Ze) °o ” © me — ——_ ra a = ) | Sy <= a S =z Ea es meaner |INDICE Capitulo 1. Capitulo 2. Capitulo 3, Capitulo 4, Capitulo 5. Capitulo 6. Capitulo 7. Capitulo 8. Capitulo 9. Capitulo 10. Capitulo 14. Capitulo 12, Capitulo 13. Capitulo 14, Capitulo 45, Capitulo 16, Capitulo 17, Capitulo 48, Capitulo 19, Capitulo 20. Capitulo 24. Capitulo 22. Capitulo 23. Capitulo 24, Capitulo 25, Capitulo 26. Capitulo 27, Anexos ... La Ingenieria de bioprocesos. Procesos biotecnolégicos Balances de materia y energia Transformaciones biolégicas Comportamiento en el flujo de fluidos . Bombeo de fluidos. ... . Ae Mezcla con materiales fluidos. . . Transmisién de calor (I). Cambiadores . Transmisién de calor (Il). Operaciones . . * Transferencia de materia. Suministro de oxigeno Separacién de productos (|). Por velocidad y en mailas . Separacién de productos (Il) Transferencia entre fases Operaciones con aire . Manejo de sélidos ae Biorreacciones. Transformaciones enziméticas Biorreacciones microbianas . Inactivacion ¢ inhibicién de microorganismos. . . Cultivos celulares mas complejos y poblaciones mezcladas . . Biorreactores para seres vivos, Fase sélida. Biorreactores para seres vivos en fase liquida Biorreactores discontinuos . Biorreactores continuos Tratamientos biolégicos de aguas . Consideraciones complementarias de Ingenter Diseito de productos . Introduccién a los aspectos econémicos Consideraciones sobre las normativas legales aaa 133 149 165 183 205 227 247 263 285 303 317 335 353 373 389 409 439 455 473 493 SitPRESENTACION El manuscrito que aqui se presenta recoge temas de es: Pecial utilidad para e! estudio de la ingenieria de procesa- do de, y con, materiales bioldgicas. Resulta pues de inte és en un buen nuimero de campos industriaies como el alimentario, enzimas, energfa y productos quimicos, agri: cultura, en el sector salud y en el tratamiento de resicuos y medio ambiente. Esta es una materia multidisciplinar, ‘como todas las ingenierfas, que hace uso de los princi- pios fisicos, biolégicos y quimicos para analizar sistemas de materiales, procesos 0 productos de base biolégica. Es un libro para uso en el seguimiento durante el curso, tanto para una asignatura general como para asignatu: ras especificas. Puede también ser ctil como consulta ocasional, para personas con un conocimiento basico previo de estos temas. El libro ve dirigido primeramente a estudiantes de titulaciones tales como Biotecnologia, Ingenieria Quimica, Tecnologia de los Alimentos, Biogul- mica, Farmacia, Ingenieria Agronémica, Ingenieria de Sis- temas Biol6gicos, Ingenieria Biotecnoldgica, Ingenieria In- dustrial.... Pero espero que pueda ser itil también para todos los que se acerquen a estos temas desde muchas otras areas. Para los bidlogos, bioquimicos, 0 quimicos, al acercarse a la aplicacién industrial de los procesos, y para los ingenieros al precisar los materiales necesarios en este campo, en las diferentes industrias de procese- do mencionadas. La estructura se basa en la definicién de lo que seria la ingenieria de procesos biolégicos, en todos los aspec- 108 que pueden requerirse para llevar un proceso de base biol6gica, con materiales biol6gicos, a la realidad indus- ial. La organizacién del curso es inicialmente deudora de la concepcién tradicional de fa ingenierfa de los pro- ‘e805 quimicos. Asi la introduccién de principios fisicos previa a las aplicaciones, un cierto orden de operaciones segtin las diferentes transferencias y transformaciones, y la continuidad de capftulos tematicos desde procesos de transporte hasta transformaciones biolégicas y bio- rreactores. La programacién se ha ide modificando en muchos afios de ensefianza de esta area, y se ha querido completar con aspectos de interés ingenieril y socioeco- némicos, esenciales al llevar los procesos biolégicos a la préctica. En una época en la que el acceso a la informacién por internet resulta muy facil, uno de los primeros objetivos €8 a seleccidn de la informacién y a continuacién orge- niizar los conocimientos de interés para procesos bioldg cos, facilitando asf la profundizacién en los aspectos mas relevantes. Se hace por ello muy importante la seleccién de {a informacién. Casi toda esté en la Red, y la que fal: ta tampoco esté aqui, salvo quiza nuestro interés en el campo. Se es muy consciente que el conocimiento no es. tener ios datos, sino saber relacionarlos. Se introduce el texto con unos primeros capitulos sobre las caracteristi- cas de Ios procesos industrials de base bioldgica, as! como de los principios basicos de los sistemas biol6gi- cos. Junto con las bases para los cdlculos ce balances, se introducen fenémenos de transporte aplicados a pro- cesos biolégicos, y su aplicaci6n en equipos de flujo de fluidos, transmisién de calor y materia, La importancia de la preparacién de aire, por ejemplo para las fermentacio- nes 0 para el secado, junto con el cardcter critica y aife- rencial para los procesos biolégicos de las operaciones de separacién (downstream} ha requerido una seleccién de operaciones de diferente principio de separaci6n. La importancia de las transformaciones biolégicas se mani- fiesta en ocho capitulos, le mitad para estudiar los proce: S08 cinéticos y la otra para los equips 0 biorreactores, a los que se afiade otro que completa el tratamiento bio. logico de aguas y para procesos medioambientales. Dos aspectos tan importantes como el manejo de sélidos, y los diversos aspectos complementarios 0 de ingenieria general, de gran importancia cuantitativa en ia industria,‘se recogen aquf en dos capttulos, con los que se quiere desoribir aspectos habituaimente poco tratados. Se ha querido finalmente incorporar otros tres capitulos poco frecuentes en libros de texto, pero de gran importancia practica, como son el disefio de ingenierfa de producto, que define la realidad de! producto de base biolégica jos usualmente de productos de base 0 (commodities), el andlisis econdmico de los procesos y productos, y final- mente una introduccién a los temas legales que afectan a la industria. La organizacién de este libro permite su uso como texto general para los estudios ya mencionados, pero ademas puede ser util de forma espectfica para algunas materias que aparecen de forma horizontal en muchas titulaciones. En forma indicativa se seflalan algunos cape ‘tulos que presentan interés para esas materias, ast, + Procesos biotecnoldgicos: 1,2, 4, 18, 19, 23, + Biologia industrial: 4, 17, 24, 25, 26, 27 + Biotecnologia. Balances de materia y energia: 1, 2,3, 4,8, 21, 22 + Fenémenos de transporte en procesos biolégicos: 5,6 ,7,8,9, 10 + Biorreacciones: 15, 16, 17,18 + Biorreactores: 19, 20, 24, 22, 10 + Procesos de separacién o postratamiento (downs- (ream) : 3, 10, 14, 12, 13, 14 + Disefio de productos: 2, 14, 18, 24, 24, 25, 26, ar + Ingenieria farmacéutica: 2, 3, 6,7, 11,12, 13, 44, 15, 24, 26, 27 + Ingenieria alimentaria: 2, 4,5, 6, 7, 13, 14, 16, 47,26, 27 + Biotecnologfa ambiental: 3, 4 .7, 16, 19, 20, 22, 23,27 ‘Se ha querido guardar un equiliorio entre fo extensivo y lo intensive, y cuidar una gradacién de la cificultad, procu- rando faciitar ja entrada en los temas, y animar al andlisis posterior de problemas mds complejos. Se trata en forma general un buen numero de los diferentes procesos existen tes, pero se incorporan cuestiones de detalle cuando son Impartantes para promover el aprendizaje y dotar de herra- mientas al lector, Aunque éste es un libro de texto, se ha pprocurado introducir informacién relacionada con posibles desarrollos de investigacién, que eniman sobre aspectos de futuro. Con este esquema, y para mantener el texto en tunos limites manejables se intraducen s6lo algunos ejer cicios considerados de interés pedagdgico muy basivo, en algunos temas. Resultaré importante en el futuro disooner de un libro de “problemas” que trate, de forma specifica, de ilustrar ampliamente los aspectos aqut mostrados. Mi agradecimiento a todos los que me han ayudado a desarrollar y terminar este manuscrito, a quienes lo han Jeldo y ayudado a evitar algunos errores, a Ménica, Fe- derico, Lorea, Estefania, Manuel, Adriana, Luis, Ricardo, Fran, Aurelio. Carmen, Emilio, Roberto, Sergio, Carlos, Francisco, José Antonio, Rosana, y muy en particular a José Ramén Fernandez que me escribié inicialmente el capitulo 27. A Colin por su visién y estimulantes discu: siones. La ayuda sobre todo de Sergio y de Raquel, ha sido muy valiosa en las ditimas etapas de correccién. Los errores que permanecen son responsabilidad com- pleta mia. A quienes lo consulten, y a quienes lo com- ren gracias por su interés. En fin a todos, por si hay que hacer otra edici6n, como La Guerra de las Galaxias, les agradezco que me indiquen los posibles errores, © sugerencias de materiales adicionales. Mario Diaz Universidad de OviedoCAPITULO 1 LA INGENIERIA DE BIOPROCESOS 4.4, INTRODUCCION 1.1.4. El enfoque y el alcance 1.4.2. Consideraciones historicas 41.2. ASPECTOS DE INTERES EN INGENIERIA DE BIOPROCESOS 1.3, LOS DIAGRAMAS DE BLOQUES Y DE FLUJO 1.3.4. Elementos constitutivos de diagramas de flujo 4.3.2. Las lneas de produccién y de residuos 1.3.3. El tratamiento de residuos 1.4, DIVERSIDAD DE DIFICULTADES Y SOLUCIONES 1.4.4. Escala de andlisis 1.4.2. Algunas formas de procesos de transformacién biol6gica1.4. INTRODUCCION 1.1.4. El enfoque y el aleance a) Gampos de optic La Ingenieria de Bioprocesos tiene por objeto de estudio el conjunto de las metodologfas y procesos dirigidos a la transformacién de materiales biolégicos, 0 aplicaciones de procesos para le conversién por via biolégica del ma- terial bidtico 0 no, con la finalidad de obtener productos ccon valor de mercado. Son campos propios de estudio aspects tales como: + Eldisefio, desarrollo, seleccién, adaptacién y con- trol de nuevos procesos industriales biolégico-qur micos y la optimizacion de su funcianamiento, El disefio y desarrollo de nuevos biocatalizadores (enzimas, microorganismos) que respondan a la demanda industrial + El diseno de reactores biolégicos y de operaciones bsicas de extraccién-puriicacién del producto, El disefto y Ia seleccién de equipos que permitan la operacion en condiciones dptimas en los proce- 0s a partir de materiales de origen vegetal, ani- mal y microbiano. El cambio de escala (escalamiento) de equipos y procesos que involucren la utilizacién o genera- clon de materiales de caracter biol6gico. ‘Su campo de aplicacion es amplio. Asi, puede em- plearse en el sector industrial, incluyendo el alimenta- ‘io, en empresas procesadoras de alimentos, como las de fermentacién (vinos, cervezas, antibidticos, enzimas, cidos orgénicos, levaduras, etc.), en la obtencién de ‘aminodcidos, polisacaridos, etc., en la obtencién de ma- teriales energéticos, 0 de productos biolégicos de uso diverso. También se aplica en el campo de la salud. en @! desarrollo de productos farmacéuticos, nuevas droges, hormonas, etc. Bajo el punto de vista académico y de la investigacién, es un drea de desarrollo en el dmbito de la ciencia y tecnologia de los alimentos, la tecnologia mi- crobiana y la tecnologfa de enzimas; pero también, cam- pos tales como la aplicacién de fa ingenierfa genética, la biotecnologia vegetal y el cultivo de células y tejidos animales. Los conocimientos adquiridos y los profesio- nales formados tendran interés para empresas publicas © privadas, asesorias y laboratorios de investigacion, de tos sectores de produccién primaria y de transformacién, ¢ industria de proceses. Es un campo donde puede rest: tar fructifero desarrotiar una actitud emprendedora que permita participar en la creacién de empresas. Podemos clasificar de forma inicial los distintos tipos de procesos segtin la clase de transformacién que se inclu- ya. Algunos de éstos son: a) Sintesis celviar, b) Producctén enzimatica. ‘) Produccién de metabolites (primarios y secundarios). d) Procesos de transformacién de materiales, por ejemplo, hidrolitica, enzimatica 0 microbiana. 2) Procesos de destruccién de materia biolégica. f) Otros procesos de transformacién de materiales bioldgicos, por ejemplo, hidrblisis. Existen, no obstante, otros procesos de base bioldgica que no incluyan ninguna trasformacién bioquimica, sino procesos basicamente de separacién 0 preparacién por mezcla de componentes; por ejemplo, con actividades si- nérgicas o de amortiguaciGn, para tener un producto final comercializable. También pueden ser transformaciones de tipo estructural, por ejemplo de la estructura proteica, de estructuras mecénico-biolégicas. Resuitan muy importantes los dos mecanismos de generacién de energia metebélica util en forma de ATP (adenosina tifosfato), que pueden utilizar los microorga- hismos quimiosintéticos 0 quimiotrofos: + Fermentacion: reacciones de éxido-reducci6n de com- uestos ofgénicos que ocurren en ausencia de ox eno, sin la participacién de la cadena de transporte de electrones. Es decir, las moléculas orgénicas ac- tGan como dadores y aceptores de elactrones. + Respiracién: reacciones de oxidacién de compues- tos orgénicos o inorgénicos, can la participacién de la cadena de transporte de electrones. Segun la raturaleza del aceptor final de electrones la respi raci6n puede st — Aerobia: cuando el oxigeno es el aceptor final de electrones. — Anaerobia: cuando el aceptor es un compues- to inorgdnico oxidado diferente del oxigeno, como el nitrato, © sulfato. Existen muchas clases de biorreacciones que, a me- nudo, son caracteristicas de grupos microbianos espect ficos. En las fermentaciones microbianas hay dos aspec: tos habituales comunes: 1) el NADH (nicotinamida ade- rina dinucledtido) es oxidado a NAD", y 2) el aceptor de electrones es piruvato 0 un derivado de éste. El término fermentacion se utilizar no obstante aqut de una formageneral: no s6lo para procesos biolégicos que se produz: can en ausencia de 0, como la descomposicién de los, alimentos 0 la produccién de bebidas alcohdlicas, sino por extensi6n, para cualquier proceso, aerdbico 0 anaerd- bico, que conlieve el cultivo masivo de microorganismos. Conwiene en este momento indicar la escala en la que es- tamos considerando el analisis cienttfico e ingenieril de los, procesos de transformacién (Figura 1.4). No se considera aqui la escala de modificacion genética de microorganis- ‘mos para obtener otros que tengan ms actividad 0 expre- sen una determinada proteina. Puede ser una escala de partida, el elegir entre los biocatalizadores disponibles, 0 generados en otras disciplinas, o a través de la transforma ign deseada llegar al producto final deseado. Estas esca- las se resumen en las etapas sefialadas a continuacién, 4) Seleccién de microorganismos: bien sean de ori gen natural 0 modificados genéticamente. 2) Seleccién de materias primas (clasificacién, pre- tratamiento, almacenamiento) 3) Equipos de transformacién, 4) Separacion y recuperacién de productos (downstream processing) 5) Formulacién de productos. Un objetivo frecuente es obtener productos meta bolicos utiles a partir de materiales biolégicos. En los, procesos de fermentacién, los aspectos clave son la regulacién y optimizaci6n de los microorganismos y los, procesos biolégicos. Algunos métodos de recuperacisn de los productos son comunes a los empleados en los, procesos quimicos (separaci6n, desecacidn, etc.), pero adaptados a los materiales biolégicos mds labiles, junto @ algunas operaciones especificas. El desarrollo de la industria biotecnolégica en campos relacionados con el aprovechamiento de los recursos bié- ticos y en los sectores de salud, alimentacion, medio- ambiente y educacién, requiere del desarrollo de conoci- mientos que abarquen todos estos aspectos. E! objetivo es formar profesionales que, con sentido critico, apliquen {os principios y métodos de la Ingenieria de Biopracesos (0 Ingenieria Bioquimica) para el aprovechamiento racio- nal € integral de los recursos bi6ticos en la produccién de bienes y servicios que contribuyan a mejorar el nivel de vida de la sociedad. Todo ello se debe apoyar en los conocimientos basicos de biologia, fisica, quimica, mate. méticas y de las ciencias de la ingenieria y del disefio, 41.1.2. Consideraciones histéricas Los procesos biotecnolégicos tradicionales de interés han supuesto la utilizacién comercial ¢ industrial de fos microorganismos para la obtencién de productos quimi- Cos, antibidticos, y otras compuestos farmacéuticos y ali- 41. Andlsis de oéiulas 2. Seleccida y cutive 3. CUTtN en Taboratorio solide de celulas = ' 5. Produccién plant 4. Evaluacién de | Seavert 5. Produecién planta valuacién de las ic aio ra aust iloto condiciones y factores de ah operacién 7. Recuperacion de ‘productos ees waquetado y venta Figura 4.2. Etapas generales en la obtencion de productos biotecnolégicos.Tabla 4.4. Breve descripcidn histéica de algunas hites en la intraduccion de procesos biotecnolégicos. Preparacin de pan con levadura Fermentacin de zumos para la produccn de bebidas alcohdicas| Prducién de cervere (Oriente Medio) |_ Faria de papel (cin) ja | Sonocimint dea formacin de vnagre apart de a ermentacn de mos Perio pretistireo (antes dl afo 3000 a. G) Perio prehistérica {antes dl afio 3000 a. G) Petiodo prenistirica {antes del afo 3000 aC.) ‘nies del 300 a | Siglo td. c. Produecén de eores do vi tana) Después del 1190 ©. ecient arin de sts en Francia Después del 1650 dC. |_Deseurinionto de as ponies fermertaties de sieved “aie Dsscrocn dea femmonacin do cio cto por Pasteur 1867 | Prodiccén oe dio icten por miroarganismas a 1881 | ime ae | Final de siglo XX |_Prera depuradra de aguas urvaras i “Riana dni 1916 { Proceso paral roduccn de butanl yaceoa, yaa ceo 7 i9isn916 Produceén de did rico en un proceso de snare ms Desde aprox. 1920 "Proezndepeicna __ 1988 | Producién de vtamina 8, Z i Desde prox. 1949 | 1953 Producién de eid gutamica Después de 1957 | Manip namic el ater gebico a 870 : 20002001 Secuenciaciin del genoma humano ‘mentarios. En la Tabla 4.4 adjunta se recogen una serie de hitos en fa evalucion del descubrimiento y la mejora de conocimientos o de procesos que han tenido una re- Percusion muy importante. Con este enfoque se mues- tran las posibilidades de mejora sobre los productos tra- icionaies, al tiempo que se abre el paso al desarrollo de nuevos productos. ASPECTOS DE INTERES EN INGENIERIA DE BIOPROCESOS Se recogen aqut algunos aspectos ilustrativos de cono- cimientos que resultan importantes para la mejora o el desarrollo de pracesos biotecnoldgicas. 1.2. + Diagramas de proceso Sirven para describir un proceso de produccién. Los diagramas de proceso estén conformados por los equi pos necesarios, junto con las lineas de corriente de en- trada y de salida de los equipos; esto es, los flujos de materiales de unos equipos a otros. Pueden tener distin: to nivel de complejidad. segtin el abjeto de la descripcién, y las personas a quienes van dirigidos. + Los procesos de transformaci6n Denominaremos A al reactivo 0 sustrato, Fa la enzima, y Xa los microorganismos que participan en un biopro- eso. Asi podemos detinir diversos tipos de transforma. clones:ASP Reaccién de A par dar P Por emo, una htt A> ——Reaccién catalica de A para dar P, mediante fa enaima E 4“ Pex Reacién autocataitica caractrsica de ‘microorgaismes. + Cinética de los procesos et conoeimiento de la velocidad (cinética) con ta que se (> realizan las transformaciones bioldgicas es fundamental para saber el tiempo que hay que dejar actuar al proceso: (en sistemas discontinuos), o el volumen en el que debe ¢ procesarse un cierto caudal (en continuo). La cinética [> Suele notarse, por ejemplo para la especie A, como los moles de A transformados por m? y segundo. iol A Las unidades pueden indicarse también usando masa (> (kg) en lugar de moles, 0 substituyendo el volumen por la masa de catalizador 0 su superficie. La cinética de reac cién en ocasiones se mantiene constante, otras es fun: {” cién de las concentraciones de las especies presentes, ‘con frecuencia de la misma especie A, ¢,, por ejemplo de _ orden 1, r5=-k-c4 0 de tipo Michaelis Menten o Monod Fy npnact Ne betas, fs ots de ts rooesos pe eecg biolégicos pueden simplificarse frecuentemente aproxi- méndolas a cinéticas de orden 4 u orden O, en particular eg tae seesostndisidaVortitiswcne caer > facionss detominadn sono depande dail core puesto de interés A se forma [+], o desaparece [-] como rece ee hs La cnsleg cise deeds en incr hem ene iabonha ncue dase eect et es iD to indupal soe dedice poods carter unis ae presencia do rapuremseo 8 le modfaasén 8 signa pees 5° rot led, lata aenstomacion dott, hay Fae sla cies erat fue be tclotenoes er oe eta ‘Sr cads puta do tamentacor Por lela ie oak ian queden sedmentades por aoa geveded en Is pats Me cal annehioun antec Niger aes Pe i fancied pe tl AS termentadar sino nay e835, trmpoce hab transfor +4 macién microbiana por lo que la velocidad en ese punto ‘2 serla cero. En este caso la velocidad total (y a partir de po so ella la media) se obtiene como la suma de las velocida- des (Er,,) en los distintos puntos del reactor. + Suministro de 0, desde la fase gas a la fase liquida en un fermentador Se realiza a través de un transporte de materia (de 0.) entre [as dos fases. Suele suponer una limitacién im portante para trabajar con fermentadores en condiciones aerobias. Si se necesita aportar 100 g/L de glucosa en el fermentador, no hay problema dada su alta solubilided, pero la solubilidad del 0, (desde el aire) en el agua es del orden de [0,}* = 0,02 @/L. Ast, los microorganismos podrfan consumir estos 0,01 g de O en menos de un minuto, mientras que, sin embargo, les queda muchisima glucosa por consumir. Al aumentar la temperatura el pro- blema se complica, pues puede acelerarse la velocidad de consumo de Qz, al tiempo que st solubilidad en el agua se reduce. En los afos cuarenta, la transferencia de 0, supuso uno de los problemas clave en los estu- dios para comenzar el desarrollo de la disciplina conoci- da como Ingenierfa Bioquimica. Este problema de trans- porte de materia entre dos fases se produce también en otras situaciones, por ejemplo al disolver solidos. + Transmisi6n de energia (calor) Los procesos biol6gicos suelen ser exotérmicos, generan calor. Para mantener un bioproveso a 25 °C tendremos frecuentemente que entfriar el sistema, lo cual no es tan facil, ni siquiera a nivel de laboratorio cuando hablamos de unos 2 0 3 L. Resulta més complejo conforme se ‘aumenta el volumen, y el drea de intercambio con el ex- terior por unidad de volumen (generador de calor) se re- duce. Por ejemplo, es una limitacién fundamental en ta produccién de levadure de pan. Puede llegar a ser dificil el funcionamiento de algunos procesos en condiciones rentables, por las dificultades de eliminr calor. No deben olvidarse los problemas de la puesta en marcha. + Condiciones de mezcla Se debe prover el grado de mezcla mas adecuado en los bioprocesos para suministrar a los biocatalizadores el entomno adecuado para la produccién en condiciones rentables. Se puede requerir también para disolver ma teriales o suministrar nutrientes, para suspender particu- las, 0 para optimizar cada proceso en particular. No se precisa necesariamente que el sistema sea totalmente homogéneo; dado el coste que ello puede implicar. Ade- mas hay procesos que son mas eficaces si no hay mez- cla completa,+ Transporte de fluidos 0 sélidos En el transporte de fluidos tenemos que considerar el trans- Porte de cantidad de movimiento my (cuya conservacién, si Tho hay fuerzas externas, es uno de los cinco principios fis cos basicos}. Para iniciar el movimiento y superar después las fuerzas de friccién, debemios aportar fuerzas exteriores. + Esteriliza in Es una reaccién para pasar de biomasa viva a biomasa muerta (X, > X,). Constituye una operacién bésica pre- via para la produccién mediante microorganismos indivi- duales deseados vs. indeseados, o en otras aplicaciones la expediciin de productos. + Sistemas de separacin Frecuentemente se requiere separar los componentes deseados de los indeseados. Se emplean asf por filtra- idn 0 centrifugacién (los sdlidos y los Iiquidos adquieren distinta cantidad de movimiento), operaciones de sepa- racién de membranas, 0 separaciones en columna, apro- vechando Ia diferente retencién debido a interacciones fisicas 0 quimicas, y de difusién de componentes, + Sistemas de contro ‘Se requiere un sistema de control para mantener el proceso de produccion industrial en las condiciones deseadas. Pue- den diferenciarse distintas escalas 0 jerarquias; desde el control directo, a través de controladores donde se colocan distintos tipos de sistemas de actuacién, valvulas, bombas, etc., usando diferentes ajustes en funcién de las necesi- daces de control {control proporcional, integral.), hasta el control de maxima Jerarquia y, en forma centralizada, inclu yendo los sistemas de emergencia. * Preparacion, almacenamiento y empaquetado En raras ocasiones se hace hincapié en estas operaciones, que suelen sefialarse como de Ingenieria o disefio de pro- ducto, Debe considerarse algo tan simple como que mu- ‘chos productos se venden Unicamente cuando estan “bien” empaquetados. Los profesionales de Ia industria se lamen- tan con frecuencia de que en la formacién académica no se dé mas peso a la preparacién y presentacién del producto, * Balance econémico y temas legales En el diseno de todo bioproceso debe considerarse la rentabilidad como un criterio basico. Ademés, todos los procesos, desde la implantacion de la empresa y la fabri- cacién hasta la comercializacién estén sujetos a la nor- mativa legal, a importantes interacciones can la sociedad y, cada vez mas, a consideraciones de sostenibilidad. 1.3. LOS DIAGRAMAS DE BLOQUES Y DE FLUJO 1.3.1, Elementos constitutivos de diagramas de flujo Existen diversos niveles de descripcién de diagramas, al- gunos con diferente interpretaciGn segtin textos: + Diagrama de bloques (son los més bésicos), y se Ingican las operaciones que se van usando. + Diagrama de flujo; se indican las corrientes princi- pales con operaciones y elementos basicos. + Diagrama detallado 0 completo: presentan mas especificaciones, con diferentes grados. + P&ID (Process and Instrumentation Diagram) es el documento fundamental en el desarrollo de la in- genierfa que incluye todas las caracteristicas del procesado. De forma general, dirfamos que en cada nivel de res- ponsabilidad en la empresa se trebaja con un tivo de diagrama: asf, el gerente con el diagrama de bicques, el técnico con un diagrama de flujo y el P&ID, los operarios en planta con uno de detalle de su zona... En la planta, los diagramas se dividen en grandes secciones, que a su vez se van subdividiendo y detallando. En planta también se tendra un diagrama de flujo de tuberias (piping), y un | Uniones Sepsraciones Bypass Pie Reciclo 4.2. Elementos constitutivos de un diagrama de fujo que cconectan los bloques. KRdiagrama de flujo eléctrico. Cuando se termina ia cons: ‘truccicn de la planta y se entrega funcionando, el operador recibe ademds, junto @ los cursos de formacién, el libro de ‘Operacién y Mantenimiento (O&M). Los elementos basicos de un diagrama son los blo- ‘ques (representados, por ejemplo, mediante rectangu- los), Estos se conectan mediante lineas de flujo que epresentan movimientos de materiales, incluyéndose puntos de unién y puntos de separacién (Figura 1.2), Para conocer las magnitudes en cada corriente pueden llevarse a cabo mediciones, o realizar balances de mate- tia y de energia. Estos balances se pueden apiicar a los bloques, a los puntos indicados 0 a algtin conjunto de ele- mentos constitutivos. Los balances sirven para completar el diagrama de flujo. Por ejemplo, aplicado al siguiente logue, conociendo las cantidades de leche y queso se puede determinar la masa del residuo (suero). 20 ke de leche : Li. 2 kg ae queso 18 4g de resicuo Para completar los diagramas hay que conocer ade- mas la estequiometria de las reacciones biolégicas. Por ejemplo, para saber cudntos kg de acide Iéctico se po drian obtener por fermentacién de 4 kg de residuo con lactosa. Para procesos descontinuos, debe recogerse la planificacién temporal de las operaciones. 1.3.2. Las lineas de produccién y de residuos En un diagrama simple de bloques pueden diferenciarse dos lineas de flujo: (1) la de produccién que conduce des- de las materias primas hasta la obtencién de producto, liberandose de materiales no utiles; y (2) la de residuos, > que recoge y procesa los materiales que parecen incitles {4 Figura 2.1). [e ___ Las materias primas en muchos bioprocesos pueden |) tener un coste considerable, hasta del 50% del coste total, A\ por lo que podemos tener un gran interés en reducir su fe coste en algun porcentaje. Este es el motivo de que mu iA ‘chos procesos fermentativos utilicen como materia prima los residuos de otras industrias; por ejemplo, las fébricas de antibiéticos pueden utilizar residuos de la industria azucarera. En otros procesos, con productos de alto valor ‘ahadido, la materia prima representa, por el contratio, un porcentaje muy bajo, lo que hace que se hayan utilizado incluso materiales puros 0 especialmente preparados. Los residuos de un bioproceso se pueden obtener como la diferencia entre la masa que entra y la que se japrovecha. Puede tratarse de materiales que quizé sean valiosos, pero a los que no se les ha encontrado atin un valor econémico. Parece, no obstante, ldgico a priori consi derar que es deseable tener biopracesos con una la linea de produccién de gran capacidad, y que sea pequefia la linea de los residuos que se genere. Conviene mencionar Ia dilucién en la que se encuen- tran las células y productos en muchas fermentaciones. La concentracién de células que hay en un bioproceso puede ser aproximadamente de 0,1% (es dificil que ile gue al 1%). Esto significa que, de cada 100 kg de cultivo, 0,4 kg son células y 99,9 kg son fase acuosa. Es decir, en la produccién de biomasa tendriamos que eliminar 999 kg de fase acuosa, que puede constituir un residuo, para obtener al final 1 kg de producto. Resultan, por ello, muy importantes las operaciones de eliminacién de agua (fase acuosa) como: + Sedimentacién, aprovechando la fuerza de gravedd. + Centrifugacién, mediante Ia fuerza centrifuga. + Evaporacién: se hace en fase Ifquida (operacion de separacién de agua con calor). + Filtracién (a presién 0 a vacio) + Secado: operacién donde se transfiere materia (agua) desde un s6lido a una fase gas. Suele par- tirse de una concentracién moderada de agua; por ejemplo, menor del 70%. El coste de separacién de 4 kg de agua es diferente para cada operacién. Habituaimente cuestan menos las Que se aplican cuando el porcentaje de agua es mayor. Podemos dar algune estimacién, como que eliminar 1 KE de agua, en el secado, puede costar unos 3 céntimos de €; en la evaporacién, aproximadamente 1 céntimo de €; en la filtracién, algo menos de 0,04€, y para la centrifu- gacién, algunas milésimas de €, siendo la sedimentacion la més barata. Si eliminasemos los 999 kg de fase acuo- sa por secado, podtia llegar a costar unos 30 €/kg de producto. Habitualmente podemos disponer de distintas tecnologias para obtener un producto, y una de las acti- vidades mas diffcil en el disefio es seleccionar, en cada intervalo de concentracién, cual de ellas es la mas ade- cuada bajo los puntos de vista econémico y operativo, yevaluarla de forma continua al desarrollarse la tecnologia y la competencia 1.3.3. El tratamiento de residuos Debido a la prevalencia de materia orgénica, habitual mente biodegradable, en los residuos de los procesos biotecnol6gicos, el tratamiento biologico de los residuos constituye un bioproceso al que debernos prestar aten. cidn en este disciplina. Debemos recordar también que el proceso de produccion debe considerar globalmente todas las lineas, y que la actuacién sobre los residuos es tuna parte integral del propio proceso. Haremos un breve comentario segin la fase en que se hallen. Sélido. Si son solidos asimilables a residuos solidos lurbanos (RSU), suelen llevarse a un vertedero municipal, con el coste que represente, por ejemplo, 20 €/m* ade- mds del transporte. Si no son RSU, sino residuos t6xicos y peligrosos (RTP), el tratamiento sera mas costoso, por ejemplo, vertedero controlado o incineracion. El respon- sable de los residuos es la empresa generadora hasta ue obtiene un certificado de que se ha deshecho ade cuadamente de ellos. Liquido, La materia orgénica en fase acuosa, habitual mente biodegradable, suele tratarse mediante un pro- eso biol6gica, andlogo al que se produce en el medio ambiente; por ejemplo en rfos, pero intensificado, lo que requiere un mayor coste energético. Residuos en fase gas. Con frecuencia son compues- tos orgénicos volatiles (COV). Séio se tratan en algunas situaciones espectticas; por ejemplo, oxiddndolos (térmi- ca 0 catalfticamente), 0 reteniéndolos en un soporte. El tratamiento biolégico es también una alternativa intere- sante, una vez que el residuo se ha absorbido en la fase acuosa, 0 simulténeamente a la absorcién en un proceso {por ejemplo, en columna). El conocimiento de la concentracion y la biodegradabi- lidad de la materia orgénica en un residuo complejo es la informacién basica inicial para pensar en el tratamiento biol6gico de residuos. Con frecuencia no se puede abordar nl plantear un andlisis qutmico pertectamente definido de cada uno de los componentes (determinar cuantos gra mos hay de glucosa, de fructosa, etc.) en una fase tan compleja, en ia que puede haber més de 100 compuestos diferentes. Por ello, pareceria conveniente indicar global mente toda la materia organica (por ejemplo, 4g materia ‘orgginica total/U} Dado el impacto de la diferente composicién quimica fen su biodegradacién, e! método habitual de expresar la materia organica total se hace indicando cuéntos gramos de 0, s@ necesitan para oxidarla, en 1. m? de disolucién. Esa oxidacién de la materia orgénica puede ser quimica, 100 (demanda quimica de oxigeno), habitualmente usan- 40 dicromato como oxidante aunque hay normas pare hacerlo también con permangenato. La materia orgéni: ca también puede medirse por el 0, que necesitan los rmicroorganismos mezciados para degradaria, lo que se denomina DBO (demanda bioldgica de oxigeno). En este caso, el pardmetro que mds se utiliza es Ia DBO, (el ox: geno que se necesita durante un perfodo de 5 dias, ha bituaimente a 20 °C). Estas definiciones se utilizan tan- to on tratamiento serobio en que se genera CO, + H,0 como en tratamiento anaerobio en que se genera CH, y CO, (unto con hidrdgeno, derivados de azufre, etc.) or motivos diferentes, para tener idea de la cantidad de biomasa celular, puede interesar conocer la materia que hay en fase solida, como slides volatiles (fitrando, secando a 103 °C, e incinerando a 550 °C). Otra cues: LiGn de interés futuro es el impacto ambiental de fas emi- jones gaseosas con posible efecto invernadero. Puede pensarse, por ejemplo, en la generacién de metana en vertederos, la combustidn de biogas, la formacion de NO, en el tratamiento biol6gico de aguas, 0 la produccion de CO, en fermentaciones alcohdlicas. Hay que recordar que los grandes generadores de CO,, generaimente, de los seotores eléctrico 0 cementero, deben conseguir autor zaci6n de fa Administraci6n, para lo que pueden precisar comorar derechos de emisién de CO,, 1.4, DIVERSIDAD DE DIFICULTADES Y SOLUCIONES 1.4.1. Escala de analisis El andlisis de las transformaciones, o cambios de ma- teriales, se realiza a partir de principios fisicos basicos generales, aunque la metodologfa se hace especifica en los diferentes niveles. Ast, el andiisis cldsico de as- tronomfa se puede realizar con iguales ecuaciones que 1 flujo en un rfo. Uno de los aspectos que define una disciplina es la escala o dimension en que se anali- zan los fendmenos. En la Tabla 4.2 se sefialan algu- nos érdenes de magnitud en que se realizan, en forma indicativa, los andlisis que llevamos a cabo en esta disciplina. También pueden servir para dar érdenes de magnitud en disefio, u observar cémo varian los dlistin- tos parémetros.Escala de longitudes ‘tua de couras de destin Tabla 1.2, Contentualizacion de los érdenes de magnitud habituales en que se estudian los fernimenos en bioprocesos. © Escala de tiempos |, lame recvent de anus gins y columns Diémetro de ia placa Pei ha de este libro Longitude ia escaa dela mezci iquido) Tamafo de bacteias Gen -plésmidos ibosomas Espesor dela membrana celular Tiempo de mezcla en gases | Tempo de mezcia en liquidos 10-100 Tiempo de dupcnin de becerias [ato | fanidodetittol a0 | | [tiem de cuzin de ies, tongs nasa) | —_2x10® ||_Tiempo de fermentacin (10 ccs) Ft | jee | Tiempo de auptieacén ce herb (masa) “Tiempo de resienciatanques, ‘Tiempo de duplicaciin del cordo (masa) ‘Ancho dela halice del ADN Pasta on marcha detretamient bikgico 107 Didmetio de diversas protinas Realizacin dl tuo grad (6 aos) Péptidos,inidos Desde descubrimianto estructura ADN ‘Tamafo de ones sales inorgnicas Escala de velocidadies Filo dogs en tuto ‘Tiempo desde hombre del Sidrn sca de enerias Combustion de cal | (cada te desde avin) Seal = ——_|_ Combustin de gluosa Fujo de lquido en tubo Pp Le | corredor mato de maratén) |__Evaporacién de agua | Nelda ascenso bubs 025 | || Energise eatin, contol eso Velocidad en echo fuiizado 10% _| | ‘anterenc de deste MOH al oigero | | Secimentacgn de “renas” _— 5x10" Congelacin de agua ‘Movimiento de ciliados 10% | _ Fly en colurna de adsorcin ‘Sedimentacén iéculosbiolgicas Coeficiente de transferenca de materia (k) ‘Novimiento de ametas Seimentacifn de levadura Flujo en membranas (96 Uh) Crecimienio de bacteras en placa | Disolucién nitro aménico Trturacion cristales organicos de 1 mm adi mm Sombeo lento de aguarges 10 m Mezela iquidos/segundo1.4.2, Algunas formas de procesos de transformacién biolégica Comviene sefialar en esta presentacién algunas de las for mas de procesos que se han ido desarrollando en la obter- clén de determinados productos y que muestran la diversi- dad al mismo tiempo que las preocupaciones habituales en bioprocesos. Se sefialan algunos ejemplos de biorreactores usados frecuentemente: Es el sistema mas utilizado en la préctica. Permite mante- ner la biomasa en suspensién, suministrandole nutrientes, inciuyendo, por ejemplo, oxigeno. Para ajustar la composi cidn a las necesidades de los microorganismos en cada momento, suele ser mejor utilizar un sistema discontinuo, con adicién de algunos nutrientes de forma intermitente. En algunos procesos de produccién a gran escala, el tan- que agitado se uttiiza con flujo continuo, para mantener el sistema en condiciones de operacién constantes y aumen- tar la produstividad. En ocasiones puede ser interesante pasar de un solo tanque agitado a varios, debido a la mayor facilidad de eliminacién de calor, o porque resulte mas facil la intro- duscién de oxigeno. Este es el caso de la produccién de levaduras donde existe el problema de eliminar calor € Introducir 0, en el sistema. Si lo hacemos en un solo tenque, puede resultar quizé imposible, por lo que puede dividirse en un nimero N de tanques en serie como se indica en la Figura 1.3. En las conexiones entre tanque y tanque también se puede eliminar calor, e incluso aitear. Suelen corresponder con procesos tradicionales que se han desarroltado sin equipos de mezola mecénicos, y de cuyo producto no se desea cambiar las propledades mod ficando el proceso. Es el caso, en particular, de fermenta- ciones para la produccién de bebidas alcohdlicas, en las que fa formacicn de CO, acta como propio elemento de agitacién (agitacién autoinducida). Un ejemplo bien cono cido es la produccién de cerveza en tanques cilindrocéni- cos (Figura 1.4), donde Ia levadura concentrada en la ba- se genera la mayorfa del CO2. En consecuencia a mayor altura del tanque se obtiene un valor de la potencia de agitacién més elevado. Ademds de esta agitacién e incluso si no se produce la evolucién de CO,, se puede producir movimiento dei fluido por conveccién libre cerca de la pared. Esto es, si el tanque lleva un encamisado de agua fria, el mosto cer cano a la pared tendré una temperatura inferior a la que hay en el centro del biorreactor. De esta forma, el fuido. cercano a la pared tiene mas densidad que en el centro y Por tanto se produce un movimiento del fluido. d) Sistemas con mi aglomerados organismos 4.1. Biopeliculas Los microorganismos se pueden ir fjando con el tiempo. a las superficies sélidas formando biopelfculas. La can- lidad de estos microorganismos puede ser importante I] Figura 4.3. Soluciones tecnolégicas para facitar procesos de transporte: paso de un tanque continuo @ varios en serie.Figura 1.4. Flujo en una columna de fermentacién de cerveza sin ay el tiempo de produesien. si se aumenta el area de soporte colocancdo relleno en luna columna. Asi, en la produccién de cido aeético en biocoiumna, se utilizan virutas de madera, quedando in- movilizadas en su superficie las bacterias acéticas. Por la parte superior se hace pasar la bebida alcohdlica (e! etanol, es decir, el vino), airedndose (Figura 1.5). Por ia arte inferior, se recoge acido acético. El etanol de la fase acuosa penetrara hasta cierta Gistancia en la biopelicula que forman las bacterias acé- ticas, Acetobacter (Figura 1.5.a). Las bacterias acéticas transforman el etanol en acido acético, EI 0, se agota pronto (solubilidad {0.]*=0,04 g/L); quizé haya condicio: guido Blopetioula @ ye { Nutdentes © Productos Figura 1.5. Comportamiento alrededor de biopeliculas (a) y procesu d Potenela tw) Oa 2 3 4 Tempo (alas) tacion exterior y evolucion de ta potencia de agitacién inducida con Nes aerobias sélo en la parte superticial de la blopeticula, incluso menos en la parte inferior de la cotumna: Un problema importante es que puede taponarse le columna de relleno durante ef flujo de la corriente na- Gia abajo, debido al crecimiento de ta biopelicula. Para evitarlo conviene tener una alta porosidad para facilitar 1 flujo, y ademas conviene regular que el arranque de las biopeliculas vaya siendo continuo, para lo que puede aumentarse e! caudal, recirculando el liquide que llega ai fondo después de la separacién. Por ejemplo, con ios datos de la Figura 1.5.b, si se introducen al proceso 500 Vala, el liquide baja despacio, pero recirculando 1.000 1.500 va i} 500 iva lo | 1.000 va 50074 fe transformacién con © (b), en una biocolumne,L/d aumenta el caudal a 1.500 L/d y se puede arrastrar la biopelfoula mejor. Este disefo tiene poca capacidad para introducir 0, y eliminar calor. 4.2, Fléculos En este caso, los microorganismos, en lugar de adherir- se a un sdlido, forman una agrupacion de células con otras particulas (precipitados, otros. microorganismos, residuos biolégicos, etc.). Este fléculo suele tener, por lo general, entre 100-4.000 yim (una bacteria puede medir entre 0,6-5 um), Este fldculo tiene ya unas caracteristicas de separe- cién mejores. Un microorganismo de 1 ym puede tardar ‘semanas en separarse en un equivo por sedimentacién; por el contrario, si se forman fléculos de unos centenares de micras, pueden separarse por gravedad con una velo- cidad préxima a 4 m/h. Por tanto, si queremos faciltar la separacién es muy positivo que se formen fléculos (0 biopeliculas sueltas, que se comportan de forma seme- jante en este caso). £1 inconveniente de que se formen biopeliculas o fléculos es que su interior puede quedar sin oxigeno, pudiendo resultar esa parte no active. La operacion en tanque agitado aerdbico es une al- temativa econémica para la produccién de vinagre (este sistema se denomina acetador Frings). Se introduce aire por la parte inferior, en forma de burbujas, usualmente aprovechando {a propia velocidad del agitador para su rotura y distribucién. Se coloca ademas una hélice de enfriamiento (serpentin) por cuyo interior pasa agua frfa, udiendo tenerse temperaturas como las de la Figura 1.6; de refrigeracién 10 y 22°C, y de alimento y producto 15 y 35°C, La capacidad de enfriamiento que se requiere pue- de hacer que el interior del tanque parezca simplemente un cambiador de calor. Bocteras Te=35% Tou 10%C Tae © 22°C Figura 4.6. Esquema de funcionamiento y operacién basica en una operacién con féculos. + Aiba, S.; Humphrey, A. E. y Millis, N. F. Biochemical Engineering: Academic Press: NY, 1973. + Atkinson, 8.; Mavituna, F. Biochemical Engineering and Biotechnology Handbook: Stockton Press: NY, 1991 + Jackson, A. T. Process Engineering in Biotechnology; Open University Press: Buckingham, 1990. + Lee, J. M. Biochemical Engineering; Prentice Hall, N.J., 1992. + Shuler, M. L.; Kargl, F, Bioprocess Engineering. Basic Concepts; Prentice Hall, NJ, 2002. + Subramanian, G. Bloseparation and Bioprocessing. A. Handbook, Volume Il: Processing, Quality and Characteriza tion, Economics Safety and Hygiene: Wiley-VCH:Weinheim, 1998. + Swartberg, H.G.; Rao M.A. Biotechnology and Food Process Engineering. Marcel Dekker, NY, 1990.CAPITULO 2 PROCESOS BIOTECNOLOGICOS 2.4. COMPETITIVIDAD DE PROCESOS Y PRODUCTOS BIOTECNOLOGICOS 2.4.4, Aspectos que representan ventajas de los sistemas biol6gicos 2.1.2, Factores importantes para su implementacién 2.4.3. Consideraciones sociales de la Biotecnologia LAS MATERIAS PRIMAS 2.2.4, Caracter 2. icas y usos 2.2.2. Tipos de sustratos 2.3. PROCESOS DE PRODUCCION CON CELULAS 2.3.4. Obtencién de productos de fermentacion en fase lquida 2.3.2, Productos de fermentacién en fase sélida 2.4, TRANSFORMACIONES INDUSTRIALES CON ENZIMAS 2.4.1. Hidrlisis de polisacéridos 2.4.2. Fabricacion de nuevos productos 2.4.3. Uso comercial directo 2.5, APROVECHAMIENTO DE MATERIALES BIOLOGICOS 2.5.1, Materiales de almacenamiento de hidratos de carbono 2.5.2. Materiales de construcci6n celular vegetal 2.5.3, Aprovechamiento de aceites 2.4.4, Aprovechamiento de proteinas residuales 2.5.5. Obtencién de bioplasticos 7a1. COMPETITIVIDAD DE PROCESOS Y PRODUCTOS BIOTECNOLOGICOS La existencia de procesos industriales de base biolégica para la obtencién de determinados productos es fruto de numerosos factores que incluyen esencialmente as- pectos econémicos, pero también aspectos legales y de ‘competencia con otros procesos de produccién. 1.4. Aspectos que representan ventajas de los sistemas bioldgicos 1) Los sistemas bioldgicos son procesos que se lle: van a cabo en condiciones de presisn (P) y tempe- ratura (T) parecidas a las ambientales y valores de pH generalmente préximos al neutro. Los equipos trabajaran en condiciones poco severas, y por tan- to los costes de operacion se verdn reducidos. En general es mds barato trabajar a temperaturas “altas” que “bajas”. También es més barato a pre- siones entre 5 y 40 atm que a 100 0 1.000 atm, condiciones en fas que suben mucho los coste: En forma esquemdtica es mas caro trabajar a va- cofo que a presidn, aunque hasta 0,1.0,2 atm resul- ta asequible. Al extremar las condiciones, el coste es més alto, multiplicandose de forma exponencial y llegando a hacerse inviable econémicamente. 2) La materia prima es de origen muy diverso, inch yendo los residuos de procesos agroalimentarios. 3) Se obtiene una gran diversidad de productos. 4) Hay reacciones que son Unicas, que sélo se pue- den obtener por via biol6gica. Carécter ambiental. Aunque se forman subpro- ductos 0 residuos que necesitan tratamiento, los productos residuales generados en transformacio- nes bioldgicas van a ser “mds biodegradables"; 25 decir, existen en el medio ambiente sistemas enzimaticos que los degradan. 5) 2.1.2. Factores importantes para su implementacion La implantaci6n de un proceso se produce tras una serie de etapas que pasan por numerosos estudios técnicos, econémicos, de previsiones de competencia y de riesgo, que pueden durar varios afios. Al final, slo un pequefio nimero de los procesos estudiados (en torno a uno de ‘cada 100) llega a la implementacion y produccion defi- nitiva. Algunos factores comunes a considerar en este aspecto son: 1) Econémicos. Rentabilidad, con cumplimiento de la normativa legal 2) Optimizacién de! proceso. Disposicién de los mi- oroorganismos seleccionados, mejora en la selec cidn de la materia prima, en los equipos de trans- formacién y separacién, en el mantenimiento, etc. es decir, ventaja en alguna de las etapas del pro- ceso. La mejora 0 innovacién deberd ser, ademas, actualizada de forma continua. Actuaciones politicas, ambientales y legales. Por ejemplo, la produccién de bioetanol a partir de gre- no de cereal est promocionada por la Administra- cldn y se desarrolla actualmente s6lo si existe ese apoyo. En ocasiones puede considerarse que es Ia forma de abrir paso a un tipo de procesos sosteni: bles y preparar la campetitividad para el futuro. 3 2.4.3. Consideraciones sociales de la Biotecnologia Conviene que diferenciemos diversos tipos de productos biotecnolégicos. Algunos productos podemos clasificar- los como tradicionales, estando actualmente sometidos @ procesos de mejora a partir del crecimiento de los, conocimientos cientificos, de los mecanismos y posibi- lidades de actuacién; es decir, se optimizan procesos tradicionales. Otros productos, menos importantes eco- némicamente en Ia actualidad, pero quizé con mayores perspectivas de desarrollo futuro, son los nuevos produe- tos que aparecen debido a avances biotecnolégicos con © sin base en modificaciones genéticas. Las consideraciones sociales debido a la aplicacién de la tecnologia del ADN recombinante dependen del sector en que se apliquen. Se admiten en el campo far- macéutico y de la salud, mientras que en el sector ali mentario el rechazo es mayor. En este sector, incluso las variaciones y las mejores en los procesos tradicionales se rechazan en acasiones frente a la mayor valoracién de la practica artesanal. En el campo medioambiental, tampoco hay aceptacién social. Asf, para la biodegrada- cién de productos de plantas de tratamiento de aguas de origen farmacéutica, diffcilmente biodegradables, la apli- cacién de tecnologia de ADN recombinante se considera muy arriesgada. Una clerta consideracién negativa afecta también al sector de la agricultura. Algunos aspectos que se sefialan en las discusiones sobre este tipo de productos son:+ Es importante que se haga hincapié en el produc to 0 en el proceso (por ejemplo: matz como produc- to frente al proceso de obtencién de! mismo). Se menciona que en EE. UU. se centran en el produc: to, mientras que en Europa se pone mucha aten: cién en el tipo de proceso. + Etiquetado. Es otro aspecto importante en el and: lisis; su forma resulta de consideraciones de bioé- tica, comerciales, + Resuita clave en la discusién la confianza y la fla- bilidad en la informacién difundida, Campos de preocupacién. Se han mencionado: alergias, transferencia de genes de organismos modificados genéticamente (OMG) a plantas sil- vestres, aspectos sociales/morales/éticos. Por ejemplo, el hecho de que las semillas se hacen estériles para impedir su multiplicacién en el am- biente natural es sefialado en ocasiones como una forma de obtener un mayor beneficio econémi- co haciéndolas inasequibles para el tercer mundo. En ocasiones se afiade al problema econémico en estos paises el que se vayan dejando de consu- mir sus productos agrarios en el primer mundo, al obtenerse mediante nuevos procesos en el labo- ratorio, + Consideraciones morales y religiosas, como el concepto de Ia no-naturalidad, o el de los dere- chos de los animales, al tiempo que aumenta el interés vegetariano, 2.2. LAS MATERIAS PRIMAS 2.2.1. Caraeteristicas y usos El medio de cultivo utilizado debe tener una serie de ca- racteristicas de acuerdo a los requerimientos nutriciona- les de los microorganismos, tales como: a) Proporcionar al microorganismo un ambiente fisi co-quimico adecuado. b) Contener los nutrientes adecuados para el micro: organismo, tanto para el crecimiento como para la produccién. ©) Cumplir una serie de requisitos de tipo econémico y t€cnico (compatibilidad con las instalaciones dis ponibles, etc.) Los sustratos son necesarios como soporte para el crecimiento de la biomasa, y para la sintesis de metabo- litos, entre otros aspectos. Se pueden clasiticar inicial- mente en dos tipos: a) Macronutrientes (det orden de 10? M): C, H, 0, N, PK, Mg, S. ) Micronutrientes (del orden de 10°* M). Algunas variables de interés en la seleccién de los Sustratos son: precio, disponibilidad (que no see esta ional), productividad, transporte y almacenamiento, di versificacién, flexibilidad, estabilidad y competencia entre otros. ‘Algunas tendencias actuales son las siguientes: + Para altos voldmenes de productos. Actualmente se utilizan cantidades grandes de azucares resi duales y almidones. A medio plazo parece muy in teresante la posibilidad de hidrdlisis de materia les lignocelul6sicos (maderas), sobre todo para producir bioenergia + Para bajos volumenes de productos pero de alto precio el impacto del coste de la materia prima es més bajo. Importan mas la calidad y la uniformi- dad de la materia prima. Se pueden llegar a util zat medios artificiales caros. 2.2.2. Tipos de sustratos Se presenta una clasificacién de las materias primas (feed stocks), incluyendo la dificultad de uso por los mi- croorganismos industriales mas usuales. No se incluyen aqui las materias primas alimentarias tradicionales. +4) Sacarosa: se obtiene a partir de cafia de aziicar 0 remolacha, para la produccién de etanol. 2) Melazas: son subproductos de la cristalizacién de la sacarosa (el contenida en sacarosa es de alrededor del 2%). Son baratos y contienen mu- chos nutrientes esenciales, Cabe mencionar como desventajas el diffcil almacenamiento y su poca estabilidad (variaciones de la materia). En oca: siones se necesita algtin tipo de pretratamiento para regular la concentracién de meteles. Asi, en la produccién de acide citrico con Aspergillus niger, se reduce la cantidad de Mn? hasta unos 3 mg/L mediante el uso de agentes que complejen 0 pre- oipiten el metal 3) Suero Iécteo o lactosuero: es la materia residual de la fabricacién de queso al separar ia grasa y las caseinas. La composicion tipica es = 4% de lactosa, = 0,6-1% de proteinas y = 0,5-0,8% de sales. El porcentaje de las proteinas en el lactosuero, puede variar si se desproteiniza, Sus ventajas son que es barato, tiene una alta 000 (es decir, tiene alto contenido en materia organica) y su aprovechamiento reduce la carga orgénica de vertide. Respecto a las incanvenientes, podemos encontranes con que muchos microorganismos ‘no asimitan la lactosa, y que es un medio inesta- ble y de composicién variable. 4) Aimidones (amilosa y amilopectina): estén presen- tes en muchos productos agratios: cebada, arroz, maiz, patata... Hay que hidrolizarios hasta llegar al monémero (glucosa). La glucosa puede aprove- charse por fermentacién, por ejemplo para obte- ner cerveza. En algunos casos, segdn el volumen y el precio de los productos, puede plantearse el problema de que las enzimas que se necesitan (en grandes cantidades) para la hidrétisis pueden resultar muy caras. Materiales lignoceluldsicos: estan considerados como una materia prima energética de futuro. Se ha estimado que se producen unas 5x10!9 kg/afio. Contienen sobre todo lignina, celulosa, hemicelu- Josa y pectina. Los tres uitimos son polisacaridos (grandes polimeros insolubles que no contienen N}. La lignina es un compuesto de tipo polifendti co, que constituye el 20-30% de la materia vegetal (es un material plastico diffeilmente degradable). Con dicali se extraen la lignina y la hemicelulosa, y con H,0 caliente 0 dcidos débiles se separan las pectinas. Lo que queda de residuo es la celulosa. Existen varias propuestas para romper su estruc: tura macromolecular y llevar a cabo la hidélisis, come calentar el material a 180 °C para que se rompa el polimero. Para su expansién hay linita- clones, en particular econémicas. Productos quimicos y residuos: hay una grandisi- ma variedad de compuestos que se utlizan como materia prima. El uso de residuos industriales es un aspecto de interés creciente, sustituyendo el consumo energético en su tratamiento por el re- ‘aprovechamiento; como es el caso de papeleras, mataderos, etc. 8) 2.3. PROCESOS DE PRODUCCION CON CELULAS La mayorfa de los procesos bajo consideracién estén ba- sados en microorganismos, alguno de ellos con miles de aos de uso. Los microorganismos més frecuentes son levaduras y bacterias, pero también se pueden utilizar otros cultivos celulares, incluyendo tejidos u drganos. Se indica en Ia Figura 2.1. un esquema de un hipotéti co proceso de produccién involucrando las diferentes ete as posibles. En la préctica, el proceso puede ser mucho més sencillo, porque no haya proceso de biorreaccién, © porque no se desee obtener un producto compuesto, sino sdlo células, 0 que el objeto no sea producir algin producto nuevo, sino separar componentes 0 destruir materia organica, 9 porque se trate de una transforma- cién con enzimas como catalizadores. Puede servir no obstante para ver las posibles etapas y para visualizar la presencia de una linea de residuos durante la produccién de un determinado producto. Se tratan, en este apartado, algunos procesos de fer- mentacién en fase liquida y fase s6lida, describiéndose en los siguientes el uso de enzimas y el aprovechamiento de materiales bioldgicos de forma compleja. Por supues- to, los procesos comerciales van cambiando y se van in- troduciendo nuevos desarrollos. También se incorporan algunos valores de produscién y costes, que, a pesar de que van cambiando bastante con el tiempo, son intere- santes para dar una idea de los érdenes de magnitud actuales. 2.3.1. Obtencion de productos de fermentacién en fase liquida Se realizaré una descripoién breve de algunos procesos de interés, para mostrar el tipo de operaciones precisas y algunos de los microorganismos mas usuales. En la fabricacién de cerveza, se prepara primeramente ta malta. Para ello, fos grenos de cebada se limpian, se so- meten a maceracidn (unes 2 dfas) y germinacién (unos 7 dias), se secan (a unos 80 °C), se separan fos gérmenes de las semilias y se mueten los granos, La malta contiene amilasas y proteasas, y al amasaria con agua aplicando per files de temperatura complejos, se solubilizan algunos de sus componentes, Por debajo de 50°C las [iglucanasas de- gradan productos gomosos, la proteolisis se produce a unos 50.60 °C, y la sacarificacion a 60-74 °C. Tras diversos lava- dos se hierve el mosto (para concentrar, esterlzar, coagular, inactivar enzimas, extraer productos aromas/antisépticos y caramelizar ligeramente). Se afiade también flor de Ipulo,