Catedira de Bacteriologia EAP. de Microbioto y Parasitologia-UNT | PREPARACION DE COLORANTES Y REACTIVOS 1. INTRODUCCION . oBeTIVo ‘* Preparar los colorantes y reactivos empleados en las principales técnicas de identificacién morfoldgica en bacteriologia. © Preparar los reactivos més comunes empleados en la desinfeccién de reas y material de trabajo en bacteriologia. II, MATERIALES Y PROCEDIMIENTO a, COLORANTES “Cristal Violeta - Oxalato de amonio de Hucker: Solucién A: > Cristal violeta 28 > Etanol 95% 20 mL Solucién B: Oxalatodeamonio 08g > Agua destilada 80 mL Preparar ambas soluciones por separado. Mezclar las dos soluciones y filtrar. + Lugo! débil (Gram) lodo (quimicamente puro) 1g loduro de potasio 2e Agua destilada 300 mL Disolver el KI (Yoduro de potasio) en pequefia cantidad de agua destilada, luego afadir y disolver completamente el Yodo. Agregar el resto de agua destilada.(os i tera de Ba ela Marissa Rodriguez Haro_~ Cates “Alcohol Acetona: 20 mL. » Acetona > Btanol 95% 80 mL Mezclar ‘+ Safranina (para coloracién Gram) > Safranina 258 > Alcohol etilico 95% 10 mL >Aguadestilada 100 mL Mezclar, disolvery filtrar. ‘+ Safranina (para coloracién de esporas) > Safranina 5,08 > Agua destilada 100 mL Mezclar, disolver y filtrar. “© Verde de malaquita: > Verde de malaquita 5g > Agua destilada 100 mt Mezclar, disolver y filtrar, * Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen Solucién A: > Fucsina basica 03g > Etanol 95% t0mt Mezclar, disolvery fitrar, Solucién B: * Fenol (Ac. Fénico o Ac, Carbélico) 5g > Agua destilada 95 mt. m(Dra. teela Marissa Rodriguer Haro - Cateda de Bacteriologia EAP. de Microbiologia y Parasitologia - UNT | Mezclar ambas soluciones por separado, Mezclar las dos soluciones (solucién B en solucién A), dejar en reposo 24 horas y filtrar. * Alcohol-dcido (alcohol clorhidrico) + Acido clorhidrico concentrado = 3 mL > Etanol 95% 97 mL Medir en un recipiente la cantidad necesaria de etanol y luego agregar lentamente el HCI concentrado por las paredes del recipiente por ser muy reactivo y mezclar suavemente, * Colorante Maneval > Fenol (Sol. Acuosa 5%) 30mL > Ac. acético(Sol. Acuosa 20%) 40 mL. > Cloruro férrico (Sol. Acuosa 30%) 4 mL > Fucsina acida(Sol. Acuosa 1%) 2mL Mezclar y disolver. * Rojo de Congo + Rojo de Congo 1g + Agua destilada 100 mL. Mezclar y disolver “ Colorante de Nigrosina o tinta china > Nigrosina 5e > Formalina OS mt > Agua destilada 200m Disolver la nigrosina en H20 destilada caliente, luego enfriar y agregar la formalina. + Solucién A: Solucién Argéntica -Amoniaco de Fontana: % Nitrato de plata 5B > Solucién amoniaco al 10% 10 mL > Agua destilada 100 mLtilada y luego agrey sere agnos on agus cestode Y INCE SEEDY gota yg jan de NH3 hasta ro hasta que se fogre una oo que el preciptado s© redisueWva, Con, ap soluci tenue opalescencia. agregand Bb: Solucién Mordiente de F 5B ‘ontana 4 Solucién > Acido tanico > Fenol o dcido fénico 1g > Agua destilada 100 mL p Mezclar y disolver * Solucién C: Solucién Fijadora de Fontana > Acido acético glacial Lm > Formol al 40% 2mL 100 mL > Agua destilada Mezclar y disolver ‘ Tintura de iodo: Solucién saturada de loduro de potasio en agua destilada, luego agregar el lodo. Alcohol iodado: > Mezclar 3 partes de alcohol de 962 con 1 parte de agua destilada y se afiade la tintura de iodo hasta que éste tome un color pardo oscuro. ‘+ Mezcla Sulfocrémica > Dicromato de potasio 100g > Acido sulfirico 100 mL > Agua destilada 100 mL * Solucién para el lavado de laminas > Dicromato de potasio 100g > Acido sulfirico 252 mL > Agua destilada 300 mL[pare Matisse Rodriguez Haro - Cétedra de Bacteriologia EAD. de Microbiologia y Parasitologia- UNT | Disolver el dicromato de potasio en agua destilada completamente si es posible con ayuda de calor. Afiadir lentamente el dcido sulfirico por las paredes del recipiente con el fin de evitar una reaccién exotérmica entre el agua y el dcido, si fuera posible colocar el vaso de precipitacién donde se est preparando la mezcla en hielo. Solucién Salina Fisiolégica: > Clorure de sodio Ogsg Agua destilada 100 mL Mezclar y disolver. b. PROCEDIMIENTO * Preparar los colorantes y reactivos segin la cantidad indicada al momento de la practica IV. RESULTADOS Vv. COMENTARIO Vi. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS