Mermet - Limite de Quantification

Concepts de limite de quantification
J.M. Mermet
Spectroscopy Forever
Club de Spectromtrie Atomique, 18 juin 2006
Bibliographie (scopus.com)
Mthodes de sparation: > 6000
J. of Pharmaceutical and Biomedical Analysis (419)
J. of Chromatogr. B: Biomedical Applications (398)
J. of Chromatogr. A (378)
J. of Anal. Toxicology (247)
Spectromtrie atomique (ICP): 62
J. of Anal. Atom. Spectrom. (11)
J. of AOAC International (8)
Anal. Chim. Acta (7)
Spectrochim. Acta - Part B (6)
Anal. Chem. (3)
Appl. Spectrosc. (3)
Qualits dune dfinition
Claire
Brve
Univoque
Sans ambigut
Universelle
Pragmatique et facile appliquer
Introduction
Dtecter: dceler lexistence de (Petit Robert),
dceler lexistence de ce qui est peine
perceptible (Larousse).
Quantifier: Attribuer une quantit (Petit
Robert), dterminer la quantit de (Larousse).
Il y a clairement une diffrence entre les deux
concepts.
Diffrents concepts
La limite de dtection (Ldd) sera la limite
ultime dun instrument ou dune mthode, et
pourra servir de seuil pour prouver la prsence
(ou labsence) dun analyte.
La limite de quantification (Ldq) est la
concentration partir de laquelle on va
pouvoir founir un rsultat fiable.
Tout le problme va tre de dfinir quoi
correspond le mot fiable .
Quelques acronymes
Ldd: limite de dtection
Ldq: limite de quantification
RSD: cart-type relatif (relative standard
deviation)
MDL: limite de dtection de la mthode
(method detection limit)
ISO: International Organization for
Standardization
EPA: Environmental Protection Agency
Multiplicit des approches
Chaque organisme (IUPAC, ISO, EPA, ICH,
ASTM, DIN, AFNOR...) tient sa propre
approche, avec ventuellement des
nomenclatures diffrentes: limite
dapplication, limite de dosabilit, limite de
dtermination...
Il existe galement une volution vers une
approche mtrologique.
EPA terminology
We use the word "limit" rather than "level" to
indicate that the detection and quantitation
concepts are directed at the lowest
concentration or amount at which an analyte is
determined to be present (detection) or may be
measured (quantitation).
EPA terminology
We use the term "quantitation" in this
document because of its common usage
among analytical chemists, even though we
recognize that the term "quantification" (i.e.,
the act of quantifying) is the term listed in
most dictionaries.
Problmes pour la rptabilit et la
reproductibilit
Il existe des dfinitions trs gnrales qui ne
rpondent pas ncessairement aux problmes
de clart et duniversalit.
En particulier le passage de rptabilit
reproductibilit est ambigu et dpend de la
mthode et de linstrument.
Rptabilit (VIM)
Etroitesse de l'accord entre les rsultats de mesurage
successifs du mme mesurande, mesurages effectus
dans la totalit des mmes conditions de mesure. Ces
conditions sont appeles conditions de rptabilit.
Les conditions de rptabilit comprennent: i) mme
mode opratoire de mesure; ii) mme observateur;
iii) mme quipement de mesure, utilis dans les
mmes conditions; iv) mme lieu; et v) rptition
durant une courte priode de temps.
Rptabilit (ISO)
Fidlit sous des conditions de rptabilit,
cest dire des conditions o les rsultats
d'essais sont obtenus par la mme mthode sur
des individus dessai identique dans le mme
laboratoire, par le mme oprateur, utilisant le
mme quipement et pendant un court
intervalle de temps (ISO 3534-1, ISO 5725-1).
Rptabilit et indpendance
En principe, la notion de rptabilit implique
des mesures indpendantes. On peut
considrer que cest le cas avec des injections
en SAA-four. Est-ce le cas avec des rpliques
successives dune mme aspiration de solution
en ICP?
Successive readings from an instrument do not
give a valid measure of repeatability. Rather,
they are solely an indication of the
instrumental repeatability. (IUPAC 1995).
Reproductibilit (VIM)
Etroitesse de laccord entre les rsultats des
mesurages du mme measurande, mesurages
effectus en faisant varier les conditions de mesure.
Pour quune expression de la reproductibilit soit
valable, il est ncessaire de spcifier les conditions
que lon fait varier, qui peuvent comprendre: i)
principe de mesure; ii) mthode de mesure; iii)
observateur; iv) instrument de mesure; v) talon de
rfrence; vi) lieu; vii) conditions d'utilisation, et viii)
temps.
Reproductibilit (ISO)
Fidlit sous des conditions de
reproductibilit, c'est dire des conditions o
les rsultats d'essais sont obtenus par la mme
mthode sur des individus d'essais identiques
dans diffrents laboratoires, avec diffrents
oprateurs et utilisant des quipements
diffrents (ISO 3534-1, ISO 5725-1).
Reproductibilit
Dsaccord: intralaboratoire ou interlaboratoire?
Au moins un des paramtres a t modifi
volontairement:
lintrieur dun laboratoire: oprateur, appareil,
mise en solution, temps...
entre laboratoires
On devrait toujours spcifier le type de
reproductibilit.
Diffrents concepts de reproductibilit
Fidlit
intermdiaire
(Intermediate
precision)
Between-lab (inter-
lab) reproducibility
Within-lab (intra-
Within-lab (intra-
diffrents labos mme labo, mais
diffrents systmes,
oprateurs
mme laboratoire,
paramtre= temps
Exemples de dfinition de la ldq
Quantification limits are performance characteristics that mark the ability of a chemical
measurement process to adequately quantify an analyte.
o The level above which quantitative results may be obtained with a specified degree of
confidence.
o The smallest concentration that can be determined with a defined coefficient of variation
(relative standard deviation) using a given analytical procedure.
(The content) equal to or greater than the lowest concentration point on the calibration curve.
The limit of quantitation (LOQ) of the analytical method is the lowest level at which analyte
can be reliably measured. Some common definitions of LOQ are three times the LOD and a
level at which the %RSD of injection precision is less than 5%.
The lowest concentration of an analyte that can be determined with acceptable precision
(repeatability) and accuracy under the stated conditions of the test.
The limit of quantitation (LoQ) is strictly the lowest concentration of analyte that can be
determined with an acceptable level of repeatability, precision and trueness.
The lowest level that can be reliably achieved within the specified limits of precision and
accuracy during routine laboratory operating conditions.
The overall quantitation limit for IH method will be the smallest amount of analyte that can
be quantitated by analytical method (with established detection limit) within the requirements
of at least 80 % recovery and a precision of 20% or better.
Lowest amount of analyte quantitatively determined with (stated) uncertainty.
Diffrentes approches
Seuil de rptabilit
En partant de la ldd (IUPAC)
En partant du RSD
net
(Eurachem)
Seuil de reproductibilit
En partant de la MDL (EPA)
RSD
net
intra-laboratoire
Seuil rptabilit/reprod. + seuil de justesse
Utilisation de la droite dtalonnage
Seuil dincertitude (Eurachem)
Seuil de rptabilit
En partant du RSD
net
(Eurachem)
RSD
net
intra-laboratoire
Historique: rptabilit du fond
Historiquement, on trouve cette dfinition de la ldq
qui est la concentration correspondant un signal gal
10 fois lcart-type des fluctuations du fond.
Cette limite est rapprocher de celle de la ldd dont le
signal correspond 3 fois lcart-type des fluctuations
du fond.
On aurait donc Ldq = 3,3 Ldd.
Cette dfinition fait appel la rptabilit du fond.
Cest une mesure dans des conditions idales, ce qui
conduit une limite de quantification instrumentale.
Ldq en fonction du temps
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
11-mai 1-juin 22-juin 13-juil 3-aot 24-aot 14-sept 5-oct 26-oct 16-nov 7-dc
L
d
q
,

Z
n

2
0
6

n
m
,

m
g
/
L
Seuil de rptabilit
En partant du RSD
net
(Eurachem)
RSD
net
intra-laboratoire
RSD du signal net, RSD
net
H. Zitter and C. God, Fresenius Z. Anal. Chem., 1971,
255, 1.
K. W. Boyer, W. Horwitz, R. Albert, Anal. Chem. 1985,
57, 454-459.
Analytical Methods Committee, Analyst, 1987, 112, 199.
Quality assurance of Chemical Measurements, J.K.
Taylor, Lewis Publishers, Chelsea, chap. 9, 1987.
Eurachem and Welac Guidance document n WG2, 1993;
Eurachem: Accreditation for chemical laboratories;
Eurachem Secretariat: Teddington, U.K., 1993.
L. Huber, LC-GC International, 96, # Feb. 1998.
J. Vial, A. Jardy, Anal. Chem., 1999, 71, 2672.
Etude du RSD
net
dans le cas de lICP
M. Thompson, Analyst, 1988, 113, 1579.
E. Poussel and J.M. Mermet, Spectrochim.
Acta, 51B, 75 (1996).
M. Carr, S. Excoffier, J.M. Mermet,
Spectrochim. Acta, 52B, 2043 (1997).
Limite de quantification fonde sur un
seuil de rptabilit
Plus petite grandeur dun analyte examiner
dans un chantillon pouvant tre dtermine
quantitativement dans des conditions
exprimentales dcrites dans la mthode avec
une variabilit dfinie (coefficient de variation
dtermin) (XP T 90-210).
Relation entre RSD
net
, c
L
et c
1/2
2 2
2
L
2
net
c k
2c
RSD
(
+ =
En spectromtrie ICP, lcart-type s
s
est
proportionnel au signal S, donc, s
s
= .S
net
, avec
dans la gamme 0,002-0,02, or 0,2%-2%.
c: concentration; c
L
: ldd; k = 3
A faibles concentrations, RSD
net
= f(a/c)
RSD
net
au niveau de la limite de dtection
k
2
RSD
net
=
RSD
net
= 47% pour k = 3
RSD
net
= 70% pour k = 2
Quand c c
L
, c
L
/c 1, et comme
2
<< 2/k
2
1/2
2 2
2
L
2
net
c k
2c
RSD
(
+ =
RSD
net
au niveau de la limite de dtection
Il est noter que trs souvent il est indiqu un
RSD
net
de 33 % pour k = 3.
Cela vient du fait quon ne prend pas en
compte la correction de fond, qui introduit un
terme en 2.
Relation entre la limite de dtection (LDD)
et la limite de quantification (LDQ)
Si on prend la condition k = 3, on obtient:
RSD = 50% pour c = c
L
(3 )
RSD* = 15% pour c = 3.3 c
L
(10 )
RSD = 10% pour c = 5 c
L
(15 )
RSD = 5% pour c = 10 c
L
(30 )
Trs souvent, la LDQ est dfinie pour 10 ,
ce qui donne un RSD
net
de 15%. Un RSD
net
de 10 % correspond 15 , et 5% 30
(soit 10 fois la ldd)
Relation entre la limite de dtection (LDD)
et la limite de quantification (LDQ)
Quand on fonde la ldq sur un seuil de
rptabilit, il existe donc une relation directe
entre la LDD et la LDQ.
Toute amlioration de la LDD correspond
une mme amlioration de la LDQ.
Ldd et ldq en fonction du RSD
net
Il suffit donc de tracer le RSD
net
en fonction de
la concentration pour des concentrations entre
la ldd (si possible lgrement infrieure) et 20-
20 fois la ldd.
Problmes des rpliques: dpendantes ou
indpendantes
La ldd correspondra la concentration donnant
un RSD
net
= 50 % pour k = 3.
La ldq sera choisie en fonction du problme
analytique (RSD
net
= 5, 10, 20 %...)
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
0 10 20 30 40 50 60 70
c/c
L
R
S
D
n
e
t

(
%
)
Ecart-type relatif du signal net en fonction de la
concentration
LDD
LDQ
=0.005
0.1
1
10
100
1 10 100
c/c
L
R
S
D
n
e
t

(
%
)
Ecart-type relatif du signal net en fonction de la
concentration (chelles log-log)
LDD
LDQ
= 0.005
RSD
net
de Al en fonction de la concentration
(JY 38)
1
10
100
1 10 100
Concentration (ng/ml)
%
R
S
D
Rgression
linaire
RSD
net
de Cu 324 nm en fonction de la
concentration (Maxim)
1
10
100
1 10 100
Concentration (ng/mL)
%
R
S
D
LDQ LDD
RSD
net
de Ni 231 nm en fonction de la
concentration (Optima, axial)
1
10
100
10 100 1000
concentration (ng/mL)
%
R
S
D
LDQ
RSD
net
: influence temps dintgration
1
10
100
1 10 100 1000
Concentration Ni (g/L)
%
R
S
D
n
e
t
1 s
10 s
Ldd: 50%
Ldq: 5 ou
10%
Pb dans sang, ICP-MS (PE 6100)
0%
1%
10%
100%
0.001 0.01 0.1 1 10
Pb Concentration/ g/L
%
R
S
D

n
e
t

LDD LDQ
RSD
net
en ICP-MS (Elan 5000,
95
Mo)
0.1
1
10
100
1000
0.01 0.1 1 10
concentration (ng/mL)
%
R
S
D
n
e
t
Remarque sur lapproche RSD
net
Elle ncessite de travailler rellement basses
concentrations.
Elle prend en compte toute une srie de
concentrations et non pas une seule, comme pour la
ldd.
Elle permet de dterminer dans la mme exprience
la limite de dtection et la limite de quantification.
Elle est largement utilise dans dautres techniques.
Cest la seule approche qui prenne en compte une
possible corrlation temporelle entre la mesure du
signal et celle du fond.
Limite
Limite
de quantification
de quantification
0
5
10
15
20
0 5 10 15 20 25 30
[oxalate] (mg/L)
C
V

%
LDQ # 2 mg/L
Approche Eurachem
) log 1 (
1
2
C p
p C CV

=
Seuil de rptabilit
En partant du RSD
net
(Eurachem)
RSD
net
intra-laboratoire
EPA: Revised Assessment of
Detection and Quantitation
Approaches
October 2004
EPA Method 200.7 (metals by ICP/AES)
Limite de dtection de la mthode (method
detection limit, MDL)
La MDL est la concentration minimum dun analyte
qui, dans une matrice donne et avec une mthode
spcifique, a une probabilit de 99 % dtre identifie
qualitativement ou quantitativement, comme tant
plus grande que zro.
La MDL nimplique pas justesse ou fidlit.
La MDL est fonde sur des ajouts pour pallier
lventuelle absence de fond avec certaines mthodes
(discrimination, seuil...), donc de fluctuations.
Limite de dtection de la mthode
On suppose que lamplitude de lcart-type du
signal est trs similaire celui du blanc,
lorsquon est proche de la Ldd (discutable).
Au moins 7 rpliques dajout doivent tre
utilises. Les ajouts sont prpars 1-5 fois la
MDL suppose partir dun blanc de ractifs.
Les ajouts doivent subir toutes les tapes de la
mthode analytique.
A partir des mesures des n ajouts, un cart-
type s, exprim en concentration, est obtenu.
Avec la valeur t du coefficient de Student pour
n-1 degrs de libert et un taux de confiance 1-
, la MDL est:
( )
=
1 , 1
MDL
n
t s
t = 3.14 pour n = 7 and 99%
La MDL produirait seulement 1 % de faux
positifs.
Cest une limite raliste, car les ajouts sont
des concentrations trs proches des limites de
dtection, et plusieurs rpliques sont utilises
tout au long de la mthode analytique.
Les contaminations potentielles sont ainsi
prises en compte, condition quelles restent
faibles par rapport lajout.
Ldq: niveau mininum (Minimum level,
ML)
A partir de la MDL, on peut dduire un niveau
minimum, ML, qui est alors le point le plus
bas de la droite dtalonnage (voir EPA
200.7).
ML = 3.18 MDL.
La valeur est ensuite arrondie au plus prs de
2, 5, ou 10 10
n
, o n est un entier.
Seuil de rptabilit
En partant du RSD
net
(Eurachem)
RSD
net
intra-laboratoire
ICP-MS: Pb dans sang (repro sur 5 jours)
reproductibilit biais
0.056 g/L sans pondration sans EI 113% -30%
avec EI 20% 20%
avec pondration sans EI 12% -1%
avec EI 9% 1%
0.558 g/L sans pondration sans EI 2% -3%
avec EI 1% -1%
avec pondration sans EI 3% 0%
avec EI 1% 0%
Seuil de rptabilit
En partant du RSD
net
(Eurachem)
RSD
net
intra-laboratoire
Limite de quantification fonde sur les bandes de
prdiction
A. Hubaux and G. Vos, Anal. Chem., 36, 849
(1970).
L. Oppenheimer, T.P. Capizzi, R.M.
Weppelman, H. Mehta, Anal. Chem., 55, 638
(1983).
Paramtres dune droite dtalonnage
x
i
: valeur de la concentration dune solution talon,
y
i
: intensit du signal correspondant une concentration x
i
,
n: nombre de concentrations x
i
utilises pour ltalonnage,
p: nombre de rpliques pour la dtermination de chaque y
i
,
x
m
: moyenne (centrode) des concentrations,
y
m
: moyenne (centrode) des intensits,
b
0
: ordonne lorigine de la droite dtalonnage,
b
1
: pente de la droite dtalonnage (correspondant la
sensibilit de la mthode),
t: coefficient de Student,
s
y/x
: erreur-type destimation de y sur x,
s: incertitude.
Utilisation des bandes de prdiction
Concentration, c
I
n
t
e
n
s
i
t
y
,

x
B
t.s
b0
k.s
B
c
L
c
D
blanc
prdiction
Cest la seule mthode qui prenne rellement
en compte la droite dtalonnage et ses bandes
de prdiction.
Cela oblige laborer la droite dtalonnage
des faibles concentrations.
La limite de quantification va dpendre de:
nombre et position des talons
utilisation dune pondration ou non.
Comparaison de k.s
B
avec t.s
b0
.
prdiction
( )
(
(
|
|
\
|
+ +

+ =
2 / 1
2
2
/
1
1 1
LDD
0
n p
x x
x
s s
b
t
m i
m
x y b band
Une bonne approximation est:
1
0
. . 2
LDD
b
s t
b
band
=
Seuil de rptabilit
En partant du RSD
net
(Eurachem)
RSD
net
intra-laboratoire
Incertitude
En toute rigueur, il faudrait tablir un bilan
dincertitude en fonction de la concentration,
en particulier en tendant vers la ldd.
En rgression non pondre, la procdure
dtalonnage est certainement la principale
cause dincertitude sur la concentration.
Dans ce cas, on peut donc avoir une estimation
plausible de la variation de lincertitude en
considrant celle due ltalonnage.
Incertitude sur x
u
partir des intervalles de
prdiction
Concentration, x
I
n
t
e
n
s
i
t
,

y
y
1
y
2
x
1
x
u
x
2
y
u
il faut donc
calculer x
1
et
x
2
Incertitude = f (c)
1
10
100
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Concentration
I
n
c
e
r
t
i
t
u
d
e

(
%
)
non pondre
pondre
Incertitude = f (c) et ldq (bandes de
prdiction)
1
10
100
0.1 1 10 100
Concentration
I
n
c
e
r
t
i
t
u
d
e

(
%
)
Ldq Ldq
Comparaisons
Trs long Conditions relles
Plusieurs expriences
Repro signal
net

Difficile si bilan
global
But ultime de lanalyse Incertitude
Dpend des talons,
pondration
Tient compte de la droite Etalonnage
s varie avec c
Trs long
Mme si blanc = 0
Raliste, contamination
ML
Long Conditions relles
Plusieurs concentrations
RSD
net
Problme valuation s
Repro?
Facile
Limite ultime
Ldq instrum.
Conclusions
Le concept de ldq ne rpond aucun critre en ce qui
concerne clart et absence dambigut.
Quant la facilit dapplication (!!!!).
De faon pratique, la majorit des publications se
rfre 10 s (3.3 ldd), sans aucune justification.
Bien que rejete par lEPA, et sans compter la
complexit de son valuation, la ldq fonde sur
lincertitude devrait tre la dfinition la plus raliste.
Besoin dun grand nombre dexpriences pour
comparer toutes ces dfinitions.

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