EQ902 Tecnicas

EQ902 Tcnicas e Roteiro para Elaborao de Relatrios
1
PGINA 1 LABORATRIO DE ENGENHARIA QUMICA IV
SEDIMENTAO
Ana Paula Gimenez Peres

1. Objetivo

Pretende-se a partir de ensaios de laboratrio descontnuos de sedimentao, determinar a
rea de um sedimentador contnuo que opere com 10 ton/h de CaCO
3
. A suspenso inicial tem
uma concentrao de 30 g/L, ou 40 g/L ou 50 g/L ou 50 g/L com coadjuvante e pretende-se que o
lodo tenha 100 g de slido por litro de suspenso. Densidade do CaCO
3
= 2,8 g/cm
3
.
Estudos prvios mostraram que o sulfato de alumnio era um coadjuvante conveniente para
aumentar a velocidade de sedimentao, mas que por razes econmicas no deveria ser
utilizada uma concentrao superior a 1200 ppm.

2. Fundamentao Terica

A separao de uma suspenso por deposio por gravidade das partculas slidas resultando
num lquido lmpido na fase superior e uma lama de alto contedo de slidos na fase inferior
chamada de Sedimentao.
A Figura 1.(a) mostra uma suspenso em uma proveta. Quando o processo comea, as
partculas vo se sedimentando e se estabelecem vrias zonas de concentrao como mostra a
Figura 1.(b).

(a) (b) (c) (d) (e)
Figura 1 Sedimentao batch.

A zona D de slidos sedimentados inclui predominantemente as partculas mais pesadas que
sedimentam mais rapidamente. Com a continuao da sedimentao as alturas de cada zona
variam, como indicam as Figuras 1.(b), 1.(c) e 1.(d). Note que as zonas A e D crescem com a
diminuio da zona B, at que se atinge um ponto em que as zonas B e C desaparecem e todos
os slidos se encontram na zona D, este chamado o ponto crtico de sedimentao, Figura
1.(e).
A partir desse ponto, o processo consiste em uma compresso lenta dos slidos, forando o
lquido para a regio lmpida. A consolidao final do sedimento a parte mais lenta do processo,
sendo a velocidade de sedimentao para esse perodo dada por:
) ( *

= H H i
dt
dH
(1)

Zona A
Zona B
Zona C
Zona D

2
Num sedimentador contnuo esto tambm presentes as quatro (04) zonas indicadas acima,
sendo o lquido lmpido retirado pela parte superior e a lama contendo os slidos pela parte
inferior (Figura 2).

Figura 2 - Sedimentador Contnuo.

Para o processo decorrer satisfatoriamente a velocidade de subida do lquido no sedimentador
deve ser inferior velocidade de deposio das partculas.
possvel atravs do uso de resultados do teste em batelada, dimensionar um sedimentador
contnuo para um produto especificado.

Balano de massa para o slido:
(2) . . . .
0
e
e
C
C
L U C U C L C F = = =
Balano para o lquido entre um nvel qualquer e a sada do sedimentador:
)
1 1
.(
.
)
1 1
.( . )
1 1
.( .
) 1 .( ) 1 .( .
) 1 .( ) 1 .(
0
0
e
e e
e
e
e
C C A
C F
A
V
C C
C F
C C
C L V
C L C
C
C
L V
C L C U V
=
= =
= +
= +

Ento, a equao para A, torna-se:
[ ] (3) ) (M/L ),
1 1
.(
. .
3 *
* *
0
= = C
C C V
C F
A
e
S

A partir da tabela H x , constri-se o grfico:
Overflow de
Lquido Lmpido
Alimentao
Descarga
de
Slidos

3

O projeto deve ser baseado no maior valor de A obtido, isto , no valor mnimo da funo:

(4)
1 1
. .
* *
0
e
S
C C
V
A
C F

3. Equipamentos e Materiais

Sero utilizados na experincia:

Provetas (250 mL) para sedimentao calibradas;
Suspenso de CaCO
3
;
Sulfato de Alumnio;
Cronmetro;
Balana analtica e de prato superior;
gua destilada.

4. Procedimento Experimental

1. Preparar suspenses de CaCO
3
com 30, 40 e 50 g/L em provetas graduadas;
2. Preparar outra suspenso (50 g/L) com 100 ppm de aluminato de sdio;
3. Anotar a altura da interface (entre o lquido lmpido e a suspenso) em funo do tempo,
iniciando as leituras em intervalos de vinte (20) segundos. Aps quatro (04) minutos aumentar
o intervalo para quarenta (40) segundos. Aps dez (10) minutos aumentar o intervalo para
sessenta (60) segundos. Aps vinte (20) minutos aumentar o intervalo para cento e vinte (120)
segundos at completar quarenta (40) minutos de experimento, no mnimo. Para as
concentraes de 50 g/L, completar o experimento aps oitenta (80) minutos, no mnimo;
4. Determinar t
c
e H
c
indiretamente a partir de mtodos grficos.
5. Tomar nota da altura H
, sendo para isso necessrio deixar um (01) dia em repouso.


4
5. Clculos e Anlise dos Resultados

1. Calcule a rea do sedimentador contnuo trabalhando nas condies pretendidas.
2. Procure verificar a validade da equao (1) e determine a constante i representando
graficamente ln (H - H
) versus t = (t t
c
), pois:
(5) ) ln( ) ln( .

= H H H H t i
C

para as trs concentraes.
3. Compare as experincias com e sem sulfato de alumnio.

6. Nomenclatura

A = rea do sedimentador (L
2
)
C = Concentrao de slidos (L
3
slido/L
3
suspenso)
C
0
= Concentrao de slidos na alimentao (L
3
slido/L
3
suspenso)
C
e
= Concentrao de slidos na lama espessa (L
3
slido/L
3
suspenso)
C* = C.
S
= Concentrao de slidos (M slido/L
3
suspenso)
F = Vazo de alimentao (L
3
/)
H = Altura do sedimento no instante t (L)
H
= Altura final do sedimento (L)

i = Constante para uma dada suspenso
L = Vazo de suspenso descendente (L
3
/)
V = Vazo de lquido ascendente (L
3
/)
U = Vazo de lama que deixa o sedimentador (L
3
/)
S
= Massa especfica do slido (M slido/L
3
slido)

7. Bibliografia

1. Coulson e Richardson, Chemical Engineering, vol 2.
2. Foust, Wenzel, Clump, Mauss e Andersen, Principles of Unit Operations.


5
REATOR CONTNUO (CSTR)

Profa. Elizabete Jordo

1. Objetivo
Estudo de um reator tanque contnuo utilizando a reao de hidrlise do acetato de etila.

Seja um reator tanque contnuo, isotrmico, com agitao perfeita, trabalhando a volume
constante. Podemos escrever a seguinte equao do balano de massa para o componente k:

k k k
k
r C C
dt
dC
+ =
0 ,

(1)
na qual: - tempo mdio de residncia;
C
k,0
- concentrao de k na alimentao;
C
k
- concentrao de k no reator;
r
k
- taxa da reao medida em relao a k.

A reao de hidrlise alcalina do acetato de etila :

RCOOR
+ OH- RCOO- + ROH
A + B C + D

uma reao de segunda ordem, ou seja:
B A
C KC r =
(2)
no caso particular de ter-se:
C
A,0
= C
B,0
(concentrao de ster e base iguais na alimentao)
C
A
= C
B
= 0 em t = 0 (concentrao em t = 0 no interior do reator),

A integrao da equao (1) conduz a:
( )
( )
(
(
A A A
A A A A
A A
A
C C C
C C C K C
C C
C
t
, 0 ,
0 , , ,
, 0 ,
,
ln
2
(3)
onde C
A
= Concentrao de ster no interior do reator no tempo suficiente para se atingir o
estado estacionrio.

Para o estado estacionrio possvel obter de (1) que:
K
C K
C
A
A
2
1 ) 4 1 (
2 / 1
0 , +
=
(4)

6

A condutividade especfica de uma soluo de eletrlitos em meio aquoso dada por:
j j j
C z =
(5)
Sendo :
j - mobilidade inica de j (L.mol
-1
.cm
-1
);
Cj - concentrao molar do on j (mol.L
-1
);
Zj carga das partculas.

Tendo-se em conta a estequiometria da reao e que no instante inicial se tem C
A
= C
B
e na
alimentao C
A,0
= C
B,0
e usando ainda a relao:
L =
(6)
onde = constante da clula nas condies de medida;
L = condutncia medida,
possvel estabelecer a seguinte relao:
( )
( ) RCOO OH
Na OH
t
RCOO e
L
L L
C C

+
|
\
|

=

0
0
0
(7)
onde: L
0
= condutncia medida para uma soluo de NaOH de concentrao C
0;

C
0
= concentrao de NaOH na alimentao.


O equipamento a ser usado consta de um reator tanque de ao, com aletas e capacidade
mxima de 6 litros. O reator provido de um agitador mecnico com controle da velocidade de
agitao e de dois bales para armazenamento alimentao dos reagentes. sada de cada
balo esto os rotmetros para controlar a vazo de entrada dos reagentes. sada do reator
existe um sifo junto vlvula de sada para permitir o fluxo contnuo durante todo o experimento,
bem como o eletrodo para medida de condutividade.

4.1 - Proceder lavagem do reator com gua destilada;
4.2 -Preparar 4L de solues aquosas de acetato de etila e hidrxido de sdio com
concentrao de 0,05M;
4.3 -Colocar os reagentes nos respectivos bales de alimentao.
4.4 -Fazer uma curva de calibrao de concentrao versus condutividade usando 200mL de
soluo de NaOH nas concentraes: 0,05 (mesma do reator); 0,03 e 0,02N. No esquecer
de medir a condutividade da gua pura com a respectiva temperatura e retornar para o balo
de alimentao a soluo de concentrao 0,05N;
4.5 -Adicionar ao reator 2,5 L de gua destilada. Verificar se a vlvula de sada est fechada!
4.6 Ligar o agitador ajustando-o para 190rpm;
4.7- Ligar a bomba hidrulica;

7
4.8 Transferir o eletrodo do condutivmetro para o local adequado sada do reator;
4.9- Retirar as mangueiras de alimentao do reator e, no Becker, ajustar as vazes de NaOH
e Acetato de etila em 80 mL/min. Imediatamente aps o incio da entrada de reagentes acione
o cronmetro e registre a variao de condutividade com o tempo e temperatura, at o final da
adio de todo o volume de reagentes necessrio.
4.10 Aps o trmino da experincia, desligar a bomba, o agitador e lavar o reator com gua
destilada. Retirar o eletrodo do reator e retorn-lo gua pura.

5.1 -Apresentar a deduo das equaes (1), (3), (4) e (7).
5.2 -Utilizando as equaes fornecidas, calcular a converso correspondente ao regime
estacionrio. Confirmar o valor por via experimental para cada experimento realizado.
5.3 -Calcular o tempo necessrio para que a variao de concentrao no reator seja de 90%
do estado estacionrio .
5.4 -Apresentar as curvas terica e experimental da variao da concentrao do produto em
funo do tempo e discut-las.
5.5 -Calcular o volume de um reator tubular correspondente ao utilizado no experimento.
5.6 -Discutir os resultados obtidos, tendo em considerao as fontes de erros experimentais e
do modelo.
5.7 -Discutir a validade da equao (5) conforme a curva de calibrao fornecida pelo
responsvel do experimento.

6. Dados Adicionais
OH - RCOO = 0,135 + 2,1.10
-3
(T - 18)
OH + Na = 0,198 + 3,7.10
-3
(T - 18) onde T a temperatura em C.

Experincias anteriores fornecem os seguintes valores da constante da taxa K(L.mol
-1
min
-1
):

T (C) 36 33,5 30 29,5 27 26
K 13,88 10,4 6,59 6,44 4,40 4,39

8

7. Bibliografia
1. Charle G. Hill, An Introduction to Chemical Engineering Kinectics &Reactor Design
John Wiley & Sons, NY, 1977
2. J. M. Smith, Chemical Engineering Kinectics, McGraw-Hill, London, 3
rd
ed., 1981
3. Octave Levenspiel, Chemical Reaction Engineering, John Wiley & Sons, NY, 2
nd
ed., 1962
4. H. Scott Fogler, Elements of Chemical Reaction Engineering, 2
nd
ed., Prentice-Hall Int.
Editions, 1992
5. F.J. Holler e C.G. Enke, em Laboratory Techniques in Eletroanalytical Chemistry, editado por
P.T. Kissinger e W.R. Heineman, 1984, Marcel Dekker, Inc.


9
DESTILAO CONTNUA
Erica Roberta Lovo da Rocha

1. Objetivo
Determinao da altura de recheio equivalente a um prato terico (HETP) e do nmero de
unidades de transferncia (NTU) em uma coluna de destilao.

2. Teoria

A separao de misturas lquidas nos seus constituintes uma das principais operaes da
indstria qumica e petroqumica, e a destilao o mtodo mais correntemente utilizado para
conseguir este objetivo. Um possvel arranjo que proporciona uma grande rea de interface para
transferncia de massa a coluna de recheio. Nestas colunas o vapor subindo contata em
contracorrente o refluxo de lquido que desce. Este processo de contato contnuo, no que difere
das condies operacionais das colunas de pratos, em que o processo de separao por
estgios.
Nas colunas convencionais por estgios, o vapor que sai de um prato est mais rico no
componente mais voltil, do que o vapor que entra. Este mesmo enriquecimento do vapor
ocorrer em uma coluna de recheio em certa altura do recheio, altura esta que na literatura
designada por altura equivalente a um prato terico (HETP). Visto que todas as sees do recheio
so fisicamente anlogas, supe-se que um estgio de equilbrio representado, por uma dada
altura de recheio. Sendo assim, a altura de recheio necessria para qualquer separao que se
deseje dada por:

Altura do recheio = HETP x (nmero de estgios ideais) (1)

Fenske deduziu uma equao para calcular o nmero de pratos, correspondentes operao
sob refluxo total, para uma separao desejada.

N + l = log { (x
A
/x
B
)
D
(x
B
/x
A
)
R
} / log
MED
(2)

onde, N o nmero de pratos, x a frao molar dos componentes da mistura e
MED
a
volatilidade relativa mdia do componente A em relao ao componente B; D indica produto de
topo (produto destilado) e R indica produto de fundo. Se as volatilidades relativas no variarem
muito ao longo da coluna, podemos tomar a mdia aritmtica entre as volatilidades relativas
temperatura do refervedor (
R
) e temperatura do topo (
D
). Para as maiores variaes, utiliza-se
a equao:

MED
= 1 + (
D
-1) (
R
-1) (3)

onde a volatilidade relativa dada por :

AB
= [y
A
/(1-y
A
)][(1-x
A
)/x
A
] (4)


10
Tsung e Coull correlacionaram o nmero de pratos com o NTU, atravs da seguinte
expresso:

NTU / N = [2 /( + 1)] - {( - 1)/[k ( + 1)]} (5)

sendo, k = 0,5 {1 + ln [(1 - x
R
)/(1 - x
D
)] / ln (x
D
/x
R
)} (6)


1. Coluna de destilao de recheio, de 5 cm de dimetro e 80 cm de altura, contendo anis de
Raschig de l cm de dimetro; 2. Divisor de refluxo; 3. Temporizador; 4. Termmetros, 5. Banho
termosttico; 6. Refratmetro.


4.1. Preparao do refratmetro:- ligar o banho termosttico, para manter a temperatura da gua
de circulao no refratmetro a 20
O
C.

4.2. Abrir a vlvula de circulao de gua de refrigerao do condensador da coluna.

4.3. Colocar o controle de aquecimento da manta na posio mxima. Quando o vapor chegar ao
condensador, regular o aquecimento para evitar inundao da coluna e fixar a taxa de
aquecimento que dever permanecer constante durante todo o trabalho experimental.
Enquanto aguarda a coluna atingir estado estacionrio, verificar o funcionamento do
refratmetro.
Preparar amostras e realizar medidas, de modo a construir a curva de calibrao do
refratmetro, para o sistema a ser destilado.

4.4. Manter a destilao sob refluxo total.

4.5. Quando a coluna atingir o equilbrio (aproximadamente meia hora de destilao), retirar uma
amostra do condensador (posicionando o temporizador para retirada total do destilado), e uma
amostra do refervedor. Analisar as amostras no refratmetro.

4.6. Determinar a vazo de condensado (procedimento idntico ao da retirada da amostra).

4.7. Repetir o procedimento para outras razes de refluxo. Mantendo, com o auxilio do
temporizador, diversas razes de refluxo (por exemplo, 4:1, 2:1 e 1:2)

4.8. Podero ser realizadas experincias com o aquecimento em outras posies. Neste caso
repetir todos os procedimentos desde 4.4.


11
4.9. Quando terminar o experimento desligar o aquecimento, mas manter a circulao de gua no
condensador at esfriar o refervedor.


5.1. Deduzir a equao (4) a partir da definio de volatilidade relativa, explicitando as hipteses.

5.2. Deduzir a equao de Fenske, equao (2).

5.3. Atravs da curva de equilbrio do sistema e da linha de operao determinar o nmero de
pratos ideais, utilizando o mtodo de McCabe-Thiele, para as razes de refluxo utilizadas.

5.4. Buscar na literatura uma correlao para o clculo do HETP, e utiliz-la para todas as
condies experimentais. Explicitar a referncia encontrada, bem como as condies de validade
da correlao. Comentar os resultados obtidos.

5.5. Determinar NTUs, a partir dos dados experimentais obtidos, utilizando a equao de Tsung e
Coull, equao (5).

5.6. Fazer uma analise crtica da experincia e dos resultados obtidos.

6. Referncias

Coulson J.M. e Richardson, J.F., Chemical Engineering, 4 ed., 1996
MacCabe e Smith, Unit Operations of Chemical Engineering.
Perry R.H. e Green, D.W., Perrys Chemical Engineers Handbook, 7a ed, 1998
Treybal, R.E., Mass Transfer Operations.
Tsung, Y. e Coull, J., Evaluation of Equilibrium Stages and Transfer Units, Chem. Engng Process,
1950, (fevereiro)

12
DESTILAO BATELADA
Prof
a
. Sandra Lcia da Cruz

1. Objetivo
O objetivo principal do experimento destilar uma mistura etanol/gua visando recuperao
do lcool presente na mistura binria. Posteriormente, deve-se calcular as fraes molares do
lcool utilizando-se os modelos NRTL, Van Laar e Wilson devido a no idealidade do sistema. Os
dados obtidos devem ser comparados em si e com dados tericos encontrados na literatura.

Apesar da tendncia nas indstrias de processos qumicos ser, sempre que possvel, operar
em processos contnuos, as operaes em batelada podem ser, em muitos casos, uma alternativa
vantajosa nos aspectos econmicos e operacionais. Assim, os estudos de processos em batelada
so de grande importncia, principalmente enfocando suas aplicaes pequena indstria, onde
os investimentos so limitados.
A aplicao mais importante da destilao batelada realmente para plantas de pequena
escala, onde o maior volume do equipamento no se torna uma desvantagem frente operao
contnua, com maior eficincia de separao, uma vez que esta requer grande investimento em
tecnologia. Na prtica, observa-se que, com o aumento de capacidade da planta, o custo da
batelada aumenta, devido s dimenses do equipamento, que vo se tornando anti-econmicas, e
do custo de manuteno.
Este tipo de destilao utilizado em plantas de produo em pequena escala, porm com
alto valor agregado, como plantas farmacuticas e teraputicas, na extrao de leos essenciais
de plantas, na concentrao de alguns tipos de princpio ativos e de xaropes medicinais e em
alguns processos petroqumicos.
Freqentemente, unidades fabris de pequeno porte processam produtos variados na mesma
planta, alternando as campanhas. A destilao em batelada permite que isto seja de forma
operacional simples, ao passo que paradas de processos contnuos so de alto custo.
O equipamento em batelada tambm oferece a versatilidade de se obter o produto final com
diferentes especificaes em termos de concentrao, uma vez que na destilao em batelada as
composies variam com o tempo. Tambm uma boa alternativa para processos em que a
destilao requerida ocasionalmente.
Assim, em cada caso, para se operar entre um processo contnuo ou em batelada, deve-se ter
como critrios os aspectos operacionais e econmicos do projeto, sem o estabelecimento de
regras gerais.
Mas, apesar da destilao em batelada ser um sistema simples, tanto na sua concepo
quanto nos aspectos operacionais, as condies de operao variam com o tempo, o que dificulta
a preciso do projeto do equipamento e a previso dos parmetros de operao para a instalao
de sistemas de controle. Alm disso, o sistema em batelada exige um acompanhamento
constante do operador, desde a recarga at a descarga do produto.

Ser utilizada uma coluna de destilao batelada com recheio. Para a anlise da quantidade
de lcool nas amostras ser usado um refratmetro cuja curva de calibrao representada pela
Figura 1. Tambm sero utilizadas pipetas, provetas e erlenmeyers para retirada de amostras das
colunas e para diluies.


13
A mistura aquecida em um refervedor com potncia de 96,68 cal/s, o vapor passa atravs de
uma coluna de recheio. No topo da coluna temos a sada do componente mais voltil, e a
presena de um refluxo, por onde retorna ao processo uma parte do destilado. Lembrando que a
composio de sada dependente do tempo de destilao. O processo de destilao continua
at que o fundo apresente uma pequena concentrao do material mais voltil.
As amostras coletadas sero de 1mL para que no haja alterao de volume durante o
experimento.

As fraes molares das fases lquida e vapor devero ser calculadas e seus grficos devem
ser apresentados. Devido a no idealidade da mistura binria as fraes molares da fase vapor
devem ser calculadas utilizando-se as correlaes de Wilson, Van Laar e NRTL. Esses dados
devem ser comparados entre si e com dados da literatura utilizando clculos de erro. Para o
clculo da presso de saturao (Psat) pode ser utilizada a equao de Antoine. Vale ressaltar
que a discusso sobre os resultados obtidos fundamental, bem como, todos os dados obtidos
para os clculos do coeficiente de atividade () devem ser apresentados.

6. Referncias
Bonsfills, A., Puigjaner, L. Batch Distillation: simulation and experimental validation, Chemical
Engineering and Processing. 2004, 43, 1239-1252.
Coulson, J.M. e Richardson, J.F., Chemical Engineering, vol. 2, 4 ed, 1996.
Diwekar, U.M., Madhavan, K.P. Batch-Dist: a comprehensive package for simulation, design,
optimization and optimal control of multicomponent, multifraction batch distillation columns,
Computers Chem, Eng. 1991, 15, 833-842.
Galindez, H., Fredenslund, A. Simulation of multicomponent batch distillation process, Comput.
Chem. Eng. 1988, 12, 281-288.
Hitch, D.M., Rousseau, R.W. Simulation of Continuous-Contact Separation Processes:
Multicomponent Batch Distillation, Ind. Eng.Chem.Res. 1988, 27, 1466-1473.
Perry R.H. e Chilton, Perrys Chemical Engineers Handbook, 5 ed, 1975
Perry, R. Chemical Engineering Handbook, 4edition , McGraw-Hill.
Reid, R.C., Prausnitz, J.M., Poling, B.E. The properties of gases and liquids, 4 edition,
McGraw-Hill, 1977.
Sandler, S. I. Chemical and Engineering Thermodynamics, 3 edition, John Wiley & Sons, Inc.,
1999.
Sinnott, R.K., Coulson and Richardsons Chemical Engineering, vol 6, 2 ed, 1996.
Treybal, R.E., Mass Transfer Operations, 3 edition, McGraw-Hill, 1982.

14
BIOSSEPARAO

Profa. Snia Maria Alves Bueno
Monitora: Luana Cristina Andrade da Silva

1. Objetivo
Purificao de imunoglobulina G humana (IgG) a partir de uma soluo contendo IgG e
albumina de soro bovino (BSA) por cromatogrfica de troca-inica em gel DEAE-Sepharose
.
Determinao da isoterma de adsoro de BSA e clculo dos parmetros capacidade mxima de
adsoro de BSA em DEAE-Sepharose
e constante de dissociao.

2. Teoria
O estudo da purificao de biomolculas por cromatografia assunto de grande interesse
dentro de diversas reas da Biotecnologia. Dentro da rea de purificao de protenas, a adsoro
em resinas trocadoras de ons uma das tcnicas mais utilizada na atualidade. Esta tcnica
baseia-se na interao eletrosttica entre grupos ionizveis presentes na superfcie das protenas
em soluo com grupos de carga oposta presentes em uma fase estacionria [1]. A carga lquida
da protena varia com o pH do meio onde se encontra e depende do nmero e tipos de grupos R
ionizveis contidos na molcula. A escolha do adsorvnete mais adequado (trocador de ctions ou
trocador de nions) depender, de forma geral, do ponto isoeltrico da protena alvo e do pH em
que se deseja efetuar a adsoro (Figura 1) [1].

Figura 1 Representao esquemtica, de acordo com a carga lquida de uma protena modelo,
do comportamento da adsoro em resinas trocadoras de ons como funo do pH. O pI
corresponde ao ponto isoeltrico da protena. Fonte: Lucena, S. L. Tese de Doutorado. FEQ,
UNICAMP (1999) [2].

Escolhido o adsorvente e as condies mais adequadas para a adsoro, faz-se necessrio a
determinao dos parmetros que descrevem o desempenho do sistema em estudo. Uma das
metodologias mais utilizadas para a obteno de alguns dos principais destes parmetros consiste
no estudo da adsoro em bateladas (frascos agitados) visando determinao de isotermas de
adsoro. Nesse caso, o contato entre as fases realizado de modo que se tenha um estgio de

15
equilbrio. Uma isoterma de adsoro pode ser construda plotando-se na abscissa, valores de
concentrao de soluto em equilbrio na soluo e na ordenada, valores de concentrao de
soluto em equilbrio na superfcie do adsorvente.

No estudo do equilbrio para a adsoro de um componente, o modelo matemtico mais
utilizado, inclusive para correlacionar dados de adsoro de protenas, o modelo de Langmuir
[3], que pode ser descrito na forma (Eq. 1):
* C K
* C . Q
* Q
d
m
+
=
(1)
e pode assumir a forma linearizada (semi-recproca, Eq. 2) [4],
m
d
m
Q
K
* C .
Q
1
* Q
* C
+ =
(2)
onde C* a concentrao de soluto na fase lquida em equilbrio com a fase slida, Q* a
quantidade de soluto adsorvido por unidade de massa ou volume de adsorvente, Q
m
a
capacidade mxima do adsorvente em adsorver o soluto expressa em massa de soluto por
unidade de massa ou volume de adsorvente e K
d
a constante de dissociao efetiva que
descreve o equilbrio da reao de adsoro [4].
Os parmetros Q
m
e K
d
podem ser obtidos a partir do ajuste no linear e linear da equao de
Langmuir. Outra informao importante que pode ser obtida a partir dos dados de adsoro em
batelada em tanques agitados a presena ou no de cooperatividade no fenmeno de adsoro.
Isto pode ser feito analisando-se os dados segundo o modelo de Langmuir-Freundlich (Eq. 3) [4]:

n
d
n
m
*) C ( LF K
*) C .( Q
* Q
+
=
(3)
onde n coeficiente de cooperatividade e K
dLF
a constante do modelo de Langmuir-Freundlich
[3].


- Coluna cromatogrfica contendo 1,0 mL de gel DEAE-Sepharose
;
- Soluo de IgG e BSA em tampo Tris-HCl a 25 mmol/L, pH 7,0 na concentrao a ser
determinada em aula;
- Sistema cromatogrfico de baixa presso;
- Tubos do tipo Eppendorf de 1,5 mL contendo 50 microlitros de gel DEAE- Sepharose
;
- Equipamento de agitao;
- Pipetas automticas e tubos Eppendorf para determinaes analticas;

16
- Soluo estoque contendo albumina de soro bovino (BSA) em tampo Tris-HCl 25 mmol/L,
pH 7,0 na concentrao a ser determinada em aula;
- Soluo tampo Tris-HCl 25 mmol/L, pH 7,0 (tampo de adsoro e equilbrio do gel)
- Espectrofotmetro na faixa visvel de comprimento de onda;
- Soluo (reagente de Bradford) para a determinao da concentrao de protena.


Purificao de IgG humana
Uma coluna cromatogrfica modelo C 10/10 de 1,0 cm de dimetro interno 10,0 cm de altura
(GE Healthcare, EUA) empacotada com 1,0 mL de gel DEAE-Sepharose ser conectada um
sistema de cromatografia de baixa presso, como o representado na Figura 2. O adsorvente ser
equilibrado com o tampo Tris-HCl 25 mmol/L, pH 7,0 a uma vazo de 0,8 mL/min.

Figura 2. Esquema do sistema cromatogrfico de baixa presso. 1) reservatrio de soluo; 2)
bomba peristltica; 3) coluna cromatogrfica; 4) monitor de medida de absorbncia a 280 nm; 5)
coletor de fraes; 6) registrador.

Aps a etapa de equilbrio, 1,0 mL de soluo contendo IgG e BSA a uma concentrao de
protena total a ser determinada ser alimentada na coluna. Em seguida, a coluna cromatogrfica
ser lavada com o mesmo tampo utilizado para equilibrar a coluna com a finalidade de eliminar
as protenas que no foram adsorvidas. A eluio ser feita por acrscimo de 0,5 mol/L de NaCl
no tampo de equilbrio. Finalizada a eluio, a coluna ser regenerada com soluo de hidrxido
de sdio a 50 mmol/L e, finalmente, com gua. Durante todo o experimento, sero coletadas
fraes de 1,0 mL para anlise. As fraes obtidas sero monitoradas a 280 nm, aquelas situadas
nos picos de protena sero agrupadas e analisadas pelo mtodo de Bradford [6] e por
nefelometria.

Isoterma de adsoro de BSA
a) Em tubos Eppendorf, preparar 1,0 mL de solues de BSA nas concentraes 0,5; 1,0; 1,5;
2,0; 3,0; 5,0; 7,0; 10,0; 13,0; 15,0; 17,0 e 20,0 mg/mL, por meio de diluio da soluo
estoque fornecida em tampo de adsoro (25 mmol/L Tris-HCl pH 7,0). Agitar suavemente
as solues no interior dos frascos;

17
b) Com cuidado, pipetar as solues proticas (1,0 mL) e introduzir a soluo para os tubos
eppendorf contendo o gel de troca-inica, colocando-as sob agitao por um perodo de 45
minutos a 1 hora;
c) Anotar a temperatura na qual o experimento desenvolvido;
d) Aps o tempo determinado (garantida a condio de equilbrio), remover a soluo dos tubos
eppendorf para o interior de novos tubos Eppendorf numerados previamente;
e) Determinar, em duplicata, a concentrao de equilbrio das protenas segundo a metodologia
de determinao proposta por Bradford [6]:
- No interior de frascos Eppendorf, adicionar 100 mL da amostra de soluo protica a ser
quantificada e 1000 mL (1,0 mL) da soluo reagente de Bradford [6]. Em um dos frascos,
utilizar 100 mL da soluo tampo no lugar da amostra. Esta soluo ser utilizada como
branco para zerar o espectrofotmetro;
- Agitar suavemente os frascos de modo a garantir a homogeneizao da soluo e aguardar
por dez minutos para efetuar a leitura da absorbncia das amostras;
- Utilizando cubetas de poliestireno, efetuar a leitura das amostras em um espectrofotmetro,
utilizando o comprimento de onda de 595 nm;
- Repetir o procedimento todo para aquelas amostras cujo valor de absorbncia exceder 0,600
unidades. Nesse caso, a amostra protica deve ser diluda em tampo a fim de que a
concentrao de protena medida se enquadre na faixa estipulada;
f) Calcular as concentraes de protena das amostras utilizando a curva de calibrao dada pela
seguinte expresso: C = xx * A
595
, onde C a concentrao de protena da amostra em
mg/mL e A
595
a absorbncia a 595 nm da referida amostra. O valor de xx ser fornecido no
dia do experimento.

5. Elaborao do Relatrio

O relatrio das experincias dever conter:
a) Introduo
b) Princpio do mtodo de Bradford para dosagem de protenas totais
b) Materiais e Mtodos
c) Resultados e Discusso
d) Anlise crtica dos resultados e concluso

O relatrio dever conter ainda:
1. O perfil cromatogrfico, o balano de massa da purificao de IgG, a pureza de IgG obtida no
experimento, o fator de purificao e o rendimento (Colocar a memria de clculo). Discutir
criticamente os resultados obtidos com base na literatura apropriada de cromatografia de troca

18
inica. Comparar os resultados obtidos com o de outros adsorventes comerciais ou com dados
encontrados na literatura pertinente.
2. A isoterma de adsoro de BSA em gel DEAE-Sepharose
.
3. O ajuste de parmetros de equilbrio Q
m
e K
d
da equao de Langmuir na sua forma no-linear
(utilizando o Microcal
TM
Origin
TM
ou outro software para o ajuste), incluindo memria de clculo.
Realizar tambm o ajuste de parmetros de equilbrio Q
m
e K
d
da equao de Langmuir na sua
forma linear. Analisar os parmetros obtidos e comparar com aqueles obtidos para outros
adsorventes de troca inica.
4. Os parmetros de equilbrio Q
m
e K
d(LF)
da equao de Langmuir-Freundlich na sua forma no-
linear (utilizando o Microcal
TM
Origin
TM
ou outro software para o ajuste), incluindo memria de
clculo. Analisar os parmetros obtidos e comparar com aqueles obtidos para outros adsorventes
de troca inica.
5. Discutir os resultados obtidos. (anlise crtica do experimento).

6. Referncias
[1] PESSOA-JR, A.; KILIKIAN, B. V. Purificao de Produtos Biotecnolgicos. 1
a
ed., Editora
Manole Ltda, v. 1. 444 p., 2005.
[2] LUCENA, S. L. Tese de doutorado. Faculdade de Engenharia Qumica, UNICAMP, 1999.
[3] BUENO, S.M.A.; HAUPT, K.; VIJAYALAKSHMI, M.A. Separation of immunoglobulin G from
human serum by pseudobioaffinity chromatography using immobilized L-histidine in hollow
fibre membranes. Journal of Chromatography B, 667 (1995) 57-67.
[4] MANDJINY, S.; VIJAYALAKSHMI, M.A. Quantitation of adsorption capacity of immunoglobulin
G on histidine-aminohexyl Sepharose and determination of affinity constant. Journal of
Chromatography, 616 (1993) 189-195.
[5] BRESOLIN, I. T. L.; BORSOI-RIBEIRO, M.; TAMASHIRO, W. M. S. C.; AUGUSTO, E. F. P.;
VIJAYALAKSHMI, M. A.; BUENO, S. M. A. Evaluation of Immobilized Metal-Ion Affinity
Chromatography (IMAC) as a Technique for IgG1 Monoclonal Antibodies Purification: The
Effect of Chelating Ligand and Support. Applied Biochemistry and Biotechnology, in press.

[6] BRADFORD, M. M. A Rapid and Sensitive Method for a Quatitation of Microgram Quantities of
Proteins Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding. Analytical Biochemistry, 72 (1976) 248-
254.


19
7. Referncias Sugeridas

LUO, Q. E ANDRADE, J. D. Cooperative adsorption of proteins onto hydroxyapatite. Journal of
Colloid and Interface Science, 200 (1998) 104-113.
CATLOGOS DA GE, Sigma, Fluka e Bio-Rad.
COLLINS, C. H. Fundamentos de Cromatografia. Campinas: Editora da UNICAMP, 2006.
HARRIS, E.L.V.; HANGAL, S. Protein purification methods a practical approach, IRL Press, New
York, 1989.
SCOPES, R. K. Protein Purification, principles and practices. NY, Springer Verlag, 1994.


20

ROTEIRO PARA ELABORAO DE RELATRIOS

1. Capa

Dever conter um cabealho, o ttulo do experimento realizado, o nome dos componentes da
equipe e a data de realizao do experimento.

2. Sumrio

Apresentar, de forma organizada, os principais itens do trabalho e as pginas onde se iniciam.

3. Resumo

Apresentar de forma sucinta e objetiva um quadro geral do contedo do trabalho que foi realizado,
indicando a metodologia utilizada, sistema estudado, objetivos e concluses.

4. Nomenclatura

Colocar todas as variveis que se encontram no relatrio, apresentando os smbolos utilizados, o
que elas representam e tambm suas unidades.

5. Introduo

Apresentar uma discusso generalizada do tema abordado, incluindo uma anlise das
informaes bibliogrficas relevantes e proposio dos objetivos gerais e especficos. O princpio
terico envolvido no experimento tambm dever ser abordado, ressaltando a aplicao e
importncia do ponto de vista da Engenharia Qumica.

6. Materiais e Mtodos

Neste item devero ser apresentados todos os equipamentos, instrumentos e reagentes (quando
for o caso) utilizados no experimento, com uma descrio detalhada de suas especificidades, bem
como os modelos utilizados e a metodologia de clculo.
Equipamento: descrever o equipamento (ou montagem) utilizado, apresentando um diagrama
esquemtico do mesmo, com legenda indicando os diversos componentes.
Materiais: indicar quais os materiais usados no experimento e as substncias envolvidas. No caso
de reagentes, especificar fabricante e grau de pureza. No caso de instrumentos, alm do
fabricante, indicar tambm o modelo, a faixa de medida e a incerteza experimental.
Metodologia: descrever detalhadamente todo o procedimento experimental realizado, na
seqncia em que foi realizado, com clareza e objetividade, de modo a permitir a repetio do
experimento nas mesmas condies, por um outro grupo, a fim de observar a reprodutibilidade
dos dados obtidos.

7. Resultados e Discusses

Apresentar todo o memorial de clculo utilizado e os principais resultados obtidos em forma de
grficos ou tabelas. Realizar uma anlise crtica dos resultados obtidos, na mesma ordem de
apresentao dos resultados, ou seja, houve ou no coerncia entre os resultados? H
possibilidade de comparar com resultados contidos na literatura? Os dados medidos
experimentalmente so discrepantes dos dados simulados (quando for o caso)? E quanto s
possveis fontes de erros? Fazer uma anlise dessas fontes e sua influncia sobre os resultados
obtidos.

8. Concluses

Apresentar as principais concluses do trabalho na forma de um resumo curto.

21
9. Sugestes para continuao do trabalho

Indicar sugestes para melhorar o experimento com relao ao equipamento, aos materiais
utilizados, metodologia aplicada e equaes utilizadas. Se possvel, sugerir outros tpicos que
poderiam ser abordados nesse mesmo experimento ou ento outros experimentos que podem ser
realizados a partir desse.

10. Referncias Bibliogrficas

Todos os artigos, livros, catlogos, sites e outras bibliografias consultadas e referenciadas no
texto devem ser listados.

11. Anexos

Aqui poder ser apresentado o detalhamento de todos os clculos realizados na obteno dos
valores apresentados no item de resultados, bem como as medidas experimentais efetuadas.

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, sendo para isso necessrio deixar um (01) dia em repouso.

= Altura final do sedimento (L)

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