TD Biophysique 1ére année Séance 12 TD Equilibre de DONNAN / Transports et équilibres ionique intra-membranaire Préparé Par: GUEDOUAR Raja Mise a jour Mars 2023 Année universitaire 2022-2023 Pré-requis nécessaires Ce TD propose des exercices de synthése qui font appel a la fois & des connaissances en électricité et en physico-chimie des solutions. Afin de répondre a ces exercices, |'étudiant devra revoir les cours portant sur: Les propriétés colligatives des solutions (les pressions osmotiques et ‘oncotiques....); Les membranes biologiques (types, équilibre membranaire, les transports intra-membranaire...); Les champs électriques, forces électriques et potentiels électriques créés par des charges électriques positifs et négatifs (électrons ou ions); Les électrolytes (en solution) et la formule de Nemst; Objectifs spécifiques d’apprentissage Au terme de cette séance, I'étudiant doit tre en mesure de : Calculer la pression oncotique des protéines et décrire les phénoménes de Gibbs-Donnan; Appliquer les notions d’électricité pour résoudre un probléme de transport intra-membranaire; Faire l'analogie entre condensateur et une membrane biologique; Expliquer le potentiel d'équilibre au repos et calculer sa valeur; Différencier lorigine, le sens et la conséquence du flux passif et actif.Exercice 1 ou 64 (Session rattrapage 2019-2020) On considére 2 compartiments A et B, de volume constant, séparés par une membrane perméable aux ions K* et Cl, mais imperméable aux ions Y. Les concentrations ioniques sont les suivantes compartiment A : [K'la = [Yl 1M compartiment B : [K'Js = [CIs = 0,1 M felreaM On donne : R= 831 J.mol.K* ‘Température T=29° 1) En quoi la membrane séparant A et 8 est-elle une membrane de Donnan ? On appelle “membrane de Donnan" une membrane perméable a certaines particules chargées et pas a d'autres. C’est le cas ici, puisque la membrane est perméable a K’ et a Ct, mais pas a Y~. © Que décrit 'équation de Gibbs-Donnan ? L’équation de Gibbs-Donnan décrit l'état d’équilibre de chaque paire d’ions monovalents de part et d’autre d'une membrane de Donnan. 2) Les ions sontils a I'équilibre ? ‘Au départ, I'ion Cl’ n'est pas a |'équilibre, étant en excés dans le compartiment B. Le flux de CI va aller de B vers A. Ce flux de charges négatives va créer une différence de potentiel négative (E, —E,)<0), ce qui va provoquer un flux de K* également de B vers A. 3) A réquilibre, quelles seront les concentrations des différents ions dans chaque compartments 2 NA léquilibre, K* et Cl satisfont a 'quation de Donnan [Kh [Cla = [K+]s (Cls (1) Lélectroneutralité de chaque compartiment induit par ailleurs que : [K}, = [Cl], + IY (2) et [K]s = [Cle (3) La conservation de la matire induit que IK*], + [Kl = 0, (4) [Cl], + [Ct (5) Yh=01M (6) (1) et (3) donnent : [K"]a[Cl]a = ((K']3)° En remplagant [K*], et [Cr], par leurs équivalents calculés a partir de (4) et (5), on obtient (0,2 - [K*].)(0,1 - (Cla) = ([K*]a)° d'ou (0,2 x 0,1) - [K*]e(0,1 +0,2) + ([K*]e)? = (Ke)? (0,2 x 0,1) = [K']a)(0,1 +0,2) IK']s = (0,2 x 0,1) (0,1 +0,2) = 0,2/3 = 0,066 M [K']s = 0,066 M ; [ClJs = 0,066 M ; [K*J, = 0,133 M ; [Cl], = 0,033 M; [Y= 0,1M * Quelle sera la différence de potentiel entre A et B 2 K* et Cl étant a l'équilibre, ils satisfont a I'équation de Nernst. La différence de potentiel peut donc étre calculée a l'aide de cette équation, a partir de l'un ou l'autre de ces deux ions. = - a eh 7 AVm =E, — Ex =AVeq(K*)= oe iy, ee Zot - yo ety [hs =AVeq(Cl= — G7 _—log ie, Z, = - 60log2 =-18mV Exercice 2 ou 65 (extrait d’un ancien examen) On considére 2 compartiments A et B séparés par une membrane perméable contenant des ions de bicarbonate HCO; aux concentrations de 1 M et 0,1 M, respectivement. La différence de potentiel entre A et B est E, — Ep = + 100 mV. On donne : R= 8,31 J.mol.K*[Hco;]=1M_— | [HCOs]~ 0 M 1- Donner sur un schéma, les forces appliquées sur cet ion a travers la membrane. Les 2 forces extérieures appliquées sur les ions bicarbonates sont : - Force chimique F_, due au gradient (différence) des concentrations de part et d'autre de la membrane : - Force électrique F,,, due au gradient du potentiel électrique de part et autre de la membrane : F..=qF Alors F,, est dirigé de Byers A Remarque : On ne peut pas prévoir quelle force est la plus grande avant de calculer le potentiel d'équilibre des ions bicarbonates !! 2 a) Déterminer le potentiel d’équilibre des ions bicarbonates a 37°. Lion HCO; est-il a 'équilibre ? Satisfait-il 4 'équation de Nernst ? Calculons le potentiel d’équilibre pour ren en iat l'équation de Nernst. co; AVo(HCOs)=(ExrEs)on = — Glog log avec Z co, Hc = + (0.00615/)log (1/0,1) = +0.0615 V=+ 61,5 mv #100 mVAVeq(HCOz)=(Ex — Ea)ea eSt différent de AV,,(E,— Es). Lion n'est pas a 'équilibre électrochimique. || ne satisfait pas a |'équation de Nersnt. b) Si ion n'est pas a I’équilibre, déduire le bilan des forces appliquées. = Dans quel sens la force électrochimique va-t-elle le faire migrer ? Etant donné que AVeq(HCOs)=(ExEs)ag= + 60 mV et AV, = (Ex-Es)q= + 100 mV sont différents = ions bicarbonates ne sont pas en équilibre de diffusion Condition d'équilibre : Yi forces = ‘extérieures Déja les 2 forces sont du sens opposé I! En plus AV, > AV,(HCO;) a> W Feel > WE A D’oUil6 Mux Het est de meme sens que la force électrique ainsi ion diffusera de BVEFS/A > Autre méthode : Voir le cours Indications 1- Le mouvement de I'ion dépend de la force électrochimique a laquelle il est soumis. La diffusion se fera dans le sens pour lequel la différence de potentiel électrochimique (différence entre AV, le potentiel au repos et AVa(ions) celui d’équilibre de ion considéré) sera négative (transformation spontanée ou aussi diffusion passive) : si AV;,= AVeq(HCO;): ions HCO; en équilibre de diffusion Hp Pas de difusion 2 Pour déduire le flux net, il faut calculer le gradient de potentiel électrochimique : AV=(E-Es)= AV AVee(HCO3")=100-61.5=38.5 mV >0 C) En déduire le mécanisme de transport de rion bicarbonates HCO, ”. dans ce cas, et pour rétablir l’équilibre, il y aurait apparition d'une force du transport actif FTP qui s'opposera aux flux net mp Transport actif :F, =(F,,, + F,) de Avets B avec | FANT IFS I - WF Il Remarque : En cas de la non fonctionnement de la pompe, on pourrait renverser la polarité des 2 faces de la membrane : A>- Bd>+ et appliquer une différence de potentiel AV, = -(AVp-AVeq)=-38.5 mVExercice 3 ou 66 (Session principale 2018-2019) Le potentiel de repos d'une membrane cellulaire est AVm = Vi-Ve = -60 m\, les concentrations de lion sodium intra et extracellulaire a |'équilibre sont respectivement 12 et 145 mEq.L* On donne : R= 8,31 J.mol".K" T=37° 1) Déterminer le potentiel d’équilibre du sodium a 37°C. . 1 va, AVa{Na (EE = — 108109 TA = - (0.006/)log (12/145) = 0,0668 V = 66.8 mV >0 2) Déduire @ partir du AVEq (Na+), la polarité des feuillets inteme et externe de la membrane cellulaire. ‘on peut comparer le potentiel d’équilibre de Na+ avec le potentiel de repos de la membrane (AVm): gradient électrochimique (total}=AVm - AVsq(Na*) =-60-66=-126mV<0 lons Na ne sont pas en équilibre donc flux net négatif donc Na‘ a tendance a entrer a Vintracellulaire, 3) Iilustrer l'aide d'un schéma la signification du potentiel d’équilibre de l'on sodique ainsi que le champ transmembranaire Comme AV,,(Na’) >0 —Vintracellulaire->+ Vextrecellulaire> - Extracellulaire MB intracellulaire En déduire sa valeur sachant que I'épaisseur de ja membrane est 10 ym. E=IAVml /épaisseur=(60*10*)/(10*10")=6"10° V.m"Exercice 4 ou 67 Un réservoir est séparé par une membrane dialysant en deux compartiments A et B de volumes fixes, égaux et maintenus a la température 27°C. A (‘instant initial le compartiment A contient en solution une protéine monovalente totalement dissociée P,., Na’ a la concentration de 5,2mmol.L”. Le compartiment B contient en solution une protéine monovalente totalement dissocié PB’, Cl ala concentration de 2mmol.L” et du NaCl a la concentration de 6mmol. L“. 1) quelle est le phénoméne observé? justifier votre réponse. Phénoméne de Donnan puisqu’on a une molécule chargée qui ne peut diffuser a travers la membrane de Dialyse Aléquilibre : 2) Quelle est en mmol.L”, la concentration en Cl- dans le compartiment B ? 3) Quelle est en mmol.L, la concentration en Na+ dans le compartiment A ? 4) Dans quel compartiment losmolarité est-elle la plus grande ? Yosmolarité est additive donc 3 Osmolarité,= J, Cosmolaire =Osmo,, +Osmo,,,+OSMO,,=2,5+7,745,2=15,4 osmoll/| a 3 Osmolarité,= ¥ Cosmolaire =Osmo,, +Osm0y,,+OSM0,,=52,5+3,5+2=11 osmol/| ma donc Osmolarité, > Osmolarité, 5) Quelle en mV, la valeur absolue de la différence de potentiel de la part et d’autre de la membrane dialysante ?AVm =| Ex— Exe |=| AVeq(Na’)|= | — RT =| AV..(Ct)| = | - - 60log2| = +18 mV Exercice 5 ou 68 (Facultatif) En utilisant la technique du patch-clamp (configuration cellule entiére), on impose a la membrane plasmique un potentiel de -80 mV. On effectue alors des sauts de potentie! de 5 ms de 20 mV jusqu’a + 80 mV. On enregistre la valeur maximale du courant membranaire observé pour chaque saut de potentiel. Les valeurs obtenues sont les suivantes fem anv) |-80 — |-60 [40 | lo +20 [+40 [+60 [rqay foto [45-60 [70 [56 [as [5 [+25 1) Tracez la courbe |=f(V). Déterminer le potentiel dinversion du courant Le potentiel d'inversion du courant est de + 65 mv. b) Les concentrations intracellulaire et, extracellulaire en sodium de la cellule sont les suivantes : [Na‘], = 10 mM [Na‘], = 130 mM. Calculez le potentiel d’équilibre du sodium. Que peut-on dire de la nature du courant étudie? Eq, (Na’)= -0.0615 log(10/130) = +0.067V=+ 67 mV, Le potentiel d'équilibre de l'on sodium est trés proche du potentiel d'inversion du courant Studié. |I est probable que le courant en question soit un courant sodique. Messages clés a retenir - le mécanisme de transfert d'un ion peut étre passif ou actif; - le potentiel d'équilibre au repos est négatif; - 'équilibre de Donnan est conditionné par l'existence d'au moins dune macromolécules chargée dans une (ou les deux) compartiment (s)..