LUNIVERSIDADE FEDERAL 00 RIO GRANDE DO NORTE CENTRO DE BIOCIENCIAS DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Prof. Elizeu A. Santos ROTEIRO DE AULA PRATICA: CARACTERIZACAO DE PROTEINAS ‘iga fietmente os procedimentos dos testes, analise os resultados € discuta com 0 seu grupo o conclusto de cada experimento. TESTE 1 - TESTE DO BIURETO umere 3 tubos de ensaio. No tubo 3, pipete 2 ml de gua destlada; no tubo 2, aqueca tims pequena quantidade de urefa (com a ponta da espatula) ¢ adicione 2 mL de agua ciretinds: no tubo 3, coloque 2 mL de solucdo de ovoalbumina, que se enconite ne casa. Adicione 3 ml do reativo do biureto em cada tubo, homogeneize © ancte a5 coloragées obtidas. ; Grea Reativo do Resurado = oe ‘Agua destilada bumina biureto- (cor) 1 - 2 mb - 3mi Adgul Aquegauma Zt (apa 0 = ; 2 pequena porgio _aquecimento da urea) : ROSA : : amt 3 mt QOxO TESTE 2— REACAO DA NINHIDRINA Em um tubo de ensaio pipete 2 mL de solucdo de ninhidrina, adicione 5 gotas da solugdode ovoalbumina e ferva durante 2 minutos, cuidadosamente. TESTE 3 — PRECIPITACAO PELO TCA Coloque em um tubo de ensaio 2 ml de solucdo de ovoalbumina, adicione 1 ml de soluco de acide tricloroacético (TCA) a 10%. TESTE 4 - TRATAMENTO COM SULFATO DE AMONIO [(NH«):5O«] Coloque § ml de solugo de ovoalbumina num tubo de ensaio ¢ adicione 10 ml de solucio de sulfato de aménia a 75%. Misture por inversao. Aguarde 10 minutos, fitre para um novo tubo de ensaio, e com o filtrado obtido faca a Reagao do Biureto: pipete 2m}, do filtrado para um outro tubo de ensaio e adicione 3 mL do reativo do biureto.LS ole ia , = > prssiptla ; tricloroacético (também 0 picrico e 0 tUngstico) ie ON, aN 0 resultado obtido no teste a \eadl ff O sro “on Io “aoe oa ae. eee wT 4, O que acontece com PRicsoab Mount la ao se sated ar sulfato de aménio [(NH. {teste 4)? Como se explica 0 resultado do “rh ic ° we do biureto? cpt AS 3 ila reste, profeice ‘proteris 5, Para explicar os resultados do teste 5, conside! em torno de 4,5, a 5,0, e responda: srr que apenas a variagio de pH nao é suficente para desestabilizar (insolubiza), 5 cebalbumina (fato que 36 ocorre de forma evidente apés aquecimento)? J b. Por que 2 desestabilizagdo nao acorre com a mesma intensidade em todos os tubes (om diferentes valores de pH)? VaTese7~ Srvpes Com zavels fem cor \! Com relagdo 20 efeto da posterior adiclo de tampio (pH 4,7) 20 tubo 2, seria Sees ° mesmo a. wy parece com ohube For saucy tn levsicade we 1 | Yabo 4 Wee? C Yibo 2 a aa Poxle se ane Base fe que’o pl (ponts ane da ovoalbumina € Le chevelle - Xe spits aww proto “ae, Prece pt O cone cas! wens y Acdabe °o" adi ‘ofa do pre ay oe jan? 1 \ ee de aun d seks Cees wars pov Po de auderonds disqi lade dimawi¥ ° ple se Rea ee gir > oe aWD (SiN i, ot)TESTE 5 — TERMOPRECIPITACAO Numere trés tubos de ensaio e proceda conforme o esquema abaixo: ee ‘SOLUGRO PROTEICA Hel NaOH TAMPKO ACETATO (ovealbumina) oiM 01m (oH 7,0) 7 ‘Smt Im = 2 Smt amt Smt - - amt 3 ee Agite os tubos e observe seu aspecto. Coloque-os em banho-maria fervente durante 5 minutos. Esfrie os tubos e observe em quallis) tubo(s) houve precipitagdo (floculagao}. Ao tubo 2, junte 0,5 mL de soluco tampao acetato pH 4,7. QUESTGES 1. Com base nas informacdes dadas a seguir, como se explica os resultados do teste 1 com a ureia of 4 @ a ovoalbumina? $ ge Na ION? so / Ne ' aah Yomo=d 1 oreagente do biureto (nfo 6 biureto!), é eto de wee ne Cobre (Cu) hidréxido de sédio, com um estabilizante oP 9X ore (tartarato de sic) que mantém o cobre em solo. Be nee Cmmeto slang 9 forma um complexe de y De coordenagio com 0 biureto. sofre mudanga de cor. Ve \ eh Nn , Ureia Biureto N o (2melecuias) compost de condereags) 7 o tH ‘cu Guu tim empasequiomapeocondesiots | O=Q/ Guas moléeulas de ureas, com IiberacSo de uma molésula de \7 mania Esta condensacio oeorre pelo aguecimento, y 2. Segundo as informagdes abaixo, qual a explicacéo do resultado do teste 2 com a ovoalbumina, se 0s grupos a-amino no mais existem em proteinas (exceto no residuo do aminoacido arnino- terminal, o que representa muito pouca amina livre)? 1a é aquecida na presenca de aménia e aminas lives (primérlas), desenvolve- Quando uma solugio de ninhidrin sto formado (complexo de Ruhemann}. ow seume colorado sauvioleta cracteristica, resultante do como +o + HOH Qcorre > Sola lufegrs) eee, isd)