ALT/GPT Liquiform Instrugdes de Uso Finalidade . sistema para doterminagao da Alanina Amino Transterase (ALT) ou Transaminase Glutémico Piruvica (GPT) em modo cindtico. Uso protissional [Somente parauso diagnéstico invitro.] Principio . A ALT cataisa especticaments a transterénea do grupo amina da alanina para 0 cetoglutarato, com formagao de glutamato ¢ piruvato. O piruvato é reduzido a lactato por agdo da lactato desirogenase (LDH), enquanto que, acoenzima NADH ¢oxidada a NAD. ‘A redugao da absorbancia em 340 nm, consequente & oxidagdo da ccoenzima NADH, 6 monitorada fotometricamente, sendo diretamente proporcional atividade da ALT na amostra ALT LAlanina + Cetoglstarato ———P Piruvato + |-Glutemato LDH Piruvato + NADH ——— NAD + L-Lactato Caracteristicas do sistema . A metodologia cinética-UV para rmediggo da atividade da ALT foi inroduzida por Karmen’ sendo posteriormente otimizada por Henry ¢ colaboradores” e o procedimento «de medigdo ganhou acetagdo mundial por ser rapido, preciso e exato. (O método de referéncia proposto pela International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC)* recomenda a utlizagao do piridoal fosfato para assegurar que toda transferase presente no soro estoja totalmente ativa,evtando assim, valores falsamente diminuidos em amostras. com deficiéncia da coenzima, O sistema Labtest esta ctimizado para atender a essas recomendacdes. Para obtengdo de resultados rastredveis ao método de referéncia FCC, & necessério utilizar o procedimenta bi-reagente com a ativacao pelo piridoxal fosfato (Reagente 3). Quando se aplca o procedimento mono- reagente nao se uliliza a ativag2o com piridoxal fosfato. Portanto, os resultados obtidas nao sao rastredveis aa método de referencia dalFCC. ( componentes da reagdo se encontram dstibuides adequadamente em ‘és reagentes para conferit maior estabilidade na forma liquida originale manutengao das condigdes stimas da reagao. Ossistema ALT/GPT da Labtestutliza medigges em modo cinético e pode ser facilmente aplicado em analisadores automaticos e semiautomaticos ccapazes de medir absorbancia em 340nm. 01 Portugués - Ret: 108 Ret. 108 ANVISA 10009010029 i Metodologia . cinetcauv-ircc Reagentes 1.(E121 - Reagente 1 - Armazenar entre 2-8 °C. Contém Tampao Tris 132,5 mmol/L; L-alanina 687,5 mmol/L; LOH > 2300 U/L, azida sédica 0,095%, estabilizador e surfactant 2. + Reagente 2 -Armazenar entre 2 -8°C. Contém Tampao Tris 20 mmol/L; NADH 1320 wmoV/L; cetoglutarato 82,5 mmol azda sédica0,095%,estabiizadore suractante 3. [13] - Reagonte 3 -Armazenar entre 2-8 °C, Contém Tampao Tris 20 mmol/L; piridoxal fosfato 11,1 mmol/L; azida soda 0,095%. Os reagentes néo abertos, quando armazenados nas condigdes indicadas, s40 estaveis até a data de expragao impressa no rétula. Apés abertos, os reagentes devem ser manuseados de acordo com as boas praticas de laboratério para evitar contaminagées de natureza quimica & ‘micrabiana que podem provocarreducao da estabildade, eed Os cuidados habituais de seguranga devem ser aplicados na ‘manipulagdo do reagente. Nao utilizar os reagentes quando a absorbancia do reagente de trabalho ou da mistura Reagente 1, Reagente 2 © Reagente 3, medida contra agua em 340 nm, for menor que 1,0 ou {quando os reagentes estiverem turvas ou com sinais de contaminagao. Nos analsadores automiéticas, os reagentes esto sujeltos a contaminagées com outros reagentes ou com o ar ambiente, que ddopendem da caracteristica do equipamento e das condigées de trabalho. Essas contaminagées podem resultar em redugdo da estabilidade dos Teagentes ou modificagdes no seu desempenho, requerendo nova calbragao do sistema, Como acorre em toda medigéo da atividade enzimatica, a rigorasa observagéo do tempo e da temperatura de incubagao é de grande Importanciaparaa qualidade dos resultados obtidos, Os reagentes contém azida s6dica que ¢téxica. Néo ingerire, no caso de Contato com os olhos, lavar imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio médico. A azida pode formar compastos attamente explosivos com tubulagées de chumbo e cobre. Portant, utlizar grandes volumes de Agua para descartar os reagentes. Labtest @Material necessario e nao fornecido 1. Fotometro com cubetatermostatizada capaz de medi com exatidao a absorbancia em 340 nm, 2. Pipatas para mediramosrasereagentes 3, Cronometro Influéncias pré-analiticas . cxercicios em excesso (levada atvdade muscuar) elevam a atvidade sérica da alenine amino transferase Em pessoas do sexo feminino de todas as idades, a atvidade da ALT é mais baixa que em individuos do sexo masculina, Esterdides anabélicos, cloranfenicol, clorotiazida, uso prolongado de aspirina, gentamicina entre outras drogas, podem provacar um aumento daatividade da ALT, Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrda (POP) que estabeleca procedimentos adequados para coleta, preparagao © armazenamento da amostra.Enfatizamos que 0s erros devidos a mostra podem ser muita maiores que 0s erros ocorridos durante o procedimento analitco. Usar sora ou plasma (EDTA, Heparina). A atividade enzimatica permanece estavel durante 4 dias entre 2- 8 °C © 2 semanas a 10°C negativos, Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue réo transmitem infecgdes, todas elas devem ser consideradas como potencialmenteinfectantes. Portanta, ao manuseé-las deve-se seguir as normas estabelecidas para biosseguranga, Para descartar os reagentes e o material bioldgico sugerimos aplicar as rnormas locais, estaduais ou federais de protecao ambiental Valores de Bilirubina até 19 mg/dL, Hemoglobina até 180 mg/dL € Triglcérides até 640 mg/4L nao produzem interferéncias significatvas, Para avaiar a concentragao aproximada da hemaglobina em uma amostra hemolisada pode-se proceder do seguinte modo: Diluir 0,05 mL. dda amostra em 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) ¢ medir a absorbancia em 405 ou 415 nm acertando o zero com agua deionizada oudestilada. Hemoglobina (mg/dl) = Absorbénciayg, x 601 Hemoglobina (ma/dL) = Absorbanciaygs x 467 /Amosiras fortemente ipémicas e ictéricas possuem absorbancia elevada ‘em 340 nm, Quando aatividade enzimtica nestas amostras estiver muito aumentada, pode ocorrer consumo bastante répido do substrato sem haver diminuigao significativa na absorbancia. Portanto, na ocorréncia de valores baixos de atividade enzimtica nessas amostras deve-se repetira determinagaio utilizanda amostra dluida com NaC0,85%, 02 Portugués - Ret: 108 Veritens Calculo, Calibragao, Line de eObservacées. Determinagao da Atividade Enzimatica Utilizando o Piridoxal Fosfato Para obtengdo de resutados rastreéveis ao método de referencia FCC, & necessério utlizar 0 procedimento b-reagente, para que a encima seja totalmente ativada pelo piidoxal fostato, Proparo do reagente.. Transferir0,300 mL. do Reagente 3paraum rasco do Reagente 1 (24 mL) ¢ homogeneizar suavemente, Estabiidade: 21 dias entre 2 - 8 °C ¢ 24 horas entre 15 - 25 % quando nao hower contarninagdo quimica ouricroblana, Anatara data deexpiraao. Opcionaimente pode-se preparar um volume menor da mistura (Reagente 1 + Reagente 3) adicionando-se 1 parte do Reagente 3 a 80 partes do Reagente 1 (exemplo: adicionar 0,010 mL. do Reagente 3 a 0,800mL do Reagente 1). Procedimento doteste 1. Em um tubo rotulado “Teste” ou “Calibrador”, pipetar 0,800 mL da mmisturaReagente 1 + Reagente3 2. Adicionar 0,100 mL de amostra ou calibrador de enzimas, homogeneizare incubar em banho- maria a 37 + 0,2 °C por § minutos. AApOs essa incubagdo, pode-se esperar até 30 minutos para iniciar @ rmodigao cindtica coma adigao doreagente 2. 3. Ajustar 0 zero do fotémetro em 340 nm com Agua destilada ou deionizada, 4. Adicionar 0,200 mL. do Reagente 2, homageneizar o transterc imediatamente para a cubeta termostatizada a 37 + 0,2 °C. Esperar 1 minuto, 5. Registrar @ absorbéncla inicial (A,) e disparar simultaneamente 0 ctonémetra. ps 2 minutos registrar aabsorbancia (A). Para verificar a linearidade da reagdo, registrar a absorbancia com intervalos de 1 minuto e verfcar se a diferenga de absorbancia a cada minuto é equivalents. Determinagéo da atividade enzimatica sem a utilizagao do piridoxal fostato Preparo do Reagente de Trabalho .Transferiro conteido de um frasco do Reagente 2 para um frasco do Reagente 1 © homogeneizar suavemente. O reagente de trabalho éestavel 14 dias entre 2- 8°C e 24 horas entre 15 - 25 °C quando nao houver contaminagao quimica ou imicrobiana, Antara dala de expragdo. Opcionalmente pode-se preparar um volume menor do reagente de trabalho misturando-se 1 parte do Reagente 2a 4 partes do Reagente 1 (exemplo: misturar 0,200 mL do Reagente2 ¢0,800mL do Reagente 1), Labtest @Para preservar 0 desempenho, os reagentes devem permanecer fora da ‘temperatura de armazenamento somente o tempo necessario para se obtero volume. ser utlizado, Evtarexposigao aluz solar dirt Procedimento do Teste 1..Em um tubo rotulado “Teste” ou "“Calibrador”, pipetar 1,0 mL do reagente de trabalho 2. Ajustar 0 zero do fotémetro em 340 nm com agua destilada ou deionizada, 3. Adicionar 0,100 mL de amostra ou calbrador de enzimas, hhomogeneizaretransfririmediatamente para a cubeta termastatizada a 37 £0,2°C. Esperart minut. 4. Registrar a absorbénciainicial (A,) e disparar simultaneamente 0 ctonémetro. ps2 minutos registrar aabsorbancia (A). Para verficar a linearidade da reagdo, registrar @ absorbancia com intervals de 1 minuto e verfcar se a diferenca de absorbancia a cada ‘minuto € equivalente, Absorbancia nical (A,) igual ou menor que 0,8 é um indicative de que ‘a amostra tem atividade elevada de ALT. Neste caso, diluira amostrae repetir amedigao (ver linearidade). Como ocorre em toda medigao da atividade enzimatica, a rigorosa observagao do tempo ¢ da temperatura de incudagao & de grande importancia para. qualidade dos resultados. Os procedimentos sugeridos so adequados para fotdmetros cujo volume minima de react para medigao 6 igual ou menor que 1,0 ml. Deve ser feta uma verificagao da necessidade de ajuste do volume para o fotdmetro utiizado. Os volumes de amostra e reagente podem ser ‘modiicadas proporcionalmente sem prejuizo para 0 desempenho do teste @ 0 procedimento de calculo se mantém inalterado. Em caso de redugdo dos volumes é fundamental que se observe o volume minimo rnecessério para a medigéo fotométrca. Volumes de amostra menores {que 0,010 mL séo crfticos em aplicagées manuals e devem ser usados ‘com cautela porque aumentam aimprecisda damedicao. Calculos . € uma pratica habitual calcular os resultados de atividade enciméticautlizando um ftorobtdo em condigdes otimas de eagao que incluem CComprimento de onda: 340m, Cubeta termastatizada a 37 + 0,2 °C com 1,0 om de espessura de solugdo Banda deppassagem<2nm, Luzespiiia 0,1 %. Como na maioria das vezes nao é possivel trabalhar sob essas condigées, as boas praticas de laboratério recomendam realizar a calibragao do ensaio utlizando calibrador de enzimas indicado pelo fabricante do reagente. A Labtest indica a inha Caliora para calbragaa do sistema ALT/GPT Liguitorm, 03 Portugués - Ret: 108 AN/minuto Teste ou Calibrador = (A, ~A,)/2 Atividade do Calibrador Fator = ‘Nin Calibrador ALT (U/L) = AA/min Teste xFator Exemplo Teste A, = 1,925 A= 1.851 1,925- 1,851 ‘ANmin Teste = ———— = 0,037 2 Calibrator A,=1,875 A,= 1,733 1,875 -1,733 AA/min Calbrador = ort 2 Atividade do Caliprador (U/L) = 125 125 Fator = 761 071 Atividade da ALT (U/L) = 0,037% 1761 = 65 Sendo atendidas as condigées otimas de reagao cltadas anteriormente pode-se optarpelautlizacdo do fator 1746, Calibragao Calibragées manuais Usarcalibrador CalloraH -Labtest. Aatividade de ALT no CaibraH ¢rastredvel ao material de referéncia ERM- AD454)IFCC 20 método de referéncia da IFCC* Intervalo decalibragses Calibragao de 2 pontos ao mudar de ot; Calibragdo de 2 pontos quando a controle interno da qualidade indica, Sistemas automaticos Branco de reagentes: dgua deionizada ou solugdo de cloreto de s6dio 150, mmol (0,85%); Usar calibrador Calibra H - Labtest. A atividade de ALT no Calibra H & rastredvel ao material de referéncia EAM- AD4S4/IFCC e ao métado de referéncia dalFCC* Calbragéo de 2 pontos ao mudar de lote; Calibragao de 2 pontos quando a controle interno da qualidade indica Labtest @resultado da medigao ¢lnear entre 3,5 a 400 U/L Para valores maiores, dir a amostra com NaC! 150 mmol/L. (0,859). Realizarnova medigao € rmultipicar oresutado abtid pel fator de diuigdo. Controle interno da qualidade . 0 laboratério deve manter um programa de controle interno da qualidade que defina claramente os regulamentos. aplicéveis, objtivos, procedmentos, critéios para especiticagdes da qualidade elites de tlerancia, agdes corretvas & registro das atvidades, Materais de controle devem ser utlizados para ‘monitoriza aimprecisao da medigao e desvos da caibracdo. Sugere-se que as especificagées para o coeficiente de variagdo e erro total sejam baseadas nos componentes da variagao biolégica (VB)"**, Intervalo de referéncia®’ . Estes valores devem ser usados apenas como orielagéo. Recomenda-se que cada laboratério estabelega sou proprointervalo de referénciana populacao atendida ‘Testes realizados com plridoxal fostato Método Método Comparative Labtest Nimero de amostras 40 0 Tntervalo de concentragaes wy 82-2562 | 80-2627 Mécia das estimatvas tu) 102,4 105.5 Eauando da egressao Método Labtest = 1,086 quagio da 129 Método Comparativo - 0,589, Caefciente de correlagao 0,999 Utiizando a equagao da regresséo, 0 erro sistemdtico total (bias) estimado ¢ igual a 2,9% para um nivel de decisdo igual a 89 U/L @ 3,3% para um nivel de deciséo igual 2272 U/L. Esses erros sao menores que 0 erro sistemdtico analtico da especiticagao dtima baseada na variagao biologica' queé<=5,7% dade Masculino (U/L) Feminino (U/L) 30 dias 20-54 Testes realizados sem pridoxal fosfato 1-6 meses 26-55 26-61 : 7-12 meses 26-59 26-55 Método Método: 1-3 anos 19-59 24-59 Comparative Labtest 4-11 anos 24-49 24-49 Numero de amostras 40 40 72-16 anos 24-58 18-44 Inarvalo de coneonagies |S ose | yae.2408 Adultos 11-45 10-37, (U/L) Meas estimativas 1024 oo Converséo: Unidades Convencionais (U/L) x 16,7 = Unidades St A a Método Labtest = 0,958x (chat) Eavagdo darearesséo Método Comparativo- 1,284 Cooficente de corelagao 0,998 Caracteristicas do desempenho* Estudos de recuperagdo . Em dvas amostras com concentragdes da alanina aminotransferase iguaisa 1006227 U/L foram adicionadas quantidades da enzima obtendo-se 0s seguintes resultados: Atividade (U/L) Inia! Aleionada_Esperada Encontrada | Reeuperasée aT ia 140 99.2 zy al 258275 102.6 erro sistematico proporcional médio estimado é igual a0,7 U/L para o nivel de decisdo 80 U/L e2,5 U/L para oniveldedecisdo 281 Ui Estudos de comparagao de métodos . 0 método proposto foi comparado com o métoda de referéncia da IFCC®, sendo obtidos os ‘seguintes resultados: 04 Portugués - Ret: 108 Uitizando a equagdo da regressao, 0 erro sistemético (bias) estimado & igual a 2,6% para um nivel de decisdo igual 80 U/L ¢3,7% para um nivel de decisdo igual a 282 U/L. Esses eras so menores que o erro sistematico analtico da especificagdo dlima baseada na variagdo biol6gica’ quee==5,7%. Estudos de preciso . 0s estudos de precisto foram realizados no sistema Labtest/Labmax 240®, utilizando amostras com valores de atvidade iquais a 89 e272 UL parao procedimento com pirdaxal fostato 80 e282 U/L para o procedimento sem piridoxal fosfato. Testes realizados com piridoxal fosfato Repetitvidade - imprecisao intraensaio N Media | DP (uA) [| CV (%) ‘Amostrat [20 89 143 16 Amostra2 | _20 272 2,61 1.0) Reprodutiblidade - imprecisdo total N Media | DP(u/L) [| CV(%) ‘Amostrat | __20, 89 231 26 ‘Amostra? | _20 272 7.40) 27, Labtest @Testes realizados sem piridoxal fostato Repetitividade - imprecisdo intraensaio N Media| OP(UA) | CVC) ‘Amostrat [20 80 7,20 15 ‘Amostra2 | 20 282 2,19 08 Reprodutiblidade - imprecisdo total N Media| DP(u/t) [CV (%) ‘Amostrat | 20 80 1,40 Te Amostra2 | 20 282 3.31 12, A imprecisdo total obtda para as amostras atende a especificagao étima paraimprecisdo total baseada na variacdo biolégica® que é <4,9%. Estimativa do erro total . 0 erro total (ero aleatério + erro sistematic) estimado no valor de 89 U/L é igual a 7.2% e no valor de 272 UML 6 igual a 7,8% nos testes realzados com pirdoxalfosfato. Para os testes realzados sem pirdoxalfosfato aero total estimado no valor de 80 U/L éigual a 5,5% e no valor de 282 UML 6 igual a5,7%. Os resultados, indicam que o método atende & especiticagao dtima para o Erro total (513,7%) baseada nos componentes da variagao biolégica (VB). Sensibilidade metodolégica . Utlizando-se como parametro a absorbancia minima detectavel, a sensibildade fotomética ¢ de 41,75 U/L correspondendo a uma absorbanciaigual 0,001 Efeitos da diluigéo da matriz . Duas amostras com valores iguais a 408 e 459 U/L foram utlizadas para avaliararesposta do sistema nas diluigdes da matriz com NaCl 150 mmol/L. (0,85%), Usando fatores de diuigdo que variaram de 2 a 16, foi encontrada recuperagao média de 100.3%, Significado clinico®. etevagses das transaminases ocorrem nas hepatites (viral e téxica), na mononucleose, cirrose, colestase, carcinoma hepitico priméro ou metastitico, pancreatte, traumatsmo extenso eno choque prolongado. Valores de ALT sao iguais ou superiores aos de AST na maioria dos pacientes com hepatite vial, ictercia pés-hepatica ou colestase intra- hepatica, Nos casos de cirtose hepatica, hepatitealeéolica ou carcinoma Imetastitico, 0s valores de ALT sao inferiores aos de AST. Elevagées de ALT também sto relatadas na polimiosite, dermatomiositee rabdomidlise No nfarto agudo do miocardio os valores de ALT encontram-se dentro do intervalo dereferéncia ou ligeiramente aumentados. Observagdes 1. limpeza e secagem adequadas do material utiizado séo fatores fundamentais para a establidade dos reagentes e obtengao deresultados cortetos. 05 Portugués - Ret: 108 2..A aqua utlizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicagao. Assim, para prepararreagentes e usar nas medigdes, deve ter resistividade =1 megaohm.cm ou condutvidade <1 micrasiemens/em e concentragao de slicatos <0,1 mg/L (4gua tipo I) Para o enxégue da vidraria a agua pode ser do tipo Il, com resistvidade >0,1 megaohms ou Condutividade <10 microsiemens. No enxégt final utlizar gua tipo I ‘Quando a coluna deionizadoraesté com sua capacidade saturada ocorre a produgao de gua alealina com lberacdo de varios fons, silicatos substancias com grande poder de oxidagao ou redugdo que deterioram 10s reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados cde modo imprevsivel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da Aqua. Referéncias 1. Karmen A.J Glin Invest 1955;34:131 2. Henry RJ, Chiamori N, Golub O, Berkman §. Amer J Clin Path 1960; 34:381 3, IFC Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Concentration of Alanine Aminotransferase. 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Apresentagao Produto Referéncia Contesdo To 4x24mi 108-430 [aay 4x6mL 1X4,5 mL 1 ALT/GPT Liquiform KBR 1o8-2/100 [I] 2x20mL C1 X2,2 mL Ca) 4X39 mL ALT/GPT Liquiform abe seordoo, | 1084/49 4X10 mL CS) 1X2,5 mL cam 1x80mL ALT/GPT Liguiform | 108-1/100 | (Ia) 1X20mt CH) 1X2,2mU Labtest @Para informagées sobre autras aprasentagdes comerciais consulteosito all Lablest Diagnéstica S.A. \wwwlabtest.com.br ou ene em contato com 0 SAC, ‘NPL: 16:516,296 / 001 38 ‘Paul Ferra da Costa, 600 - Vist lage - CEP 95240-182 Esto disponiveis aplicagées para sistemas automaticos Lagoa Santa Minas Gerais Bras - wwautabest.com.br semiautomatioos. Servga de Apia ao Cliente | 0800 031 3411 (Ugecdo Gratuit emai: sac@labest.com br (nimera de testes om aplicagdes automaticas depende dos pardmatros de programagio. « , Eeigdo:Juho, 1994 Copyright by Labas Diagnstica S.A Informagoes ao consumidor Revisao: Agosto, 2022 Reprodugdo sob prévia autorizagio. Ret 120723(03) [Termos e Condigdes de Garantia] A Labtest Diagnéstica garante o desempenho deste produto dentro das especiicagées até a data de expiracdo indicadanos rétuos, desde que 0s cuidados de utlizagao e armazenamentoindicados nos rotuos e nestas instrugdes sejam seguidos corretamente Simbolos utilizados com produtos diagnésticos n vitro Simbolos usados con productos diagndsticos in vitro . Symbols used with IVD devices oven alot para <> tts Constr sie to Tic iogce Cove ste > we Garant Egitsesrout Biope rk Dale dag ana oman) Per ats ere Fant por Cormhe Ese tan ode). G_ hrstoreaenn tl toc 4 Corre Useor nts an) Perot afepenrg tae a Come ‘inte ener ema) Wor eat Fantom ince Tiros tan oe Ce ater Nenad on pn Terese orate a Comat rp Prd dance me ‘owe Mara apes sutraan naman aren Sipste de sapien 7) sata (