~ DY MY 61 F21AWviMICN A _ A METODOS CUA) REQUISITOS Repasar las estructuras de los 20 L-a aminodcidos (AA), que forman las proteinas y las caracteristicas de las proteinas. AMINOACIDOS Y PROTEINAS OBJETIVOS — dentificar por métodos colorimetritos os 20 L-a aminodcidos (AA), que forman las proteinas, basados en las reacciones de los grupos R 1 FUNDAMENTOS Por la estructura peptidica y la presencia de determinados grupos (grupos R), las proteinas pueden reaccionar con una variedad de agentes originindose productos analizada. 1 LLI ~voloreados. Estas reacciones son la base para la Ta determinaci6n cuantitativa y cualitativa de las proteinas, Por presentarse variaciones en Ja composicién de los aminoacidos de __Ias diferentes proteinas, se manifiestan diferentes colores y grados de intensidad para — una misma reaccién, intimamente relacionado con la naturaleza de la proteina Fundamentos quimicos de las pruebas. Prueba dela ninhidrina (Hidrato de tricetohidrindeno). Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre, Feascionaran con la ninhidrina. La positividad se manifiesta a por la aparicién de un color violéceo 0 amarillo, Debido a que las-proteinas y los=aminodcides, poseen esta caracteristica, la reaccién sirve para identificarlos. Algunas $0 'soluciones de amonio y mings, dan Ia coloracién caracteristica, aparentemente ‘dehido a una oxidacién y reducci6n intramolecular de la ninhidrina en presencia de amoniaco. Los aminodcidos porina e hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino (-NH-), rojo que pasa ripidamente a amarillo. La reacci6n se muestra en la figura 1 dan un‘colorFigura 2 Reaccién de la prueba de Biuret OH OH CO——NH, ——Cu —NHz ——CO H HN Ve CO—NH,—K —2HN—oc a OH 1.1.3 Prueba de coagulacién: Es una prueba para identificar: albiminas, globulinas, glutelinas y prolaminas. La positividad se manifiesta por la formacién de un coagulo. No se conoce exactamente el mecanismo de reaccién, se cree que ocurre cierta deshidratacién de la molécula __proteica. H.. : a de Sulfato de amonio: CA Zita Prue Las proteinas, como otros coloide son precipitadas por soluciones concentradas de sales ee de amoniofNaCl-(NH4);SO4y NaSO; ]. Aparentemente Ta precipitaciOn se debe a Ta” neutralizacién y deshidratacién de la molécula, seguida de agregacién y precipitacion. _1.1.5_____ Prueba xantoprotica: Es una reaccién que reconoce los aminodcidos que poseen el gruporbencénico (tirosina, fenilalanina, tript6fano). Las proteinas que tienen en su composicién estos aminodcidos también darén la reaccién. La positividad se reconoce-por la aparicién de un color amarillo o verde debido a la formacién-de nitrocompuestos: LL6 Buna prueba para identificar aminodtidos azufrados y las‘proteinas que los contiene, se reconocen por la formacién de una coloracién negra o gris. La figura siguiente muestra dicha reaccién. ——____—— sp corner2.2 Métodos Procedimient? soo ca _ 10 4 Prueba fin un tubo de ensay 221, P. Ninhidrinat (Hidrato de. tricetohidrindeno meg Reactivo ninhidrina - : Calentar hasta ebullicién_por 1 min. __[Deje enfriar y observe Sustancia problema ancia pro iaOH al 10% ee Mezclar e ir afiadiendo gota a gota el sulfato Gate a 0.5 % (CuSO,), agitando después de cada adici cee Ja aparicién de un color violeta, azul o amarillo. El col Violeta indica la reaccién positiva, 223. P. Coagulacién _{Sustancia problema __ | Acido acético al. 30 % (CH3COOH} ‘Solucién loruro de sodio (NaCl) Mezclar bien y calentar a la llama por 1 min, En el caso : , Il de la_albimina “© Ta globulina “se presenta un ay enturbamiento mas 0 menos intenso que persiste al gatriamiento, también puede observarse * pequefios | rumos en las paredes del tubo, Observe el tubo sobre un| erage fondo oscuro, 224, aa P. Sulfato — de| Sustancia problema ~{amonio (NH;50,) ttt atte oh Bl Solucién de Sulfato de amonio al 30 Mezclar bien % =Imi | Dejar en reposo durante 10 min. i fe Precipitado, Centrifugar a 300 ae ay pmervar La reacién postivatss manifiesta pot 1, de un precipitado, dependien irectament de la concentracién de albimina presente ea iene P. Xanti Sustancia problema ¥ Se cen es Mezclar bien ={_0.5 mi Calentar ala lama y observar bo Hb bhyy yp a— G) Violeta o amarillo claro (Rojo (Q incolora No es proteina ni proteina, polipéptide © amarillo fuerte aminoacido aminodcido Hidroxiprolina © prolina @) Violeta Proteinas y polipéptidos Co © Incoloro Otros aminoacidos ) Amarillo, naranja o verde ‘Tirosina, fenilalanina (9 Incoloro otros aminodcidos