NS MS CAPITULO2 Estructuracelular 31 CO © O aa) Ci) db © ‘Bacius subtilis 0 Escherichia coli 8 ‘Streptococcus pneumoniae Staphylococcus aurous FIGURA 2-20 Incorporacién de una nueva pared celular en bacteras de forma diferente. Las bacterias con forma de bacilo, como Bacillus subtilis Escherichia coltienen dos modos de sitesi de la pared celular: se inwoduce nuevo peptidoglcano en forma helicoidal (A), lo que da origen alla elongacion de a pared lateraly e introduce en un anillo que se clera alrededor de sitio dela futuracvisin, lo que da orgen ala formacién del tabique de division (8) Los Streptococcus pneumoniae tlenen forma ovaly se elongan al insertar nuevo material en la pated cellar deforma que se originan anillos ecuatoriales (A), que corresponden con a proliferacién de la pared celular que rodea ala célula El ail inicil se duplicay los dos anillosresultantes se separan en forma progresiva, marcando el sitio de dvisién futua de las eéllashijas. El abique de division sesintetiza en la porclén media dela célla (8) Las células redondas, come Staphylococcus aureus, no parecen tener un mode de elongacién de la sintesis dela pared celular En este caso se introduce nuevo peptidoglucano slo en el tabique de divisén (B).(Reproducida con autorizacién de Schetfers DJyPinho MG: Microbiol Mol Biol Rev 2005;68:585) tratamiento con antibiéticos, constituyen problemas especia- les en la quimioterapia, Su reversién a la forma basilar puede producir recaidas de infecciones evidentes. J. Micoplasmas Los micoplasmas son bacterias que carecen de pared y que no contienen peptidoglucano (figura 25-1), Hay también arqueo- bacterias carentes de pared, pero se les ha estudiado menos. El analisis gendmico coloca los micoplasmas cerca de las bac terias grampositivas, a partir de las cuales se derivaron, Los micoplasmas carecen de un sitio de accion para los farmacos antimicrobianos que inhiben Ia sintesis de la pared celular (.¢). penicilinas y cefalosporinas) y por lo tanto son resisten- tes.a tales farmacos. Algunos micoplasmas causantes de neu monia, como Mycoplasma pneumoniae, contienen esteroles en su membrana, La diferencia entre las formas Ly los mico- plasmas es que es posible la sintesis de mureina, por lo que las formas L pueden adquirir nuevamente su forma original de bacterias, lo que nunca ocurre con los micoplasmas Capsula y glucocdliz Muchas bactriassintetizan grandes cantidades de polimeros extracelulares cuando crecen en sus ambientes naturales, Con tina exeepcién conocida (cépsulas de dcido poli-p-glatémico de Bacillus anthracis y Bacillus licheniformis) el material extra: celular es un polisacdrido (cuadro 2-2) Los términos cépaula y capa mucilaginosa con frecitencia se wtilizan para descr bir capas de polisaciridos; también se utiliza el término més incluyente,glucocdliz que se define como el material que se encuentra fuera de la célulay que contiene polisacéridos. Una capa condensada, bien definida que rodea en forma estrecha a la célula y que excluye partculas, como la tinta china, se conoce como cépaula (figura 221), Si el ghtcociliz tiene wna asociacién laxa con la célula y no excluye particulas, se le deno. mina capa mucilaginosa, Los polimeros extracelulares son sin- tetizados en la superficie de la célula bacteriana. Por ejemplo, Streptococcus mutans utiliza dos enzimas (glucosiltransferasa y fructosiltransferasa) para la sintesis de dextranos de cadena larga (poli-p-glacosa) y levanos (poli-p-fructosa) a partir de sacarosa, Estos polimeros se denominan homopolimeros. Los ppolimeros que contienen mas de un tipo de monosacaridos se denominan heteropolimeros. La cépsula contribuye ala capacidad de invasién de la bac- teria patégena; las células encapsuladas estan protegidas de la, fagocitosis a menos que estén cubiertas con anticuerpos anti- capsulares. El glucocéliz participa en la adhesién bacteriana a las superficies en su entorno, lo que incluye eélulas hospe- dadoras vegetales y animales. Por ejemplo, $, mutans posce la capacidad para adherirse estrechamente al esmalte de los dientes por medio de su glucocaliz, Las eélulas bacterianas de a misma o de diferentes especies permanecen atrapadas en el ¢lucocéliz, donde forman una capa conocida como placa den- tal; los productos acidos excretados por estas bacterias causan caries dental (capitulo 10). La participacién esencial del glu cociliz en este proceso y su formacion a partir de sacarosa explican la correlacién de la caries dental con el consumo de sacarosa en seres humanos. Como las eapas de polisacéridos externas se unen a una cantidad significativa de agua, la capa de glucocliz puede participar en la resistencia ala desecacién, Flagelos ‘A. Estructura: Los flagelos bacterianos son apéndices fusiformes compuestos en su totalidad por proteina, con un didmetco de 12 30 nm. Son drganos de locomocién para las estructuras que las poseen, booksmedicos.orgNS MS 32. SECCIONT Fundamentos de microbiologia CUADRO 2-2 _Composi n quimica del polimero extracelular en bacterias selectas ‘Bacilsanthracis, Polipéptido ‘Acido e glutémico Enterobacter aerogenes Polisaciridos complejos ucosa, fucosa, cide glucurénico Haemophilus influenzae Serogrupo b bos, ribitol fosfato etserla meningitides Homopolimerosyheteropolimeros, ph, Serogrupo A Parcalmente O-acetlado ‘Nacetimeneseminofostato Serogrupe 8 ‘Acide N-acetimuraminico {cide silico) Serogrupe ¢ Acide silico acetlade Serogrupo 135 Galactosa, sido silico Pseudomonas aeruginosa Alginato ‘Acido o-manurénico, dcido\- glucurénico Streptococcus pneumoniae Polisactidos complejos(varlostiposp.¢, (reumecoce) Tipo! Ramnosa,glucos, sido glucurnico Tot! Glucosa, dide glueurnico Tpov! Galactosa, glucose, ramnosa Tipo xv Galactose, glucosa,N-acetillucosomina Tipo XVI Remnosa, glucosa Streptococcus pyogenes (grupo A) ‘ido Nalurénico Neacetiglucosamina Sido glucurénico Streptococcus salvarus Levane Fructosa Se conocen tres tipos de disposicién: mondtrico (lagelo polar Linico), lof6trico (mvltiplesflagelos polaes) y peritrico (age- los distribuidos sobre la totalidad de la célula), En la figura 2-22 seilustran los tres tipos. Un flagelo bacteriano esté constituido por varios miles de moléculas de subunidades proteinicas denominadas flage- lina. En unos cuantos microorganismos (pe). caulobacter) los, flagelos estan compuestos por dos tipos de flagelina, pero en la mayor parte de los casos sélo se encuentra un tipo. El flagelo, se forma por la agregacién de subunidades a una estructura de forma helicoidal. Silos flagelos se eliminan por agitacién rmecdnica de una suspension de bacterias, con rapide se for- ‘man nuevos flagelos por la sintesis, agregacién y extrusion de subunidades de flagelina; la motilidad se restablece en 326 min. FIGURA 2-21 Capsulas bacterianas.A:Tincin de la cépsula de Bacilus anthracis con la técnica de M'Faydean, cultivados a35°C en sangre ddecaballo sin sibilina, B: Demostracion dela presencia de cépsula en 8. anthracis po tncidn negatva con tina china, Este método es til para ‘mejorar la vsualizacion de bacterias encapsuladas en muestras clinicas como sangre, medios de hemocultiveoliquido cefalorraquideo. (CDC, cortes’a de Lary Stauffer, Oregon State Public Heath Laboratory) booksmedicos.orgNS MS CAPITULO 2 Estructuracelular 33 FIGURA 2-22 Flagelos bacterianos. A Vibrio metchnikovi una bacteria monotrica (7 500%). Reproducida con autorizacién de van terson, ‘Ws Blchim Biophys Acta 19471527). B: Micrografla electronica de Sprllum serpens, que muestra flageloslofetrcos (9 000%), (Reproducida con autorzacin de van terson W: Biochim Biophys Acta 19471527): Merografia electronica de Proteus vulgar, que muestra fagelosperiicos (9 000%). Obsérvense los grinuls basales. Reproducida con autorizacisn de Houwink A, van Iterson W: Electron microscopical observation on bacterial cytology a study of flagellation. Blachim Biophys Acta 1950;5:10) La flagelina de diferentes géneros bacterianos probablemente difiera de otra en cuanto a su estructura primaria. Son muy antigénicas (antigeno H) y algunas de las respuestas inmunita- rias ala infeccién se dirigen contra estas proteinas.. Los flagelos se unen al cuerpo celular bacteriano por una estructura compleja formada por un gancho y un cuerpo basa El gancho es una estructura curvada corta que parece actuar como articulacién universal entre el motor en la estructura ‘basal yl flagelo, Los cuerpos basales cuentan con un grupo de anillos, un par en las bacterias grampositivas y dos pares en las bacterias gramnegativas. En la figura 2-23 se muestra un dia- sgrama interpretativo de la estructura de los gramnegativos; los anillos con las letras Ly P se encuentran ausentes en las células, sgrampositivas. La complejidad del lagelo bacteriano se hace evidente por estudios genéticos, los cuales muestran que més, de 40 productos génicos participan en el ensamble y funcién de (ales estructuras, Los flagelos se elaboran en forma escalonada (figura 2-23) En primer lugar se ensambla el cuerpo basal y se inserta en le envoltura celular. A continuacién se afiade el gancho y por ‘ltimo el flamento se ensambla en forma progresiva por la adi- cidn de subunidades de flagelina a su punta de tamafio cada vez, mayor. Las subunidades de flagelina son expulsadas a través de un conducto central hueco en el flagelo y cuando alcanzan, la punta, se condensan con las moléculas predecesoras, lo que permite que el filamento se haga més largo. B. Motilidad Los flagelos bacterianos son rotores helicoidales semirrigidos que imparten movimiento de rotacién ala célula, Esta rotacion funciona por el flujo de protones dentro de la misma, siguiendo el gradiente de concentracién producido por una bomba de protones primaria (véase revisién anterior); en ausencia de una fuente de energia metabslica, puede funcionar por la fuerza de desplazamiento de protones generada por ion6foros. Las bac- terias que viven en entornos alcalinos (alcalofilas) utilizan la ‘energia del gradiente del sodio (en lugar del gradiente de proto- ‘nes) para hacer funcionar el motor flagelar (figura 2-24). ‘Todos los componentes del motor flagelar se ubican en la ‘envoltura celular. Los flagelos unidos a una envoltura celular aislada y sellada rotan normalmente cuando el medio contiene un sustrato apropiado para la respiracién o cuando se establece uaa gradiente de protones por medios artificisles. ‘Cuando una bacteria peritrica se desplaza, los flagelos se ‘asocian para formar un mechén posterior que favorece el des- plazamiento de la célula en linea recta mediante la rotacién en sentido contrario alas manecillas del reloj.En intervals ls fla- ‘gelos invierten su direccién de rotacidn y suften unadisociacién transitoria, ocasionando que la célula dé volteretas hasta que de ‘nuevo se restablece el desplazamiento, con direccién aleatoria. Esta conducta hace posible la propiedad de la quimiotaxia; una célula que se desplaza de la fuente de un compuesto quimico atrayente sufre una voltereta y se reorienta mas a menudo de lo que ocurrieia si se desplazara hacia la sustancia que causa la atracci6n, lo que da origen a un desplazamiento neto dela céhula, hhacia el sitio de origen de lasustancia atrayente. La presencia de un atrayente quimico (como un carbohidrato 0 aminodcido) es percibido por receptores especifcos ubicados en la membrana ‘celular (en muchos casos el mismo receptor también participa cen el transporte de membrana de dicha molécula). Las eélulas bacterianas son demasiado pequefias para detectar Ia existencia, dde un gradiente quimico espacial (es decir, un gradiente entre dos polos); los experimentos muestran que detecta gradientes temporales, esto es, concentraciones que disminuyen con el booksmedicos.orgNS MS 34 SECCION I Fundamentos de microbiologia »~ ‘Cubier Sano Pio) Famerto nn 200m do gancho-flamento Impulsor toa a arene WS Anillo L (FigH) pe 8 omen = Mentana eterna no Pa) Cuerpo ewes poplars Fe onsen da Qa Monsran cea ection | para stiesoe Elect (So Srwntn soni) orto QeMng ae soso wien tiny 8 SS Praca an sostts teense —@D SS aniioms (rir) OE epormacién (FIA, FH, Fil)? ‘Motor (Mot, MotB) A . FIGURA 2-23 A: Estructura general del fagelo de una bacteria gramnegativa, como Escherichia colo Salmonella typhimurium. El gancho flamentoso en el complejo corporal basal se ha alslado y se describe ampllamente. La ubicacién del aparato de exportacién no se muestra. B: Un diagrama del fagelo muestra la subestructuray proteinas a partir de las cuales se construye. La proteia FiFes responsable de a caracterstica de! anilo M, del anillo Sy de la disposicion en collar de las subestructuras que se muestran, que en conjunto se denominan anilo MS. Se desconoce |a ubicacién de FE respecto al anillo MS y con la bara y el orden de las proteinasFlgB, FlgCy Flgf en la barra proxima).(Tomada de Macnab RM: Genetics and biogenesis of bacterial flagella. Annu Rev Genet 1992;26:131. Reproducida con autorizacién de Annual Review of Genetics, Volume 26, © 1992 by Annual Reviews.) Membrana externa Mureina Espacio perplésmico {NHI Membrana cetuar FIGURA 2-24 Componentes estructraes en el cuerpo basal del lagelo, lo que permite que la porcién interna de a estructura, las baras yet cuerpo basa asi como el complejo de gancho-lamento unidos presenten rtacién. Los anillos externos permanecen estaticos en contacto conla ‘membrana cela intema y externa yla pared celular (murein} fjando el complejo del agelo ale ervoltura bacteriana. La rotacén es estimulada poral flujo de protones através del espacio peripsmico fuera de la membrana celular hacia el itoplasma en respuesta a un campo eléctricoy sradiente de protones través de la membrana, que en conjunto constituyen la fuerza moiriz de protones. Un apagador determina a decciin de Iarotacin, lo que a su vez determina sla bacteria se desplaza en sentido anterdgrado (por rotacisn en sentido contraro alas manecilas de reo) © presenta movimiento irregular (por rotacén en el sentido de as manecillas del elo) de los lagelos. (Reproducida con autorizacon de Saler MH Jr Peter Mitchell and his chemiosmotic theories. ASM News 199736313), booksmedicos.orgNS MS paso del tiempo durante el cual la célula se aleja de Ia fuente de atraccién y que se incrementa con el tiempo durante el cual la célula se desplaza hacia dicha fuente. Algunos compuestos actian como repelentes en lugar de atrayentes. Un mecanismo por el cual las células responéen, a las sustancias atrayentes y repelentes implica la metilacién mediada por cGMP y la desmetilacién de proteinas especificas n la membrana, Las sustancias atrayentes causan una inhibi cién transitoria dela desmetilacién de estas proteinas, en tanto que los repelentes estimulan su desmetilacién, EI mecanismo por el cual un cambio en la condueta celw: lar ocurre en respuesta a un cambio en el entorno se denomina transduccién sensorial; dicho fendmeno es causante de la qui miotaxia y de la aerotaxis (movimiento hacia la concentracién, <6ptima de oxigeno), fototaxis (movimiento de las bacterias foto. sintéticas hacia las fuentes luminosas) y taxis aceptora de elec- trones (movimiento delasbacterias espiratorias hacia aceptores electr6nicos alternatives, como nitrato y fumarato). En estas, respuestas, al igual que la quimiotaxia, el desplazamiento neto depende de la regulacién de la respuesta alas volteretas. Pilosidades (fimbrias) Muchas bacterias gramnegativas poseen apéndices superfi- ciales rigidos denominados pilosidades ("pelos L”) o fimbrias (‘flecos [Son més cortos ymas finos que los flagelos yal igual que éstos, se componen por subunidades proteinicas estruc- turales denominadas pilinas. Algunas pilosidades contienen tun tipo dnico de pilina en tanto que otras tienen més de una. Las proteinas menores denominadas adhesinas se ubican cn 1a punta de las pilosidades y participan en sus propiedades de tunidn. Pueden distinguirse dos clases: pilosidades ordinarias, que participan en la adhesin de bacterias sintéticas y patd- genas con las células del hospedador y pilosidades sexuales, que participard en el mecanismo de unidn de células donadas y receptoras para la conjugacién bacteriana (capitulo 7) En la figura 2.25 se ilustran las plosidades en las cuales la pilosidad sexual ha sido cubierta por una particulafagoctica para la cual cuentan con receplores especificos Plosidas sexual otras Fagelo piles Sades vm FIGURA 2-25 Pilosidades.Pilosidades en una célula de Escherichia coll Las plosidades cortastfmbrias) gobiernan Ia adhesién; a pilosidad sexual participa en a transferencia de DNA. (Cortesia del doctor Charles Brinton, Jr) CAPITULO2 Estructuracelular 35 La motilidad a través de pilosidades es completamente diferente del movimiento flagelar. Las moléculas de pilina muestran disposicién helicoidal para formar un cilindro recto que no rota y que carece de un cuerpo basal completo, Su punta se adhiere fuertemente a superficies distantes ala célul, Mis tarde, las pilosidades sufren despolimerizacién desde el extremo interno y de esta forma sufren retraccién al interior de la célula. Bl resultado es que la bacteria se mueve en ladireccién en que se adhiere la punta, Este tipo de movimiento superficial se denomina fasciculaciones y se observa a menudo en bacte- riascon pilosidades. A diferencia de los flagelos, las pilosidades erecen desde el interior de la célula hacia el exterior. La virulencia de ciertas bacterias patégenas depende de la produccién de toxinas y también de “antigenos de coloniza cin’, los cuales son pilosidades ordinarias que proporcionan a las células propiedactes de adhesion. En cepas de E. coli ente- ropatégena, las enterotoxinas y los antigenos de colonizacion (pilosidades) tienen determinacion genética através de plasmi- dos transmisibles, como se menciona en el capitulo 7. En los estreptococos que son un geupo de cocos geam- positivos, las fimbrias son el sitio principal para la ubicacién del antigeno de superficie, la proteina M. El Acido lipoteicoico relacionado con estas fimbrias es causante de la adhesion de los estreptococos del grupo A a las células epiteliales del hos- pedador. Las pilosidades de diferentes bacterias son distintas desde el punto de vista antigénico y desencadenan la formacién de anticuerpos por el hospedador. Los anticuerpos contra ls pilo- sidades de una especie bacteriana no evitan Ia unin de otra especie. Algunas bacterias (capitulo 21), como N. gonorrhoeae son capaces de producie pilosidades con diferentes tipos anti- «génicos (variacién antigénica) y por lo tanto pueden adherirse a las células aun en presencia de anticuerpos contra su veloci dad original. Al igual que las eépsulas, ls pilosidades inhiben la capacidad fagocitica de los leucocitos. Endosporas Miemnbros de varios gfnerosbacterinos son capaces de formar envdosporas(Sgura 2-26), Las dos més comunes son bacilos grampostivos: los anaerobis obligados del género Bacillus y los anaerobiosobligados del género Clostridium, Otras bacte- rias que se sabe forman endosporas son Thermoactinomyces, Sporolactobacius, Sporosarina, Sporotomaculum, Sporomusa y Sporohalobacter, Dichos microorganismos sufren un cilo de diferenciacién en respuesta a condiciones ambientales: el proceso, denominado esporulacién, es desencadenado por dl casi agotamiento de varios nutrientes (arbono,nitrdgeno o foro. Cada cule forma una espor interna tnica que es lberada cuando la offula madre sufte autlis, La espora es una célula en reposo, muy resstente al desecacién, al calor ¥ alos compuestos quimicos, cuando se encuentra en condi Giones nutricionalesfavorables y se activa (véase adelante) Ia espora germina para producir una célula vegeativa A. Esporulacién El proceso de esporulacién inicia cuando las condiciones nutri cionales se tornan poco favorables, hay casi agotamiento de las fuentes de nitrégeno o de carbono (o ambas), lo que constituye booksmedicos.orgNS MS 36 SECCIONI Fundamentos de microbiologia ° i) i= Ce 3 ° 0-6 e oe = ak A 8 FIGURA 2-26 Células en esporulacion del género bacios. A:Bacilos no identifcados provenientes del suelo, B: Baclus cereus. C: Bacilus ‘megaterium. (Reproducida con autorizacién de Robinow CT, Structure. En GunsalusIC, Stanier RY feds], The actera:A Treatise on Structure and Function. Vol 1, Acadernic Press, 1960) los factores més significativos, La esporulacién ocurre masiva- mente en cultivos que han terminado su crecimiento exponen- cial como consecuencia del casi agotamiento de los nutrientes. La esporulacién implica la produccién de muchas estruc- turas, enzimas y metabolitos nuevos junto con la desaparicién de varios componentes de la célula vegetativa. Estos cambios representan un verdadero proceso de diferenciacién; se acti- vva una serie de genes cuyos productos determinan la forma- cin y composicién final de la espora. Tales cambios implican alteraciones en Ia especificidad transcripcional de la poli- merasa de RNA, que depende de la asociacién de la proteina central de polimerasa con una u otra proteina promotora espe cifica denominada factor sigma, Durante el crecimiento ve} tativo, predomina un factor sigma designado como o*, Mas tarde, durante la esporulacién se forman otros cinco factores sigma que causan la expresién de varios genes de la espora a diferentes tiempos en ubicaciones especificas. La secuencia de eventos en la esporulacién es sumamente ccompleja: la diferenciacién de una célula vegetativa de B, sub- filis en una endospora tarda casi 7 h en condiciones de labo- ratorio, Distintos eventos clinicos y morfoldgicos ocurren en tapas eecuenciales del proceso. Se han identificado siete etapas diferentes, Desde el punto de vista morfoldgico, la esporulacién inicia con Ia formacién de un filamento axil (figura 2-27). El proceso continiia con el plegamiento de la membrana de forma que se produce una doble membrana cuyas superficies corresponden ala superficie de sintesis de la pared celular de la envoltura celular. Los puntos de crecimiento se desplazan de manera progresiva hacia el polo de la célula de forma que pueda englo. bar la espora en formacién, Las dos membranas de a espora inician la sintesis activa de ccapas especiales que formaran la envoltura celular: Ja pared de la espora y la corteza que se encuentran fuera de las mem- branas en aposicién, En el nuevo citoplasma aislado muchas enzimas de la célula vegetativa sufren degradacién y son sus tituidas por un grupo de constituyentes singulares para la espora B. Propiedades de las endosporas 1. Regién central. La regién central es el protoplasto de la espora, Contiene un nicleo completo (eromosomas), todos los, componentes del aparato de sintesis de proteinas y el sistema, productor de energia que depende de la glucclisis. Se carece de citocromos incluso en especies aerobias y porlo tanto las esporas, dependen de una via de transporte de electrones acortada que incluye lavoprotefnas. Varias enzimas de células vegetativas se incrementan en cantidad (p.¢), alanina racemasa) y se forman varias enzimas singulares (p. ¢), sintetasa de écido dipicoli nico). Las esporas no contienen nucledtidos de piridinas redu. cidos o ATP, La energia para la germinacién se almacena en forma de 3-fosfoglicerato en lugar de almacenarse como ATP. La resistencia al calor de las esporas se debe en parte a su estado de deshidratacién y ala presencia de grandes eantidades de dipicolinato céleico en la regién central (5 x 15% del peso seco de la espora) que se forma a partir de un intermediario de Ja via biosintética de glicina (igura 6-19). En alguna forma que ain no se comprende por completo, estas propiedades causa Ia estabilizacién de las enzimas de la espora, la mayor parte de las cuales muestran labilidad normal al ealor euando se ais Jan en forma soluble. 2. Pared de la espora. 12 capa més interna que rodea la ‘membrana interna dela espora se denomina pared de laespora Contiene peptidoglucano normal y se convierte en la pared celular de la eélula vegetativa en germinacién, 3. Corteza. Es la capa més geuesa de la envoltura de la espora, Contiene un tipo inusual de peptidoglicano, con muchos menos enlaces cruzados de los que se encuentran en booksmedicos.orgNS MS Pared celular \ ® Enlovarion de a prespora —O)- @ sitosis det cotaza Conde Pared collar sgerminatva Se CAPITULO2 Estructuracelular 37 @ Formacisn ® Fer na Sy, @ fomacen co aviue {dala preespora © depo de cbiena @® wcuracin Destruccién do la célula madre Espora FIGURA 2-27 ttapas de a formacién de endosporas. Reproducida con autorizacin de Merrick ML: Streptomyces. E: Parish JH ed] Developmental Biology of Procaryotes. Univ California Press, 1978) cl peptidoglucano de la pared celular. El peptidogtucano de la, corteza es extremadamente sensible alas lisozimas y su autéli- sis participa en la germinacidn de la espora 4, Cubierta. La cubierta se compone de proteinas simila- res a la queratina que contienen muchos enlaces disulfuro intramoleculares. La impermeabiliad de esta capa confiere a las esporas su relativa resistencia a los agentes quimicos antibacterianos, . Exosporio. El exosporio esté compuesto por proteinas, Iipidos y carbohidratos. Consiste de una capa basal paracris- talina y una regién externa con aspecto piloso. La funcién del ‘exosporio ¢s poco clara. Las esporas de algunos microorganis- ‘mos del género Bacillus (pe). B. anthracis y B. cereus) poseen lun exosporio, en tanto que microorganismos de otros géne- 0s (p. ej. B. atrophaeus) poseen esporas que carecen de esta estructura, C.Germinacién Bl proceso de germinacién ocurre en tres etapas: activacién, Inicio y retono, 1. Activaci6n. La mayor parte de las endosporas no pueden ‘germinar de inmediato después de su formacién, Pueden ger- ‘minar después de que han permanecido en reposo por varios, booksmedicos.orgNS MS 38 SECCIONT Fundamentos de microbiologia dias o cuando se activan por primera vez en un medio rico en nutrientes por uno u otro agente que dafa la cubierta de la espora, Entre los agentes que pueden activar a una espora en. reposo se encuentran el calor, abrasién, acidez y compuestos que contienen grupos sulthidrilo libres. 2. Inicio. Después de activada, una espora iniciard la ger ‘minacién si las condiciones ambientales son favorables. En diferentes especies han evolucionado receptores que recono- cen diferentes efectores como sistema de sefalizacién en un entorno rico en nutrientes: asia etapa de inicio es desencade- nada por L-alanina en una especie y por adenosina en otra. La unin del efector activa una autolisina que degrada con rapide, la corteza de peptidoghucano. Se capta agua, se libera el dipi- colinato cAlcico y diversos constituyentes de la espora suften degradacién por enzimas hidroliticas. 3. Proliferacin. La degradacién de la corteza y de las capas, externas da origen al surgimiento de una nueva célula vegetativa aque consiste de protoplastos de espora con su pared circundante. Se continia con un periodo de biosintesis activa que coneluye con la divisin celular y se conoce como etapa de proliferacién; para que se lleve a cabo ésta es necesario el suministro de todos, los nutrientes esenciales para el crecimiento celular TINCION Los colorantes sufren combinacién quimica con el proto- plasma de la bacteria; sila célula no estd muerta, el proceso de tincién la desteuye; por Io tanto, tal proceso es dréstico y puede producir artefactos. Los colorantes utilizados a menudo son sales. Los coloran- tes basicos consisten de cationes t (p. ej. cloruro™ de azul de metileno”); ocurre lo contrario con los colorantes dcidos (p. ¢}, eosinato~ de sodio"). Las células, bacterianas son ricas en acidos nucleicos y portan cargas ne- gativas en los grupos fosfato. Esta se combina con las cargas, positivas de los colorantes bisicos. Los colorantes Acidos no tifien a las células bacterianas y por lo tanto pueden utilizarse para tefiir el material de fondo a fin de proporcionar un con- taste de color (véase la seccién Tincién negativa) Los colorantes bésicos tiflen las células bacterianas de ‘manera uniforme a menos que en primer lugar se destruya el RNA citoplismico, Sin embargo, pueden utilizarse técnica de tincién especial para diferenciar Ios flagelos, cépsulas, paredes celulares, membranas celulares, grénulos, nucleoides y esporas. jddos con un anién incoloro Tincién de Gram Una caracteristica laxonémica importante de las bacterias ¢ su respuesta a la tincién de Gram, Las propiedades de tin- ign de Gram parecen ser fundamentales, porque la reaccién de Gram se correlaciona con muchas otras propiedades mor- fol6gicas en formas con relacién filogenética (capitulo 3). Un ‘microorganismo que en potencia es positivo para la tincién de Gram puede parecerlo sélo bajo condiciones ambientales par- ticulares y en un cultivo joven. Los procedimientos de tincién de Gram (capitulo 47) ini- cian onlaaplicacién de uncolorantebisico, violetadegenciana. ‘A continuacién se aplica una solucidn de yodo; todas las bac terias se tifen de color azul en este punto del procedimiento. Luego la célula se trata con alcohol. Las células gramposi tivas que conservan el complejo de violeta de genciana-yodo adquieren un color azul y las células gramnegativas se deco: Toran por completo con la adicién de alcohol. Como ul paso se aplica otro colorante (como rojo de safranina) de forma que las células gramnegativas decoloradas adquieran un color contrastante; las células grampositivas adquieren un color vio liceo (cuadro 2-1), La base de la reaccién diferencial ala tincién de Gram es laestructura dea pared celular, como se coment antes en este capitulo, Tincién acidorresistente Las bacterias acigorresistentes son aquellas que conservan Ja carbolfucsina (tiroxina bisica disuelta en una mezcla de agua-alcohol-(enol) incluso cuando se decolora con cido clothidrico en alcohol, Un frotis de células sobre una lami nilla se cubre con carbolfucsina y se calienta en bafio Maria. ‘Acontinuacién sl {cido-alcahol y por sitimo se aplica una tincidn de contraste (azul 0 verde) (capitulo 47). Las bacterias acidorresstentes (imicobacterias y algunos actinomicetos relacionados) adquie- ren un color rojizo en tanto que otras células adquieren el color del segundo colorante. ‘aa cabo la decoloracién con la mezcla de Tincién negativa Este procedimiento consist enlaatencién del entorno con un colorante icido, dejando a las células incoloras, El colorante negro de nigrosina (tinta china) se utiliza a menudo. Dicho método se emplea para aquellas clulaso estruct de ten en forma directa (figura 2-218). 3 dificiles Tincién de los flagelos Los flagelos son demasiado delgados (12 a 30 nm de diémetro) para que sean visibles en el microscopio de luz. Sin embargo, su presencia y distribucién pueden demostrarse al tratar las células con una suspensién coloidal inestable de sales de acid tanico, lo que causa la precipitacién intensa sobre las paredes celulares y flagelos. De esta manera, el didmetro aparente de éstos se incrementa a un tamafio tal que las tinciones subsi guientes con fucsina basica hacen visibles a los flagelos en la microscopia de luz, En la figura 2-28 se muestran células tei das con este método. En las bacterias peritricas los lagelos forman haces durante el movimiento y tales haces pueden ener un grosor tal que sea posible observarlos en células vivas en la microscopia de campo ‘oscuro o de contraste de fases. Tinci6n de la capsula La presencia de la cApsula por lo comiin se demuestra por pro. cedimientos de tincién negativa o modificaciones de tales pro- cedimientos (figura 2-21). Uno de estos métodos de “tincién de la cApsula” (método de Welch) implica el tratamiento con solucién de violeta de genciana caliente seguido de un lavado con solucién de sulfato de cobre. Este tiltimo se utiliza para booksmedicos.org