Espectrofotometra UV-Visible

Espectro UV-Visible

Espectro de ferruginol
2.5

OH

Absorbancia

1.5
H

Ferruginol

0.5

0 200

250

300

350

400

450

500

550

600

Longitud de onda (nm)

Espectrofotmetros UV-VIS

Fundamento Qumico

La radiacin electromagntica puede comportarse como partcula

La radiacin electromagntica origina excitaciones electrnicas y vibracionales.

Cromferos

10

Los Espectros UV-Visibles dependen del estado fsico y del analito El intervalo de longitudes de onda tiles en el UV-Visible corresponde de 200 a 800 nm

Para cada estado de energa electrnica de una molcula generalmente existen varios estados vibracionales posibles y, a su vez , para cada uno de estos estados vibracionales son posibles numerosos estados rotacionales. 11

Transiciones Electrnicas La absorcin de la radiacin UV o visible corresponde a la excitacin de los electrones externos. Cuando un tomo o molcula absorbe energa, electrones son promovidos desde su estado fundamental a un estado excitado. En el caso de la molcula los tomos rotan y vibran con respecto a los otros. Estas vibraciones y rotaciones tambin tienen energas discretas que estn empacadas sobre cada nivel e energa electrnico. CROMFEROS La absorcin de radiacin UV-visible en el caso de molculas orgnicas se restringe a ciertos grupos funcionales llamados cromferos. Estos contienen electrones de valencia de baja energa excitacin relativa. Los espectros UV-Visible de molculas orgnicas en solucin presentan bandas. Esto se explica por la existencia de estados vibracionales y rotacionales que se superponen a las transiciones electrnica para dar uan combinacin de lneas superpuestas 12

Absorcin por transferencia de carga Complejos inorgnicos presentan bandas de absorcin debido a la tranferencia de electrones desde un grupo donante de electrones a un orbital vaco de un aceptor dando orgen a estado excitado.

Las Transiciones no se observan en UV-visible ya que son transiciones de mayor energa (SOLVENTES) El oxygeno atmosfrico absorve a menores de 200 nm

13

La ampliacin de la seal modulada permite la eliminacin en gran parte de la radiacin parsita

Los instrumentos de doble haz ofrecen la ventaja de compensar tanto las llamadas fluctuaciones mas cortas en la radiacin que salen de la fuente y las derivas del detector y amplificador. Tambin compensa las variaciones grandes en intensidad de la fuente con la longitud de onda. Adems permiten el registro continuo de espectros de transmitancia o absorbancia.

Sistema de Deteccin

16

DETECCIN DE LA RADIACIN

17

18

19

Fenmenos Fsicos y Consecuencias

20

Fenmenos fsicos observables cuando una radiacin atraviesa una solucin

Requerimiento de medir una REFERENCIA para poder medir slo las transiciones electrnicas 21

DISPERSIN DE LA RADIACIN Cuando la radiacin se propaga e incide sobre partculas atmicas o molculas que son pequeas respecto a la longitud de onda de la radiacin, la interferencia destructiva elimina la mayor parte de la radiacin reemitida. Pero una fraccin muy pequea de la radiacin se transmite en todas las direcciones cuya intensidad aumenta con el tamao de la partcula

REFLEXIN DE LA RADIACIN Cuando la radiacin atraviesa una interfase entre medios de diferente ndice de refraccin, parte de la radiacin se refleja. La fraccin reflejada aumenta con la dererencia entre los ndices de refraccin REFRACCIN DE LA RADIACIN

22

Monocromadores

23

Monocromadores Secuenciales de RED o PRISMA La dispersin de la radiacin en la red de reflexin se debe a la difraccin. Mientras que en el caso del prisma es debido a la refraccin.

24

La red tiene una dispersin lineal y prove mayor separacin de longitudes de onda. El prisma tiene una mayor dispersin para longitudes de onda corta que para las largas

25

La radiacin parsita

El haz de radiacin que emerge de un monocromador incluye una proporcin de radiacin parsita de longitud de onda diferente a la ajustada. Para medidas exactas es necesario que la cantidad de esta radiaciones parsitas sea un mnimo. Para determinar la cantidad de haz parsito en un espectrmetro consiste en colocar un filtro que absorba completamente a la longitud de onda de inters y que permite pasar radiaciones de otra longitud de onda de manera inatenuada. Si se encuentra seal en el detector se puede atribuir a las radiaciones parsitas.

26

Monocromadores

El propsito del monocromador es el de separar las longitudes de onda de radiacin proveniente de la fuente, y aislar la longitud de onda de inters. La efectividad del monocromador se mide en trminos de rendimiento de la potencia del haz, la resolucin y el ancho de banda. El ancho de banda es el intervalo de longitudes de onda que emergen del monocromador para un valor dado de .

27

Efecto del ancho de la rendija sobre los espectros A menor ancho menor es la potencia radiante W1/2= 1-2

W1/2= 3/4(1-2)

W1/2= 1/2(1-2)

28

29

Difraccin de Radiacin monocromtica

30

INTERFERENCIAS de La radiacin electromagntica

Interferencia Constructiva

31

Una red para UV-Vis tiene de 1400 a 2000 surcos/mm 1. El ngulo CAB es igual al ngulo i. 2. El ngulo DAB es idntico a r

Para que la interferencia sea constructiva es necesario que los caminos pticos difieran en un mltiplo entero n de

Red de monocromador variable n = d(sen i +sen r) Si 800 nm se encuentra al ngulo r (n = 1), lnea de primer orden, entonces una segunda lnea a 400 nm tambin aparecer al mismo ngulo. Las lneas de orden mayor se eliminan con filtros (vidrio)

Las caras se pueden considerar como una 32 fuente puntual de radiacin

Monocromador del Espectrofotmetro multicanal

33

Espectrmetro de arreglo de diodos Relacin seal ruido alta La duracin y la intensidad de la iluminacin determina tanto la relacin S/R final y el intervalo de exposicin requerido para obtener un espectro. Este intervalo es tambin el tiempo de integracin para la seal. Un tiempo de integracin mas extenso permite una mayor S/R ya que la seal ser mayor .. No hay funcin de integracin en los espectrofotmetros convencionales los cuales acumulan la seal. Por ejemplo, el tiempo total requerido ser de 1000 s para un espectro con 1000 donde se necesita 1 s para medir a una . En este caso, todas los 1000 seales tienen la misma relacin S/R. Pero en los instrumentos multicanales, que tiene un arreglo de 1000 diodos, todas las 1000 seales pueden ser medidas durante 1s, y tomara slo 1/1000 s obtener la relacin S/R que se produce en un Espectrmetro convencional.

34

35

La ventaja de Fellgett n, nmero de espectros

Sx =

Si
i =1

Se multiplica por n el numerador y el denominador y se obtiene

( Sx Si )
Ruido cuadrtico medio =
i =1

R = (Ruido cuadrtico medio)1/2

S = n R

Sx

( Sx Si)
i=1

S = R

Sx ( Sx Si ) 2
i=1 n

Los espectrofotmetros de arreglo de diodos tienen superior relacin S/R porque puede medir muy rpidamente en comparacin con los espectrmetros convencionales 36

Fuentes

37

FUENTE Las fuentes de radiacin mas comunes son la lmpara de deuterio para la regin desde 180 a 350 nm y la lmpara de filamento de tungsteno en la regin desde 330 a 900 nm. La fuente de arco de xenn cubre desde 175 a 1000 nm

38

Escogencia de la longitud de onda para la cuantificacin 1. Desviaciones de la Ley de Beer debido a la radiacin policromtica.

vara poco con

Tenemos un haz formado por dos longitudes de onda, ` y `` Entonces:

40

Cuando realizamos la medida con la radiacin formada por ` y `` tenemos:

41

42

La radiacin parsita

El haz de radiacin que emerge de un monocromador incluye una proporcin de radiacin parsita de longitud de onda diferente a la ajustada. Para medidas exactas es necesario que la cantidad de esta radiaciones parsitas sea un mnimo. Para determinar la cantidad de haz parsito en un espectrmetro consiste en colocar un filtro que absorba completamente a la longitud de onda de inters y que permite pasar radiaciones de otra longitud de onda de manera inatenuada. Si se encuentra seal en el detector se puede atribuir a las radiaciones parsitas.

43

La radiacin parsita disminuye el intervalo lineal de la Ley de Beer

Radiacin parsita surge en el monocromador como resultado de la dispersin y reflexin interna, y puede que no pase por la muestra.

44

A = In-b[In-] + HInb[HIn]
A = 2,06 x 104x 1,00 x 1.12 x 10-5 + 6,30 x 102 x 1,00 x 0,88 x 10-5 A = 0,236

45

Efecto del ruido instrumental en espectrofotometra UV-VIS

1. Un tpico mtodo instrumental de anlisis implica varias medidas experimentales, cada una de las cuales est sujeta a una incertidumbre indeterminada y cada una de ellas contribuye al error indeterminado neto del resultado final
46

Para un nmero limitado de medidas

5 4
47

48