Machine Translated by Google

ORİJİNAL ARAŞTIRMA yayınlandı:

29 Nisan 2022 doi: 10.3389/
fimmu.2022.830021

Hızlı TCR ve CD8ab üretimi

Transgenik Virüse Özel T Hücreleri
Lösemi İmmünoterapisi
1,2*
Gagan Bajwa1 ve Caroline Arber

1 Hücre ve Gen Terapisi Merkezi, Baylor Tıp Fakültesi, Houston Methodist Hastanesi ve Teksas Çocuk Hastanesi,
Houston, Teksas, Amerika Birleşik Devletleri, 2 Onkoloji Bölümü UNIL CHUV, Lozan Üniversite Hastanesi (CHUV), University of
Lozan (UNIL) ve Ludwig Kanser Araştırma Enstitüsü Lozan Şubesi, Lozan, İsviçre

Arka Plan: Virüse özgü T hücreleri (VST'ler), tümör hedefli transgenik reseptörlerin verilmesi
için çekici bir hücre terapisi platformudur. Ancak geleneksel yöntemlerle üretim birkaç
hafta ve yoğun bir işlem gerektirebilir. Burada, tek bir üründe birkaç viral ve tümör
antijenini aynı anda hedeflemek için T hücresi reseptörü (TCR) ve CD8ab (TCR8) transgenik
Düzenleyen:

Paul G. Schlegel,
VST'lerin üretimi için IFN-g sitokin yakalamayı (CC), retroviral transdüksiyonla birleştirirken
Würzburg Üniversite Çocuk Hastanesi, fizibiliteyi ve zaman çizelgelerini değerlendirdik.
Almanya

Tarafından gözden geçirildi:

andreas beilhack,
Julius Maximilian Üniversitesi
Würzburg, Almanya
Robert Handgrettinger,
Tübingen Üniversitesi, Almanya
*Yazışma:
Caroline Arber
caroline.arber@unil.ch
Yöntemler: Sağlıklı donör periferik kan mononükleer hücreleri, immünojenik viral
proteinlerden türetilen sitomegalovirüs (CMV) ve Epstein-Barr-Virus (EBV) peptid karışımları
ile uyarıldı ve ardından CC boncuk seçimi yapıldı. Kültürde 3 gün kaldıktan sonra hücreler,
dört geni (survivin'e özgü bir abTCR ve CD8ab) kodlayan bir retroviral vektör ile
transdüksiyona tabi tutuldu. TCR8-transgenik veya kontrol VST'ler genişletildi ve fenotipleri,
özgüllükleri ve anti-viral ve anti-tümör fonksiyonları açısından karakterize edildi.

Sonuçlar: CC ile seçilen hücreler TCR8 ile verimli bir şekilde transdüksiyona tabi tutuldu.
Uzmanlık bölümü: Ortalama kat genişlemesi 10 günde 269 kattı ve hücreler yüksek oranda CD8+ T merkezi
Bu makale şu adrese gönderildi:

T Hücre Biyolojisi,
hafıza hücreleri içeriyordu. TCR8+ VST'ler, hücre yüzeylerinde eşzamanlı olarak doğal anti-
derginin bir bölümü viral ve transgenik anti-survivin TCR'leri eksprese etti. Hem kontrol hem de TCR8+ VST'ler
İmmünolojide Sınırlar
viral hedeflere sitokinler üretip onları öldürdü; tümör hedefleri ise yalnızca TCR8+ VST'ler
Alınma: 06 Aralık 2021
tarafından tanındı ve öldürüldü.
Kabul: 29 Mart 2022

Yayınlanma: 29 Nisan 2022 Sonuçlar: IFN-g sitokin yakalaması, retroviral transdüksiyonla verimli bir şekilde gen
Alıntı:
modifiye edilebilen ve ex vivo hızla genişletilebilen CMV ve EBV'ye özgü hafıza öncüsü
Bajwa G ve Arber C (2022) Lösemi
CD8+ T hücrelerini seçer ve aktive eder. Çok spesifik T hücrelerimiz çok işlevlidir ve aynı
İmmünoterapisi için TCR ve CD8ab
Transgenik Virüse Özel T Hücrelerinin Hızlı kökenli antijenleri ifade eden viral ve lösemik hedefleri tanır ve öldürür.
Üretimi.
Ön. İmmünol. 13:830021. Anahtar Kelimeler: immünoterapi, virüse özgü T hücreleri, sitokin yakalama, transgenik TCR, transgenik CD8, tasarlanmış T hücreleri, interferon-gamma
doi: 10.3389/fimmu.2022.830021

İmmünolojide Sınırlar | www.frontiersin.org 1 Nisan 2022 | Cilt 13 | Madde 830021

Machine Translated by Google
Bajwa ve Arber
GİRİİŞ
Virüse özgü T hücrelerinin (VST'ler) benimsenen transferi, antiviral
bağışıklığı hızla geri kazandırır ve allojeneik hematopoietik kök hücre
nakli (HSCT) sonrasında viral enfeksiyonları önler veya tedavi eder (1).
VST'ler, orijinal kök hücre donöründen veya kısmen ilgisiz HLA
uyumlu üçüncü taraf sağlıklı donörlerden üretildiğinde hem güvenli
hem de etkilidir (1, 2), tümörü hedef alan tasarlanmış reseptörlerin
dağıtımı için hücresel tedavi platformu olarak kullanımlarına zemin
hazırlar. İlişkili antijenler (yakın zamanda (3)'te gözden geçirilmiştir).
Aslında lösemi, B hücreli akut lenfoblastik lösemideki (B-ALL) CD19-
CAR'lar gibi kimerik antijen reseptörlerini (CAR'lar) veya Wilms Tümör
1'i (WT1) veya minör doku uyumluluk antijeni HA-1H'yi hedef alan T
hücresi reseptörlerini (TCR'ler) hedef aldı. Akut miyeloid lösemi
(AML), VST'lerde eksprese edilmiş ve hastalara nakil sonrası
aşılanmıştır (4-9). Kök hücre donöründen üretilen CD19-CAR ile
modifiye edilmiş VST'ler ile güvenlik ve bir miktar etkinlik gösterilmiştir
(4-6), TCR ile modifiye edilmiş VST'lerin fizibilite ve etkinliği ise
çalışmalar arasında değişkenlik göstermiştir (7, 8).
Tasarlanmış VST'lerin üretimi zorludur ve operatör yoğundur.
Akış sitometrisine dayalı sıralama (7) gibi belirli adımlar açık
sistemlerde gerçekleştirilir veya streptamer seçimi (8) gibi hedeflenen
epitopun bilgisini gerektirir . Diğer işlemler, otolog lenfoblastoid
hücre dizilerinin (4-6) oluşturulması için canlı Epstein Barr Virüsü
(EBV) , antijen sunan hücrelerin transdüksiyonu ve VST'lerin
transdüksiyonu (3, 6) için çeşitli viral vektör türleri ve uzun süreli ex
vivo gerektirir. birkaç hafta boyunca kültür (4-7).
Bu tür çoklu antijen hedefli tedavilerin daha geniş uygulanabilirliği
için, üretim süreçlerinin karmaşıklığının azaltılması gerekmektedir
(son zamanlarda (10)'da gözden geçirilmiştir). Burada, sağlıklı
donörlerden alınan İnterferon-g (IFN-g) sitokin yakalamanın (CC)
seçilmiş virüse özgü hafıza T hücrelerinin, bir HLA-A*02'yi tanıtan
retroviral transdüksiyona doğrudan ilerlemek için yeterince
zenginleştirilip etkinleştirilmediğini küçük ölçekte araştırdık: 01 kısıtlı
survivin, VST'leri geniş bir tümörle ilişkili antijene (12, 13)
yönlendirmek için CD8ab (TCR8) ile kombinasyon halinde TCR'yi (11)
hedef aldı . CD8ab'nin bir transgen olarak dahil edilmesinin, TCR
transgenik VST'lerin anti-viral aktivitesini eski haline getirdiğini ve
CD4+ T hücrelerini sınıf I kısıtlı antijene yönlendirdiğini daha önce
göstermiştik (12, 13). CC çekicidir çünkü donör HLA'sından bağımsız
olarak VST'lerin tamamen kapalı üretimiyle uyumludur ve çeşitli
immünojenik epitopları tanıyan çeşitli TCR repertuarlarına sahip T
hücrelerini seçebilmektedir (14-16). Şimdi anti-viral hafıza T
hücrelerinin CC ile zenginleştirilmesi ve aktivasyonunun ardından
retroviral transdüksiyonun aktivite üretim süresini 7-10 gün
azalttığını, sürecin genel karmaşıklığını azalttığını ve eşzamanlı anti-
viral ve anti-tümöre sahip hücreler ürettiğini gösteriyoruz. .
MALZEMELER VE YÖNTEMLER
Hücre Hatları
BV173 ve K562 hücre çizgileri Alman Hücresinden elde edildi
Kültür Koleksiyonu (DSMZ) veya Amerikan Tipi Kültür
Sırasıyla toplama (ATCC) ve eksiksiz olarak muhafaza edilmesi
İmmünolojide Sınırlar | www.frontiersin.org
Lösemi için Hızlı Transgenik VST'ler
%10 veya %20 fetal sığır serumu (FBS, Hyclone), %1 penisilin-
streptomisin (Gibco) ve %1 glutamax (Gibco) ile desteklenmiş RPMI
1640 ortamı (Hyclone, Thermo Scientific) .
293T hücreleri (ATCC), %10 FBS, %1 penisilin-streptomisin ve %1
glutamax içeren tam IMDM ortamında (Hyclone) tutuldu.
Sağlıklı Donör Buffy Coats CMV
seropozitif kimliği belirlenemeyen sağlıklı insan
gönüllülerden elde edilen Buffycoat'lar Gulf Coast
Bölgesel Kan Merkezi'nden (Houston, TX, ABD) temin
edildi. HLA-A2 durumu FACS analizi ile belirlendi ve
deneyler için HLA-A2 pozitif donörler seçildi.
Retroviral Vektörlerin ve Süpernatantın Üretilmesi
Survivin'e özgü
(s24) TCR ve CD8ab'yi kodlayan retroviral vektörün tasarımı daha
önce açıklanmıştır (Şekil 1A) (11-13). Retroviral süpernatan, 293T
hücrelerinin RD114 ve Pegpam plazmitleri ve ilgilenilen genleri
içeren SFG vektörü ile geçici ortak transfeksiyonu yoluyla hazırlandı
(11).
IFN-g Sitokin Yakalama ve Retroviral Transdüksiyon
Kullanılarak Gen Modifiye Virüse Spesifik T Hücrelerinin
Oluşturulması PBMC'ler, Lymphoprep (Accurate Chemical
and Scientific Corporation) tarafından yoğunluk gradyanlı
santrifüjleme kullanılarak buffy kaplamalardan izole edildi, T hücresi
tam ortamında (1:1 karışım) yeniden süspanse edildi. RPMI 1640 ve
Click ortamı, Hyclone, %10 FBS, Hyclone, %1 penisilin-streptomisin,
%1 glutamax ile desteklenmiş ve gece boyunca 37°C'de
dinlendirilmiştir ( 24 oyuklu plakadaki tam ortam/kuyucukta 2 ml
başına 107 PBMC) . İnkübasyondan sonra PBMC'ler, CMV ve EBV
pepmiksleri (CMV pp65, CMV IE1, EBV LMP2, EBV BZLF1, EBV EBNA,
1 mg/ml, tümü JPT Technologies'den) ve HLA-A*02:01 kısıtlı
immünodominant karışımıyla uyarıldı. Peptitler (CMV pp65'ten
türetilmiş NLV: NLVPMVATV, hemen erken EBV BRLF1'den türetilmiş
YVL: YVLDHLIVV, erken EBV BMLF1'den türetilmiş GLC, 1 mg/ml,
tümü Genemed Synthesis'den) 37°C'de 6 saat süreyle. Pepmiksler
ve peptidlerin kombinasyonu, nakil sonrası dönemde CMV ve EBV
enfeksiyonunun antijen ekspresyon modellerine göre seçilmiştir (1).
IFN-g salgılayan hücreler, üreticinin tavsiyelerine göre ( Şekil 1B) IFN-
g salgılama tahlili hücre zenginleştirme kiti (Miltenyi Biotech,
#130-054-202) kullanılarak izole edildi. IFN-g salgılayan hücreler, IL7
(10 ng/mL, R&D Sistemleri), IL15 (10 ng/mL, R&D Sistemleri) ve IL21
(30 ng/mL, R&D Sistemleri) ve ışınlanmış IFN-g ile tam ortamda
kaplandı -negatif fraksiyon (30 Gy), bir besleyici katman olarak
kullanıldı ( 24 oyuklu plakadaki oyuk başına 0,5 x106 besleyici hücre
başına 0,02-0,5 x106 IFN-g yakalanan hücreler ). 3 gün sonra, IFN-g
sitokinle yakalanan VST'ler toplandı ve retronektin kaplı plakalar
üzerinde survivin spesifik abTCR ve CD8ab'yi (TCR8, Şekil 1A) kodlayan
retroviral süpernatan ile transdüksiyona tabi tutuldu veya viral
partiküller içermeyen retronektin kaplı plakalara maruz bırakıldı
(transdüksiyona tabi tutulmamış VST'ler için) )). VST'ler 5-7 gün
süreyle genişletildi
2 Nisan 2022 | Cilt 13 | Madde 830021
Machine Translated by Google
Bajwa ve Arber
ŞEKİL 1 | IFN-y sitokin yakalama ve retroviral transdüksiyon yoluyla TCR8 transgenik VST'lerin üretilmesi. (A) Fare sabit bölgeleri (mCa, mCb), CD8ab ve kesik seçilebilir bir
işaretleyici (DCD271) içeren survivin spesifik TCR'yi içeren retroviral vektörün şeması. (B) IFN-g CC, retroviral transdüksiyon ve hücre genişlemesi kullanılarak transgenik
VST'lerin üretiminde yer alan adımlar. S1: birinci uyarım, S2: ikinci uyarım (isteğe bağlı). (C) İmmünomanyetik ayırma sonrasında 5 x 107 PBMC'den IFN-g yakalanan
hücrelerin toplam verimi , n=8 donör, ortalama ± SD.
IL7 (10 ng/mL, R&D Sistemleri), IL15 (10 ng/mL, R&D Sistemleri) ve
IL21 (30 ng/mL, R&D Sistemleri) sitokinlerinin varlığı. Tasarlanan
VST'lerin daha fazla genişleme potansiyelini değerlendirmek için ikinci
bir uyarım (S2) gerçekleştirildi. S2, CMV/EBV pepmix/peptid ve HLA-
A*02:01 kısıtlı survivin peptidi LMLGEFLKL (transgenik TCR'nin aynı
kökenli antijeni, Genemed sentezi) darbeli ışınlanmış (40 Gy) otolog
aktive edilmiş T hücreleri (daha önce OKT3/üzerinde aktive edilmiş) ile
gerçekleştirildi. anti-CD28 kaplı plakalar) ve G-Rex gaz geçirgen
kültüründe 1:1:5 oranında ( Şekil 1B ) ışınlanmış (100 Gy) K562cs
hücreleri (CD80, CD83, CD86, 41BBL ve CD32'yi eksprese edecek
şekilde tasarlanmış K562 hücreleri) cihazlar (WilsonWolf, Saint Paul,
ABD) daha önce açıklandığı gibi (17).
İmmünofenotipleme Hücre
yüzeyi işaretleyici ekspresyonunun değerlendirilmesi için hücreler,
CD4, CD8, CD45RO'ya karşı FITC-, fikoeritrin (PE-), allofikosiyanin (APC),
V450-, PerCP, APC-AF750 veya Krome turuncu konjuge antikorlar
(Abs) ile boyandı. , CD62L, CCR7, CD45RA, CD56, TCRgd, CD271, CD19,
7- AAD (BD Biosciences), murin TCRb sabit bölgesi (ebiosciences), NLV
pentamer (Proimmune) veya survivin LML dekstramer (Immudex),
4°C'de 30 dakika süreyle . Degranülasyon deneyi daha önce tarif
edildiği gibi yapıldı (13). Kısaca, VST'ler (106 ) golgi-plug/brefeldin A
(Invitrogen) ve CD107a/b VioBlue (BD Biosciences) ile işleme tabi
tutuldu ve ardından uygun işlem uygulandı.
İmmünolojide Sınırlar | www.frontiersin.org
Lösemi için Hızlı Transgenik VST'ler
uyarılar: CMV/EBV'ye özgü viral pepmiksler veya tek peptid (pp65, IE1,
LMP2, BZLF1, EBNA1, GLC, 1 mg/ml), survivin'e özgü LML peptidi,
viral pepmiksler/peptid artı LML peptidi, PMA (25 ng/ml) )/İyonomisin
(1 mg/ml) veya kontrol İnfluenza matris proteini GIL (GILGFVFTL,
Genemed sentez) peptidi (negatif kontrol), 37°C'de 4 saat süreyle.
Hücre içi boyama (ICS), anti-insan IFN-g-FITC ve TNF-a-PE (BD
Biosciences) antikorları kullanılarak gerçekleştirildi. Örnekler, BD
FACSDiva yazılımıyla bir FACS Canto'da alındı ve analiz, FlowJo yazılımı
(Tree Star Inc.) kullanılarak yapıldı.
IFN-g ELISpot IFN-g
üreten hücrelerin ELISpot ile miktarının belirlenmesi için, VST'ler ( oyuk
başına 105) üç kopya halinde kaplandı ve bireysel pepmiksler/peptitler
(1 ug/ml) veya hücre çizgileri (BV173 veya K562) ile 1:1 oranında
uyarıldı. oranı ( oyuk başına 105 hücre) veya tek başına ortam. Plakalar
gece boyunca 37°C/%5 CO2'de inkübe edildi ve geliştirildi. Nokta
Oluşturma Birimleri (SFU'lar) ZellNet tarafından numaralandırılmıştır.
Ortak Kültür Testi ve Sitokin Tespiti
Anti-tümör fonksiyonunu belirlemek için VST'ler ve BV173 hücreleri,
ekzojen sitokinler olmadan 1:5 E:T oranında birlikte kültürlendi.
Ortak kültürlerden gelen süpernatanlar 24 saat sonra toplandı ve
sitokin analizi için -80°C'de saklandı. 3 gün sonra kalan VST'ler ve
tümör hücreleri, CountBright Beads (Life Technologies) ve FACS analizi
kullanılarak numaralandırıldı. Sitokinler
3 Nisan 2022 | Cilt 13 | Madde 830021
Machine Translated by Google
Bajwa ve Arber
MILLIPLEX İnsan CD8+ T-hücreleri Manyetik Boncuk Paneli (EMD
Millipore) ve bir Luminex 200 cihazı (Luminex) kullanılarak
süpernatanlarda ölçüldü.
51Cr Salınım Tahlili VST'lerin in vitro kısa süreli
sitotoksisitesi, daha önce açıklandığı gibi standart bir 51Cr salma tahlili
kullanılarak değerlendirildi (13). Kısaca otolog aktive edilmiş T hücreleri
(hedefler), belirtilen peptitler veya pepmiksler (1 mg/ml) ile dolduruldu
ve 1 saat boyunca 51Cr ile etiketlendi. VST'ler ve hedef hücreler, 4 saat
boyunca çeşitli oranlarda inkübe edildi. Kontroller için hedef hücreler,
sırasıyla spontane ve maksimum salınımı ölçmek için tek başına
ortamda veya %1 triton-X 100 (Sigma-Aldrich) ile inkübe edildi. Üçlü
kuyucukların spesifik lizizinin ortalama yüzdesi şu şekilde hesaplandı:
[(test sayıları – spontan sayımlar)/(maksimum sayımlar – spontan
sayımlar)] x%100.
İstatistiksel Analiz Verileri
özetlemek için tanımlayıcı istatistikler kullanıldı.
Gruplar arasındaki karşılaştırma, student's t-testi veya One-Way
ANOVA'dan hangisi uygunsa kullanılarak yapıldı. İstatistiksel analiz için
GraphPad prizma 6 (GraphPad yazılımı, Inc., La Jolla, CA) veya üstü
kullanıldı. P değerleri <0,05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.
SONUÇLAR
IFN-g Sitokin Yakalama ve Retroviral Transdüksiyon Yoluyla
Transgenik VST'lerin Hızlı Oluşturulması Sağlıklı donörlerden
genetik olarak
tasarlanmış TCR8+ VST'leri hızlı bir şekilde oluşturmak için, Periferal
hücrelerin peptit uyarımı üzerine CMV ve EBV'ye özgü hafıza T hücrelerini
zenginleştirmek amacıyla IFN-g sitokin yakalama sistemini kullandık.
kan mononükleer hücreleri, ardından retroviral transdüksiyon.
Retroviral vektörün şeması (Şekil 1A) ve hücre izolasyonu, transdüksiyonu
ve genişleme sürecinin (Şekil 1B) şeması Şekil 1'de gösterilmiştir ve İyi
Üretim Uygulamaları (GMP) laboratuvarıyla tamamen uyumludur. 50 x
106 PBMC'den IFN-γ salgılayan VST'lerin ortalama verimi 0,15 x 106 idi
(aralık 3,13 x 104 – 2,2 x 106 , n = 8, Şekil 1C). IFN-g CC ile izole edilen
VST'ler, 3. günde doğrudan retroviral transdüksiyona devam etmek için
izolasyonla yeterince aktive edildi (TCR8+ vs NT VST'ler, %mTCR+
hücreleri; %66±9 vs %0,8±0,4, p<0,0001, ortalama±SD, n=8) (Şekil 2A).
TCR8+ VST'ler, transdüksiyona tabi tutulmamış (NT) VST'lere kıyasla
survivin spesifik dekstrameri etkili bir şekilde bağladı (TCR8+ vs NT
VST'ler, %mTCR+Dex+; %42±7 vs %0,3±0,4, p<0,0001, ortalama±SD,
n=8 , Şekil 2A). Hem TCR8+ hem de NT VST çizgileri, kullanılan NLV-
pentamer boyamaya dayalı olarak NLV+ hücrelerinde zenginleştirildi
(TCR8+ vs NT VST'ler; %18±15,8 vs %28±27, ortalama±SD, p=ns, n=5).
Ürün içindeki CMV'ye özgü hücreleri tespit etmek için (Şekil 2B).
Transdüksiyona tabi tutulmamış ve TCR8+ VST'ler, birinci (S1) (NT:
294±267 kat, TCR8+: 269±285 kat) ve ikinciden (S2) (NT: 6284±6646 kat,
İmmünolojide Sınırlar | www.frontiersin.org
Lösemi için Hızlı Transgenik VST'ler
TCR8+: 5877±6682 kat) uyarım sırasıyla (ortalama±SD, n=5, Şekil 2C).
Fenotipik olarak hem NT hem de TCR8+ VST'ler ağırlıklı olarak CD3+
CD8+ T hücrelerinden (NT: %95±3, TCR8+: %93±3, ortalama±SD, n=8)
ve düşük yüzdelerde CD3+ CD4+ T hücrelerinden (NT: 3) oluşuyordu. ±
%3, TCR8+: %1±1, ortalama±SS, n=8)
(Şekil 2D). Ürünlerimizde NK hücrelerinin (CD3-CD56+) ve TCRgd+ T
hücrelerinin tamamen bulunmadığını bulduk. Bununla birlikte, TCR8+
VST'ler, NT VST'lere kıyasla biraz daha yüksek CD3+ CD56+ aktive edilmiş
T hücresi frekansları içeriyordu (NT vs TCR8+: 0±0 vs %10±10, p=ns,
n=8) (Şekil 2E). CD3+CD8+ bölmesindeki bellek alt kümesi dağılımı, hem
NT hem de TCR8+ VST'lerde yüksek oranda merkezi bellek T hücresi
(TCM) ortaya çıkardı (NT vs TCR8+, saf (TN) %1,9±1,9 vs %2,5±2,7, TCM;
75 ±%18 vs %81±12, efektör hafızası (TEM) %22±18 vs %16±11, terminal
olarak farklılaşmış (TEMRA) %0,8±1,2 vs %0,7±0,9, p=ns, n=6) (Şekil
2F ) ). Böylece, IFN-g yakalama ve retroviral transdüksiyon
kombinasyonunun, CD8+ TCM hücrelerinde oldukça zenginleştirilmiş,
eşzamanlı anti-viral ve anti-tümör spesifikliklerine sahip tasarlanmış T
hücresi ürünlerini hızlı bir şekilde üretebildiğini gösterdik .
IFN-g Yakalama TCR8+ VST'ler Hedeflenen Viral ve Tümör Antijenlerine
Karşı Tepki Vermektedir Daha sonra, NT ve TCR8+ VST'lerin
antijen spesifik fonksiyonunu IFN-g ELISPOT ve hücre içi sitokin boyama
(ICS) ile değerlendirdik. Beklendiği gibi, NT VST'ler değil, TCR8+ aynı
kökenli survivin peptidine (LML) veya transgenik TCR tarafından
hedeflenen HLA-A*02:01+survivin+ lösemi hücre çizgisi BV173'e yanıt
olarak IFN-g üretti (IFN-g SFC'ler NT'ye karşı TCR8+ VST'ler; LML: 7,0±3,7
vs 577±268, p=0,003; BV173: 71,5±122 vs 925±246 p<0,0001, n=6,
ortalama±SD) (Şekil 3A, sol üst). Önemli olarak hem NT hem de TCR8+
VST'ler, CMV (pp65 ve IE1 pepmiksi) ve EBV (LMP2, EBNA1 ve BZLF1
pepmikleri, GLC ve YVL peptidleri) antijenlerine karşı karşılaştırılabilir
anti-viral reaktiviteler gösterirken, NLV reaktivitesinde küçük ama
anlamlı bir azalma gözlendi. TCR8+ VST'ler (Şekil 3A). Bu sonuçlar, viral
antijenlere yanıt olarak NT ve TCR8+ VST'lerde benzer degranülasyon
(CD107a/b), IFN-g ve TNF-a seviyelerini bulduğumuz ICS tarafından da
desteklenmiştir (Şekil 3B). Yine survivinden türetilen LML peptidi yalnızca
TCR8+ tarafından tanındı ancak NT VST'ler tarafından tanınamadı.
Dolayısıyla, IFN-g yakalama TCR8+ VST'leri hem hedeflenen tümöre
hem de viral antijenlere karşı spesifiktir ve onlara karşı reaktiftir ve anti-
viral reaktiviteler, TCR8'in transdüksiyonu ve zorla ekspresyonuyla
değiştirilmez.
IFN-g yakalar TCR8+ VST'ler Viral ve Tümör Hedeflerini in vitro
Öldürür Daha sonra NT ve TCR8+
VST'lerin sitotoksisitesini ortak kültürlerde ve 4 saatlik bir 51 Krom
salınım tahlilinde değerlendirdik. Biz ne zaman
HLA-A*02:01+survivin+ BV173 lösemi hücreleriyle birlikte kültürlenmiş
NT veya TCR8+ VST'ler, hedef hücrelerin TCR8+ tarafından önemli
ölçüde öldürüldüğünü gözlemledik, ancak NT VST'ler tarafından
öldürülmedi (kalan tümör hücre sayısı NT'ye karşı TCR8+: 2,3±0,6x106'ya
karşı 0,04±) 0,07 x 106 , p=0,0004, ortalama±SS, n=6) (Şekil 4A, sol).
Ortak kültürlerin sonunda VST sayımlarında hiçbir fark görülmedi (Şekil
4A, sağ). Ayrıca sitokin salgılanmasını ve birlikte bulunan litik granülleri de analiz ettik
4 Nisan 2022 | Cilt 13 | Madde 830021
Machine Translated by Google

Bajwa ve Arber Lösemi için Hızlı Transgenik VST'ler

B C

e F

ŞEKİL 2 | TCR8+ VST'lerin fenotipik karakterizasyonu ve kat genişlemesi. (A) Temsilci FACS, transdüksiyon verimliliklerinin (mTCRb, CD271) ve transgenik TCR özgüllüğünün
[LML dekstramer (Dex)] özetini (solda) ve özetini (sağda). NT: dönüştürülmemiş. NT vs TCR8+, ortalama ± SD, ****p < 0,0001, her ikisinde de n=8.
(B) Temsilci FACS, NT ve TCR8+ VST'lerdeki CMV'ye özgü T hücrelerinin (solda) ve özetini (sağda) çizer. NT vs TCR8+, ortalama ± SD, n=5, p=ns. Nokta rengi bireysel bağışçıları
gösterir. (C) Birinci (S1) ve ikinci (S2) stimülasyondan sonra NT (açık daireler) ve TCR8+ (mavi daireler) VST'lerin genişlemesini katlayın. (D) CD4+ ve CD8+ T hücrelerinin
dağılımı, temsili FACS grafikleri (sol) ve özet (sağ) (toplam canlı hücrelere bağlı), ortalama ± SD, n=5. (E) NT ve TCR8+ VST'lerde NK hücrelerinin (CD56+CD3-), aktive edilmiş T
hücrelerinin (CD56+CD3+) veya TCRgd T hücrelerinin (TCRgd+CD3+) analizi. Temsilci FACS çizimleri (solda) ve özet (sağda) (toplam canlı hücrelere göre), ortalama ± SD, n=5. (F)
VST'lerin hafıza fenotipinin temsili FACS grafiği (üstte) ve özeti (altta) (canlı CD3+CD8+ T hücrelerine kapılı): saf (TN), merkezi hafıza (TCM), efektör hafızası (TEM) ve terminal
olarak farklılaşmış ( TEMRA) CD45RO ve CD62L boyamaya dayalı NT ve TCR8+ VST'lerle karakterize edilen alt gruplar, n=5, ortalama±SD. ns, anlamlı değil.

İmmünolojide Sınırlar | www.frontiersin.org 5 Nisan 2022 | Cilt 13 | Madde 830021

Machine Translated by Google

Bajwa ve Arber Lösemi için Hızlı Transgenik VST'ler

ŞEKİL 3 | TCR8+ VST'ler survivin ve viral (CMV ve EBV) antijenleri için çoklu antijene spesifiktir. (A) S1'den sonra NT veya TCR8+ VST'ler viral (CMV ve EBV) pepmiksler/peptitler,
survivin peptidi veya lösemi hücre çizgileri (BV173: HLA-A2*02:01+survivin+ veya K562: HLA-A2-) ile uyarıldı. 24 saat ve IFN-g nokta oluşturan hücreler (SFC) ELISPOT ile ölçüldü,
n=6, ortalama ± SD: NT vs TCR8+, LML peptidi: **p=0,003, BV173: ****p<0,0001, NLV peptidi : *p=0,035, pp65, IE1, LMP2, BZLF, EBNA1, GLC peptidi, YVL peptidi: ortalama
± SD, p=ns, n=6. (B) NT veya TCR8+ VST'ler, viral pepmikler, LML peptidi, viral pepmiksler artı LML peptidi, PMA/İyonomisin (25 ng/ml) veya ilgili influenza GIL peptidi
(negatif kontrol) ile 4 saat boyunca uyarıldı ve degranülasyon için boyandı (CD107a/ b) ve hücre içi IFN-g ve TNF-a ve ardından FACS analizi. CD107a/b+/IFNg+ (sol üst), CD107a/
b+/TNFa+ (üst orta) ve (CD107a/b+/IFNg+/TNFa+ (çok işlevli, sağ üst) ifade eden hücrelerin yüzdesi gösterilmektedir. Noktalar, ortalama ± SD, n= 3 donör. NT (solda) ve TCR8
(sağda) için temsili FACS grafikleri altta gösterilmektedir (toplam canlı hücrelere geçişli, ardından CD107a/b+ hücrelerine geçişli). ns, anlamlı değil.

Tümör tehdidinden 24 saat sonra kültür süpernatantı. TCR8+ VST'ler,
IFN-g, TNF-a ve IL-10 dahil önemli miktarlarda TH1 sitokinleri üretti
(NT'ye karşı TCR8+ VST'ler: IFN-g; 0,9±1,0'a karşı 8,1±4,0 ng/ml,
p=0,017, TNF-a; 0,02) ±0,01 vs 1,2±0,9 ng/ml, p=0,017, IL-10; 0,3±0,2
vs 2,8±2,1 ng/ml, p=0,028, ortalama±SS, n=6) ve sitolitik granüller
(GZMB NT vs TCR8+: 2,7±1,5 vs 6,8±4,0 ng/ml, p=0,02, ortalama±SS,
n=6) (Şekil 4B). Biz
Hiçbir sitotoksisite gözlenmemesine rağmen NT VST'lerin
süpernatanına GZMA ve performans salımı tespit edildi. 4 saatlik 51
Krom salınımlı sitotoksisite analizinde, viral peptitler ile doldurulan
aktive edilmiş otolog T hücrelerinin, çeşitli E:T oranlarında hem NT
hem de TCR8+ VST'ler tarafından etkili bir şekilde parçalandığını,
darbe uygulanmayan hedeflerin ise öldürülmediğini bulduk (Şekil
4C, ortalama ± SD, n=3 donör, her biri teknik olarak üç kopya halinde kaplanmıştır

İmmünolojide Sınırlar | www.frontiersin.org 6 Nisan 2022 | Cilt 13 | Madde 830021

Machine Translated by Google

Bajwa ve Arber Lösemi için Hızlı Transgenik VST'ler

ŞEKİL 4 | TCR8+ VST'ler, aynı kökenli viral ve tümör hedeflerine karşı in vitro sitotoksiktir. (A) NT veya TCR8+ VST'lerin BV173 lösemi hücreleriyle (HLA-A2*02:01+survivin+) ortak kültürü;
E:T oranı 1:5. 3. günde FACS ile ölçülen kalıntı BV173 hücreleri (sol) veya VST'ler (sağ), NT vs TCR8+, ortalama ± SD, Tümör hücreleri: ***p=0,0004;
VST'ler: p=ns; n=6. (B) 24 saatlik ortak kültürden sonra süpernatanlarda sitokin ölçümü, NT vs TCR8+, ortalama ± SD, IFN-g, TNF-a, Granzyme (Gzm) B, GM-CSF, IL-10 ve IL-4: *p< 0,05,
n=6. (C) Peptit/pepmix darbeli veya darbesiz aktive edilmiş otolog T hücrelerinin veya BV173 hücrelerinin NT veya TCR8+ VST'ler tarafından 4-'lük bir aralıkta spesifik lizizi yüzdesi
saat 51Cr-salım tahlili, 40:1, 20:1, 10:1, 5:1 E:T oranlarında, ortalama ± SD, n=4. (D) Bireysel donörleri gösteren E:T 10:1 oranında spesifik lizis yüzdesinin özeti
(renkli noktalar). NT vs TCR8+, ortalama ± SD, NLV peptidi, havuzlanmış CMV, havuzlanmış EBV: p=ns; BV173 hücreleri: *p=0,01, n=3, eşleştirilmiş t-testi. ns, anlamlı değil.

A*02:01+survivin+ BV173 lösemi hücreleri yalnızca Neredeyse yalnızca EBV'ye yönelikti, karşı değil
TCR8+ ancak NT VST'ler değil. Donör heterojenliği CMV, değerlendirilen diğer iki donörün gösterdiği gibi
CMV ve/veya EBV reaktivitesi aşağıdaki şekilde gösterildiği gibi yüksekti: Her iki virüse karşı eşzamanlı yanıtlar. Lösemi karşıtı
Şekil 4D. Örneğin, 9 numaralı donörden alınan anti-viral spesifiklik transgenik TCR tarafından sağlanan aktivite çok daha fazlaydı

İmmünolojide Sınırlar | www.frontiersin.org 7 Nisan 2022 | Cilt 13 | Madde 830021

Machine Translated by Google
Bajwa ve Arber
tutarlı bağışçılar arasında. Böylece yaklaşımımızla oluşturulan TCR8+
VST'lerin hem viral hem de tümör hedeflerine karşı sitotoksik ve işlevsel
olduğunu gösterdik.
TARTIŞMA
Burada, eşzamanlı anti-viral ve anti-tümör aktivitesine sahip, tasarlanmış
insan T hücrelerinin hızlı bir şekilde üretilmesi için bir yaklaşım sunuyoruz
(Şekil 5). IFN-g sitokin yakalama sistemiyle, retroviral transdüksiyona
doğrudan uygun olan anti-viral hafızalı CD8+ T hücrelerini verimli bir şekilde
zenginleştirdik ve etkinleştirdik; böylece daha önce oluşturulan işlemlerle
karşılaştırıldığında üretimin karmaşıklığını önemli ölçüde azalttık. CD8ab
ortak reseptörünün hedeflenen TCR ile transgenik birlikte ekspresyonu,
hem endojen anti-viral hem de transgenik anti-tümör TCR'ler için yeterli
ortak reseptör mevcudiyetini sağlamıştır. Etkin bir şekilde tanınan
yaklaşımımızla oluşturulan T hücreleri, hem viral hem de tümör hedeflerini
öldürür.
Yaklaşımımız, tasarlanmış VST'lerin üretimine yönelik diğer yerleşik
süreçlere göre önemli avantajlara sahiptir ve yarı otomatik kapalı bir sürece
geçmenin düşünülmesine olanak tanır. En önemli avantajları şunlardır: (1)
lenfoblastoid hücre dizilerinin üretimi için canlı virüse gerek yoktur, (2) viral
antijen sunumu ve T hücresi aktivasyonu, periferik kan mononükleer
hücrelerinin peptit darbesi ile sağlanması ve ilave antijen sunan hücre
üretiminin gerekmemesidir. gerekli olması, (3) T hücresi seçimi ve
aktivasyonu için kısa bir kültür periyodundan sonra doğrudan gen
modifikasyonuna geçilmesine izin veren tek adımlı bir prosedür yeterlidir,
(4) seçim manyetik kolonlarla yapılır ve akış sitometrisi gerektirmez-
sıralamaya dayalıdır ve daha da önemlisi (5) bu yaklaşım, üretim süresinin
yanı sıra ürün üretimi için gereken manipülasyon sayısını da önemli ölçüde
azaltır. IFN-g ile yakalanan VST'ler, daha çok yönlü ve uygun maliyetli olan
transpozonlar veya CRISPR/Cas9 gibi viral olmayan gen dağıtım sistemleri
kullanılarak potansiyel olarak değiştirilebilir (18). Ayrıca yaklaşımı
yükseltmeyi ve açık üretim adımlarına olan ihtiyacı azaltmayı planlıyoruz.
Örneğin, sitokin yakalamanın yanı sıra gen modifikasyonu ve hücre
genişlemesi, otomatikleştirilmiş bir sistemin yeteneklerine uyarlanabilir.
ŞEKİL 5 | Transgenik virüse özgü T hücresi üretimine ve fonksiyonel değerlendirmeye şematik genel bakış.
İmmünolojide Sınırlar | www.frontiersin.org
Lösemi için Hızlı Transgenik VST'ler
örneğin CliniMACS Prodigy sistemi (16, 19) gibi kapalı üretim platformu .
Bununla birlikte, elimizde (1) CD8+ T hücrelerinin neredeyse tamamen
zenginleştirilmesi ve (2) CC seçim prosedüründen sonra T hücresi veriminde
yüksek donör değişkenliği bulunan bazı dezavantajlar da belirledik. Aslında
virüse özgü CD4+ T hücreleri, sitotoksik CD8+ T hücresi yanıtlarını
güçlendirerek, etkili ve uzun süreli antikor yanıtları için B hücrelerine
yardım sağlayarak ve doğrudan sitotoksik etkilerle uzun süreli antiviral
bağışıklığın geliştirilmesinde önemli bir rol oynar. (20–22). HSCT'den sonra
bağışıklık sistemi baskılanmış hastalara VST transferinin benimsenmesi
üzerine, CD4+ T hücresi bölmesi uzun süreli viral kontrolün geliştirilmesinde
etkili oldu (23). Çalışmamızda CD4+ T hücresi zenginleşmesinin olmaması,
viral pepmikslerle stimülasyonumuzun, stimülasyonun 16 saat sürdüğü
önceki literatürle karşılaştırıldığında yalnızca 6 saatten fazla gerçekleştirilmiş
olmasından kaynaklanıyor olabilir (14, 24), bu da gerekli bir faktördür.
gelecekte değerlendirilmek üzere. Viral antijene spesifik hücre frekansındaki
yüksek değişkenlik önceki gözlemlerle tutarlıdır (14, 16, 24) ve dolaşımdaki
antiviral hafıza T hücresi frekansının farklı bireylerde geniş bir aralıkta
değiştiği gerçeğini doğrulamaktadır.
VST'ler, allojenik, kullanıma hazır tasarlanmış T hücresi tedavilerinin
geliştirilmesi için ilginç bir hücre terapisi platformudur. Çeşitli akademik
klinik çalışmalar, kısmen HLA uyumlu ortamlarda üçüncü taraf donörden
türetilmiş bankalanmış VST'lerin infüzyonu ile katı organ nakli veya allojenik
HSCT sonrası bağışıklık sistemi baskılanmış hastalarda viral enfeksiyonların
kontrol edilmesinde güvenlik ve etkinlik göstermiştir (25-30). Üçüncü taraf
VST hücre terapisi artık ticarileşme yolundadır. VST'ler viral antijenle sınırlı
bir TCR repertuarını eksprese ettiğinden, çalışmalar boyunca infüze edilen
hastalarda anlamlı graft-versus host hastalığı üretmediler. Bununla birlikte,
in vivo kalıcılık, HLA uyumlu donörlerden türetilen VST'lerle karşılaştırıldığında
daha kısaydı [yakın zamanda (3)'te gözden geçirildi], bu da konakçı T veya
NK hücreleri tarafından önemli ölçüde reddedildiğini gösterir. Son
zamanlarda, gen-modifiye edilmiş VST'lerin (31, 32) reddedilmesine karşı
direnç kazandırmak için ek mühendislik stratejileri geliştirilmiştir; bu da
daha genel bir hücre terapisi platformu olarak gelecekteki potansiyel
uygulanabilirliği daha da artırır.
8 Nisan 2022 | Cilt 13 | Madde 830021
Machine Translated by Google
Bajwa ve Arber
Özetle, gen mühendisliğiyle üretilmiş VST'lerin üretiminin, IFN-g sitokin
yakalama ve retroviral transdüksiyonu birleştirerek basitleştirilebileceğini
ve kısaltılabileceğini gösteriyoruz. Sürecimiz ölçeklenebilir, viral olmayan
gen dağıtım sistemlerinin kullanımına uygundur ve hem anti-viral hem de
anti-tümör aktivitesine sahip oldukça çok işlevli T hücreleri üretir.
Yaklaşımımızın klinik çevirisi, allojeneik kök hücre nakli sonrası hastalarda
viral enfeksiyonu ve malignite nüksetmesini önlemek veya tedavi etmek
amacıyla bir klinik deneyde öngörülebilir.
VERİ KULLANILABİLİRLİĞİ BEYANI
Bu makalenin sonuçlarını destekleyen ham veriler, makul talep üzerine
yazarlar tarafından sağlanacaktır.
ETİK BEYANI
İnsan katılımcılar üzerinde yapılan çalışma için yerel mevzuat ve kurumsal
gereklilikler uyarınca etik inceleme ve onay gerekmemiştir. Ulusal mevzuat
ve kurumsal gereklilikler uyarınca bu çalışma için katılım için yazılı
bilgilendirilmiş onam gerekmemiştir.
REFERANSLAR
1. Bollard CM, Heslop HE. Allojeneik Hematopoietik Kök Hücre Nakli
Sonrası Viral Enfeksiyonlarda T Hücreleri. Kan (2016) 127(26):3331–40.
doi: 10.1182/kan-2016-01-628982
2. O'Reilly RJ, Prockop S, Hasan A, Doubrovina E. Tanımlanmış HLA Kısıtlamasının
Bankaya Alınmış Virüse Spesifik T Hücreleri Tarafından Sağlanan Terapötik
Avantajlar. Kemik İliği Nakli (2019) 54(Ek 2):759–64. doi: 10.1038/
s41409-019-0614-1
3. Perez C, Gruber I, Arber C. Kanser için Kullanıma Hazır Allojeneik T Hücresi Tedavileri: Doğal
Olarak Oluşan "Evrensel" Kullanımın Fırsatları ve Zorlukları
Donör T hücreleri. Ön Immunol (2020) 11:583716. doi: 10.3389/ fimmu.2020.583716
4. Cruz CR, Micklethwaite KP, Savoldo B, Ramos CA, Lam S, Ku S, ve diğerleri.
Allojeneik Kök Hücre Nakli Sonrası Nükseden B Hücresi Maligniteleri için Donörden
Türetilen CD19'a Yönlendirilmiş Virüse Spesifik T Hücrelerinin İnfüzyonu: Bir Faz 1
Çalışması. Kan (2013) 122(17):2965–73. doi: 10.1182/blood-2013-06-506741 5. Rossig C,
Pule M, Altvater B, Saiagh S, Wright G, Ghorashian S, et al.
Tekrarlayan Pediatrik Akut Lenfoblastik Lösemide CD19CAR Geni Modifiye T
Hücrelerinin Kalıcılığını Artırmak İçin Aşılama. Lösemi (2017) 31(5):1087–95. doi:
10.1038/leu.2017.39 6. Lapteva N,
Gilbert M, Diaconu I, Rollins LA, Al-Sabbagh M, Naik S, et al. T Hücresi Reseptör
Stimülasyonu, CD19 Kimerik Antijen Reseptörünü Eksprese Eden T Hücrelerinin
Genişlemesini ve Fonksiyonunu Artırır. Clin Cancer Res (2019) 25(24):7340–50. doi:
10.1158/1078-0432.CCR-18-3199
7. Chapuis AG, Egan DN, Bar M, Schmitt TM, McAfee MS, Paulson KG, ve diğerleri.
WT1'i Hedefleyen T Hücresi Reseptör Gen Terapisi, Nakil Sonrası Akut Miyeloid
Lösemi Nüksetmesini Önler. Nat Med (2019) 25(7):1064–72. doi: 10.1038/
s41591-019-0472-9
8. van Balen P, Jedema I, van Loenen MM, de Boer R, van Egmond HM, Hagedoorn
RS, ve diğerleri. Allojeneik Kök Hücre Transplantasyonu Sonrası Hematolojik
Malignitelerin Tedavisinde Virüse Spesifik T Hücrelerini Yönlendirmek İçin HA-1h
T-Hücresi Reseptör Gen Transferi: Bir Faz 1 Klinik Çalışma. Ön Immunol (2020)
11:1804. doi: 10.3389/fimmu.2020.01804
9. Campillo-Davo D, Anguille S, Lion E. Deneme İzlemesi: Akut Miyeloid Lösemi için
Benimsenen TCR Tasarımlı T Hücreli İmmünoterapi. Kanserler (Basel) (2021)
13(18). doi: 10.3390/kanserler13184519
İmmünolojide Sınırlar | www.frontiersin.org
Lösemi için Hızlı Transgenik VST'ler
YAZAR KATKILARI
Büyük Britanya araştırma tasarladı, deneyler yaptı, sonuçları analiz etti,
yorumladı ve taslağı yazdı. CA araştırmayı tasarladı, tüm çalışmayı
denetledi, sonuçları analiz edip yorumladı ve taslağı yazdı. Her iki yazar da
makaleye katkıda bulundu ve sunulan versiyonu onayladı.
FİNANSMAN
Çalışma, Lösemi ve Lenfoma Derneği Çeviri Araştırma Programı Bursu
(6490-16), Lozan Üniversite Hastanesi (CHUV) ve İsviçre'deki Lozan
Üniversitesi tarafından tamamı CA'ya desteklenmiştir. Açık erişim
finansmanı Lozan Üniversitesi tarafından sağlandı.
TEŞEKKÜRLER
Baylor Tıp Fakültesi Hücre ve Gen Terapisi Merkezi üyelerine ve Lozan
Üniversitesi Ludwig Lozan Şubesi üyelerine faydalı tartışmalar ve öneriler
için teşekkür ederiz. Taslağın eleştirel okunması için Cynthia Perez'e
teşekkür ederiz.
10. Abou-El-Enein M, Elsallab M, Feldman SA, Fesnak AD, Heslop HE, Marks P, et al. Kanser
İmmünoterapisi için CAR T Hücrelerinin Ölçeklenebilir Üretimi.
Kan Kanseri Discov (2021) 2(5):408–22. doi: 10.1158/2643-3230.BCD-21-
0084
11. Arber C, Feng X, Abhyankar H, Romero E, Wu MF, Heslop HE, ve diğerleri.
Survivin'e Özel T Hücresi Reseptörü Tümörü Hedef Alır Ancak T Hücrelerini Hedeflemez. J
Clin Invest (2015) 125(1):157–68. doi: 10.1172/JCI75876
12. Rath JA, Bajwa G, Carreres B, Hoyer E, Gruber I, Martinez-Paniagua MA, ve diğerleri. Tek
Hücreli Transkriptomikler, TCR ve CD8alfabeta ile Tasarlanmış İnsan CD4(+)'ın Antitümör
Fonksiyonunun Altında yatan Çoklu Yolları Tanımlıyor
T hücreleri. Sci Adv (2020) 6(27):eaaz7809. doi: 10.1126/sciadv.aaz7809 13.
Bajwa G, Lanz I, Cardenas M, Brenner MK, Arber C. Transgenik CD8alphabeta Yardımcı
Reseptörü, TCR-Transgenik Virüse Spesifik T Hücrelerinde Endojen TCR Fonksiyonunu
Kurtarır. J Immunother Cancer (2020) 8(2):e001487. doi: 10.1136/jitc-2020-001487 14.
Feuchtinger T, Opherk K, Bethge
WA, Topp MS, Schuster FR, Weissinger EM, ve diğerleri. Kemorefrakter Sitomegalovirüs
Hastalığının Tedavisinde veya Haploidentik ve Eşleştirilmiş İlişkisiz Kök Hücre
Transplantasyonu Sonrası Yeniden Aktivasyonda Pp65'e Spesifik T Hücrelerinin Adaptif
Transferi. Kan (2010) 116(20):4360–7. doi: 10.1182/blood-2010-01-262089 15. Priesner C,
Esser R, Tischer S, Marburger M, Aleksandrova K, Maecker-Kolhoff B,
et al. Kısmen ve Tamamen Entegre Platformlar Kullanılarak Klinik Ölçekte IFN-Gama-Pozitif T-
Hücresi Zenginleştirmesinin Karşılaştırmalı Analizi. Ön Immunol (2016) 7:393. doi: 10.3389/
fimmu.2016.00393 16. Kim N, Nam YS, Im KI, Lim JY, Jeon YW, Song Y, ve diğerleri. Tam
Otomatik IFN-Gama Sitokin Yakalama Sistemi Kullanılarak
Sitomegalovirüs Pp65'e Özel T Hücrelerinin Güçlü Üretimi. Transfus Med Hemother (2018)
45(1):13–22. doi: 10.1159/000479238
17. Ngo MC, Ando J, Leen AM, Ennamuri S, Lapteva N, Vera JF, ve diğerleri.
Geniş Hedef Spesifikliğine Sahip T Lenfositleri Oluşturmak için Antijen Sunan Hücrelerin
Tamamlanması. J Immunother (2014) 37(4):193–203. doi: 10.1097/CJI.000000000000000014
18. Irving M, Lanitis E, Migliorini D,
Ivics Z, Guedan S. Genetik Mühendisliği için Doğru Aracı Seçmek: Kimerik Antijen Reseptör-T
Hücrelerinden Klinik Dersler. Hum Gene Ther (2021) 32(19–20):1044–58. doi: 10.1089/
hum.2021.173 19. Joedicke JJ, Grosskinsky U, Gerlach K, Kunkele A, Hopken UE, Rehm A.
Tanımlanmış Özelliklerle BCMA CAR T Hücrelerinin Klinik Ölçekli Üretiminin Hızlandırılması
9 Nisan 2022 | Cilt 13 | Madde 830021
Machine Translated by Google
Bajwa ve Arber
Olgunlaşma Aşamaları. Mol Ther Yöntemleri Clin Dev (2022) 24:181–98. doi: 10.1016/
j.omtm.2021.12.005 20. Novy
P, Quigley M, Huang X, Yang Y. CD4 T Hücreleri, Hem Birincil Hem de Bellek Geri Çağırma
Yanıtları Sırasında CD8 T Hücresinin Hayatta Kalması İçin Gereklidir. J Immunol
(2007) 179(12):8243–51. doi: 10.4049/jimmunol.179.12.8243 21.
Pourgheysari B, Piper KP, McLarnon A, Arrazi J, Bruton R, Clark F, ve diğerleri.
Efektör Hafıza CD4+ CMV'ye Spesifik T Hücrelerinin Erken Sulandırılması, Allojeneik
SCT Sonrası CMV Reaktivasyonuna Karşı Koruma Sağlar. Kemik İliği Nakli (2009)
43(11):853–61. doi: 10.1038/bmt.2008.403 22. Swain SL, McKinstry KK, Strutt
TM. Virüslere Karşı Bağışıklıkta CD4(+) T Hücrelerinin Rollerinin Genişletilmesi. Nat Rev
Immunol (2012) 12(2):136–48. doi: 10.1038/ nri3152
23. Walter EA, Greenberg PD, Gilbert MJ, Finch RJ, Watanabe KS, Thomas ED, ve diğerleri.
Donörden T Hücresi Klonlarının Transferi Yoluyla Allojeneik Kemik İliği Alıcılarında
Sitomegalovirüse Karşı Hücresel Bağışıklığın Yeniden Oluşturulması. N Engl J Med
(1995) 333(16):1038–44. doi: 10.1056/ NEJM199510193331603
24. Rauser G, Einsele H, Sinzger C, Wernet D, Kuntz G, Assenmacher M, ve diğerleri.
Allojeneik Kök Hücre Nakli Alıcılarına Adaptif Transfer için Kombine CMV'ye Spesifik
CD4+ ve CD8+ T-Hücre Hatlarının Hızlı Üretimi.
Kan (2004) 103(9):3565–72. doi: 10.1182/blood-2003-09-3056 25.
Haque T, Wilkie GM, Jones MM, Higgins CD, Urquhart G, Wingate P, ve diğerleri.
EBV-Pozitif Transplantasyon Sonrası Lenfoproliferatif Hastalık için Allojeneik
Sitotoksik T-Hücre Tedavisi: Faz 2 Çok Merkezli Klinik Araştırmanın Sonuçları.
Kan (2007) 110(4):1123–31. doi: 10.1182/blood-2006-12-063008 26. Leen
AM, Bollard CM, Mendizabal AM, Shpall EJ, Szabolcs P, Antin JH, et al.
Hematopoietik Kök Hücre Transplantasyonu Sonrası Şiddetli Viral Enfeksiyonları
Tedavi Etmek İçin Bankaya Alınmış Üçüncü Taraf Virüse Spesifik T Hücrelerinin Çok
Merkezli Çalışması. Kan (2013) 121(26):5113–23. doi: 10.1182/
blood-2013-02-486324 27. Withers B, Blyth E, Clancy LE, Yong A, Fraser C, Burgess J, et
al. Üçüncü Taraf Virüse Spesifik T Hücreleri ile Allojeneik HSCT Sonrası Tekrarlayan
veya Dirençli Viral Enfeksiyonların Uzun Dönem Kontrolü. Blood Adv (2017)
1(24):2193–205. doi: 10.1182/bloodadvances.2017010223
28. Withers B, Clancy L, Burgess J, Simms R, Brown R, Micklethwaite K, ve diğerleri.
Üçüncü Taraf Virüse Özel T Hücre Bankasının Kurulması ve İşletilmesi
İmmünolojide Sınırlar | www.frontiersin.org
Lösemi için Hızlı Transgenik VST'ler
Allojeneik Kök Hücre Nakli Programı kapsamında. Biol Kan İliği Nakli (2018)
24(12):2433–42. doi: 10.1016/j.bbmt.2018.08.024 29. Tzannou I, Watanabe
A, Naik S, Daum R, Kuvalekar M, Leung KS, et al.
Yalnızca 8 Donörden Oluşan "Mini" Banka, Çeşitli Alıcılara CMV Yönelimli T Hücreleri
Sağlıyor. Blood Adv (2019) 3(17):2571–80. doi: 10:1182/ Bloodadvances201900 30.
Prockop S, Doubrovina
E, Suser S, Heller G, Barker J, Dahi P, ve diğerleri. Transplantasyon Sonrası Rituximab'a
Dirençli EBV ile İlişkili Lenfoma için Kullanıma Hazır EBV'ye Özel T Hücresi
İmmünoterapisi. J Clin Invest (2020) 130(2):733–47. doi: 10.1172/JCI121127 31.
Quach DH, Becerra-Dominguez L,
Rouce RH, Rooney CM. Alloreaktif T Hücrelerini Ortadan Kaldırmak İçin Tasarlanmış
Virüse Özel T Hücrelerini Kullanarak Kullanıma Hazır Hücre Terapisi Ürünlerini
Korumaya Yönelik Bir Strateji. J Transl Med (2019) 17(1):240. doi: 10.1186/
s12967-019-1988-y 32. Mo F,
Watanabe N, McKenna MK, Hicks MJ, Srinivasan M, Gomes-Silva D, ve diğerleri.
Tasarlanmış Kullanıma Hazır Terapötik T Hücreleri Konakçının Bağışıklık Reddine
Dirençlidir. Nat Biotechnol (2021) 39(1):56–63. doi: 10.1038/s41587-020-0601-5
Çıkar Çatışması: CA ve GB, Immatics'ten lisans ücreti almaktadır. GB, Immatics'in mevcut
bir çalışanıdır. CA'nın tasarlanmış T hücresi tedavileri alanında patentleri ve bekleyen
patent başvuruları vardır. Büyük Britanya'nın tasarlanmış T hücresi tedavileri alanında
beklemede olan patent başvuruları vardır.
Yayıncının Notu: Bu makalede ifade edilen tüm iddialar yalnızca yazarlara aittir ve
bunların bağlı kuruluşlarının veya yayıncının, editörlerin ve hakemlerin iddialarını temsil
etmeyebilir. Bu makalede değerlendirilebilecek herhangi bir ürün veya üreticisi
tarafından öne sürülebilecek iddialar, yayıncı tarafından garanti edilmez veya onaylanmaz.
Telif Hakkı © 2022 Bajwa ve Arber. Bu , Creative Commons Atıf Lisansı (CC BY) koşulları
altında dağıtılan açık erişimli bir makaledir. Orijinal yazar(lar)a ve telif hakkı sahibine/
sahiplerine atıfta bulunulması ve kabul edilen akademik uygulamalara uygun olarak bu
dergideki orijinal yayına atıfta bulunulması koşuluyla, diğer forumlarda kullanılmasına,
dağıtılmasına veya çoğaltılmasına izin verilmektedir. Bu şartlara uymayan hiçbir
kullanıma, dağıtıma veya çoğaltmaya izin verilmez.
10 Nisan 2022 | Cilt 13 | Madde 830021