CAPITULO 9 Oxidaciones biolédgicas Bioenergética http://booksmedicos.blogspot.com Las actividades de los seres vivientes requie- ren continuo aporte de energfa. La sintesis de componentes celulares, e! transporte de sustan- cias a través de membranas contra gradientes de concentraci6n, ]a contraccién muscular, el movi- miento de cilias y flagelos, etc., s6to pueden Ile- varse a cabo si se suministra la energfa necesaria En Gltima instancia, la energia para los pro- cesos biolégicos procede del sol. La energia luminica es captada por pigmentos existentes en los vegetales y en algunos microorganismos y transformada, mediante la fotosintesis, en otras formas de energfa, principalmente quimica, uti- lizable para ta sintesis de sus propios componen- tes (hidratos de carbono, lipides, protefnas, etc.), a partir de sustancias muy simples del medio (CO,, HO. Nz, NH, NO,). Estos organismos son itamados fordtrofos. El resto de los seres vivos necesita incorporar moléculas complejas ya elaboradas. Estos orga- nismos se denominan quimiétrofos, pues utilizan la energia quimica contenida en esas moléculas, Por ejemplo, la glucosa es sintetizada por or. ganismos fotdtrofos a partic de CO; y H,0. La reaccién global de la fotosintesis puede expre- sarse mediante la ecuacién 6 moles CO, + 6 moles HO + 2.870 kI > > 1 mo) C, H,; O, + 6 moles O. E] diéxido de carbono y el agua se transfor ‘man en vn compuesto de mayor contenido ener- tico, 1a glucosa. Las 2870 kJ (686 kcal) nece Sarios para sintetizar una molécula gramo de la hexosa (180 g) son provistos por la radiaci6n so- lar. La glucosa ha incorporado 2870 kI por mol, que pueden ser aprovechados por organismos ca- paces de degradarla y de utilizar la energfa libe- rada en el proceso. EI ATP es el principal intermediario de alto contenido energético ‘Tanto la transformacién de la energfa luminica en seres fotdtrofos, como el aprovechamiento de la energfa quimica en los quimiétrofos, exige la formacién de compuestos intermediatios especia- les, de alto contenido energético, 10s cuales ac- tian como reservorios y transportadores de 1a energfa autilizar en la realizacién de trabajo (qui- mico, osmotico, mecanico, etc.) en la célula, En todos los seres vivientes, el principal compuesto intermediario rico en energia es adenosina trifosfato (ATP) (fig. 9-1). Wig. 9-1, Modelo molecular compacto de adenosina tri- fosfato (ATP). C: negro, N: gris, Hi blanco, O: rojo, P: rosa.146 QUIMICA BIOLOGICA Los organismos aerobias, que requieren oxfgeno para subsistir, aleanzan la mayor eficiencia en el apro- vechamiento de la energia contenida en fas moléculas aportadas por fos alimentos. La oxidacién de esas moléculas constituye el principal mecanismo para li- berar esa energia. En el caso de la glucosa, su oxida- cién completa en el organismo da los mismos produc- 10s finales que su combustién en e! laboratorio: CoH: O, +60, 4 6 CO, +6H,0 Esta reaccin es fuertemente exergénica (AG? ~2870 kJ/mol 0 -686 kcal/mol), Cuando la combustion se efectia en una sola etapa, hay liberacién brusca de energia en forma de calor. Obviamente, la oxidaci6n de la glucosa no puede realizarse de este modo en las célutas, pues [a elevacién térmica resultante seria incom- patible con su subsistencia y, por otra parte, aun cuando resistieran el aumento de temperatura, esa forma de energia no puede ser utilizada por las células para efectuar trabajo alguno. Sin embar- 20, la oxidacién de la glucosa y de otras sustan- Cias proveedoras de energia se tealiza en el orga- nismo en una serie de etapas ordenadas de mane- ra tal que la energfa se libera gradualmente, en condiciones que permiten su captacién y utiliza- cidn con gran eficiencia Como en los serés aerobios fas oxidaciones son Ia principal fuente de energia, es conveniente in- cluir aquf algunos conceptos basicas sobre el tema. OXIDACION-REDUCCION Concepto de oxidacién y reduccién Inicialmente se entendia por oxidacién exclusiva- mente la combinacién de up elenten(o o compuesto con oxigeno. EI fenémeno inverso, es decir, la pérdi- da de oxigeno por parte de un compuesto, era llamado reduccion Un trozo de hierro dejado a la intemperie reaccio- na lentamente con el oxigeno del aire y forma éxido férrico. Se dice que ¢) hierro se ha oxidado: Ja reac cién puede representarse: 4Fe +30, 2Fe,0, (1) Cuando se quema carbén en presencia de oxige- no, se produce anitidrido carbinico C+0290C0, 2 el carbono se ha oxidado. Este tipo de proceso, que transcurre répidamente, con gram desprendimiento de energia (calor y luz), recibe el nombre de combusti6n. El 6xido cuproso, en presencia de oxigeno, se con- vierte en Gxido ciprico 2Cu,0 +0, > 4Cu0 GB) La relacién Cu/O en el 6xido cuproso es de 2/1; en el 6xido ciipeica, de 1/1. El segundo compuesto posee proporcionalmente mas oxigeno que el prime- ro: vale decir, el cobre se ha oxidado. La reduccién, proceso inverso a la oxidacién, se consideraba equivalente a la pérdida o disminucis del contenido de oxigeno de un compuesto. Por ejem- plo. el dxido férrico, en presencia de bidrdgeno, fo ma hiervo libre y agua: Fe,Q\+3H; 9 2Fe +30 (4) E] hierro ha perdido ef oxigeno al cual estaba uni- do en el dxido fécrico; por lo tanto, se ha reducido, Nuevos aportes experimentales obligaron a exten- der e} concepto de oxidacidn. Se comprobé que un elemento 0 compuesto también podfa aleanzar el es- tado considerado como “oxidado”, no sdlo por adi- cién de oxigeno. sinto por sustraccién de hidrégeno: 3 HS +2 HNO; > 3$+2NO+4H,0 (5) En esta reaccién, el azufre del sulfuro detidrége- no, al convertirse en azufre libre, no harganado oxige- no; ha perdido hidrégeno. Eilo equivale a oxidacién, Por otra parte, puede reducirse un compuesto por adi- cidn de hidrégeno. Oxidacién implica pérdida de electrones Si se analizan los ejemplos precedentes desde el punto de vista de los intercambios electrénicos entre Jos elementos participantes, se tiene: Reaccidn (1): El oxfgeno posee seis electrones en su nivei de maxima energia. Para conseguir la confi- guracidn estable necesita ganar dos electrones. Et hie~ s7o puede ceder dos 0 tres electrones en sus combina- ciones; en el 6xido férrico, el hierro “cede” tres elec- trones que son captados por dtomos de oxfgeno, mas electronegativo que él. Reaccidn (2): Cuando el carbono se oxida a didxi- do de carbono, se establecen enlaces covalentes pola- res. En estos enlaces los electrones estén. mas proxi- mos al oxfgeno, mAs electronegativo que el carbono. Hay transferencia relativa de electrosies del carbono a los oxigenos. Reaccidn (3): El cobre en el éxido cuproso se une al ox{geno por un enlace covalente polar simple en el cual ef par electrénico esté mas préximo al oxigeno: €l cobre ha “cedido” un electrén al oxigeno. En el 6xido ctiprico, el étomo de cabre cede dos electrones al oxigeno. Ai pasar de cuprosa a ctiprico, el cobre ha perdido un electtén mas. Reaccién (4): El hierro del éxido férrico “cede”tres electrones a los oxigenos a los cuales se une: al redcirse y transformarse en hietro libre, recupera esos tres electiones, Reaccidn (5): En el sulfuro de hidrégeno el azufre esté unido al bidrégeno por enlaces covalentes pola- res en los cuales los electrones son atraidos hacia el anufie. Al convertirse en azufie libre, éste pierde esos electrones. En todos los casos expuestos se comprueban cam- bios electrénicos de fos elementos oxidados 0 reduci- dos que se pueden generalizar del siguiente modo. todos los elementos que se oxidan pierden 0 ceden electrones; los elementos que se reducen ganan elec- twones. De esto surge una nueva definicién de tos pro- esos de oxidacién y reduccidn, La oxidacidn importa una pérdida de elec- tones, mientras la reduceién implica ganancia de electrones. Si se hace reaccionar hietro y cloro, se puede ob- tener cloruro férrico: 2Fe #3Ch > 2FeCh i En este caso se forina un compuesto con enlaces idnicos. Bi hietra cede tres electrones y se convieste en ion férrico: Jos tres electrones perdidos por el me- tal son captados por Serko ditomos de cloro, que se ansforman en iones clol y cl cloro se ha reducido. He aqui un ejemplo de oxi- Uacién y veduccién que transcurre sin participacién de oxigeno ni de hidrégeno. Séto hay transferencia de electrones desde un elemento a otro. Conviene desta- car que oxidacién y reduccién siempre van acopla- dias. pues en (oda reacci6n en la cual un elemento se oxida, simultineamente hay otro que se reduce. Los electrones cedidos por un elemento deben necesaria- mente set captados por otro, pues los electrones no pueden quedar libres, Por ello se habla de reacciones de oxidorreduccidn o redox En waa teaccidn redox, el elemento oxidado es ef agente reductor y el reducido, et oxidante. iuro. El hiervo se ha oxidado Potencial de reduccién Si en un tubo de ensayo se coioca solucién de sulfato de cobre (de color azul) con un trozo de zine metilico y se cafienta suavemente, fa solucién pierde color azul, desaparece el zine y se forma un deps- sito de cobre metalico: CuSO, #Zn > ZnSO, + Cu El Cu se encueptra oxidado en el sulfato de cobre como catién Cu’), Al pasar a cobre metélico. recu- pera dos clectrones: se ha reducido con respecto a su estado anterior. Por su parte, el zinc metalico. al des- plazar al Cu de su unién con sulfato, pierde dos elec- gs. e5 decir, se oxida, OXUDACIONES BIOLOGICAS, BIOENERGETICA 147 La reaccidn inversa no se produce; el cobre es in- capaz de ceder electrones al zinc y desplazarlo de sus combinaciones. Los electrones sélo pueden fluir de un elemento a otro si el primero tiene mayor tenden- a cederlos que et segundo. La capacidad de una sustancia 0 elemento para oxidar a otra/o y, por lo tanto, para reducirse, depende de su avidez por aceptar electrones. que se expresa cuan- Aitativamente por el llamado porencial de reduccidn. Enel ejemplo anterior el cobre demuestra poser mayor potencial de reduccién que el zinc, ya que los electrones pueden pasar desde el Zn al Cu, pero no a ta inversa. Potencial de reduccidn (E) de un elemento, ion 0 compuesto, es su tendencia a ganar elec trones frente a otro elemento, ion 0 compuesto. Semirreaccidn, Una reaccién redox puede ser con- siderada como Ja suma de dos medias reacciones 0 semirreacciones, en unia de las cuales se representa s6Jo la oxidacién y en Ia otra, la reduceién. Por ejemplo, en la reacci6n 2 Na + Cl — 2 NaCl, el sadio se oxida, pierde un electra, mientras el cloro, se reduce, gana un clectrén. Las semirreacciones co- rrespondientes son Oxidacién: Reduccién: 2Na>2Nart2e Cl+2e92¢cr Por convencién, las reacciones redox se escriben en el sentido de reduccién. Las formas oxidada y reducida (Na*-Na, CI-CI-) en cada una de estas reacciones constituyen un pat 0 cupla redox (Nat/Na, CCH, Determinacién del potencial de reduccién Para conocer cudl de dos oxidantes es mis fuerte y en qué direccién marchard la reaccién cuando am- bos se pongan en contacto, se recurre a la medicién del potencial de reduccién, basada en el principio de Tas pitas electroquimicas. Pilas electroquimicas. $i se coloca un trozo de zine dentro de una soluci6n de sulfato de cobre, se produce una reaccién de oxidorreduccién, simplifica- daen la ecuacién Cur + Zn > Zn + Cu La misma reaceién se produce, aun cuando los reactivos estén separados, en una pila eleetroquimica como la representada en Ja figura 9-2, En la cubeta de la izquierda, Nena de solucién de sulfato de zinc, se introduce una barra de zine puro; en la otra cubeta, una barra de cabse se sumerge en solucién de sulfato de cobre. Ambos recipientes estan comunicados por tun tube Heno de solucién de KCI (puente salina). Si se conectan las dos barras metéticas (electrodos) me- diante un cable conductor provisto de un voltimetro, actatememan148 — QUIMICA BIOLOGICA Voltimetro Fig. 9-2, Pila electroguimica se constata una diferencia de potencial entre ambas Fluyen electrones desde la cubeta con la barra de zinc hacia ta del electrodo de cobre. El conjunto funciona como una pila y cada recipiente con su electrodo cons- tituye una hemipila. El flujo de electrones en el con- ductor externo indica que la hemipila del electrodo de Cu los atrae mas fuertemente. El zinc de Ja barra se disuelve; libera iones Zn®* en la solucién de la cubeta. En cambio, sobre el electrodo de cobre se deposita mas cobre metélico. La solucién de iones zinc en el recipiente de la izquierda se hace mas concentrada. mientras la de iones cdpricos en la otra cubeta se tor- na mas diluida El sistema permite determinar, en unidades de fuer- za electromotriz, la diferencia entre la tendencia a ga- nar electrones (potencial de reduccién) de dos cuplas redox. Cuando la concentracién de iones en las cubetas es de | mol por litro (solucién | molar) y la temperatu- ra es de 25°C (condiciones estandar), la diferencia de potencial para la pila Zn-Cu es de 1,10 V (voltios). Las mediciones de potencial de un par redox se realizan por comparacién con el de un sistema de re- ferencia al cual se le asigna valor 0, en un dispositivo similar al de ja pila electroquimica, Se reemplaza una de las hemipilas por ¢} denominado electrodo normal de hidrégeno, constituido por un trozo de platino sa- turado en su superficie con gas hidrégeno a la presin de | atmésfera, sumergido en una solucién con iones H’ aunaconcentracién de | mol por litro (1 M, pH = 0). El par o cupla redox en este caso es H*/%4 H;, cuyo potencial se considera arbitrariamente 0 El potencial se mide conectando el sistema en es- tudio con la hemipila de hidrdgeno (si se mantienen las condiciones de concentracién | M y temperatura de 25°C, se habla de potencial de reduccién estdndar, E,) Si la hemipila Zn”*/Zn se conecta con el electro- do normal de hidrégeno, se comprueba una diferen- cia de potencial de 0,76 V; los electrones fiuyen des- de el electrodo de Zn al de hidrégeno. La medicién de la diferencia de voltaje ene ta hemipila Cu?/Cu y la de hidrégeno da un valor de 0,34 V, pero en este caso los electrones fluyen desde el electrodo de H al de Cu Por convencién, se asigna signo positivo (+) al par redox con mayor tendencia a sufrir reduccién que el de hidrégeno, y signo negativo {-) al de ten- dencia menor que el par H'/4H,, Como los potenciales de reduccién se determinan en relacién con el mismo sistema de referencia, si se conocen Jos potenciales de dos pares redox es posible predecir que, en condiciones esténdar, el sistema con potencial mas elevado tenderé a ganar electrones y sufrir reduccién, mientras e] otro se oxidard. Los elec- trones van siempre desde el par redox de menor a aquel de mayor potencial de reduccién. EL Zn de la hemipila Zn**/Zn es capaz de reducit al ion H®; esto indica que el potencial de reduccién del par H'/%4 H es mayor que el del par Zn°*/Zn, ra z6n por la cual el potencial de éste se escribe con sig- no negativo. Zo*+2e > Zn 0,76 voltios Para la hemipila Cu’/Cu, el potencial es mayor que el del par H*/4 Hy, por lo tanto, se le asigna signo positivo. Cu +2e 3 Ca AE, = +0,34 voltios Las diferencias de potencial de reduccién entre dos pares redox crean diferencias de potencial electro- motriz, a favor dei cual se produce flujo de electrones. Este flujo determina liberacién de energia utilizable. E] AG serd tanto més negativo cuanto mas grande sea la diferencia entre los potenciales de reduccién de las sustancias gue reaccionan, El cambio de energia libre estindar (AG*) puede ser calculado, pues AE, y AG® estan relacionados segiin la ecuacién: AG® = -n.RAE, nes el mimero de electrones transferidos, F es una constante (equivalente calérico del Faraday, 96,49 k} © 23,062 keal. V-' - mol"), AE, se expresa en voltios. Ep el ejemplo de las cuplas Zn/Zn y Cu**/Cu, el valor de AE, es: +0,34 = (-0,76) = 1,10 voltios eLAG® de la reaceién Cur +Zn— Zn + Cu sera AG? = ~2 x 96,49 x 1,10 12,28 kJ/mol (50,736 keal/mol) En Ja tabla 9-1 se dan valores del potencial de re- duccién estandar (a 25°C y concentracién | M) para cuplas redox de interés biolégico. Los valores son ajus: tados a pH 7,0 (B,"). A este pH, que es mas proximo al fisiolégico, ef potencial de reduccién para el par HM H, no es cero sino -0,42 V (la concentracién de H* no es 1 M sino 107 M).Los valores de la tabla 9-1 corresponden a siste- mas en los cuales las concentraciones de las formas redueida y oxidada son iguales entre sf (1M). Si la concentracién de la forma reducida es mayor que la oxidada, el potencial de reduccidn se hace mis nega- tivo y vieeversa OXIDACIONES BIOLOGICAS Gran parte de los sustratos oxidados en el or- ganismo sufren deshidrogenacidn. Los hidroge nos sustraidos al sustrato se unen finalmente a oxigeno molecular para formar agua’ ae} + 2H++2e > HO El potencial de reduccién (B,") de esta semi- rreaccién es +0.82 voltios. Las reacciones de deshidrogenacién son catalizadas por enzimas (deshidrogenasas) espe- cificas para cada sustrato; los hidrégenos son captados por la coenzima, un nucledtide de nicotinamida (NAD o NADP) o unaflavina (FAD). Para el NAD, la semirreaccién puede vepre- sentarse . NAD! +2H*+2e = NADH+H> 0,32V La diferencia de potencial entre las cuplas redox 40,/H,O y NAD*/NADH + H* es OXIDACIONES BIOLOGICS. BIOENERGETICA 149 +0,82 ~ (0,32) = 1,14 voltios. Por Jo tanto, el AG® de la reaccién de oxidorreduccidn entre ambos pares sera: AG®'=-n-F-AE, =-2 x 96,49 x 1,14 =—220 kJ/mol (-52,6 kcal/mol) Se trata de una reaccién fuertemente exer- i ocurriese en una etapa, se produciria n brusca de energia (calor) no aprove- chable por la céluta. En los procesos biol6gicos, en general, los hidrégenos sustraidos al sustrato no son directamente oxidadas por el oxigeno sino transferidos, en etapas sucesivas, a distintas sus- tancias aceptoras de potencial de reduccién cre~ ciente. De este modo, la energia se libera en for- ma fraccionada y puede ser captada por la célula El proceso es esquematizado en la figura 9-3 Un sustrato reducido (SH,) es oxidado porel com- puesto A, de potencial de reduccién superior. El sustrato cede sus hidrégenos a A, que se reduce (AH,), La liberacidn de energia en esta reaccién es proporcional a la diferencia entre los poten- ciales de reducciGn del sustrato y A. En una se gunda etapa, AH, es oxidado por e} compuesto B, de mayor potencial y, de nuevo, ocurre una moderada liberacién de energia. La situacién se repite entre BH y el compuesto siguiente (C) y luego entre CH, y e} compuesto D, cuyo poten- cial de reducci6n esta mas proximo al del agente oxidante terminal, el oxigeno molecular. El resul tado final es el mismo de la oxidacién directa, eb Tabla 9-1, Potenciales de reduccién estandar (Eo") de algunos pares redox de importancia biolégica c-cetoghitarato + 2H" + 2e E,’ (en voltios) 0,67 ~0.60 ‘Coenzima Q+2H' +26 = Coenzima QH, Citocroms b (Fe) +e = Citocromo b(Fe™) Citocromo ¢, (Fe) + & = Citocromo c, (Fe’”) Citoeroma c (Fe) + &” = Citocromo c (Fe) Citocromo a(Fe") + & = Cifocromoa(Fe™) _Citocromo a; Fe") + e&° = Citocromo a; (Fe) 40, + 2H +2e = HO =150 QUIMICA BIOLOGICA Sustrato HA BH, Sustrato Energia Enersia prane| B fen4s pb }s Energia poo DH, Eneigia —Energla Escala potencial de reaccion + Fig. 9-3. Representacién esquematica de un proceso de oxidacidn en etapas. En rojo, sustratos oxidados; en negro, sustratos reducidos, oxigeno capta dos hidrégenos para formar agua, pero la liberacién de energia ha sido subdividida en fracciones utilizables para realizar trabajo. Mitocondrias Las mitocondrias son las organelas en las cua- Jes tiene lugar la transferencia ordenada de elec- trones y la captacién de la energia generada por el flujo de electrones. Su tamatio, forma y nime- ro varfan de un tejido a otro, pero Ja estructura basica de las mitocondrias és similar en todos. Poseen una membrana externa, en contacto con el citosol, permeable a iones y moléculas de masa menor que 6 kDa. Esta permeabilidad se debe a la existencia de poros 0 canales formados por una protefna transmembrana llamada porina. Dentro de la membrana externa, separado de ella por un Particulas: Matiz submitocondriales Cresta Membrana Espacio Membrana externa intermembrana interna Fig. 9-4, Diagrama widimensional de una mitocondria seccionada (arriba). Corte transversal (abajo). espacio intermembrana, se encuentra un segun do saco cerrado, constituido por Ja membrana interna, que contiene un espacio central o matriz. mitocondrial (fig. 9-4). La membrana interna posee una permeabilidad muy selectiva; sdto pue- de ser atravesada por agua, O,, CO», NH, y algu- nos compuestos que cuentan con sistemas de transporte. Presenta invaginaciones Ilamadas crestas, més abundantes en mitocondrias de cé- lulas con intensa actividad respiratoria, En la membrana interna, la cara que mire hacia la ma- triz presenta grav aumero de formaciones esfervidales (particulas submitocondriales) im- plantadas en un corto tallo. La composicion de la membrana interna tie- ne caracteristicas distintivas; contiene cardio- lipina, fosfolipido inexistente en otras membra- nas, y es extraordinariamente rica en proteinas. que constituyen casi el 80% de sus componentes. En Ja masa gelatinosa de 1a matriz hay gran cantidad de enzimas integrantes de las vias cen- trales del metabolismo axidativo (ciclo de Krebs 0 del dcido citrico, via de oxidacién de dcidos gra- 80s, etc.) La membrana interna contiene los inte- grantes de la cadena respiratoria, las estructuras y enzimas responsables de Ja captacién de energia y sintesis de ATP y distintos sistemas de transporte. Ademds de su papel fundamental en el meta- bolismo energético, tas mitocondrias participan en otro proceso de gran importancia: ta apoptosis © muerte celular programada (ver pag. 565). CADENA RESPIRATORIA Segain se ha indicado, en Jas oxidaciones bio- logicas los hidrdgenos sustraidos al sustrato son transferidos en forma gradual a través de acep- tores que experimentan cambios reversibles en su estado redox. Er la membrana interna de las mitocondrias estos aceptores estén dispuestos or- denadamente segtin un gradiente de potencial de reduccién creciente y asociados intimamente a las enzimas gue catalizan las transferencias. El conjunto recibe el nombre de cadena respirato- ria 0 cadena de transporte electrénico.Dos hidrégenos cedidos en una reaccién redox representan la suma de dos protones (H*) y dos electrones (e°). Hidrgenos y electrones frecuente- mente son denominados equivalentes de reduc- cidn La cadena respiratoria comprende una serie de etapas. Durante todo el recorrido, los electro- nes fluyen naturalmente en e? sentido que les fija el desnivel en el potencial de reduccién de los aceptores. En un sistema como el esquematizado en la figura 9-3, se deslizan desde Aa B,a C, a D, y a oxigeno secuencialmente, impulsados pot el potencial creciente. Todos los integrantes de la cadena de trans- porte de electrones se encuentran en la membrana interna de la mitocondria, constituyendo un sis- tema multienzimatico altamente ordenado, Su in clusién en la membrana asegura la disposicién es- pacial adecuada para un 6ptimo funcionamiento. Al analizar el proceso de oxidacién de un sustrato y la transferenicia de electrones, uno po- dria preguntatse por qué el sustrato no entrega sus hidrdgenos directamente al oxigeno o a otros aceptores con mayor potencial de reduccién que el NAD por €}., ya que esas reacciones son t modindmicamente mas favorables. Esto se expli- ca si se recuerda que, en las condiciones existen tes en la célula, toda reaccién quimica transcu- re gracias a la existencia de catalizadores. S6lo la presencia de enzimas especfticas asegura el cumplimiento de tas etapus y la liberacién de energia en forma gradual y controlable. Los hi- drdgenos no pasan directamente de un sustrato dado al oxigeno 0 a cualquier otro aceptor si 0 existen enzimas que catalicen la transferencia. Transferencia de equivalentes de reduccién Nicotinamida adenina dinucledtidos, Nu- nerosos sustratos oxidables de distinta naturale- za (piravato, o-cetoglutarato, malato, isocitra OXIDACIONES BIOLOGICAS. BIOENERGETICA 451 to, glutamato, 3-OH-acileoenzima A, ete.) son deshidrogenados en la matriz mitocondrial en re- acciones catalizadas por enzimas especiticas (deshidrogenasas} cuya coenzima es un nucles tido de nicotinamida, La nicotinamida. derivada del nticleo piti- dina, estd relacionada con el acido nicotinico, vitamina perteneciente al grupo o complejo B (pag. 484). En las células existen dos coenzimas de esie tipo, nicotinamida adenina dinucledtido (NAD) y nicotinamida adenina dinuclestido fosfato (NADP) (fig. 9-5). En su estado reducido estas coenzimas se encuentran unidas a un hidi geno y aun electrén; de los dos hidrégenos cedi- dos por el sustrato queda tun protén en el medio. Las reacciones se representan AH,+ NAD* — A+NADH +H* AH, +NADP* =» A+NADPH + H* r sustrato oxidado sustrato reducide, La porcidn nicotinamida de la molécula ac- tia como aceptora de hidrégeno y clectrones (fig 9-6). Uno de los hidrégenos se une al carbono 4 del anillo pitidina, mientras un electrén del otro hidrégeno se fija al nitrégeno del ciclo. Queda un prot6n libre en el medio Las deshidrogenasas ligadas a NAD 0 NADP no forman parte de ia cadena respiratoria; se en- cuentran en la matriz mitocondrial. La coenzima NAD reducida cede equivalentes de reduccién al primer aceptor de Ja cadena de transporte elec- irdnico y de este modo vuelve a quedar oxidada. Existen también deshidrogenasas unidas a NAD y NADP en el citosol, pero como la mem- brana interna de las mitocondrias no es permeable a los nuclestidos de adenina, NADH y NADPH formados en el citoso) no pueden ceder directa- mente sus hidrégenos a la cadena. Su oxidacién se realiza mediante sistemas “lanzadera” 0 con- mutadores, con capacidad para transferit hidré- NH, 4 i G a eo - . neo7 c-conty \ 1 o-6)-0-O-0 | I H=C. C-H QoL ON cH, He 7° Sy Adenina Hi IH Ri ff Nicotinamida HO OH HO OH Ribosa Ribosa152 QUIMICA BIOLOGICA, CO.NH, 42H +2e N 1 ribosa t adenosina—| P)—O—(P) Fig. 9-6. Funcién de la porcisn nicotinamida del NAD como aceptora de hidrgeno y electranes. genos desde el citosol hacia Ja cadena respirato ria en las mitocondrias. Estos sistemas utilizan aceptores intermediarios que pueden atravesar la membrana interna (ver mas adelante} E) destino de Jos equivalentes de reduccién no es el mismo si son captados por NAD 0 por NADP. El NAD reducido en Ja matriz mito- condrial cede hidrégenos a Ja cadena respirato- ria con la finalidad de producir energia, mientras los hidrégenos de NADP reducido son utiliza- dos preferentemente en sintesis de diversos com- puestos, Sin embargo, eventual mente el NADP reducido puede transferir H al NAD en reaccién catalizada por transhidrogenasa NADPH + NAD* = NADP* + NADH De esta manera, hidrégenos originalmente captados por NADP pueden Iegar a la cadena respiratoria. Componentes de la cadena respiratoria La cadena sespiratoria es un conjunto de aceptores y transportadores de equivalentes de reduccién, incluidos en fa membrana interna de las mitocondrias. Muchos de sus componentes se agrupan en complejos multimoleculares que atraviesan todo el espesor de la bicapa lipidica Existen cuatro de estos complejos y, ademas, hay otros dos integrantes de la cadena que se encuen- tran libres (coenzima Q y citocromo c), repre- sentados esquemiiticamente en la figura 9-11 El NAD reducido es oxidado por el primer complejo de la cadena respiratoria, llamado NADH-ubiquinona reductasa. Es el complejo de mayor tamafio (>900 kDa), formado por unas 45 cadenas polipeptidicas; contiene una molécu- la de flavina mononucleétido (FMN) como gru- 0 prostético y 16 a 24 dtomos de hiero en 7.a9 centros ferro-s«ifurados (ver mas adelante). Loselectrones transferidos desde NADH al com- plejo NADH-ubiquinona reductasa son captados inicialmente por flavina mononucle6tido (FMN), e] cual se reduce a FMNH,; luego pasan sucesi- vamente por dtomos de Fe de distintos centros Fe-S del complejo y finalmente son cedidos a la ubiquinona 0 coenzima Q. E] FMN y los 4tamos de Fe se reoxidan y la coenzima Q se reduce (CoQH,). Flavoproteinas. Tienen flavina como grupo prostético firmemente unido. En el complejo Gta 0-P —o~(P}—O—Ribosa—Adenina HO-E-H Ribitol HO-G-H HO-¢-H CH, H A ° b i oe Wo, wie Cp C-CH, Ne Se So? 0 H Nuicieo isoaloxazina Fig. 9-7. Flavina adenina dinuclestido (FAD).OXIDACIONES BIOLOGICAS. BIOENERGETICA 153, R R x i i one S CHy CH | +2Ht +2 | | HN he “CHy CHs Se N Ww I 1 ° i) NADH-ubiquinona reductasa se encuentra flavina menonuclestide (FMN), constituido por el nti- cleo isoaloxazina, un pentaalcohol derivado de ribosa llamado nibitol y un resto ortofosfato (véase estructura representada en Ja figura 9-7) Sustratos existentes en la matriz mitocondrial, como succinato, acil-coenzima A, gliceral-3-fosfato, etc., son oxidados por deshidrogenasas que utili- zan flavina adenina dinucledtido (FAD) como co- enzima. En la reacci6n, él FAD se reduce a FADH,, Flavina adenina dinuclestido (FAD) esté inte- grado por isoaloxazina, ribitol y ortofosfato, es decir, los componentes de FMN, més otro nucledtido, adenosina monofosfato (AMP), cuyo fosfato se une al del FMN por un enlace piro- fosfato (fig. 9-7). El nticleo isoaloxazina y el ri- bitol, que forman parte de las moléculas de FMN y FAD, son componentes de la riboflavina, vita- mina del complejo B. Tanto en el FMN como en el FAD, el niicleo isoaloxazina es la porcisn de la molécula que acepta Jos dos hidrégenos trans- feridos (fig. 9-8). Una flavoproteina ligada a FAD que cataliza la oxidacion de succinato (succinato deshidro- genasa) integra el complejo llamado succinato- ubiquinona reductasa, constituido por cuatro subunidades polipeptidicas, una molécula de FAD como grupo prosiético, ocho étomos de Fe y ocho de $ distribusdos en tres centros ferrosulfurados Los electrones fluyen desde el succinato al FAD, que se convierte en FADHI,, y a los étomos de Fe* de los centros sulfoférricos, para ser trans- feridos finalmente a la coenzima Q. El FADH, se reoxida a FAD. E] cambio de energéa libre duran- ‘uncién de la isoaloxazina de FMN y FAD como aceptora de hidré -n0s, te el pasaje de electrones a través del complejo succinato-ubiquinona reductasa es menor que el del complejo NADH-ubiquinona reduetasa. Centros Fe-S. Los centros ferrosulfurados 0 sulfoférricos poseen hierro no heminico, es de- cir no asociado a hemo, unido a azufre. Los mas simples poseen sdlo un dtomo de Fe coordinado con los sulthidrilos de cuatro restos cisteina en la protefna, En algunos centros hay dos dtomos de Fe unidos a dos de $ inorgénico (Fe,S.) y en otros existen cuatro atomos de Fe y cuatro de S inorgnico (Fe,S,). Estos dtomos de S se separan facilmente como Acido sulfhidrico por tratamiento con dcidos fuertes. En los centros Fe,S3 y Fe,Ss, el Fe también se une al S de cadenas laterales de cisteina de la proteina (fig. 9-9). Cada dtomo de hierro capta un electrén y pasa del estado férric al ferroso en forma reversible (Fe =*Fe™), Es las protefnas sulfoférricas se encuentran en va- tios complejos de la cadena respiratoria. El po- tencial esténdar de reduccién de la capla redox Fe*/Fe* en las distintas proteins ferrosulfuradas varia entte -0,24V y +0.30V. Coenzima Q. Recibe también el nombre de ubiquinona por su naturaleza quimica y su ubi- cuidad en los sistemas biolégicos. Es una ben- zoquinona con una larga cadena formada por diez unidades isopteno (en total 50 carbonos). Las estructuras de sus formas oxidada y reduci- da se muestran en Ja figura 9-10. Este aceptor es el tnico de la cadena respira- toria no unido a protefnas. Su cadena isopre- noide, hidréfoba, le permite alojarse en la zona apolar de la bicapa lipfdica de la membrana inter- FeS Fig. 9-9. Centros hierro-azufre. Fe: rojo, S inorgénico: gris, S de cisteina: negro, restos cisteina: évalos rosados. Fe,S, Fe,S,154 QUIMICA BIOLOGICA a g a C. C, ra HCO: l Choy HCO: Secs HCO CH; I i H,CO: (CH,CH=C-CH,),gH COL hr HOA AR c ¢ c I I 1 0 OH OH Forma guinona (oxidada) Forma semiquinona Forma bidroquinona (intermedia) (reducida) Fig. 9-10, Coenzima Q 0 ubiquinona. na, dentro de la cual se desplaza con cierta liber tad, Acttia como un portador movil de electrones. En las etapas hasta aqui descriptas, se ha pro- ducido transferencia de un par de hidrégenos des- de el sustrato hasta la ubiquinona, Para algunos sustratos, Jos equivalentes de reduccién pasan primero a NAD y luego a FMN y centros Fe-S dei complejo NADH-ubiquinona reductasa; para’ otros, los hidrégenos se (ransfieren a fla- voproteinas con FAD, como en el complejo succinato-ubiquinona reductasa. En ambos ca- 508 son aceptados por la ubiquinona. Es decir, la coenzima Q recibe hidrégemos de diversa proce- dencia (fig. 9-11), La disminucidn de energia li bre (AG) del pasaje de equivalentes de reduccién desde el complejo succinato-ubiquinona re- ductasa es menor que desde NADH-ubiquinona reductasa. En la proxima etapa, la ubiquinona reducida (CoQH,) tansfiere dos electrones a los aceptores si- guientes, pertenecientes a la familia de los cilocromes. Citocromos. Son hemoproteinas con capa- cidad para aceptar electrones. El dtomo de hierro del hemo capta un electron, pasando de! estado oxidado (Fe™) al reducido (Fe*"). Se han identi- ficado varios tipos de citocromos en la cadena respiratoria, dos citocromos a (ay dy). dos b (Disa y bus) y dos ¢ (Cy ¢,). Se distinguen por su po- tencial de reduccién y espectro de absorcién de la luz. Enel caso de los citocromos b, el subindice que los identifica corresponde a la longitud de onda a la cual tienen su maxima absorcién. Su ordenamiento segdn potencial de reduce Ciente es ByyDeg€/-€--4; Los citocromos b y ¢ contienen un grupo prostético hemo idéntico al de hemoglobina y mioglobina (Fe complejado con protoporfirina TX). Los citocromos a poseen hemo A, con dos cadenas Jaterales distintas de las del hemo. Las moléculas de citocromos @ y a,son iguales, pero tienen diferente potencial de reduccién porque estan locatizadas en ambientes distintos en el com plejo del cual forman parte. Los citocromos a estin asociados con un ion Cu, ubicado cerca del Fe del hemo A. Los metales complejados su- fren oxidorreduccién, reciclando entre los esta- dos Fe*/Fe* y Cu*/Cu'* Los citocramos b y ¢; integran un complejo Namado ubiguinona-citocroma ¢ reductasa, for- mado por {1 subunidades polipeptidicas diferen- tes, incluyendo los dos citocromos by el c,. Tam- bign se encuentra en este complejo una protefna sulfoférrica (2Fe-2S). Desde el complejo ubiquinona-citocromo « reductasa, los electrones pasan al citocromo ¢ citocromo © es una hemoproteina de 13 kDa, compuesta por 104 restos aminoactdicos y un grupo prostético hemo igual al de hemoglobi- na y mioglobina. La secuencia de aminodcidos del citocromo c ha sido conservada con pocas mo- dificaciones a lo largo de la evolucién. Es una proteina periférica, ubicada del lado exterior de Ja membrana mitocondrial interna, asociada por atracciones electrostaticas a las cabezas polares de los fosfolipidos. Puede ser separado fiicilmente de la membrana mediante tratamiento con solu- ciones salinas, Su molécula pose, rodeando el nicho en el cual se encuentra el hemo, varias ca- denas laterales de restos lisina, cuyas cargas po- sitivas son importantes para el reconocimiento y unién a los complejos situados inmediatamente antes y después en la secuencia de aceptores de electrones de la cadena respiratoria. El citocromo ¢ es un transportador mévil que recibe electro- nes de la ubiquinona-citocromo ¢ reductasa y los transfiere al complejo citocromo oxidasa, respon- sable de la tiltima etapa del sistema La citocromo oxidasa esté formada por 11 a 13 subunidades polipeptidicas. Este complejo. como los anteriores, atraviesa todo el espesor de la membrana. Contiene un citocromo a, uno a; y dos iones cobre, que forman dos centros hemo- Cu. La citocromo oxidasa es el tinico componen- te del sistema de transporte electrénico con caps cidad para reaccionar ditectamente con oxigeno Una molécula de oxigeno (O,) capta cuatro electrones y se une a cuatro protones para formar dos moléculas de agua. La reaccién total es: 0,+4e+4H* > 2H,0 En esta reaccién convergen simulténeamente cuatro electrones, 1o cual plantea un interrogante de dificil respuesta, ya que eb citocramo a, tilti- mo aceptor de 1s cadena, slo transporta un elec- trén por vez y los electrones no pueden existir libres en el medio Se ha propuesto, para explicar esta reaccién, que la reduecién completa del oxigeno se reali- 2aréa en un ciclo de varias etapas, llamado ciclo Q. que consideraremos mas adelante. Los complejos de la cadena respiratoria A excepcién de Ja ubiquinona, que se encuentr libre en el interior de ta doble capa lipidica, y del cito- cromo c. cuyas moléeulas estin adosadas a la cara ex terna de Ia membrana interna, los restantes compo- nnentes de la cadena tespiratoria se agrupan en cuatro complejos multimoleculares que ocupan todo el espe- sor de la membrana. Estos complejos son designados con niimetos romanos. Complejo J es la NADH-ubiquinona reductasa. Por intermedio de NAD. recibe hidrégenos de sustratos oxidados por deshidrogenasas ligadas a esa coenzima, Contiene FMN y varios centros Fe-S. Entrega los hi- drégenos a ubiquinona. Complejo II corresponde a la succinato-ubiquinona reductasa, Posee un grupo prostético FAD y tres ven- tos Fe-S, Transfiere equivalentes de reduccién desde succinato a coenzima Q. Complejo III es la ubsquinona-citocromo c reducta- sa, Contiene citocromos big Buz ¥ Cr un centro Fe-S. Transtiere electeones desde ubiquinona a citocromo ¢ Complejo IV es la citocromo oxidasa, en la cual incluidos los citocromos @ y a, y dos iones est OXIDACIONES BIOLOGICAS. BIOENFRGETICA 155 La figura 9-11 esquematiza Ia constitucién y ordenamienta de tos complejos. Este ordenamien- to de los componentes de la cadena respirataria tiene apoyo experimental. Una de las evidencias es el valor de los potenciales de reduccién de los dis- tintos pares redox que la integran. Los valores de EB, (tabla 9-1) son gradualmente crecientes en el sentido del flujo de electrones. Debe recordarse que {os valores de E,” som determinados en equilibrio, con concentraciones iguales (1 M) de las formas oxidada y reducida en cada par y en condiciones que no reproducen situaciones fisiolégicas habi- tuales (por ¢j., para la CoQ deben realizarse en so- luciones e(anéticas, dada la insolubilidad del co} puesto en agua); por Jo tanto, puede haber dife rencias importantes entre el valor E,’ y el corres pondientc al par redox en la célula, en un momen- to determinado. Sin emibarge, los valores estdndar sirven como criterio aproximado para predecir et sentido mas probable del desplazamiento de elec~ trones. Por otra parte, en los cuatro complejos es perfectamente con el ordenamiento propuesto. 1 distribucién de los componentes ‘onpatible Inhibidores del transporte de electrones Un recurso titil para establecer Ia secuencia de la cadena ha sido ef uso de inhibidores que acttian en sitios especificos. El estado redox de los distin- tos componentes puede determinarse por espec vrofotometria dirtctamente en suspensiones de mitocondrias. Cuando se agrega a la preparacién un inhibidor que bloquea la transferencia de electro- nes en un puoto determinado, los componentes de a cadena que participan en las instantcias previas al sitio afectado aparecerin reducidos y los de etapas postetiores estarsn oxidados, pues no reciben elec- tones. Los estudios con distintos agentes blo- queantes del wansporte de elecirones apoyan el or- denamiento propuesto. Como ejemplo se mencia- Cu. Cataliza la reduceién de O, a H,0. narén algunos de los inhibidores mas utilizados 800 kDa Complejo I» 25 psi NADH- vubiquinona ‘ reductasa Complejo TI Ubiguinona- 2 FMN citocromo Complejo IV %O, (68Fes) reductasa Citocromo 2 ee CoQ e-8)--Cite,—— Citc) oxen >( ita Compiejo 11 a cu H,O Succinato- woe tas ubiquinona. cit ae reductasa ra 4 polinsytetos FAD sis 8-10 polpeptdos BFES) 4 polpeptcos Fig. 9-11. Ordenamiento de los componentes de la cadena respiratoria,156 QUIMICA BIOLOGICA Complejo 1 Complejo It Complejo 1 4O, NADH Usiqunonar 5 NADH—© unluncna = CoQ—> Giobomos m= Cit Sadana” ~C., reductasa reductasa 2 al sl Rotenona Antimicina Cianuro Amital Mondéxido de carbono Azidas: Fig, 9-12, Cadena respiratoria. Sitios de bloqueo por inhibidores, Actian a nivel del complejo I (NADH-ubiquinona reductasa): rotenona, producto vegetal, poderoso veneno de peces, amital y otros barbittiricos, y anes- tésicos como halotano. Estas sustancias impiden la egada a la CoQ de hidrégenos procedentes de sustratos oxidados por deshidrogenasas ligadas a NAD. No afectan, en cambio, la oxidacién de sticcinato y otros sustratos que ceden hidrégenos, a flavoproteinas con FAD, probando asf que éstos siguen otra via, El antibiético antimicina A inhibe el transporte de electrones en el complejo IIT. Cianw ros (CN), mondxida de earbono (CO) y azidas (Nc) inbiben espectficamente la citocromo-oxidasa 0. com- plejo TV y bloquean Ia etapa final de activacién del oxigeno (fig. 9-12) ‘El uso de inhibidores no sélo ha ayudado a dedu- cir la secuencia de la cadena respiratoria, sino que ha perinitido conocer mejor el mecanismo de accién de algunos firmacos y venenos. FOSFORILACION OXIDATIVA Hasta aqué se ha analizado el curso de las oxi: daciones en las mitocondrias y el flujo de elec- trones en ja cadena respiratoria a favor del gradiente de potencial de reduccién. Se trata de un proceso exergdnico, gue transcurre con dismi- nucidn de energia libre (-AG). Interesa ahora exa- ininar c6mo esta energia es convertida en porencial de transferencia de fosforilos para la sintesis de ATP, La union de ADP con fostato inorganico (P) ADP +P, > ATP + H,0 es una reaccidn endergénica que ocurre cuando es acoplada a procesos que suministran Ja ener- gia necesaria. La produccién de ATP utilizando energia liberada durante el transporte de elec- tones en la cadena respiratoria es denominada fosforilacién oxidativa. ELAG® de hidrilisis de la uniGn entre el tervero () y el segundo (B) tosfato de ATP es ~30,5 ki/mol (~7.3 kcal/mol); por lo tanto, se requiere una can- tidad igual o mayor de energia para sintetizar ATP a partir de ADP y P, Cuando un sustrato es oxidado en reacciones catalizadas por enzimas que utilizan NAD, éste transfiere los equivalentes de reduccién al pri- mer componente de ta cadena por accién de la NADH deshidrogenasa; desde alli recorren to- dos los aceptores intermedios hasta producir fi- nalmente una molécula de agua. Segtin el céleu- lo expuesto en secciones anteriores, este proceso transcurre con una disminucién total de energia libre de -220 kJ 0 ~52,6 keal por mol, la cual se fracciona en una serie de etapas. Tres de esas eta~ pas producen suficiente liberacin de energia como para acoplar a cada una la formacién de un enlace fosfato de alta energfa: a) la transferencia de hidrégenos desde NADH a CoQ. es decir. nivel de la NADH-ubiquinona reductasa 0 com- plejo I, b) la cesiGn de electrones en la ubig nona-citocromo ¢ reductasa 0 complejo HII y ¢) la reaccidn de la citocromo-oxidasa o complejo IV. En realidad, la sfntesis de ATP no ocurre por acoplamiento directo con esas reacciones. Sin em- bargo, el concepto de la existencia de estos tres sitios ha sido til en el estudio del funcionamien- to de la cadena respiratoria. Relacién P:O. En experimentos de medicién del consumo de oxigeno y fosfato inorgdnico por mitocondrias en presencia de un sustrato oxidable, se calculd el ntimero de moléculas de ATP pro- ducidas. Utilizando malato, compuesto que cede dos hidrégenos a NAD en reaccisn catalizada por malato deshidrogenasa, se habia estimado una re- lacién entre moléculas de fosfato y Atomos de oxfgeno consumidos (relacién P-O) igual a tres Esto indicarfa que por cada par de hidrégenos 0 electrones transferidos a Jo largo de Ja cadena respiratoria, se unen tres moléculas de fosfato a tres de ADP. Es decir. el flujo de un par de elee- trones permitirfa la sintesis de tres moléculas de ATP. La misma relacién P:O de 3 se obtenfa con otros sustratos que ceden hidrégenos a NAD.Cuando se utilizaba suecinato. sustrato oxi- dado en reaccidn catalizada por succinato des- hidrogenasa ligada a FAD, larelaci6n P:O era igual a2. La produccion de ATP seria de dos molécu- las por cada par de electrones transferidos. El valor 2 para la relacién P:O se daba también con otros sustratos oxidados en reacciones en las cuales la coenzima es FAD. Estas observaciones indicaban que uno de los sitios de produccién de ATP estaba asociado a Ja NADH-ubiquinona reduetasa, pues cuando los equivalentes de re- duccidn ingresaban por otra via (FAD->CoQ), el rendimiento cra menor en un ATP. Si bien durante mucho tiempo se han acepta- do los valores mencionados. nuevas determina- ciones del rendimiento en ATP de la fosforilacién oxidativa no dan niimeros enteros. Actualmente se acepta que por cada par electronico transferi- do desde NADH a O, se producen alrededor de 2,5 moleculas de ATP. Cuando los electrones pro- ceden de susiratos que los ceden a FAD (¢j succinato. glicerol-3-fosfato) se generan aproxi- madamente 1,5 moléculas de ATP. En la seccién siguiente se volverd sobre este tema. Mecanismo de la fosforilacién oxidativa Un problema muy dificil de resolver es el del mecanismo por el cual la energfa producida por Ja transferencia de electrones es aplicada a la sin- tesis de ATP. El primer paso importante fue el aislamiento, en Ja década del 60, de las esteac- turas en las cuales se forma ATP a partir de ADP y Py AYP sintasa. Se calcula que un humano adul- to consume alrededor de 40 kg de ATP en un dia de actividad normal. Esta enorme cantidad es regenerada por el propio organism. La mayor parte del ATP es sintetizada por la actividad de tina enzima localizada en la membrana mito- condrial interna, la ATP sintasa, constituida por Ia asociacisn de dos complejos proteicos Ilama- dos F, y F, F, integra las particulas submitocondriales, formaciones esferoidales unidas por un tallo a la faz de Ia membrana que mira a la matriz. Esté compuesto por al menos nueve subunidades, 3 a. 3B, Ly L8y 1 ¢, cuya masa total es de ~380 kDa, Los polipéptidos or y B.apareados en dimeros uf, se disponen como ios gajos de una naranja, formando la “cabeza” de la particuta (fig. 9-13). Cada una de las subunidades B contiene un sitia catalitico. El polipéptido y forma el tallo implan- lado por su base en el centro del complejo F,, mientras e} otro extremo se introduce, como un OXIDACIONES BIOLOGICAS. BIOENERGETICA 157 eje, en el hexémero oyBs. La subunidad & esté firmemente fijada a la base de yy al complejo Fy El polipéptido 8 se adhiere a la parte superior de a particula (fig. 9-13). Cuando estan separadas de 1a membrana, las particulas F, s6lo pueden catalizar la hidrdlisis de ATP, razén por Ja cual inicialmente se las consi- deré adenosina trifosfatasas (ATPasa) El complejo Fy, inserto en la membrana, tiene una masa de ~250 kDa, est formado por una, subunidad a, 2 by 10 a 14 c, Los polipéptidos ¢. \ con dos segmentos transmembrana cada uno, se disponen en anillo o rueda, a cuyo centro se unen las subunidades y y € de F,. Adyacente a este anilio se dispone la subunidad a, que tiene 8 seg- mentos transmembrana y delimita, con las subunidades c, canales que permiten el paso de protones de uno a otro lado de Ja membrana. Los dos polipéptidos 6, de estructura elongada. for- man un vastago que une la pieza a con Ja subuni- dad 8. De esta manera, a, 6, 8 y el hexémero 1B, quedan todos fijados entre si (fig. 9-13) “Hil ae canal de protones Fig. 9-13. Representacion esquematica del complejo F,- F, (ATP sintasa). La conformacién y disposicion de tas subunidades es hipotética, La porcisn , se encuentr cluida en fa membrana interna de la mitocondria, a ta cual atraviesa en todo sv expesor: la porcign F, sobresale ha- cia la mattizQUIMICA BIOLOGICA Hipétesis sobre el mecanismo de fosforilacin oxidativa. Atin existen aspectos no resueltos de! me- canismo de acoplamiento entre transferencia de clec- trones y sintesis de ATP. que algunos autores Taman sransduccidn de energfa. Esta abarca la transmisién de la energia producida durante el transporte electré- nico al sitio de fosforilacién y Ja utilizacién de la ener- ia para la sintesis de ATP. Se han postulado varias hipétesis, tres de las cua les han recibido mayor consideracién. 1) En 1953, Slater propuso a hipdtesis Hamada quimica, que postula la formacién de un intermedia- rio quimico de alta cnergfa, muy inestable, entre la cadena respiratoria y la sintesis de ATP. Hasta ahora nadie ha podido demostrar la existencia de tal inter mediario. 2) En 1964 Boyer presenté su hipétesis confor- macional, Ja cual sostiene que el proceso de transducci6n de energia se reaiza a través de protei- nas capaces de sufrir cambios conformacionales res- ponsables de transferir energia de los sistemas redox a la sintesis de ATP. 3) La hipétesis guimio-osmotica. enunciada en 196] por Mitchell, cuenta con mayor sustento expe: rimental y es actualmente la més aceptada. Sostiene que simulténeamente con el proceso de transporte electrénico, en la cadena respiratoria se produce transfevencia de protones desde la matriz mito- condrial hacia el espacio exterior a a membrana in- terna. De esta manera, el transporte de electrones se acopla con el bombeo unidireccional de protones, produce acumulacién de hidrogeniones en el lado citosdlico de la membrana y crea un gradiente electroquimico. La concentracién de H* es mayor fuera de la membrana interna que en la matriz. Ob- Espacio intermembrana NADH+H"} NAD Matriz viamente, el pH es menor en el espacio exterior. Hay también una diferencia de potencial eléctrico entre ambas caras de la membrana, con el lado externo relativamente mas positivo que ef interior. El resul- tado es la creacién de un porencial protén-motriz que tiende a hacer regresar fos protones hacia la matriz. Coo la membrana interna es impermeable a los H*, éstos slo pueden volver a través del canal de la pieza Fy de ATP sintasa. El retorno de protones al interior de la mitocondria a favor del gradiente es Ja fuerza impulsora de la sintesis de ATP. En suma, la cadena respiratoria, dispuesta asi- métricamente en la membrana interna, utiliza la ener- gia liberada por la uansferencia de electrones para bombear protones al exterior y crear un gradiente Los protones tienen sdlo la via que les ofrece el complejo F,F; para regresar a la matriz, La cortiente de regreso provee la energia que permite generar ATP a partir de ADP y P, (fig. 9-14). Acoplamiento de transporte de electrones y translocacién de protones A la luz de la hipstesis quimio-osmética, se analizaré el transporte de electrones en la cadena respiratoria y su acoplamiento con Ja translo- cacidn de protones. Los dos electrones cedidos por NADH en la cara interna del complejo NADH-ubiquinona reductasa (complejo J) se unen a FMN para dar la forma reducida FMNH,. Esta los transfiere a los centros Fe-S y finalmente a ubiquinona. En = i & & Y0,+2H" HO . 9-14. Traslocacién de protones segiin la hipétesis quimio-osmatica, Disposicidn en la membrana mitocondrial interna de componentes de la cadena de transporte electrénico. A la derecha se representa un complejo F,-Fy de ATP sintasaNADt NADH \ A \ 2H* CoQ FeSa. CoQH: \Compicjor \ NADH. iquinona iclasa Espacio intermembrana Fig. 9-1 ‘OXIDACIONES BIOLOGICAS. BIOENERGETICA 159 2Ht Matriz Complejo tit Ubiquinora- oF citovrornD © tedvctasa CoQ “ Ne fas oi a COOH: me = Fe-S Soi aS Cit. ¢ 2H* 2H Ciclo Q. Las flechas en negro indican el recorrido de electrones y protones en ia primera fase del ciclo. El de electrones y protones de la segunda etapa se representa por las flechas en rojo. esta etapa se produce pasaje de protones desde la matriz hacia el lado exterior de la membrana a wavés del complejo I. Aqui el numero de pro- tones translocados varia entre 2 y 4 segéin los au- ores. El mecanismo intimo del acoplamiento de la wansferencia de electrones con la eyeccién de protones en el complejo I no es atin bien conocido. El bombeo unidireccionai de H* ocurre en los complejos f, IH y IV, que atraviesan todo el espe~ sor de la membrana. Por otra parte, segiin se ha- bia sefalado, el flujo de electrones a través de cada uno de esos complejos es altamente exergd- nico. La energfa generada puede ser acoplada al transpotte de protones. El mecanismo de la trans- locacién de protones ha sido mejor explicado para el complejo II, con el Namado ciclo Q Ciclo Q. La coenzima Q, vansportador mévil de hidrégeno (H* y >), recibe dos electrones proce- Jentes de NADH 0 FADHL a través de los comple- os [0 IT respectivamente y ademas toma dos protones de la matciz para convertirse en COQH,, Esta obiquinona reducida migra hacia un complejo II y. en un sitio de éste préximo a la cara externa de 4 tmembrana, cede un electron a los centros Fe~ gue pasa a citocromo ¢, y finalmente, fuera del com- slejo. a citocromo ¢, La CoQH, que ha cedido un ectrn, libera dos protones hacia el espacio niermembrana y se oxida totalmente (a CoQ) do- rcndo el elecirén vestante a los citocromos h (suce- Vamente a Bog ¥ Bess)s Que Yo ceden a CoQ, la cual « convierte en semiquinona (CoQ) (fig. 9-10). Esto sierra la primera etapa del ciclo. Se inicia ahora una egunda fase, en Ja cual otra molécula de CoQH;, epite los pasos descriptos para ta primera: cesidn © un electrén a citocromo ¢, otto a citocromo b y 2s protones bombeados al exterior, Pero esta vez <1 electrén recibido por citocramo bye es donado a semiquinona formada anteriormente. que capta este segundo electrén y dos protones de la matriz para formar CoQH, lista para iniciar un nuevo ciclo (fig. 9-15). El resultado de cada ciclo es la oxidacién de una molécula de CoQH,, ta expulsién de cuatro protones y la transferencia de dos electrones a sen- das moigculas de citocromo ¢, en ta superficie exter- na de la membrana. Etapas finales: reduccién de O,. Los electrones son transportades por ef citocromo ¢ hacia el sitio aceptor de} complejo IV (el citocromo ¢ es un trans- portador mévit}. El complejo de la citocromo oxidasa conduce los electrones hacia a superficie interna y allf los dona al oxigeno (fig. 9-16). El complejo LY es, el terver sitio de bombeo de protones. No hay acuerdo entre los autores acerca del numero de protones eyectados en esta etapa; se proponen entre 2 y 4, El proceso de reduccién total de una molécula de oxigeno requiere la transferencia de cuatro electrones. Como el traisporte a Tos citocromos se realiza de a uno por vez, existe el riesgo de liberar productos de reduccién parcial de O,, que son t6xicos (ver mas ade- ante), Para reducir este riesgo, la molécula de oxige~ no es fijada en el centro hemo-Cu del citocromo a entre los dtomos de Fe y Cu. y alli pennanece hasta haber recibido cuatro electrones. Las etapas de este proceso han sido representadas en a figura 9-16. I. Inicialmente fos dtomos de Fe y Cu del citocromo 1, se encuentran oxidados (Fe™ y Cu"). En la primera clapa ingresa un electrén, que es captado por el Cu’ (se convierte en Cu") 2. Se transfiere otro electrén, tomado por el Fe (queda como Fe) 3. El centro hemo-Cu fija una molécula de O, 4. Los dtomos de Fe y Cu ceden al oxigeno un electron cada uno y se forma vn intermediario peroxi. 5. Se escinde el intermediatio y queda H,0 unida al Cu y el otro dtomo de oxigeno forma con e} Fe (Fe) un intermediario ferril 6. Ingresa el cuarto electrén y dos protones. Se liberan dos motéculas de agua y los iones Fe y Cu. oxidados. quedan listos para iniciar otro ciclo.160° QUIMICA BIOLOGIC apo “Ho~ou) Intermediario poroxi Se ha discutido mucho acerca del némero total de protones translocados desde la matriz. hacia et lado citosdtico de la membrana iaterna por cada par de electrones que se transfieren en la cadena respi- ratoria, El mtimero mas aceptado actualmente es de alrededor de 10 (2.0 4 en el complejo I.4 en el I y 2 o4enel IV) Como se ha indicado. la consecuencia del bom- beo de protones es la creaci6n de un gradiente de H* (de pH) y una diferencia de potencial elécirico. Se genera una fuerza protén-motriz que tiende a hacer regresar los protones al interior de la mitocondria. Como la membrana es impermeable a los iones H*, et flujo de retorno sélo puede producirse en sitios en Jos cuales existan estructuras que permitan el paso de protones, eludiendo ta apolaridad de la doble capa lipidica. Estos sitios se encuentran en Ja porcién F, de la ATP sintasa. El canal de protones es formado por las subuniddes ¢ y a del complejo Fp. (fig. 9-13). El ingreso de protones a favor de los gradientes de pH y potencial de membrana provee la energia necesaria para la sintesis de ATP. Sintesis de ATP en el complejo FF, De las diferentes propuestas que intentan ex- plicar ef mecanismo de acoplamiento del retorno de protones con la sintesis de ATP, la més acep- tada actualmente sostiene que F\Fy funciona como tupa “maquina rotatoria El flujo de protones ingresados al complejo F, desde el espacio intermembrana prove la ener- gia necesaria para imprimir un movimiento de rotacién al anillo de subunidades c. Como el tallo 9-16, Reduccidn de O, catalizada por citocromo oxidasa. YY el polipéptido € estan fijados al centro del anilo, rotan con 61, Las subunidades 0,, B, 8, a y 6, permanecen fijas. Al girar el tallo yen el centro del esferoide ou, se producen contactos que inducen cambios conformacionales y modifican la afinidad de los sitios cataliticos por sus sustratos y productos. El sitio activo en cada polipéptido B pasa sucesi- ig. 9-17. ATP sintasa como maquina rotatoria para la sintesis de ATP. Corte transversal (muy esquematico). La rotaciGn de Ja subunidad y determing que el sitio catalitico en cada subuatidad del complejo F, pase suce- sivamente por tres conformaciones: laxa (L.), cerrada (C) y abierta (A). En un giro completo se liberan tres molécu- las de ATP.vamente por tres estados: “abierto” (A), “laxo” (L) y “cerrado” (C), Existe un efecto cooperati- vo entre las subunidades que constituyen el hexdmero, de modo que en todo momento los tres sitios catalfticos se encuentran con confor- maciones diferentes. Al tiempo que en una de las subunidades B se muestra al estado “laxo”, en la siguiente esté “cerrado” y en la tercera “abierto”. ADP y P, pueden ingresar en el estado “abier- to” y de inmediato el sitio adquiere la conforma- cién “taxa”, Esponténeamente se produce una reaccién con AG practicamente cero, es decir, sin gasto energético, y se forma ATP que es fir- memente retenido (estado “cerrado”). Posterior- mente se vuelve a la forma “abierta”, con libera- cién del ATP al medio (fig. 9-17). Cada vuelta completa de ¥ produce tres moléculas de ATP. La rotacién y los cambios conformacionale: son impulsados por la energia generada porel flujo de H'; el ciclo se repite en forma continua mientras ingresen protones a través de los canales de F,. ransporte ATP-ADP La mayor parte de] ATP generado en células de eucariovas es sintetizada dentro de las mito- condrias y consumido fuera de ellas. Por esta ra- 26n casi todo el ATP formado debe ser enviado al exterior de esas organelas, mientras los com- pulestos necesarios para regenerarlo (ADP y P,) deben ingresar en la matri Matriz OH™ ATP OXIDACIONES BIOLOGICAS. BIOENERGETICA 61 Las tes moléculas tienen carga, razén por la cual no difunden a través de la membrana. El transporte est a cargo de un translocador o sis- tema de contratransporte (pag. 177) que inter- cambia ATP de Ja matriz por ADP del exterior (fig. 9-18). El ATP tiene 4 cargas negativas y el ADP, 3; el intercambio tiende a neutralizar el gradiente elécirico creado por el bombeo de protones. En otros téminos, el potencial de la membrana interna, posiliva fuera y negativo den- tro, impulsa el intereambio ATP*/ADP™, E] transporte de P, hacia el interior se realiza a través de otro translocador de membrana in- terna, también impulsado por el gradiente de protones. En este caso, el transporte de P, puede interpretarse como un pasaje en el mismo senti- do (hacia el interior) de P, y H* 0 un intercambio P;/OH-. Se suele representar a este sistema cbm0 un contratransportador PO,H;/OH- (fig. 9-18). Alrededor del 25% de la energia generada por Ja transferencia de electrones en la cadena res- piratoria es utilizada para impulsar los contra- transportes ATP*/ADP* y P-/OH-. Rédito en ATP de la fosforilacién oxidativa Segiin se mencioné en una seccién anterior, la produccién de ATP se habia considerado acoplada con reacciones altamente exergdnicas en tres sitios de la cadena respiratoria. Estos son aproximadamen- te los mismos sitios donde se eyectan protones. ATP a it iy He a a Espacio intermembrana Fig, 9-18. El retorno de protones a través del complejo FF, (a a derecha) promueve la sintesis de ATP. A ta izquierda y centro se han representado intercambiadores ADP/ATP y P, /OH” respectivamente,162 QUIMICA BIOLOGICA Ahora se puede relacionar la sintesis de ATP con el flujo de protones, pero ef acoplamicnto se realiza en el complejo PyF,. Las mediciones de la cantidad de H’ bombeados desde la matriz hacia el lado citosdlico de Ja membrana interna de mitocondrias por cada pat de electrones transportado, dan un total de alre- dedor de 10. Se ha determinado que Ia sintesis de una mokécula de ATP requiere ¢ flujo de 3 protones a través del complejo F,F;). Si se tiene en cuenta el requerimiento de un protén adicional para la translocacién de un ATP (intercambio ATR“/ADP) y otro para el intercambio P-/OH, se caleula un tendimiento de alrededor de 2,5 moléculas de ATP por cada par electrénico que recorre toda la cadena, desde NADH hasta 0,. Cuando los electrones son cedidos por FADH,, el rédito es de aproximadamen- te 1,5 ATP. De cualquier modo, a fin de simplificar los, las estimaciones de rendimiento energési- co de reacciones metabélicas expuestas en los si- guientes capitulos consideraran valores enteros de 3 y 2 moléculas de ATP por par de electrones dona- dos por NADH y FADE, respectivamente, Inhibidores de la fosforilacién oxidativa Los inhibidores del transporte de electrones pre: sentadlos en una seccién anterior afectan, como es 16- gico, la fosforitaci6n oxidativa. Existen otros agentes que no bloguean cf flujo de electrones, pera diso- cian a éste del proceso de fostorilacién. Estos agen ies son Namados desacoplantes Uno muy utilizado es el 2,3-dinitrofenot (DNP); transfiere iones hidrégeno desde el lado externo de la mitocondria hacia la matriz y anula el gradiente de protones creado por la cadena respiratoria. Los com puestos que transportan iones a través de la memira na son Ilamados ionéforos; el DNP se comporta como un ion6foro de protones. Existen antibidticos de naturaleza peptidica, por ejemplo ralinomicina y nigericina, que actiian como ionéforos de K*. La transferencia de K* pucde supri- mir. 0 al menos disminuir, el gradiente de potencial eléctrico a ambos lados de la membrana y entorpecer la fostorilacién acoplada al ingreso de protones. Otra sustancia que interfiere la fosforilacién oxi- lativa es el antibistico oligomicina,el cual se une espe cificamente a una de las proteinas del segmento F, del complejo de sintesis de ATP. Control respiratorio Como todos Jos procesos metabslicos, la fostorilacién oxidativa requiere la presencia en el medio de concentraciones adecuadas de los sustratos necesarios, gue incluyen ADP. P,, O3 y un meiabolito oxidable, capaz de ceder electro nes aNAD 0 FAD. Cuando disminuye la disponi bilidad de cualquiera de estos cuatro factores, se limita la sintesis de ATP. El nivel de ADP en ja matriz mitocondrial es muy importante como re gulador de Ja fosforilacién oxidativa. Cuando no hay ADP, la respiracion se detiene. En pre- sencia de oxigeno y con provisién adecuada de sustratos oxidables, la actividad respiratoria de Jas mitocondrias depende de Ja cantidad de ADP disponible. Este efecto exige una estrecha rela- cién entre el transporte de electrones y la fosfo- rilacidn y ha sido denominado control respirato- rio, Obviamente, la sintesis de ATP depende del flujo continuo de electrones desde un sustrato oxidable hasta O,. Por otro lado, en mitocondrias intactas, ef flujo de electrones ocurre solo mien- tras se sintetiza ATP. Esto se explica por el aco- plamiento existente entre transporte de electro- nes y bombeo de protones a través de la mem- brana interna. La fuerza protén-motriz es respon- sable de la sintesis de ATP. Si los protones exter- nos no pueden retornar a la matriz por el canal de la pieza F,, se detiene no sdlo la produccién de ATP en el complejo F,F,. sino también el pasaje de electrones a través de la cadena respiratoria, ya que al no volver protones a la matriz, su acu- mulacidn en el exterior de la membrana inere- mentaria el gradiente y tornaria muy costosa, des- de el punto de vista energético, la transferencia de protones adicionales; él bombeo cesaria. Este mecanismo regulatorio tiene por finali dad limitar las oxidaciones a Jos requerimientos fisiolgicos de ATP de Jas células impedir el consumo imitil de sustratos. La cadena respitatoria tiene gran capacidad de respuesta y reacciona muy répidamente a cual- quier demanda, En general, el sistema mantiene altos niveles de ATP en las células. La estimu- lacién de una actividad que consume ATP, por ejemplo la contraccién muscular, aumenta de in- mediato la produccién de ADP. El incremento del nivel de ADP en la célula activa la oxidacién de sustratos, el transporte de electrones, el bombeo de protones, el flujo de H* a través del complejo FF; y, con ello, la produccién de ATP. El translocador ATP/ADP es inhibido por un glucésido vegetal Ilamado arractildsido. Este Compuesto bloquea el ingreso de ADP, reduce 0 anula el principal estimulo de la respiracién y detiene el transporte de electrones Cuando se desacopla la fosforilacién por ac- cién de agentes como el DNP. el control respira torio desaparece. En estos casos, como el trans- porte de electrones continia sin produccién de ATP, toda la energfa liberala se disipa en forma de calorGrasa parda En el recién nacido y en muchos animales, especialmente aquellos que experimentan perio- dos de hibernacidn, existen depésitos de un tej da llamado grasa parda, cuyo color se debe a la gran cantidad de mitocondrias. Las mitocondrias de este tejido no reatizan fosforilacién oxidativa a pesar de tener un flujo de electrones particular- mente intenso. Funcionan coma si estuviesen bajo el efecto de desacoplantes debido a la presencia de termogenina en la membrana interna. La termogenina o protefna desacoplante (UCP, del inglés uncoupling protein) acttia como transpor- tador de protones, Esta via alternativa det flujo de protones, no acoplada a sintesis de ATP, es activada por acidos grasos libres. La energfa pro- ducida por el transporte de electrones se irradia como calor y sirve para mantener fa temperatura corporal. istemas conmutadores de hidrigeno Al considerar el funcionamiento de la cadena res- piratoria, se indieé que los hidrégenos de sustratos oxidados en reacciones catalizadas por enzimas de- pendientes de NAD, son transteridos al primer com- plejo del sistema de transporte electrénico (NADH- ubiquinona reductasa) y a partir de alli continta el camino que los Hlevard, a través de una serie de eta- as, a unirse con oxfgeno para formar ag EI NAD que participa en dichas reacciones debe encontrarse en 1a matriz mitocondrial a fin de ceder los hidrégenos a la cadena respiratoria, localizada en a membrana interna de la organela. xisten también reacciones catalizadas por oxidorreductasas dependientes de NAD, que tienen lugar en el citosol. E] NADH formado en esas reac- ciones no puede transferir directamente sus equi lentes de reduccién a la cadena respiratoria, pues Ia membratta interna de la mitocondria no es permeable aos nucledtidos de nicatinamida. La cantidad de NAD ene citosol es limitada y si no existiesen mecanismos, para reoxidar el NADH resultante de Las reacciones cn las cuales participa esa coenzimna, la capacidad para oxidar ciertos sustratos se veria muy reducida. Por iemplo, durante la glucélisis, en la etapa de oxida- ‘in del gliceraldehido-3-fosfato por gliceraldehdo sosfato deshidrogenasa, se produce NADH +H, En serobiosis, la reoxidacién del NADH tiene lugar en 2 reaccién de conversién de piruvato en Jactato ¢: alizada por lactato deshidrogenasa. En aerobiosis. cambio, el piruvato penetra en la mitocondria para cominuar su camino oxidative y el NADH queda en al citosol. En estas condiciones, la degradacién de la \ucosa estarfa limitada por la disponibilidad de NAD xidado. Si toda la coenzima citosélica se reduce, la slucélisis no puede proseguir OXIDACIONES BIOLOGICAS. BIOENERGETICA 163 Membrana interna EN cate Dihidroxiacetona = ee fosiato ea FADH, NADH + Ht GPDH i NAD’ : ice fostato eS Citosol ¢ 2 Matriz Fig, 9-19, Representacién esquemética del sistema con- mutador de hidrégeno de glicerofosfato. GPDH: glice- rol-3-fosfato deshidrogenasa. En negro, enzima cito: sélica; en rojo, la mitocondrial La impermeabilidad de la membrana mitocondrial interna al NADH exige la existencia de sistemas de tansferencia indirecta, Hamados sistemas lanzade- rao conmutadores, que hagan llegar los equivalen- tes de reduccién a la cadena respicatoria. El funcionamiento de estos sistemas requiere: 1) presencia en citosol de una oxidorreductasa depen- diente de NAD capaz de reoxidar el NADH, transfi- riendo los hidtégenos a un sustrato aceptor; 2) el sustrato aceptor debe contar con un sistema de trans- porte que le permita atravesar Ia membrana interna de la mitocondria; 3) el aceptor debe ceder los equi- valentes de reduccidn a la cadena respiratoria en la mitocondria, para fo cual es necesaria la existenci ea Ia organela de una envima capaz de oxidarlo. El conmutador glicerofosfato. El primero de es- tos sistemas descripto en la literatura fue el de glice rofosfato. presente en mtisculo esquelético y cerebro, que funciona segtin se esquematiza en la figura 9-19. a) El sustrato aceptor de los hidrégenos es la dihi- droxiacetonafosfato. En reaccidn catalizada por la gli- cerofosfato deshidrogenasa, enzima citosdlica ligada a NAD, los hidrégenos del NADH son transferidos a di- hidroxiacetonafosfato para formar glicerol-3-fosfato b) Bn la cara externa de fa membrana interna de imitocondrias existe una glicerofosfato deshidrogenasa ligada a FAD. Gracias a esta localizaci6n, el glicero! 3-fosfato formado en et citosol no necesita penetrar en la mattiz para set oxidado a dihidroxiacetonafosfato y transferir sus hidrégenos a FAD. c) Ei FADH, cede los equivalentes de reduccién ubiquinona. En este sistema los equivalentes de reduccién in- gresan en Ja cadena respiratoria a nivel de coenzima Q, raz6n por la cual el rendimiento en términos de ATP sera de 2 moléculas por cada par de electrones.