

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METABOLISMO MICROBIANO
Fontes de energia:
• Compostos Químicos (Quimiotrofia)
• Luz (Fototrofia)
 Própria (Autotróficos): C O 2
 Compostos orgânicos (Heterotróficos)
o Presença de O2 (Aeróbias)
o Ausência de O2 (Anaeróbias); *Facultativas
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 Microbiologia e Imunologia

METABOLISMO MICROBIANO

Glicólise:
Glicose
Respiração
celular
(Acetil-CoA) 2NADH 2ATP
Piruvato
2Piruvato
Fermentação
(Ácido lático,etanol etc)
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METABOLISMO MICROBIANO

Ciclo de Krebs e Cadeia deTransporte de Elétrons:

Cadeia de
Ciclo de N ADH
Piruvato Acetil-CoA FADH
Transporte 38ATP
Krebs de Elétrons

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METABOLISMO MICROBIANO

Fermentação:
Os microrganismos podem
fermentar vários substratos;
◾Microrganismo
◾Substrato
◾Enzimas
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METABOLISMO MICROBIANO

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METABOLISMO MICROBIANO

 Necessidades Nutricionais:
 Diferentes microrganismos:
 Diferentes exigências nutricionais!
 Diferentes metabólitos!
 Diferentes reações de biossíntese!

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METABOLISMO MICROBIANO

 Necessidades Nutricionais:

 Provas Bioquímicas:
Alterações de um substrato
conhecido pela ação de
enzimas microbianas.

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METABOLISMO MICROBIANO

 Necessidades Nutricionais:

 Provas Bioquímicas:
Alterações de um substrato
conhecido pela ação de
enzimas microbianas.

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REVISÃO

◾Microscópios:
Ópticos (Luz)
 Ampliação de até 1000x
Óleo de imersão
(Diminuir refração da luz)
Eletrônicos (Elétrons)
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REVISÃO

◾Coloração
:
Simples
Diferencial
Especial

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REVISÃO

◾Transferência Asséptica:
Simples
Diferencial
Especial

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REVISÃO

◾Coloração de Gram:
1. CristalVioleta
2. Lugol (Mordente)
3. Lavagem com Álcool
4. Safranina

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REVISÃO

◾Coloração Ziehl-
Neelsen:
1. Carbolfucsina
2. Fixar corante (Calor)
3. Lavagem
com Álcool-
Ácido 53

4. Azul de Metileno
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REVISÃO

◾Colorações Especiais:
Cápsula (Tinta da China)
Endósporos (Verde Malaquita)
Flagelos (ÁcidoTânico)

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REVISÃO

◾Metabolismo:
Autotróficos
Heterotróficos
Aeróbios
Anaeróbios/Anaeróbios facultativos

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REVISÃO

◾Metabolismo:
Glicólise = 2Piruvato + 2ATP
Respiração celular = 38ATP
Fermentação = 2ATP
 Ácido lático,Etanol e CO2 etc.

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REVISÃO

◾Metabolismo:
Variam de acordo com o microrganismo:
 Nutrientes exigidos
 Metabólitos produzidos Provas Bioquímicas
 Enzimas envolvidas

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PARASITOLOGIA

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