You are on page 1of 90

La Misión del CONAP se define como:

Somos la institución rectora del sistema guatemalteco de áreas protegidas, y de la protección, regulación y fomento del uso sostenible de la biodiversidad en el ámbito nacional, con el propósito de asegurar la permanencia y equilibrio de los bienes y servicios del patrimonio natural para el beneficio de las presentes y futuras generaciones.

Los fines principales del CONAP son:

a. Propiciar y fomentar la conservación y el mejoramiento del patrimonio natural de Guatemala.

b. Organizar, dirigir y desarrollar el Sistema Guatemalteco de Areas Protegidas, SIGAP.

c. Planificar, conducir y difundir la Estrategia Nacional de Conservación de la Diversidad Biológica y los Recursos naturales Renovables de Guatemala.

d. Coordinar la administración de los recursos de flora y fauna silvestre y de la diversidad biológica de la Nación, por medio de sus respectivos órganos ejecutores.

e. Planificar y coordinar la aplicación de las disposiciones en materia de conservación de la diversidad biológica contenidos en los instrumentos internacionales ratificados por Guatemala

f. Constituir un fondo nacional para la conservación de la naturaleza, nutrido con recursos financieros provenientes de cooperación interna y externa.

(Artículo 62, de la Ley de Areas Protegidas)

www.conap.gob.gt

62, de la Ley de Areas Protegidas) www.conap.gob.gt GEF Esta publicación fue posible gracias al apoyo
62, de la Ley de Areas Protegidas) www.conap.gob.gt GEF Esta publicación fue posible gracias al apoyo
62, de la Ley de Areas Protegidas) www.conap.gob.gt GEF Esta publicación fue posible gracias al apoyo
62, de la Ley de Areas Protegidas) www.conap.gob.gt GEF Esta publicación fue posible gracias al apoyo

GEF

Esta publicación fue posible gracias al apoyo financiero del Global Enviormental Facility (GEF) y United Nations Enviormental Program (UNEP).

Orozco, Carlos. 2004. Situación actual de la Biotecnología en Guatemala. Consejo Nacional de Áreas Protegidas. Guatemala. 86 p.

El presente documento es producto del proyecto GUA/02/G21 “Desarrollo del Marco Nacional de Seguridad de la Biotecnología para Guatemala”, ejecutado

por el Consejo Nacional de Áreas Protegidas –CONAP-, a través de la Oficina Técnica de Biodiversidad –OTECBIO-, Financiado por ell Fondo Mundial para el

Medio Ambiente (GEF por sus siglas en inglés) y el Programa de Naciones Unidas para el Medio Ambiente (PNUMA).

Las conclusiones e información expresadas en este documento son exclusiva responsabilidad del Proyecto y puede no coincidir con los del Programa de Naciones

Unidas para el Medio Ambiente.

Publicación patrocinada gracias al apoyo de: GEF-PNUMA

CONSEJO NACIONAL DE ÁREAS PROTEGIDAS

Documento Técnico No. 17 (06-2004)

Director Oficina Técnica de Biodiversidad:

Coordinadora Nacional del Proyecto:

Asistente de Proyecto:

Ing. Giovanni Fernando García Barrios

M. Sc. Ileana Catalina López Gálvez

Jacqueline Valeska Landaverde Leal

Asosores Comité Nacional Coordinador de Bioseguridad:

Nidia Álvarez

MARN

Carlos Alfaro

CMVZ

Víctor Jiménez

MSPAS

Ileana Catalina López Gálvez

PNUMA-CONAP

Autor: Dr. Carlos Orozco Castillo

Revisión de Texto:

M. Sc. Ileana Catalina López Gálvez

Ing. Giovanni Fernando García Barrios

Licda: Cecilia Isabel Cleaves Herrera

Diseño de Portada y Contraportada: Sara Chin

Primera edición: 500 ejemplares

Guatemala, Junio 2004

Consejo Nacional de Áreas Protegidas –CONAP-

5ª. Avenida 6-06, Zona 1, Edificio IPM, 5º, 6º, 7º. Nivel

Teléfonos: (502) 253-2158, 230-4234, 238-0000, 238-1188

Fax: (502) 253- 4141

Pagina web: www.conap.gob.gt

Oficina Técnica de Biodiversidad

otecbio@conap.gob.gt

Todos los derechos reservados:

©CONAP

GEF-PNUMA GUATEMALA

Guatemala, C.A.

SITUACIÓN ACTUAL DE LA BIOTECNOLOGÍA EN GUATEMALA Carlos Orozco Castillo, Ph.D.

SITUACIÓN ACTUAL DE LA BIOTECNOLOGÍA EN GUATEMALA

SITUACIÓN ACTUAL DE LA BIOTECNOLOGÍA EN GUATEMALA Carlos Orozco Castillo, Ph.D.

Carlos Orozco Castillo, Ph.D.

2
2

índice

índice

LISTA DE ACRÓNIMOS Y ABREVIATURAS

6

¿DE DÓNDE SURGE ESTA PUBLICACIÓN

8

RESUMEN EJECUTIVO

9

ÍNDICE DE CUADROS

15

ÍNDICE DE FIGURAS

15

1. ANTECEDENTES

 

21

2. INTRODUCCIÓN

21

3. OBJETIVOS

21

4. MARCO TEÓRICO

22

4.1. DEFINICIÓN DE BIOTECNOLOGÍA

22

4.2. CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

22

 

4.2.1.

TÉCNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

22

4.3. EQUIPO Y PROCEDIMIENTOS

29

 

4.3.1.

PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL

CULTIVO DE TEJIDOS

29

4.4. EMPLEO DE TÉCNICAS IN VITRO PARA LA MEJORA DE CULTIVOS: REQUISITOS EN EL LABORATORIO Y MÉTODOS GENERALES

30

 
 

4.5. CONTROL DE LA CONTAMINACIÓN

33

3
3
 

4.5.1. FUENTES DE CONTAMINACIÓN

33

4.5.2. ESTERILIZACIÓN

34

4.5.2. ESTERILIZACIÓN 34

4.5.3. PREPARACIÓN DEL EXPLANTE

34

4.5.4. PROCEDIMIENTO PARA LA ESTERILIZACIÓN

34

4.5.5. ASEPSIA

36

4.5.6. ANTIBIÓTICOS

37

4.6. CONSERVACIÓN DE GERMOPLASMA

39

 

4.6.1.

TÉCNICAS PARA LA CONSERVACIÓN IN VITRO DE GERMOPLASMA

39

4.7. MARCADORES BIOQUÍMICOS Y MOLECULARES

44

 

4.7.1. MARCADORES BIOQUÍMICOS

44

4.7.2. MARCADORES MOLECULARES

44

4.8. LA INGENIERIA GENÉTICA

47

5. METODOLOGÍA

 

49

6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

50

6.1.

LABORATORIOS, INSTITUCIONES Y/O CENTROS DE ESTUDIOS SUPERIORES VINCULADOS/RELACIONADOS AL USO DE LA BIOTECNOLOGÍA Y/O LA SEGURIDAD DE LA BIOTECNOLOGÍA

50

6.2. TIPOS DE INSTITUCIONES

51

 

6.3. LABORATORIOS POR TIPO DE INSTITUCIÓN

51

6.4. CAPITAL HUMANO PROFESIONAL

52

6.5. CAPITAL HUMANO TÉCNICO Y DE APOYO

52

6.6. INFRAESTRUCTURA

53

6.7. RAMA DE LA BIOTECNOLOGÍA QUE TRABAJAN LOS LABORATORIOS

54

6.8. ÁREA DE LA BIOTECNOLOGÍA QUE TRABAJAN LOS LABORATORIOS

55

6.9. TÉCNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS QUE EMPLEAN LOS LABORATORIOS

55

6.10. TÉCNICAS DE MARCADORES MOLECULARES QUE EMPLEAN LOS LABORATORIOS

56

6.11. TÉCNICAS DE INGENIERÍA GENÉTICA QUE EMPLEAN LOS LABORATORIOS

57

6.12. OBJETIVOS DE LOS LABORATORIOS 57

6.12. OBJETIVOS DE LOS LABORATORIOS

57

4
4

6.13. CIENCIAS CON LAS QUE SE RELACIONAN LOS

LABORATORIOS 58

LABORATORIOS

58

6.14. COLECCIONES DE ESPECIES O VARIEDADES DE ANIMALES Y/O VEGETALES, TANTO VIVOS COMO PRESERVADOS

58

6.15. CONEXIONES A REDES GLOBALES

59

6.16. LABORATORIOS QUE TRABAJAN CON ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS

60

6.17. OBJETIVOS DE TRABAJAR CON ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS

60

6.18. INTRODUCCIÓN DE ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS AL PAÍS

61

6.19. POSIBILIDAD DE INTRODUCIR ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS AL PAÍS

61

6.20. PROGRAMAS Y/O EXPERIENCIA SOBRE EVALUACIÓN DEL IMPACTO SOCIAL QUE PUEDAN UTILIZARSE ANTE LA POSIBILIDAD DE INTRODUCCIÓN DE OVM’s EN PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN O PRODUCCIÓN

62

6.21. MEDIDAS DE SEGURIDAD DE LA BIOTECNOLOGÍA PARA LA REALIZACIÓN DE PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Y/O PRODUCCIÓN

62

6.22. POBLACIÓN O GRUPO SOCIAL META BENEFICIARIO DE PROYECTOS DE BIOTECNOLOGÍA

63

6.23. PLAZO DE LOS PROYECTOS PARA QUE LOS RESULTADOS LLEGUEN A LOS GRUPOS META

63

6.24. RELACIÓN DE LOS PROYECTOS CON COMUNIDADES O PUEBLOS INDÍGENAS

64

6.25. EVALUACIÓN DE IMPACTO AMBIENTAL DE LOS PROYECTOS

64

6.26. EVALUACIÓN DE IMPACTO SOCIAL DE LOS PROYECTOS

65

6.27. RELACIÓN DE LOS TRABAJOS DE INVESTIGACIÓN O PRODUCCIÓN DE LOS LABORATORIOS CON LAS CIENCIAS HUMANÍSTICAS

65

6.28. PROGRAMAS, PROYECTOS Y FUENTE DE FINANCIAMIENTO

66

6.29. SONDEO A EMPRESAS PRIVADAS AGRÍCOLAS QUE NO TIENEN LABORATORIO, PERO QUE TRABAJARON O PIENSAN

6.29. SONDEO A EMPRESAS PRIVADAS AGRÍCOLAS QUE NO TIENEN LABORATORIO, PERO QUE TRABAJARON O PIENSAN

TRABAJAR CON OVM’s A NIVEL DE ENSAYOS DE CAMPO

71

5
5

6.30. CONOCIMIENTO DEL PÚBLICO SOBRE LO QUE ES UN ORGANISMO VIVO MODIFICADO

73

6.30. CONOCIMIENTO DEL PÚBLICO SOBRE LO QUE ES UN ORGANISMO VIVO MODIFICADO 73

6.31. CONOCIMIENTO SOBRE LO QUE ES UN ORGANISMO TRANSGÉNICO

74

6.32. CONOCIMIENTO DEL PÚBLICO SOBRE EL CONSUMO DE ALIMENTOS PROVENIENTES DE OVM’s

74

6.33. CONOCIMIENTO SOBRE LA UTILIZACIÓN DE LOS ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS

75

7. CONCLUSIONES

76

8. RECOMENDACIONES

79

9. BIBLIOGRAFÍA

81

10. APÉNDICE

83

lista de acrónimos y abreviaturas empleadas

lista de acrónimos y abreviaturas empleadas   ABA Acido abscísico ADN Acido desoxirribonucléico AFLP
 

ABA

Acido abscísico

ADN

Acido desoxirribonucléico

AFLP

Amplified Fragment Length Polymorphism

AGROCYT

Fondo para la Investigación Agropecuaria en Ciencia y Tecnología

 

AID

Agencia Internacional para el Desarrollo

 

ANACAFÉ

Asociación Nacional del Café

ARN

Acido ribonucléico

BAP

Bencilaminopurina

BCH

Mecanismo de Intercambio de Información de Bioseguridad

o

C

Grados centígrados

CENGICAÑA

Centro Guatemalteco de Investigación y Capacitación de la Caña deAzúcar

CES

Centro de Estudios en Salud de la UVG

CIAT

Centro Internacional de Agricultura Tropical

CNCB

Comité Nacional de Coordinación de Bioseguridad

CONAP

Consejo Nacional de Áreas Protegidas

2,4-D Ácido 2,4 diclorofenoxiacético

2,4-D

Ácido 2,4 diclorofenoxiacético

6
6

EDTA

Ácido etilendiaminotetraacético

ELISA

Enzime Linked Immunosorbent Assay

FAUSAC Facultad de Agronomía de la USAC

FAUSAC

Facultad de Agronomía de la USAC

Fe

Hierro

FMVZ

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la USAC

FODECYT

Fondo de Desarrollo para la Ciencia y Tecnología

GEF

General Environmental Foundation

g/l

Gramos por litro

Ha

Hectáreas

HGSJDD

Hospital General San Juan de Dios

ICTA

Instituto de Ciencia y Tecnología Agrícolas

INCAP

Instituto de Nutrición de Centroamérica y Panamá

INIA

Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas de Chile

IPGRI

International Plant Genetic Resources Institute

LENAP

Laboratorio de Entomología Aplicada y Parasitología (Escuela de

LNS

Biología de la USAC) Laboratorio Nacional de Salud del MSPAS

M

Micromol

MAGA

Ministerio de Agricultura Ganadería y Alimentación.

m

2

Metros cuadrados

m

3

Metros cúbicos

mg/l

Miligramos por litro

ml

Mililitros

 

mM

Milimolar

m -2 s -2

MS

MSc

MSPAS

NaOCl

No.

ONG

OMS

OTECBIO

OVM

PCR

pH

Ph.D.

PROMECAFE

p/v

RAPD

RFLP

RT-PCR

SCAR

SIDA

SSR

TDR

UNEP

UNR

URL

USAC

UVG

VIH

v/v

%

Metro cuadrado por segundo Murashige y Skoog Magister Scientieae Ministerio de Salud Pública y Asistencia Social Hipoclorito de sodio Número Organización No Gubernamental Organización Mundial de la Salud Oficina Técnica de Biodiversidad del CONAP Organismo Vivo Modificado Polymerase Chain Reaction Potencial de hidrógeno Philosophy Doctor Proyecto de Mejoramiento de Café Peso sobre volumen Random Amplified Polymorphic DNA Restriction Fragment Length Polymorphism Reverse Transcryptase Polymerase Chain Reaction Sequence Characterized Amplified Region Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida Simple Sequence Repeat Special Programme for Research and Training in Tropical Diseases Programa de las Naciones Unidad para el Medio Ambiente Unidad de Normas y Regulaciones del MAGA. Universidad Rafael Landívar Universidad de San Carlos de Guatemala Universidad del Valle de Guatemala Virus de Inmunodeficiencia Adquirida Volumen sobre volumen Porciento

de Guatemala Universidad del Valle de Guatemala Virus de Inmunodeficiencia Adquirida Volumen sobre volumen Porciento
de Guatemala Universidad del Valle de Guatemala Virus de Inmunodeficiencia Adquirida Volumen sobre volumen Porciento
de Guatemala Universidad del Valle de Guatemala Virus de Inmunodeficiencia Adquirida Volumen sobre volumen Porciento 7
7
7
de Guatemala Universidad del Valle de Guatemala Virus de Inmunodeficiencia Adquirida Volumen sobre volumen Porciento 7

¿De dónde surge esta publicación?

¿De dónde surge esta publicación?

El presente documento es producto del proyecto GUA/02/G21 “Desarrollo del Marco Nacional de Seguridad de la Biotecnología para Guatemala”, ejecutado por el Consejo Nacional de Áreas Protegidas –CONAP- a través de la Oficina Técnica de Biodiversidad –OTECBIO-, financiado por el Fondo Mundial para el Medio Ambiente (GEF por sus siglas en Inglés) y el Programa de Naciones Unidas para el Medio Ambiente (PNUMA-UNEP). El período de ejecución del proyecto fue de noviembre del 2002 a julio del 2004.

El “Desarrollo del Marco Nacional de Seguridad de la Biotecnología (MNSB) para Guatemala” es un proyecto impulsado por el GEF como una “Estrategia inicial para ayudar

a los países a prepararse para la entrada en vigor del Protocolo

de Cartagena sobre la seguridad de la biotecnología”, así como proveer un Marco regulatorio técnico administrativo, legal y de consulta pública que vele por la diversidad biológica y la salud de los guatemaltecos.

La Agenda 21 acordada por la Conferencia de las Naciones Unidas para el Ambiente y Desarrollo (UNCED, por sus siglas en inglés) en 1992 en Río de Janeiro, establece previsiones para el manejo ambiental de la biotecnología. En la introducción al capitulo 16, se reconoce que “aunque la biotecnología no puede proveer soluciones a todos los problemas fundamentales de ambiente y desarrollo, si podría, sin embargo, contribuir sustancialmente a un desarrollo sustentable”.

El capítulo 12 de la referida Agenda también enfatiza que la comunidad mundial puede obtener muchos beneficios de la biotecnología si ésta la desarrolla y utiliza
comunidad mundial puede obtener muchos beneficios de la biotecnología si ésta la desarrolla y utiliza adecuadamente. ElEl capítulo 12 de la referida Agenda también enfatiza que la

uso y liberación al ambiente de Organismos Genéticamente

Modificados (OGM) resultantes de la biotecnología moderna podría tener impactos negativos para la conservación y uso sustentable de la diversidad biológica. Por lo tanto ésta agenda, busca garantizar la seguridad en el desarrollo, aplicación, intercambio y transferencia de la biotecnología, a través de acuerdos internacionales basados en la evaluación y manejo del riesgo.uso y liberación al ambiente de Organismos Genéticamente El uso seguro de la biotecnología moderna también

El uso seguro de la biotecnología moderna también es una preocupación en la Convención sobre Diversidad Biológica (CDB). Esta convención reconoce que, si es desarrollada y

utilizada con adecuadas medidas de seguridad para el ambiente

y la salud humana, la biotecnología puede contribuir al logro

de los objetivos de la Convención. En sus artículos 8(g) y 19(3) exhorta a las partes a establecer medidas de control en la liberación de los OVM y la necesidad de establecer un protocolo apropiado para garantizar la conservación y uso sustentable de la diversidad biológica.

El Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnología del Convenio sobre Diversidad Biológica, adoptado en enero del 2000 fue aprobado por el Honorable Congreso de la República de Guatemala el 17 de septiembre de 2003 y ratificado por el poder ejecutivo el 13 de octubre del mismo año. Actualmente el Protocolo de Cartagena está en Cancillería del Ministerio de Relaciones Exteriores pendiente de depositarse en el seno de la Secretaría de las Naciones Unidas.

El protocolo ha sido elogiado como un importante instrumento que proporciona un marco normativo internacional para reconciliar las necesidades respectivas de protección del comercio y del medio ambiente en la industria mundial en rápido crecimiento de la biotecnología moderna. De acuerdo con el principio precautorio contenido en el Principio 15 de la Declaración de Río sobre el Medio Ambiente y Desarrollo, el objetivo del Protocolo es:

“Contribuir a garantizar un nivel adecuado de protección en la esfera de la transferencia, manipulación y utilización seguras de los organismos vivos modificados resultantes de la biotecnología moderna que puedan tener efectos adversos para la conservación y la utilización sostenible de la diversidad biológica, teniendo también en cuenta los riesgos para la salud humana, y centrándose concretamente en los movimientos transfronterizos”.

El proyecto vino a consolidar las capacidades nacionales para la instrumentación del Protocolo de Cartagena sobre Bioseguridad. Uno de los principales logros del proyecto fue la creación del Comité Nacional de Coordinación de Bioseguridad –CNCB- mediante resolución No. ALC/14/2003 de Secretaría Ejecutiva del Consejo Nacional de Áreas Protegidas –CONAP-. El –CNCB- está conformado entre otros por el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación –MAGA, el Ministerio de Economía -MINECO-, el Ministerio de Ambiente y Recursos Naturales -MARN-, el Ministerio de Relaciones Exteriores –MINEX-, el Ministerio de Salud Pública y Asistencia Social –MSPAS-, el Ministerio de Educación –MINEDUC-, el Consejo Nacional de Áreas Protegidas –CONAP-, Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología - CONCYT-, Academia, Mesa Nacional Alimentaria y varios representantes de la Sociedad Civil.

Durante la primera fase de ejecución del proyecto se realizaron cinco consultorías con el propósito de realizar un diagnóstico de la situación actual de la biotecnología en Guatemala, priorizar la diversidad biológica del país en riesgo potencial por la introducción de organismos vivos modificados, elaborar un inventario y análisis de normativa en el tema, establecer un análisis de competencias institucionales y una base de datos para organizar la información.

Asimismo, se realizaron veintidós talleres a nivel metropolitano y regional con los diferentes actores de la sociedad civil y gobierno donde se socializaron los resultados de las cinco consultorías de la fase de diagnóstico con el propósito de sensibilizar e informar a los guatemaltecos en el tema. Posteriormente se procedió a consultar a los mismos grupos sobre los elementos para la elaboración de una propuesta de iniciativa de ley que regule los organismos vivos modificados. El resultado de este proceso de consulta es el anteproyecto de iniciativa Ley de Seguridad de la Biotecnología Moderna para Guatemala.

resumen ejecutivo

resumen ejecutivo

La presente publicación se basa en un estudio referente

a

la situación actual de la Biotecnología en Guatemala.

gubernamentales (8 laboratorios), 8 privadas (10

invernaderos, con un total de 2,718 m 2 , 39 autoclaves,

52

cuanto al número de expertos los resultados indican

cámaras de flujo laminar y 14 termocicladores. En

 

laboratorios) y 5 académicas (9 laboratorios). Las

El mismo se derivó de la necesidad de cumplir con los acuerdos sobre el Protocolo de Cartagena, acerca de la seguridad de la biotecnología, cuyo propósito establece “Contribuir a garantizar un nivel adecuado de protección en la esfera de la transferencia,

capacidades existentes en materia de Biotecnología son: 199 ambientes (áreas de trabajo dentro de los laboratorios), con un área total de 12,597 m 2 , 28 cuartos de crecimiento con un área de 908 m 2 , 12

manipulación y utilización seguras de los OVM´s". El

estudio contó con el apoyo de UNEP, GEP y CONAP.

 

70

profesionales con nivel de licenciatura, 18 con grado

Dado que en Guatemala, además de la Biotecnología Moderna, se están usando otras técnicas biotecnológicas, en diferentes instituciones, con distintos propósitos, en las áreas de: salud humana, producción vegetal y animal, se consideró importante incluir también la

Los objetivos del estudio en mención fueron: elaborar

de maestría y 15 con grado de doctorado. Además, laboran en éste campo 87 técnicos y 66 personas de apoyo. El estudio indica que, hasta el momento, hay 106 proyectos y/o programas, tanto en ejecución como finalizados.

De los 27 laboratorios, 18 trabajan en el área de Cultivo

 

situación actual en el país en el uso de todas estas herramientas y procedimientos biotecnológicos.

de Tejidos, 13 con Marcadores Moleculares y 2 con Ingeniería Genética. Algunos laboratorios trabajan

un diagnóstico actual de la biotecnología en Guatemala

varias áreas simultáneamente por lo que el número

un diagnóstico actual de la biotecnología en Guatemala varias áreas simultáneamente por lo que el número

y

realizar un inventario de recurso humano y físico

total es de 33 laboratorios. Existe una gran gama de

9
9

con que cuenta el país en el campo de la biotecnología.

ciencias relacionadas con los laboratorios de

Para ello, se reunieron datos e información sobre la situación actual de la Biotecnología en Guatemala, a

Biotecnología, tanto de la rama vegetal, animal, como humana, fundamentalmente la primera y la segunda con propósitos de mejoramiento genético y producción,

animal, como humana, fundamentalmente la primera y la segunda con propósitos de mejoramiento genético y producción,

través de una boleta de encuesta, la cual fue revisada

y

la tercera con fines de prevención de enfermedades

y

aprobada por la coordinación general de OTECBIO.

y

mejoramiento de la salud. Los laboratorios están en

Así también se hicieron entrevistas personales en empresas que no tienen laboratorio, pero que realizaron ensayos de campo con OVM´s. Paralelamente se hizo un sondeo en una muestra de la población para conocer su grado de conocimiento de la Biotecnología. Seguidamente se tabularon los resultados y se hizo el análisis y discusión de los mismos, de los cuales se

buena medida relacionados con algunas de las ciencias humanísticas, por ejemplo: Sociología (11 laboratorios), Economía (9 laboratorios), Pedagogía (8 laboratorios), Antropología (5 laboratorios) y Psicología (5 laboratorios). Esto demuestra que en los laboratorios están concientes de la importancia de la Biotecnología en el área humanística y social.

derivaron las conclusiones y recomendaciones correspondientes. Los resultados, se presentan en forma resumida en la matriz de tabulación que incluye cuatro tablas, que se presentan en la parte final del resumen ejecutivo.

En cuanto a inventarios/colecciones de espe- cies/variedades/animales y vegetales, tanto vivos como preservados, 14 laboratorios indicaron que sí tienen colecciones y de éstos, 13 poseen bases de datos y 14 tienen conexiones a redes globales.

De los resultados obtenidos, se infiere el análisis siguiente: de acuerdo al trabajo realizado, se encontraron

La mayoría de proyectos trabajan con fondos propios

27 laboratorios vinculados o relacionados al uso de la

o

provenientes de donantes nacionales e internacionales

Biotecnología y/o la seguridad de la Biotecnología, pertenecientes a 17 instituciones, de las cuales 4 son

ONG´s. La mayoría de laboratorios trabajan en el ámbito de la diversidad biológica, tanto en la rama

y

animal, humana, como la vegetal; en donde se observa

especialmente el uso de las áreas de Cultivo de Tejidos

y Marcadores Moleculares para estudios de diversidad

biológica; por ejemplo: genética de poblaciones, variabilidad genética, caracterizaciones, identificación de genotipos, etc.

De los 27 laboratorios, 22 indican que tienen un grupo social meta beneficiario. Los laboratorios que respondieron positivamente mencionan a los siguientes grupos: caficultores, pequeños y medianos productores, estudiantes, granjeros y finqueros, productores y exportadores de berries, población centroamericana, población guatemalteca susceptible de contraer la enfermedad de Chagas, productores de caña de azúcar y consumidores. De acuerdo con los programas de Biotecnología encontrados, la participación del público de manera directa es nula. El público participa, pero

de forma indirecta; por ejemplo, en el caso de la salud humana, hay grupos o poblaciones que son utilizadas como elementos para la prueba de tratamientos médicos,

o en otros casos, como en el área de Cultivo de Tejidos, los agricultores llevan muestras de plantas para ser

cultivadas y probadas en sus campos de producción.los agricultores llevan muestras de plantas para ser De los 27 laboratorios, únicamente siete indican que

De los 27 laboratorios, únicamente siete indican quepara ser cultivadas y probadas en sus campos de producción. sus proyectos tienen relación con comunidades

sus proyectos tienen relación con comunidades o pueblos indígenas. Esto refleja que, en general, la Biotecnología no está dirigida, en especial, a los pueblos indígenas. Únicamente un laboratorio señala que hace estudio de impacto ambiental, específicamente en el campo de la Protección Vegetal en la UVG, y lo hace mediante la evaluación de daños producidos por enfermedades vegetales en cultivos y dispersión de sus vectores, a nivel de campo. En el caso de impacto social solamente dos laboratorios lo hacen, siendo éstos los del INCAP, con evaluación de tipo cualitativo, cuantitativo y sistematización.De los 27 laboratorios, únicamente siete indican que De 27 laboratorios encuestados, únicamente uno hace

De 27 laboratorios encuestados, únicamente uno hace evaluación y/o gestión de riesgo a nivel de OVM´s, pero en el laboratorio. A nivel de campo sólo dos empresas indicaron haber realizado una evaluación de riesgo, de acuerdo con los requerimientos que les solicitó la UNR del MAGA.

La situación actual del país indica que el uso de OVM´s es el siguiente: investigación (3 laboratorios), uso confinado (2 laboratorios) y evaluación de riesgo (1

laboratorio). A nivel de campo existen dos empresas

que no tienen laboratorio, pero que realizaron ensayos

de campo y cuya cosecha y rastrojos fueron incinerados.

Siempre en términos de realidad de la situación de OVM´s, a nivel de laboratorios únicamente un laboratorio importó una bacteria recombinante, para uso confinado. Dos laboratorios han hecho sus propias

transformaciones, clonaciones y transferencia de genes.

A nivel de campo dos empresas introdujeron en el

pasado intencionalmente 4 OVM´s, con fines de investigación, cumpliendo con los requisitos del Área Fitozoogenética de la UNR del MAGA. Al final del ciclo todos los materiales fueron incinerados, por lo que no se puso en riesgo, en ningún momento el

patrimonio genético del país. El ámbito actual de los OVM´s refleja que sólo tres laboratorios están trabajando con ellos, perteneciendo dos a la UVG, y

el otro al LENAP, y lo hacen básicamente con fines

de investigación. En la UVG, un laboratorio hace transformación, clonación, y transferencia de genes

resistentes al virus de papaya (Carica papaya); el cual

es el laboratorio de Protección Vegetal. Otro Laboratorio

de la UVG, que es un laboratorio del CES, hace aislamientos de genes de Plasmodium y tripanosomas; transformándolos, utilizando Escherichia coli, para ser clonados y transferidos a los vectores de las enfermedades malaria y dengue. En cuanto al LENAP, está produciendo Taq ADN polimerasa, usando una bacteria recombinante de E. coli introducida al país. Esto ratifica, que la Ingeniería Genética está incipiente en Guatemala, a nivel de laboratorio; pero sus fines son también claramente de carácter benéfico, desde el punto de vista social. Todos los laboratorios señalan que no tienen intención de importar o exportar OVM´s; sin embargo, dos laboratorios están, y piensan seguir produciendo OVM´s. De acuerdo al diagnóstico realizado, las prioridades nacionales, con relación a OVM´s son salud y protección vegetal.

Los laboratorios de Microbiología y Virología del INCAP, son los únicos laboratorios, a nivel nacional, que cuentan con un programa o experiencia sobre

evaluación de impacto social que se puede utilizar ante

la posibilidad de introducción de un OVM. En cuanto

a OVM´s, actualmente no existe ningún programa o experiencia sobre evaluación de impacto ambiental.

Únicamente 22 laboratorios poseen medidas de seguridad de la Biotecnología para la realización de

Cuadro 1. de Resumen Ejecutivo. Síntesis de información de los laboratorios que formaron parte del estudio realizado.

sus proyectos de investigación y/o producción. La mayoría de estos laboratorios tienen niveles de seguridad 1 y 2. Solamente un laboratorio (LNS) tiene nivel de seguridad 3.

El grado de conocimiento público sobre lo que es un OVM reflejó que la mayoría de las personas no conoce este tema.

El cuadro 1, en este resumen, muestra una síntesis de la investigación realizada.

 

Área

invernadero

100

600

200

210

40

400

480

138

250

300

2718

INFRAESTRUCTURA

No.

Invernadero

1

2

1

1

1

2

1

1

1

1

12

Área

Cuartos

crecimiento

20

100

16

20

24

20

57.5

200

200

68

26

20

48

38

50

907.5

No.

Cuartos

crecimiento

1

4

1

1

2

1

2

5

5

1

1

1

1

1

1

60

28

 

Área

Total

900

800

325

72

81

63

800

200

255

2500

2500

315

52

60

100

1600

72

144

38

1200

118

252

90

2

12597

#

Ambiente

5

22

2

4

1

6

8

4

8

25

25

10

4

6

4

10

2

6

3

16

8

7

11

5

199

CAPITAL HUMANO

Apoyo

2

3

1

1

2

6

12

6

3

1

3

1

2

18

1

66

Técnico

2

2

1

1

1

4

2

2

5

1

2

3

2

3

2

13

2

37

3

87

PhD

 

1

1

1

2

1

1

2

6

15

MSc

2

1

1

1

1

2

1

1

1

4

2

1

18

 

LIC

1

1

3

1

1

1

3

2

2

3

2

1

1

16

4

2

2

2

10

2

5

3

2

70

 

TIPO

INST.

G

G

A

A

A

A

P

A

P

P

P

P

P

P

A

P

A

A

A

A

G

G

G

G

27

 

LABORATORIO

ICTA QUETZALTENANGO ICTA BÁRCENA (2) FMVZ URL FAUSAC MARC. MOLEC. FAUSAC CULT. TEJ. CENGICAÑA UVG- PROTEC. VEG INGENIO MAGDALENA INGENIO LA UNIÓN INGENIO PANTALEÓN INGENIO SANTA ANA ANACAFÉ JARDINES MIL FLORES USAC, ESC. BIOLOGÍA INCAP, MICROBIOLOGÍA Y VIROLOGÍA (2) UVG-ESTUDIOS DE GEN POBLACIONES UVG - LEISH MANIASIS UVG - ANÁLISIS DE AGUA UVG - CENT. DE EST. SALUD LAB. NAC. SALUD (2) HGSJDD LAB. CLÍNICO HGSJDD - MED. NUCLEAR HNA - UNIDAD QUEMADOS

TOTALES

11
11

Cuadro 1. continuación

12
12

COLECCIONES

SI

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

1

1

14

NO

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

13

OBJETIVOS

PROD.

COM

 

1

1

1

1

1

1

6

INV

1

2

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

1

2

1

1

1

23

DOC

 

1

1

1

1

1

2

1

1

1

10

ÁREA

IG

 

1

1

2

MM

 

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

13

 

CT

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

18

 

Rama

Biotec.

V

VV

An

V

V

V

V

An V

V

V

V

V

V

V

An

HH

AN

H

Am H

H

HH

H

H

H

EQUIPO

Termociclad

 

1

1

2

1

1

2

1

4

1

14

Flujo

Laminar

3

5

2

1

2

1

5

2

1

1

5

3

3

1

3

1

1

1

3

3

4

1

52

 

Auto-

claves

1

5

1

1

1

1

2

1

2

2

1

1

1

1

2

2

2

2

2

4

2

2

39

 

ICTA QUETZALTENANGO ICTA BÁRCENA (2) FMVZ URL FAUSAC MARC. MOLEC. FAUSAC CULT. TEJ. CENGICAÑA UVG- PROTEC. VEG INGENIO MAGDALENA INGENIO LA UNIÓN INGENIO PANTALEÓN INGENIO SANTA ANA ANACAFÉ JARDINES MIL FLORES USAC, ESC. BIOLOGÍA INCAP, MICROBIOLOGÍA Y VIROLOGÍA (2) UVG-ESTUDIOS DE GEN POBLACIONES UVG - LEISH MANIASIS UVG - ANÁLISIS DE AGUA UVG - CENT. DE EST. SALUD LAB. NAC. SALUD (2) HGSJDD LAB. CLÍNICO HGSJDD - MED. NUCLEAR HNA - UNIDAD QUEMADOS

TOTALES

Cuadro 1. continuación

PIENSA

OVM

SI

 

0

INTRO

NO

1

2

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

1

2

1

1

1

27

HA TRABAJADO

 

SI

 

1

1

OVM

 

NO

1

2

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

1

2

1

1

1

26

TRABAJA

 

SI

 

1

1

1

3

OVM

NO

1

2

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

2

1

1

1

24

 

GLOBALES

SI

1

2

1

1

1

1

1

1

2

1

13

REDES

NO

 

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

14

DATOS

DE BASE

SI

NO

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

1

13

1

 

ICTA QUETZALTENANGO ICTA BÁRCENA (2) FMVZ URL FAUSAC MARC. MOLEC. FAUSAC CULT. TEJ. CENGICAÑA UVG- PROTEC. VEG INGENIO MAGDALENA INGENIO LA UNIÓN INGENIO PANTALEÓN INGENIO SANTA ANA ANACAFÉ JARDINES MIL FLORES USAC, ESC. BIOLOGÍA INCAP, MICROBIOLOGÍA Y VIROLOGÍA (2) UVG-ESTUDIOS DE GEN POBLACIONES UVG - LEISH MANIASIS UVG - ANÁLISIS DE AGUA UVG - CENT. DE EST. SALUD LAB. NAC. SALUD (2) HGSJDD LAB. CLÍNICO HGSJDD - MED. NUCLEAR HNA - UNIDAD QUEMADOS

TOTALES

13
13

* los números en la parte superior de las tablas de la matriz corresponden a los números de las respectivas preguntas en la boleta de encuesta (ver apéndice).

Cuadro 1. continuación

14
14
 

SOC

1

1

1

2

1

2

1

11

CIENCIAS HUMANÍSTICAS

ECO.

 

2

1

1

1

1

2

9

PSI.

 

2

1

1

1

5

DER.

 

0

PED.

 

1

1

1

1

2

1

1

8

ANT.

 

2

1

2

5

19*

SI

 

2

1

3

NO

1

2

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

24

18*

NO SI

 

1

1

1

2

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

1

2

1

1

1

26

17*

NO SI

 

2

1

1

2

1

7

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

20

 

SI

1

2

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

2

1

1

1

22

16*

NO

 

1

1

1

1

1

5

15*

NO SI

1

2

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

1

2

1

1

1

22

 

1

1

1

1

1

5

14*

NO SI

 

1

1

1

2

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

2

1

1

1

1

2

1

1

1

26

 

ICTA QUETZALTENANGO ICTA BÁRCENA (2) FMVZ URL FAUSAC MARC. MOLEC. FAUSAC CULT. TEJ. CENGICAÑA UVG- PROTEC. VEG INGENIO MAGDALENA INGENIO LA UNIÓN INGENIO PANTALEÓN INGENIO SANTA ANA ANACAFÉ JARDINES MIL FLORES USAC, ESC. BIOLOGÍA INCAP, MICROBIOLOGÍA Y VIROLOGÍA (2) UVG-ESTUDIOS DE GEN POBLACIONES UVG - LEISH MANIASIS UVG - ANÁLISIS DE AGUA UVG - CENT. DE EST. SALUD LAB. NAC. SALUD (2) HGSJDD LAB. CLÍNICO HGSJDD - MED. NUCLEAR HNA - UNIDAD QUEMADOS

TOTALES

índice de cuadros y figuras

índice de cuadros y figuras

CUADROS Cuadro 1. Relación entre presión, temperatura y tiempo de autoclaveado, cuando el autoclave tiene presión

35

Cuadro 2. Tiempo mínimo de autoclaveado según volumen de medio de cultivo

35

Cuadro 3. Algunos ejemplos de los procedimientos que se usan para la desinfección de explantes

38

Cuadro 4. Otros ejemplos de soluciones desinfectantes usadas en la preparación de

38

66

FIGURAS Figura 1. Dos tipos de ambientes de dos laboratorios visitados. A. ambiente con medidas de bioseguridad en el Laboratorio Nacional de Salud; B. ambiente de laboratorio de marcadores moleculares en el ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

50

 
 

Figura 2. Número de instituciones, por sector, dedicadas a la Biotecnología en Guatemala. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

51

15
15
 
 

Figura 3. Número de instituciones, por sector, dedicadas a la Biotecnología (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

51

Figura 4. Número de laboratorios por tipo de institución. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

51

Figura 5. Número de laboratorios por tipo de institución (expresado en porcentajes). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

52

Figura 6. Capital humano profesional (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

52

Figura 7. Número de profesionales, según grado académico, trabajando actualmente en Biotecnología. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

52

Figura 8. Personal técnico y de apoyo que laboran en el campo de la Biotecnología. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

52

Figura 9. Personal técnico y de apoyo que laboran en el campo de la Biotecnología (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

53

Figura 10. Ambiente de sala de preparación de medios en el laboratorio de Biotecnología del ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

53

Figura 11. Ambiente de cuarto de crecimiento en el laboratorio de cultivo de tejidos del ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

53

Figura 12. Vista general de un invernadero en la URL. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

53

Figura 13. Equipo básico en un laboratorio de Biotecnología. A. Termociclador en el laboratorio de Marcadores Moleculares del ICTA; B. Cámara de Flujo Laminar en el laboratorio de Cultivo de Tejidos del ICTA; C. Autoclave en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la URL. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

54

Figura 14. Número de laboratorios por rama de la Biotecnología que trabajan. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

54

Figura 15. Número de laboratorios por rama de la Biotecnología que trabajan (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

54

Figura 16. Número de laboratorios por área de la Biotecnología que trabajan. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

55

Figura 17. Número de laboratorios por área de la Biotecnología que trabajan (expresado en porcentaje). (Fuente: el autor,

55

Figura 18. Número de laboratorios por técnica de Cultivo de Tejidos empleada.

(Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,55

55

Figura 19. Número de laboratorios por técnica de Cultivo de Tejidos empleadaempleada. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 55 (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos,

(expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,56

56

Figura 20. Número de laboratorios que utilizan las técnicas de Marcadores Moleculares. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

56

Figura 21. Número de laboratorios por técnica de Marcadores Moleculares empleada (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

56

Figura 22. Número de laboratorios por técnica de Ingeniería Genética empleada (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

57

Figura 23. Número de laboratorios por técnica de Ingeniería Genética empleada (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

57

Figura 24. Número de laboratorios según sus objetivos. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

58

Figura 25. Número de laboratorios según objetivos que persiguen (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

58

Figura 26. Número de laboratorios y su relación con algunas de las ciencias más importantes. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

58

Figura 27. Número de laboratorios y su relación con algunas de las ciencias más importantes (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

58

Figura 28. Número de laboratorios que poseen colecciones de especies o variedades de animales y/o vegetales, tanto vivos como preservados. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

59

Figura 29. Número de laboratorios que poseen colecciones de especies o variedades de animales y/o vegetales, tanto vivos como preservados (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

59

Figura 30. Número de laboratorios que poseen bases de datos de sus colecciones (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

59

Figura 31. Número de laboratorios que poseen bases de datos de sus colecciones (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

59

Figura 32. Número de laboratorios que poseen conexiones a redes globales. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

59

Figura 33. Número de laboratorios que poseen conexiones a redes globales (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

60

Figura 34. Número de laboratorios que trabajan con Organismos Vivos Modificados

Figura 34. Número de laboratorios que trabajan con Organismos Vivos Modificados

(Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

60

17
17

Figura 35. Número de laboratorios que trabajan con Organismos Vivos Modificados (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

60

que trabajan con Organismos Vivos Modificados (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 60

Figura 36. Número de laboratorios por objetivos de trabajar con Organismos Vivos Modificados. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

61

Figura 37. Número de laboratorios por objetivos de trabajar con Organismos Vivos Modificados (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

61

Figura 38. Número de laboratorios que han introducido OVM´s al país. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

61

Figura 39. Número de laboratorios que han introducido OVM´s al país (expresado en porcentajes). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

61

Figura 40. Número de laboratorios que tienen planificado introducir OVM´s al país. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

61

Figura 41. Número de laboratorios que tienen planificado introducir OVM´s al país (expresado en porcentajes). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

61

Figura 42. Número de laboratorios con programas y/o experiencia sobre evaluación del impacto social que puedan utilizarse ante la posibilidad de introducción de OVM´s en proyectos de investigación o producción. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

62

 

Figura 43. Número de laboratorios con programas y/o experiencia sobre evaluació del impacto social que puedan utilizarse ante la posibilidad de introducción de OVM´s en proyectos de investigación o producción (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

62

Figura 44. Número de laboratorios que aplican alguna medida de Bioseguridad. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

62

Figura 45. Número de laboratorios que aplican alguna medida de Bioseguridad (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

62

Figura 46. Número de laboratorios que tienen una población o grupo social meta de sus proyectos. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

63

Figura 47. Número de laboratorios que tienen una población o grupo social meta de sus proyectos (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

63

Figura 48. Ejemplos de grupos sociales meta de algunos de los laboratorios encuestados. A. Finca “Esquipulas”, Guanagazapa, Escuintla ; B. Finca “Pretoria”, Guanagazapa, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

63

Figura 49. Número de laboratorios y plazo de proyectos para que los resultados lleguen a los grupos meta. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

63

Figura 50. Número de laboratorios y plazo de proyectos para que los resultados

Figura 50. Número de laboratorios y plazo de proyectos para que los resultados

18
18

lleguen a los grupos meta (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

64

porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 64   Figura 51. Número de laboratorios cuyos proyectos
 

Figura 51. Número de laboratorios cuyos proyectos tienen o no relación con comunidades o pueblos indígenas. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

64

Figura 52. Número de laboratorios cuyos proyectos tienen o no relación con comunidades o pueblos indígenas (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

64

Figura 53. Comunidades indígenas que reflejan la importancia de orientar los beneficios de la biotecnología hacia estas poblaciones. A. Finca “Pretoria”, Guanagazapa, Escuintla ; B. Finca “Pretoria”, Guanagazapa, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

64

Figura 54. Número de laboratorios que incluyen en sus proyectos una evaluación de impacto ambiental. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

65

Figura 55. Número de laboratorios que incluyen en sus proyectos una evaluación de impacto ambiental (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

65

Figura 56. Número de laboratorios que hacen evaluación de impacto social en sus proyectos

65

Figura 57. Número de laboratorios que hacen evaluación de impacto social en sus proyectos (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

65

Figura 58. Número de laboratorios por ciencia humanística que se relacionan sus proyectos. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

65

Figura 59. Número de laboratorios por ciencia humanística que se relacionan sus proyectos (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

66

Figura 60. Ensayo de campo de maíz del evento biotecnológico Yieldgard. Resistencia a Lepidópteros. A. Empresa Cristiani Burkard, finca “Las Vegas”, Tiquisate, Escuintla ; B. Empresa Cristiani Burkard, finca “Las Vegas”, Tiquisate, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

72

Figura 61. Ensayo de campo de algodón del evento biotecnológico Liberty. Resistencia a glufosinato de amonio. Empresa “Algodones Mayas S.A.”, finca “El Naranjo”, Masagua, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

73

Figura 62. Ensayo de campo de algodón del evento biotecnológico Liberty. Selección de progenies resistentes al herbicida Liberty (glufosinato de amonio). Empresa “Algodones Maya S.A.”, finca “El Naranjo”, Masagua, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

73

Figura 63. Porcentaje del público que considera saber o no que es un OVM. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

73

Figura 64. Porcentaje del público que considera saber que es un Organismo Transgénico. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

74

del público que considera saber que es un Organismo Transgénico. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

Figura 65. Porcentaje del público que considera saber o no si está consumiendo

19
19

alimentos provenientes de OVM´s. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

75

alimentos provenientes de OVM´s. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 75

Figura 66. Porcentaje del público que considera saber o no sobre la utilización de los OVM´s. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

75

Figura 67A. Identificación de muestras en el Laboratorio Nacional de Salud. (Fuente: Licda. Eyda de Campollo,

83

Figura 68A. Cabinas de seguridad en el Laboratorio Nacional de Salud (Fuente: Licda. Eyda de Campollo,

83

Figura 69A. Medidas de Bioseguridad en el Laboratorio Nacional de Salud. (Fuente: Licda. Eyda de Campollo,

83

Figura 70A. Laboratorio con nivel 3 de seguridad en el Laboratorio Nacional de Salud. (Fuente: Licda. Eyda de Campollo,

83

Figura 71A. Condiciones mínimas de Bioseguridad en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la URL. (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre,

83

Figura 72A. Aspecto general de un ambiente de trabajo en el Laboratorio Nacional de Salud. (Fuente: Licda. Eyda de Campollo,

83

Figura 73A. Cuarto de crecimiento del laboratorio de Cultivo de Tejidos del ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

84

Figura 74A. Espectrofotómetro de luz ultravioleta en el laboratorio de Marcadores Moleculares del ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

84

Figura 75A. Detalle de cámara de flujo laminar en laboratorio de Cultivo de Tejidos de URL. (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003)

84

Figura 76A. Carga de gel de electroforesis en el laboratorio de Marcadores Moleculares de FAUSAC. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

84

Figura 77A. Estufa con agitación magnética y potenciómetro en laboratorio de Cultivo de Tejidos de URL. (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003)

84

Figura 78A. Transiluminador en el laboratorio de Marcadores Moleculares de ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

84

Figura 79A. Enraizamiento de piña en laboratorio de Cultivo de Tejidos de ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

84

Figura 80A. Planta de chipe en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

84

Figura 81A. Planta cactácea in vitro en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)84 84

84

Figura 82A. Planta de mora in vitro en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de URL. (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003)84

84

Figura 83A. Planta de camote in vitro en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la

84

Figura 84A. Plantas de café in vitro en laboratorio de Cultivo de Tejidos de ANACAFÉ. (Fuente: Ing.Agr. Amauri Molina, 2002)

84

Figura 85A. RAPD en gel de agarosa en cultivo de café en laboratorio de FAUSAC. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D.,

86

Figura 86A. SSR en gel de poliacrilamida (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 1999)

86

Figura 87A. AFLP en gel de poliacrilamida. (Fuente: manual del kit de AFLP,

86

Figura 88A. Detección de colonias recombinantes en laboratorio de Marcadores Moleculares de FAUSAC. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 1999)

86

1. antecedentes

1. antecedentes

A

principios del año 2000 se definieron acuerdos sobre

biotecnología que sean viables e idóneos, Guatemala

el

Protocolo de Cartagena, acerca de la seguridad de

necesita contar con una amplia perspectiva de lo que

la

biotecnología, cuyo propósito establece “Contribuir

los científicos, agricultores y empresarios están llevando

a

garantizar un nivel adecuado de protección en la

a

cabo realmente en los sectores relacionados con la

esfera de la transferencia, manipulación y utilización seguras de los organismos vivos modificados resultantes

biotecnología y la seguridad de la biotecnología dentro de sus fronteras. En ese contexto, el estudio sobre la

de la biotecnología moderna que puedan tener efectos adversos para la conservación y la utilización sostenible de la diversidad biológica, teniendo también en cuenta los riesgos para la salud humana, y centrándose

utilización y situación de la biotecnología y Organismos Vivos Modificados (OVM´s), en el país, proporcionará orientación sobre la forma de evaluar los mecanismos de seguridad en el uso de la biotecnología en el país

concretamente en los movimientos transfronterizos.”

y

el estado del conocimiento y disponibilidad de

En la búsqueda de sistemas jurídicos-administrativos de adopción de decisiones y de participación popular de la población en la esfera de la seguridad de la

información sobre la manipulación, transporte y utilización de los OVM´s de los diferentes grupos de opinión que tendrán que desempeñar un papel en la elaboración de un Marco Nacional de Seguridad.

2. introducción

de un Marco Nacional de Seguridad. 2. introducción El presente estudio se enmarca dentro del proyecto

El presente estudio se enmarca dentro del proyecto

Todos los estudios indicados, incluyendo el presente,

financiero del Programa de las Naciones Unidas Para

Una de las primeras fases del proyecto consistió en

el presente, financiero del Programa de las Naciones Unidas Para Una de las primeras fases del

No. GUA/02/G21, titulado “Desarrollo del Marco Nacional de Seguridad de la Biotecnología para

el Medio Ambiente (UNEP) y el Fondo Mundial para el Ambiente (GEF), cuyo objetivo principal es la

21
21

Guatemala”, y fue realizado en forma conjunta con

preparación del Marco Nacional de Seguridad de la

Guatemala”, y fue realizado en forma conjunta con preparación del Marco Nacional de Seguridad de la

otros estudios, incluidos dentro de dicho proyecto, de una manera integral y paralela, tales como: “Análisis de la Priorización de la Diversidad Biológica Guatemalteca en Riesgo Potencial por la Introducción y Utilización de la Biotecnología, Especialmente la Biotecnología moderna, como lo es el uso de OVM´s”; así como el “Estudio del Sistema Jurídico Regulatorio del Uso de la Biotecnología en el País”; y la “Formulación y Organización de una Base de Datos para el Manejo y Consulta de la Información Generada”.

tuvieron el apoyo institucional del Consejo Nacional de Áreas Protegidas (CONAP) por medio de la Oficina Técnica de Biodiversidad (OTECBIO), con el apoyo

Biotecnología para Guatemala, de acuerdo a las disposiciones pertinentes del protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnología.

reunir datos e información sobre la situación actual de la Biotecnología en Guatemala, y el análisis y discusión de estos resultados. Dado que en Guatemala, además de la Biotecnología Moderna, se están usando otras técnicas biotecnológicas, en diferentes instituciones, con distintos propósitos, en las áreas de: salud humana, producción vegetal y animal, se consideró importante incluir como esta también la situación actual en el país en el uso de todas estas herramientas y procedimientos biotecnológicos.

3.

objetivos

herramientas y procedimientos biotecnológicos. 3. objetivos 3.1. Elaborar un diagnóstico actual de la Biotecnología en

3.1. Elaborar un diagnóstico actual de la Biotecnología en Guatemala

3.2. Realizar un inventario de recurso humano y físico con que cuenta el país en el campo de la Biotecnología.

4. marco teórico

4. marco teórico

4.1. DEFINICIÓN DE BIOTECNOLOGÍA

4.2.1. TÉCNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

 

La BIOTECNOLOGÍA se define como la: “utilización de organismos vivos, modificados o no, con aplicación de técnicas biológicas, para la producción de bienes y servicios”. La BIOTECNOLOGÍA se divide en tres grandes áreas que son:

Algunos cultivos importantes no se reproducen sexualmente debido a que son altamente heterocigóticos y a que sus descendientes son atípicos; por otra parte, la reproducción asexual permite mantener plantas

• Un bajo coeficiente de multiplicación.

a) Cultivo de Tejidos Vegetales.

genéticamente idénticas al cultivar padre. En el caso de las plantas de cultivo, tales como los árboles frutales,

b) Marcadores Moleculares.

los plátanos, los tubérculos, las legumbres y los

c) Ingeniería Genética. (George,

ornamentales que producen pocas semillas o ninguna,

 

1993).

la multiplicación vegetativa es la única forma de reproducción. Como puede verse en el ejemplo de los

 

4.2.

CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES.

claveles, la horticultura tradicional se basa en el empleo

El CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES se define como: “ciencia (o arte) de hacer crecer tejidos, órganos o células de plantas, aislados de una planta madre y

de grandes propágulos como medio de multiplicación, éste método tiene dos grandes desventajas, a saber:

cultivados sobre un medio artificial” (George, 1993). • Transmisión de enfermedades, particularmente virus, a

cultivados sobre un medio artificial” (George, 1993).

• Transmisión de enfermedades, particularmente virus, a través de las partes vegetativas de las plantas

22
22

Entre los USOS o APLICACIONES que tiene el Cultivo de Tejidos Vegetales podemos mencionar los

(FAO-OIEA, 1985).

siguientes: A. Cultivo de puntas de brotes (ápices y

siguientes:

A. Cultivo de puntas de brotes (ápices y

Mejoramiento Genético. Mediante la aplicación individual o conjunta de las siguientes técnicas:

meristemos), propagación de clones y eliminación de agentes patógenos.

cultivo de embriones, cultivo de anteras, variación somaclonal, cultivo de callos, cultivo de suspensiones celulares, cultivo de protoplastos, ingeniería genética (transformaciones o transferencia de genes).

Conservación de Germo-plasma. Para lo cual se utilizan las técnicas de: microtuberización, crioconservación y mínimo crecimiento.

• Limpieza de Patógenos. Mediante la utilización del cultivo de meristemos.

• Propagación Masiva. Utilizando las técnicas:

germinación de semillas, microinjertación, cultivo de ápices (brotes o puntas), cultivo de nudos (microesquejes) e inducción de brotes.

Las técnicas de cultivo de tejidos brindan un nuevo enfoque a la reproducción clonal de las plantas de cultivo. El cultivo de puntas de vástagos aislados, el llamado cultivo meristemático, es una tecnología importante de la reproducción in vitro, frecuentemente denominada microreproducción. La punta del vástago se extrae quirúrgicamente de la planta y se utiliza como explante en el cultivo in vitro. De las plantas sanas se pueden extraer “explantes” más grandes, de hasta 5 milímetros, que se utilizan para la reproducción; mientras que para la eliminación de patógenos se utilizan pequeñas estructuras meristemáticas de hasta 0.5 milímetros. La estructura meristemática consiste en una cúpula meristemática y varios primordios de hojas. La pequeña punta del vástago se corta cuidadosamente bajo el estereomicroscopio. Para evitar que se seque se transfiere inmediatamente, con una aguja fina, a la superficie de los medios nutrientes. El meristemo aislado es una estructura autónoma que, en

un ambiente nutritivo adecuado, da origen a un vástago. Generalmente, se inducen yemas axilares en medios de citoquinina y durante el subcultivo el vástago forma un conjunto de ramas. La mayoría de los cultivos

numerosas especies hortícolas, éste es el caso de los árboles frutales. Estas técnicas también constituyen un instrumento potencial para la mejora de cultivos tropicales (FAO-OIEA, 1985).

 

reproducidos vegetativamente están sistemáticamente contaminados con uno o más patógenos. Las vides,

B. Cultivo de embriones cigóticos.

por ejemplo, pueden ser atacadas por 15 virus distintos que reducen drásticamente su rendimiento. La termoterapia se ha utilizado eficazmente para obtener plantas sin virus. Este método se basa en la inactivación térmica de los virus causando poco o ningún daño en la planta huésped. A veces se requiere una exposición a altas temperaturas durante largo tiempo. En las plantas contaminadas, el meristemo apical, generalmente, no contiene virus o es portador de bajas concentraciones. Para obtener plantas sin virus las puntas de los meristemos pueden ser aisladas y cultivadas in vitro. Los vástagos se extraen en condiciones asépticas de las plantas en crecimiento activo. El procedimiento se realiza bajo el estereomicroscopio, ya que para la eliminación de los virus se necesitan explantes muy pequeños. La estructura misma consiste en una cúpula meristemática y una parte de primordios de hojas. Dependiendo de su concentración, los reguladores de

La extracción y cultivo de embriones de plantas superiores fue uno de los primeros métodos eficaces de aplicación de técnicas in vitro. Con embriones aislados es posible desarrollar estructuras de plantas completas. Esta técnica tiene importantes aplicaciones en la fitotecnia. Un embrión maduro puede cultivarse fácilmente en medios nutrientes sencillos. La principal ventaja del cultivo de embriones es, sin embargo, la posibilidad de obtener plantas, a partir de embriones inmaduros, en una etapa temprana del desarrollo. El medio de cultivo proporciona los nutrientes necesarios, simulando así la función del endosperma. Durante el desarrollo in vitro el embrión tiene la capacidad metabólica de sintetizar las hormonas vegetales endógenas y, por consiguiente, no es necesario que el medio nutriente contenga un regulador de crecimiento exógeno. Entre otros, los aminoácidos, las sustancias

cereales. La aplicación más útil del cultivo de embriones

exógeno. Entre otros, los aminoácidos, las sustancias cereales. La aplicación más útil del cultivo de embriones

crecimiento determinan la reproducción de las puntas de los vástagos. La dominancia apical está controlada

complejas, o los extractos vegetales naturales, pueden promover el desarrollo de vástagos y raíces. Las

23
23
promover el desarrollo de vástagos y raíces. Las 23 por la interacción de las hormonas vegetales

por la interacción de las hormonas vegetales (reguladores del crecimiento). La punta de un meristemo da origen a un vástago con bajas concentraciones de hormonas. Las concentraciones de hormonas no

plantas derivadas de embriones constituyen un valioso material de cultivo, especialmente en el caso de los

cigóticos, es la hibridación remota. La fertilización

equilibradas, y elevadas, promueven la formación de

y

el desarrollo inicial del embrión tienen lugar en

callos. Las citoquininas intensifican, generalmente, la ramificación axilar. La regeneración de yemas adventicias tiene lugar en medios ricos en citoquininas. Los vástagos desarrollados en presencia de una citoquininina carecen, generalmente, de raíces. Para obtener plantas completas, los vástagos deben transferirse a un medio de enraizamiento que contiene, generalmente, auxina. Las plantas bien enraizadas están en condiciones de ser transplantadas al suelo. Se

muchos cruces interespecíficos e intergenéricos. Como consecuencia del desarrollo endospérmico anormal, el embrión híbrido muere prematuramente, pero los embriones deben cortarse antes de que se produzca el aborto y cultivarse in vitro. Esta técnica se ha utilizado ampliamente para producir híbridos económicamente útiles tales como el triticale, que es la primera especie cereal artificialmente creada por el hombre (FAO- OIEA, 1985).

 

extrae el medio de las raíces y se cultivan las plántulas en varios sustratos. La humedad debe mantenerse a

C. Cultivo de callos y células.

niveles elevados durante varios días después del transplante. Las plantas sin virus, derivadas de las

En las plantas, las células diferenciadas conservan su

puntas de los vástagos, son vigorosas y crean la base

capacidad para volver a entrar en la fase meristemática

para la obtención de clones de rendimiento elevado.

y

formar una masa no organizada del tejido llamada

Actualmente, las técnicas in vitro pueden utilizarse para la reproducción de plantas, la fitotecnia con fines de man-tenimiento y la eliminación de patógenos de

callo. Prácticamente todas las partes de la planta pueden formar el callo en ambientes nutrientes y hormonales favorables. La médula del tallo del tabaco es un sistema

 
 

modelo para estudiar el desarrollo y la diferenciación del callo. Los explantes se colocan sobre la superficie del medio de cultivo que contiene cantidades exactamente equilibradas de auxinas y citoquininas. En el plazo de dos a tres semanas, el callo se reproduce sobre la superficie del explante. El subcultivo continuo sobre medios que poseen la misma composición

las hormonas, lo que es típico de los tejidos habituados.

corriente para obtener colonias de células separadas consiste en mezclar las alícuotas del cultivo líquido y el agar fundido que se enfrían a una temperatura de 35oC. La mezcla se vierte rápidamente en una placa Petri. La suspensión celular y la técnica del cultivo en placa son medios útiles demostrados para aislar mutantes en las plantas superiores (FAO-OIEA, 1985).

hormonal garantiza el desarrollo continuo del callo. La diferencia entre los distintos tipos de callos reside en las necesidades hormonales durante el cultivo a largo plazo. Algunos de ellos son independientes de

El régimen de cultivo influye sobre la contextura del callo. Existen dos tipos de callos, a saber: friables y compactos. Los callos friables pueden dispersarse fácilmente en el medio líquido para obtener una suspensión celular. Los trozos de callos en el medio líquido se colocan en un agitador. Para dispersar completamente éstos agregados y grupos celulares, así como las células separadas, hay que pasar la suspensión por tamices de acero inoxidable. La suspensión celular se cultiva en el medio líquido agitado. Básicamente existen dos tipos de cultivos: los efectuados por lotes

D. Regeneración de plantas.

Muchos cultivos de tejidos vegetales pueden regenerar plantas completas. Existen dos procesos morfogenéticos que conducen a la regeneración de la planta, a saber:

la organogénesis y la embriogénesis somática. La diferenciación organogenética supone la formación de yemas de vástagos en el tejido cultivado, que puede inducirse cambiando la razón auxina/citoquinina; sin embargo, las necesidades de reguladores de crecimiento exógenos varían en los distintos sistemas de cultivo de tejido. El ciclo de la regeneración de la planta completa termina con el enraizamiento del vástago. A condición de que se coloque en el medio apropiado la célula vegetal somática, puede convertirse en una

y los efectuados por agitación . Se prefieren los planta completa de la misma forma

y

los efectuados por agitación. Se prefieren los

planta completa de la misma forma que un embrión

24
24

agitadores giratorios. La suspensión celular en desarrollo se subcultiva en medios frescos. Se necesitan

cigótico. El fenómeno de la embriogénesis asexual está controlado por los factores de crecimiento que

subcultivos de crecimiento rápido para mantener la dependen de las características del material vegetal.

subcultivos de crecimiento rápido para mantener la

dependen de las características del material vegetal.

dispersibilidad de la suspensión y reducir la agregación celular. El material vegetal, el régimen de cultivo y la composición hormonal de los medios influyen sobre

Los embriones somáticos maduros se convierten en plantas completas que se pueden transplantar al suelo. La transferencia de tejidos a las condiciones que

la

forma de crecimiento de los cultivos. La densidad

contribuyan a la organogénesis conduce, en primer

celular elevada favorece el crecimiento rápido y la producción de biomasa. Los agregados celulares se producen, comúnmente, en cultivos más viejos. El desarrollo de los cultivos de células vegetales en suspensión se mide, generalmente, contando las células; para ello es sumamente útil un hematocitómetro. La magnitud del crecimiento en suspensión también puede expresarse como volumen celular total o incremento del peso con agua. Inicialmente, el cultivo atraviesa por una fase de retardo, seguida de una fase de crecimiento exponencial y, después de tres a cuatro generaciones celulares, los cultivos entran en una fase estacionaria. La viabilidad de las células cultivadas puede estimarse mediante varios métodos de coloración. Existen numerosas técnicas de cultivo en placas que pueden utilizarse para cultivar una variedad de células vegetales. La suspensión celular puede cultivarse en una placa fina sobre el medio sólido. La técnica

lugar, a la diferenciación de estructuras localizadas semejantes a los meristemos. Estos meristemoides son unidades monopolares, generalmente vascularizadas. Las hormonas del crecimiento determinan si los explantes o los callos regeneran vástagos o raíces. Ambos órganos, es decir, los vástagos y las raíces, rara vez se producen simultáneamente. Por éste motivo se separan los vástagos diferenciados y se transfieren a los medios de enraizamiento que tienen una composición hormonal distinta. Las plantas enraizadas se trasplantan a medios no estériles. La morfogénesis in vitro está controlada principalmente por la razón auxina/citoquinina. Cuando los niveles de ambos reguladores son iguales se produce, generalmente, un desarrollo no organizado de callos. Las concentraciones relativamente elevadas de auxinas favorecen la diferenciación radicular y, cuando las cantidades de citoquininas son más elevadas, se promueve la

regeneración de vástagos. Muy frecuentemente los vástagos se enraizan sobre medios de auxina, sin embargo, éste modelo no puede generalizarse. El fenómeno de la embriogénesis en la suspensión celular cultivada constituye una excelente prueba de la totipotencia de las células de las plantas superiores. Es muy probable que cada embrión se derive de una sola célula. Los embriones somáticos pasan por etapas en las que adquieren forma globular y de torpedo. Una característica típica de las poblaciones de embriones somáticos es la amplia gama de tamaños y de etapas de desarrollo por las que atraviesan; además, la embriogénesis somática es, algunas veces, repetitiva, y de los embriones en maduración surgen otros nuevos. La capacidad morfogenética del cultivo celular es extremadamente elevada. Los embriones asexuales maduran y comienzan a germinar inmediatamente en el cultivo. Dado que los embriones son unidades

E. Inestabilidad genética de las células

poliploidización es el proceso más común durante la inducción y el desarrollo de callos. La poliploidía in vitro está relacionada con la endomitosis o la endoreduplicación. Las células poliploides representan una fracción permanente de tejidos no organizados. Algunas de ellas alcanzan un grado extremadamente elevado de poliploidía. La presencia de aneuploidía en células cultivadas también está bien documentada. La fragmentación nuclear es frecuente. En diferentes cultivos de callos y células se han observado cambios careotípicos como consecuencia de aberraciones cromosómicas. A veces hay fragmentos tricéntricos, cromosomas rezagados y puentes cromosómicos. Actualmente el análisis detallado de las estructuras cromosómicas se realiza mediante las pruebas técnicas de coloración, tales como: la formación de Bandas de Gimpsa y el intercambio de cromatidios hermanos (FAO-OIEA, 1985).

bipolares, se forman vástagos y raíces. Las plantas derivadas de embriones se trasplantan al suelo después

F. Variabilidad genética de los regeneradores.

de un corto período de cultivo in vitro. Recientemente, se ha conseguido regenerar plantas a partir de células somáticas en muchos cultivos económicamente importantes. Esta técnica constituye un nuevo

En las plantas regeneradas in vitro también puede encontrarse una notable variabilidad. En la población de regenerantes se producen cambios fenotípicos en

también puede encontrarse una notable variabilidad. En la población de regenerantes se producen cambios fenotípicos en

instrumento para la reproducción vegetal y la fitotecnia. En el caso del maíz, al igual que en el de otros cereales,

las características morfológicas, fisiológicas y agronómicas. La transmisión de las características a la

25
25
La transmisión de las características a la 25 el callo embriogénico puede inducirse sobre medios de

el callo embriogénico puede inducirse sobre medios de auxina. Este nuevo sistema ofrece excelentes posibilidades de regeneración en masa de plantas. Los regenerantes del maíz pueden convertirse en un valioso material de reproducción (FAO-OIEA, 1985).

cultivadas.

generación siguiente se ha demostrado, tanto en las progenies reproducidas en forma sexual como en las reproducidas en forma vegetativa. La variabilidad genética en el sistema in vitro, que se denomina variación somaclonal, puede aplicarse al cultivo de plantas reproducidas en forma vegetativa, como en el caso del ajo. Se dice que las plantas reproducidas por semillas, tales como el maíz, también pueden

Los cultivos in vitro son objetos adecuados para los estudios citogenéticos. La heterogeneidad citológica es una característica típica de los cultivos de callos y células de la mayoría de las especies vegetales. El origen de la variación cromosómica está relacionada con el tipo de explante y las condiciones de cultivo. Algunos componentes del medio nutriente, como por ejemplo 2-4-D, influyen sobre la formación de las células que tienen un nivel más elevado de ploidía. La

modificarse genéticamente in vitro. En la población de regenerantes de cultivos de tejidos se han observado variantes morfológicas parecidas a mutantes de un solo gen. Mediante la manipulación in vitro puede inducirse una nueva variabilidad genética. Las posibilidades del sistema aumentan con los métodos de selección de células. Ya se está demostrando la aplicabilidad de la genética de las células somáticas y las técnicas de cultivo de células para la mejora de cultivos (FAO- OIEA, 1985).

G. Androgénesis in vitro y producción de haploides.

En el cultivo de anteras, la androgénesis es sumamente importante para la producción haploide de muchas especies de cultivos. El tabaco fue la segunda especie, después de la Datura, en la que se utilizó eficazmente el cultivo de anteras para la producción haploide en masa. Las anteras sólo son sensibles en ciertas fases del desarrollo que dependen del genotipo y las condiciones del cultivo. Los signos externos, tales como la aparición de la corola del cáliz, pueden utilizarse para seleccionar la fase adecuada de las yemas. Tras la esterilización de la superficie, se abren los capullos y se retiran cinco estambres. Cada antera debe separarse de su filamento para evitar la formación de callos a partir de los tejidos somáticos. Las anteras intactas se colocan sobre la superficie de los medios nutrientes. En el caso del tabaco, la androgénesis tiene lugar en medios sencillos. El carbón es útil para absorber inhibidores del agar. En los últimos años se han realizado progresos en la mejora de la técnica de cultivo de anteras en los cereales, especialmente en el arroz, la cebada y el trigo; sin embargo, los procedimientos todavía son muy empíricos y los resultados no pueden aún generalizarse. El éxito del cultivo de anteras, enpara la producción haploide de muchas especies de cultivos. El tabaco fue la segunda especie, después para la producción haploide de muchas especies de cultivos. El tabaco fue la segunda especie, después

el caso de los cereales, depende, predominantemente, del genotipo de las plantas donantes. Las condiciones de cultivo podrían mejorarse en el caso de cada genotipo, pero ésta labor es bastante tediosa. El estado fisiológico de la planta en el momento de la excisión de las anteras también influye sobre las posibilidades de desarrollo de las microsporas. Un factor descisivo es el aislamiento de las anteras en la fase adecuada de desarrollo del polen. Muy frecuentemente se utilizan medios específicos, en forma líquida, complementados con hormonas del crecimiento y otros componentes. Existen suficientes indicios del importante papel que corresponde a la pared de las anteras en el desarrollo del embrión polínico. En el caso de la mayoría de las especies vegetales la fase polínica adecuada para la inducción de la androgénesis es la comprendida entre inmediatamente antes de la primera mitosis del polen y durante la misma. En las primeras fases del cultivo de anteras del tabaco las microsporas embriogénicas inician la división repetitiva, forman estructuras multicelulares en la cavidad de las anteras que pasan por todas las fases del desarrollo embrionario y dan origen a cientos de embriones polínicos. Durante lasaún generalizarse. El éxito del cultivo de anteras, en etapas ulteriores del cultivo, las paredes de

etapas ulteriores del cultivo, las paredes de las anteras se rompen y dentro de la cavidad polínica germinan embriones polínicos. Después de 20 a 40 días, aparecen en el cultivo de anteras plántulas verdes. El desarrollo directo del polen que da origen a plantas completas sólo se produce en algunas especies, mientras que en otras, se produce el proceso de androgénesis indirecta, que abarca la proliferación de microsporas en el callo y la regeneración de plantas por organogénesis. Este fenómeno se observó, por ejemplo, en los cereales. Las plantas haploides se trasplantan al suelo, donde continúan desarrollándose hasta alcanzar la madurez. Una característica típica de los haploides es la esterilidad, debida a meiosis irregulares. Para obtener plantas fértiles es necesario duplicar el número de cromosomas, lo que se realiza, generalmente, mediante un tratamiento de colchicina. La diploidización da lugar a líneas plenamente homo-cigóticas que constituyen un material de reproducción sumamente valioso. Dado el creciente aumento de la población mundial, la necesidad de producir cada vez más alimento se ha convertido en un gran desafío. La técnica del cultivo de tejidos vegetales es un instrumento pode- roso que, en manos de botánicos fitotécnicos, puede ayudar a solucionar el problema del hambre en el mundo (FAO-OIEA, 1985).

H. Micropropagación.

Si el cultivo de tejidos consiste en cultivar asépticamente diferentes explantes constituidos por fracciones de un tejido u órgano que se extrae de la planta, la micropropagación es prácticamente una multiplicación masiva in vitro. Actualmente, la micropropagación se practica con éxito en especies hortícolas (Murashige, 1978) ornamentales (Hughes, 1981) y, en especies leñosas (Thorpe, 1983). En general las ventajas de la micropropagación son las siguientes:

• Incremento acelerado del número de plantas derivadas por genotipo.

• Reducción del tiempo de multiplicación.

• Posibilidad de multiplicar grandes cantidades de plantas en una superficie reducida, a bajos costos y en tiempos económicamente costeables.

• Mayor control sobre la sanidad del material que se propaga.

• Facilidad para transportar el material in vitro de un país a otro, con menos restricciones aduaneras.

Posibilidad de multiplicar rápidamente una variedad

ya que este material vegetal ha sido producido bajo

 

de la cual sólo existan pocos individuos.

cuidadosas y controladas condiciones, libres de plagas

 

y

enfermedades (Universidad de Florida, 1995b).

I. Manejo de plantas, producidas por cultivo de tejidos, en el vivero.

Plántulas o microesquejes, recibidos del laboratorio de cultivo de tejidos, deben ser atendidos lo más pronto

 

El cultivo de tejidos o micro-propagación se ha tornado importante para la producción de plantas ornamentales

posible. Las pérdidas pueden ser reducidas si el material es establecido en el ambiente de transición, lo más

en

Florida. El cultivo de tejidos permite la rápida

pronto posible. Deben lavarse las manos muy bien

multiplicación de nuevos híbridos y cultivares, y es la mejor forma de producir, uniforme y libre de enfermedades, material madre de propagación vegetativa. La micropropagación es, actualmente, ampliamente utilizada también para la producción de

antes de manejar el material. El área de trabajo debe prepararse antes de manejar el material vegetal. Los contenedores deben ser llenados con medio para plántulas y con la ayuda de herramientas para un acceso fácil. Contenedores especiales, como bandejas, son a

plantas de follaje. Muchos viveros de plantas de follaje regularmente compran plantas provenientes de cultivo

menudo usadas para enraizar microesquejes o establecer plántulas provenientes de cultivo de tejidos.

de

tejidos, que han crecido a un tamaño comercial. Las

Comprimidos (pellets) de musgo (peat moss) y bloques

plántulas producidas por cultivo de tejidos requieren especial atención durante la transcisión desde el laboratorio al invenadero y muchas pérdidas ocurren

de espuma (foam) también pueden ser usadas para enraizar microesquejes. La mezcla de suelo más comúnmente usada para establecer plántulas

durante éste período crítico. El ambiente en el cual los tejidos han estado cultivados es de baja intensidad de luz, relativamente libre de plagas y enfermedades, cerca del 100% de humedad relativa y estéril, muy diferente de las condiciones típicas de un invernadero

provenientes de cultivo de tejidos o enraizar microesquejes debe contener, al menos, 50% de musgo (peat moss), combinado con materiales variados como vermiculita, broza, perlita o ceniza. Fertilizantes de liberación lenta y micronutrientes son comúnmente

27
27
27

o

casa sombreada (Universidad de Florida, 1995b).

mezclados con el medio. El pH del suelo necesita ser

ajustado de acuerdo a las necesidades del material

ajustado de acuerdo a las necesidades del material

El

proceso del cultivo de tejidos se divide en cuatro

vegetal. Es también importante que la mezcla esté libre

etapas. La etapa I ocurre completamente en el laboratorio. Los procesos del vivero relacionados con

de partículas demasiado grandes, una mezcla fina es más fácil de colocar en los pequeños contenedores y

el material de cultivo de tejidos conciernen únicamente

disminuye la posibilidad de daños a las tiernas plántulas

a las etapas II a IV. Los materiales de la etapa II, o

o microesquejes. Las bandejas se sobresaturan con

microesquejes, son brotes no enraizados o parcialmente enraizados, cosechados de cultivos proliferados. Las plántulas en etapa III tienen ambos, brotes y raíces. Las plántulas en etapa IV son plantas provenientes de cultivo de tejidos que ya están completamente establecidas y que se cultivan en un medio de crecimiento stándard y que, por lo tanto, reciben las condiciones típicas para esas condiciones. Los lineamientos de la etapa IV son los más caros en la producción del material de cultivo de tejidos, pero necesita menos cantidad de cuidados especiales. Los

agua y se deja drenar el exceso. Es más fácil plantar en un medio húmedo que en uno seco. Las plántulas enraizadas, a menudo se reciben con el medio de agar en el cual han crecido. Los microesquejes deben ser enjuagados con agua limpia a temperatura ambiente. Los microesquejes no enraizados deben llegar en bolsas plásticas o recipientes con la mayoría del agar removido, los cuales deben ser lavados con agua limpia a temperatura ambiente. Es importante que la humedad alrededor de las plántulas o microesquejes permanezca arriba del 75% durante el proceso de transferencia, ya

microesquejes en la etapa II son los menos caros, pero son muy delicados. Plántulas enraizadas en la etapa

que estas plántulas han estado en una humedad relativa cercana al 100% en el laboratorio. Los microesquejes

III

representan un rango medio, tanto en costo como

pueden, también, ponerse a flotar en recipientes con

en

atención especial requeridos para cultivarlos en el

agua. El ambiente en el cual la siembra toma lugar

vivero. De especial atención es la sanidad durante el proceso de plántulas provenientes de cultivo de tejidos,

debe ser diseñado para disminuir el stress de las plántulas provenientes del cultivo de tejidos. Una baja

intensidad de luz y una moderada temperatura debe ser mantenida mientras se trabaja. Un dispositivo simple para plantar pequeñas plántulas en pequeños recipientes, y que funciona muy bien, es una navaja, haciendo una depresión poco profunda en el medio del recipiente, lo suficientemente profundo para poner el sistema radical de las plantas en etapa III o los tallos de los microesquejes en etapa II. Cuidadosamente se toma una plántula o microesqueje del recipiente de manejo, teniendo cuidado de no aplastar el tallo o las hojas, colocando la plántula enraizada en el agujero lo suficientemente profundo para asegurar la planta. La yema del dedo puede ser usada para acomodar el sustrato en el agujero para cubrir las raíces. No se debe compactar demasiado el sustrato alrededor de las raíces, ya que se dañará la plántula. Un microesqueje sin raíces puede ser sembrado un poco más profundo pero sólo lo suficiente para mantenerlo en su lugar durante el período de enraizamiento. Es importante trabajar rápido cuando se manejan plántulas de cultivo de tejidos recién llegadas para reducir la posibilidad de que sufran stress. Al mismo tiempo, el material debe ser manejado con el suficiente cuidado para evitar daños a los tejidos de las plantas. Las bandejas para plántulas se colocan en una banca con microaspersión (niebla o neblina). La disponibilidad de condicionesse toma una plántula o microesqueje del recipiente de manejo, teniendo cuidado de no aplastar el se toma una plántula o microesqueje del recipiente de manejo, teniendo cuidado de no aplastar el

de crecimiento iniciales son determinantes y se le deben proveer durante los primeros días críticos que siguen al transplante. En el laboratorio, el material de cultivo de tejidos está expuesto a un nivel bajo de luz, usualmente entre 100 y 1000 pies candela. Estas plantas deben ser expuestas gradualmente a niveles más altos en el invernadero. Muchas cubiertas para sombreado necesitan ser erigidas directamente sobre el área del invernadero usado para plantas provenientes de cultivo de tejidos. Una buena regla que puede seguirse es doblar el nivel de luz cada una a dos semanas, hasta que las plantas se ajusten a las condiciones típicas de invernadero. Bandejas fabricadas especialmente para plántulas provenientes de cultivo de tejidos vienen equipadas con tapas de plástico que actúan como invernaderos miniaturizados, manteniendo una alta humedad alrededor de las plántulas. Una neblina fina o sistema de propagación por neblina es probablemente la mejor forma de establecer plántulas de cultivo de tejidos, así como también para enraizar microesquejes. La microaspersión debe ser frecuente, en primer lugar, para prevenir la deshidratación de las plántulas. El(niebla o neblina). La disponibilidad de condiciones intervalo de la frecuencia puede ser lentamente incrementada

intervalo de la frecuencia puede ser lentamente incrementada conforme el material madura. Debe ser suministrado sombreado. El contenedor del sustrato no debe mantenerse demasiado mojado, ya que causa

daños. Los sistemas de neblina son caros pero útiles, porque mantienen la humedad alta pero el sustrato no

se satura directamente por las gotas de agua. En cultivo

de tejidos, las plantas no son sometidas a cambios extremos de temperatura. Material tropical en cultivo,

usualmente se mantiene a cerca de 78 grados Fahrenheit (25.5 grados centígrados). El rango de fluctuación de temperatura encontrado en la mayoría de invernaderos puede ser demasiado extremo para plántulas frescas de cultivo de tejidos. Una temperatura diurna de 80 a 85 grados (26.6 a 29.˚C) y una caída de 5 grados en

la noche (2.8˚C) es recomendable. Un programa regular

de aplicación de fungicidas durante la primera semana de establecimiento ayuda a prevenir pérdidas de plántulas por enfermedades de las raíces. Sobre todo, los niveles de humedad en el contenedor del sustrato debe ser pareja. Los pequeños contenedores usados para plántulas de cultivo de tejidos mantienen un pequeño volumen de sustrato y pueden secarse muy

rápido. Es necesario monitorear el material varias veces

al día, al principio. En unas pocas semanas, vigorosas

plántulas de cultivo de tejidos o microesquejes, deberán llenar los pequeños contenedores con raíces saludables.

A éste tiempo ya están listas para ser tratadas como

otra planta producida por cualquier método tradicional de propagación. La mayoría de plantas provenientes de cultivo de tejidos son uniformes, ocasionalmente aparecen variantes, las cuales deberán ser removidas de la bandeja.

En resumen, los pasos para el apropiado establecimiento

de plántulas de cultivo de tejidos o microesquejes son:

estar preparado para sembrar las plántulas provenientes de cultivo de tejidos tan pronto se reciban del laboratorio; enjuagar cualquier remanente de medio de agar del material antes de sembrar; mantener altos niveles de sanidad cuando se manejen plantas de cultivo de tejidos; mantener alta humedad, moderada temperatura y baja luminosidad durante el proceso de siembra; durante la primera semana crítica de establecimiento, proteger las plántulas o micro-esquejes de la luz intensa, extrema temperatura y stress por humedad. Con solo algunos pequeños esfuerzos la micropro-pagación puede proveer un cultivo con plantas

vigorosas, libres de enfermedades y uniformes, que rápidamente pueden crecer a un tamaño comercial (Universidad de Florida, 1995b).

4.3. EQUIPO Y PROCEDIMIENTOS

4.3.1. PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL CULTIVO DE TEJIDOS

Cada año, millones de plantas leñosas y herbáceas son producidas por cultivo de tejidos o micropropagación. Este procedimiento de alta tecnología involucra el cultivo de una nueva planta a partir de un ápice o

sección de tallo de una planta preexistente. El cultivo de tejidos ha venido incrementando su importancia en

a vapor” llamada autoclave. Las herramientas más

frecuentemente utilizadas en cultivo de tejidos son pinzas y bisturí. Mientras trabaja, las herramientas deben ser esterilizadas en un el incinerador, colocando las pinzas y bisturí en el él por cerca de 5 segundos. La temperatura del aire en el incinerador está entre 1500 y 1600 grados Fahrenheit. Deben esterilizarse 4 juegos de herramientas, de tal manera que un juego siempre esté frío. Después de la esterilización las herramientas deben colocarse en un soporte, a menudo una gradilla de tubos de ensayo, la cual debe ser esterilizada en un autoclave. También se utilizan toallas de papel y alcohol para esterilizar (Universidad de Florida, 1995a).

la

producción de viveros en los últimos 15 años. Existen

Técnica de asepsia. La técnica de asepsia empieza

 

más de 100 laboratorios comerciales en los Estados Unidos, con más de 30 de ellos localizados en Florida. Estos laboratorios, rutinariamente, producen plantas

El cultivo de tejidos permite la rápida multiplicación

con la limpieza personal, sencillamente con el lavado de manos, uñas y antebrazos, con agua y jabón, antes de empezar el trabajo en la cámara. Debe mantenerse

frutales, flores, follajes y ornamentales, utilizando

a

mano una botella de etanol al 70% en la estación

cultivo de tejidos (Universidad de Florida, 1995a).

de una gran gama de especies y es la mejor forma de

de trabajo, para la limpieza de manos y área de trabajo mientras se está trabajando. Casi siempre se usan batas de laboratorio. El cabello largo debe recogerse hacia atrás y colocarse dentro de un gorro. Si la cámara de

No deben tocarse las toallas de papel estéril o el material

atrás y colocarse dentro de un gorro. Si la cámara de No deben tocarse las toallas

flujo laminar se encuentra apagada, debe encenderse por lo menos 15 minutos antes de empezar a trabajar.

29
29

producir material vegetal uniforme y libre de enfermedades. El material vegetal es una parte o pedazo

de una planta. El cultivo de tejidos es tanto una ciencia, como un arte. Como ciencia, el cultivo de tejidos requiere un laboratorio y exactitud y cuidado en la preparación del medio de crecimiento formulado. También requiere la precisa manipulación del material vegetal bajo condiciones controladas. Como arte, el

También debe lavarse el área de trabajo con alcohol y colocar una toalla de papel esterilizada. Las herramientas deben colocarse de tal forma que no se crucen los brazos sobre el área de trabajo cuando se les alcanza.

vegetal con las manos mientras se trabaja. Al hablar,

crucen los brazos sobre el área de trabajo cuando se les alcanza. vegetal con las manos

cultivo de tejidos requiere habilidad manual para

la

cabeza debe moverse hacia afuera de la cámara y se

trabajar con pequeñas y delicadas porciones de material vegetal, mientras se previene la contaminación de los

debe evitar, por todos los medios, estornudar o toser dentro de la cámara (Universidad de Florida, 1995a).

 

cultivos. El alto grado de sanidad necesario es denominado como condiciones asépticas. El cultivo de tejidos difiere de los métodos convencionales de propagación de plantas, no solamente en los métodos asépticos usados, sino también por el tipo de equipo necesario. La cámara de flujo laminar es la estación de trabajo para el procedimiento de cultivo de tejidos. El aire ingresa a través de ductos situados por debajo de la superficie de trabajo. Contaminantes como: polvo, suciedad, esporas de hongos y bacterias, son filtrados

Procesos de cultivo de tejidos. La etapa I es la etapa inicial de establecimiento del material vegetal en el medio de cultivo estéril. El material vegetal puede, o no, estar establecido. En cultivo de tejidos se usa un medio especial a base de agar. El medio contiene: agar, azúcar, nutrientes para plantas y un balance especial de hormonas vegetales (reguladores del crecimiento) que estimulan el crecimiento. El medio es cuidadosamente mezclado, colocado en recipientes de

y

el aire limpio es soplado hacia el trabajador. Toda la

cultivo y esterilizado en el autoclave. Diminutos ápices

cristalería, sujetadores de instrumentos, toallas de papel,

a

alta presión y alta temperatura, en una “limpiadora

o

secciones de tallo son removidos del material madre

agua e inclusive el medio de cultivo debe ser esterilizado

sano, éstos son llamados explantes. Los explantes son desinfectados en una solución diluida de cloro y

 

transferidos cuidadosamente al medio especial. Estos cultivos deben ser mantenidos en un ambiente cuidadosamente controlado, llamado cuarto de crecimiento. El balance de las hormonas vegetales en el medio, induce a las plantas a producir muchos nuevos brotes. Estos cultivos proliferados se encuentran en la etapa II. El material obtenido de la etapa II ser dividido en subcultivos, lo cual resultará en posteriores proliferaciones de la etapa II; o bien, puede cosechar los brotes individuales, también llamados microesquejes y colocarlos en un medio que estimule la formación de raíces. Una vez se formen las raíces, los microesquejes se encuentran en la etapa III. La importancia de mantener una técnica aséptica debe ser reenfatizada cuando se trabaja con cultivo de tejidos de plantas en la cámara de flujo laminar, ya que el medio estéril de agar usado en micropropagación ayuda al crecimiento de bacterias y hongos, al igual que los cultivos de plantas (Universidad de Florida, 1995a).

Los cultivos de tejidos en la etapa II pueden ser divididos y colocados de nuevo en el mismo tipo de medio que se usó en los explantes o bien, colocados en un medio con diferente balance de hormonas vegetales para estimular el enraizamiento. Cuidadosamente, se remueve la tapadera y se pone aque los cultivos de plantas (Universidad de Florida, 1995a). un lado. Posteriormente se remueve el grupo que los cultivos de plantas (Universidad de Florida, 1995a). un lado. Posteriormente se remueve el grupo

un lado. Posteriormente se remueve el grupo de brotes con la ayuda de una pinza estéril y se coloca sobre una de las toallas de papel estéril. Se debe señalar que es importante trabajar rápido para que el material vegetal no se deshidrate. Con su bisturí estéril, cuidadosamente se separan los brotes más grandes en grupos más pequeños. Sobre los brotes grandes la tendencia también puede de ser mantenerlos del mismo tamaño. Siempre debe mantenerse enfrente de la cámara mientras se trabaja, con las manos hacia enfrente y el material vegetal enfrente de las mismas, para prevenir su contaminación. Deben esterilizarse las herramientas en el incinerador después de cada operación. El recipiente que contiene el medio fresco, debe desinfectarse con alcohol, previo retirársele cuidadosamente la tapa la cual, si es lo suficientemente pequeña para hacerlo cómodamente, debe mantenerse en las manos mientras se trabaja. De lo contrario, debe colocarse sobre una toalla de papel estéril. Con una pinza también estéril se toma una de las divisiones más pequeñas y, cuidadosamente, se inserta en el medio fresco, justamente lo suficientemente profundo para mantenerla estable, teniendo cuidado de no tocar conCuidadosamente, se remueve la tapadera y se pone a la pinza el medio o la pared

la pinza el medio o la pared del recipiente. Posteriormente, se vuelve a colocar la tapa del tubo o

frasco. Debe etiquetarse el nuevo subcultivo de acuerdo con el sistema seguido por cada laboratorio. Después de que los subcultivos se han establecido, deben ser enviados al vivero como cultivos no enraizados multiplicados en la etapa II, microesquejes no enraizados, microesquejes enraizados en la etapa III

o plántulas en etapa IV, que son enraizadas en sustrato

con medio típico de condiciones de vivero. Una vez más, es importante recordar las reglas de la técnica aséptica, ya que con sólo unos pocos segundos de descuido en la cámara, meses de trabajo pueden ser fácilmente destruidos (Universidad de Florida, 1995a).

4.4. EMPLEO DE TÉCNICAS IN VITRO PARA LA MEJORA DE CULTIVOS: REQUISITOS EN EL LABORATORIO Y MÉTODOS GENERALES.

Desde tiempos inmemoriales el ser humano se ha esforzado por mejorar las plantas de cultivo y aumentar su rendimiento mediante la selección de variedades con características ventajosas. Antiguamente la selección era más bien un proceso accidental que dependía, en cierta medida, de la habilidad y la intuición humana. El descubrimiento, en 1865, de las leyes de Mendel, fue el acontecimiento decisivo; sin embargo, fue sólo a comienzos del presente siglo que se tomó conciencia de su importancia y, desde entonces, la fitotecnia (fitomejoramiento) se considera sobre una base científica. Los métodos de fitotecnia actuales han permito aumentar espectacularmente los rendimientos de la mayoría de las plantas de cultivo. El procedimiento de fitotecnia comienza con la selección de progenitores apropiados para realizar cruzamientos. El fitotécnico selecciona dentro de la descendencia resultante del

cruce las plantas que poseen las características deseadas, las cuales dependen de una cierta combinación de genes. Además del cruzamiento, el fitotécnico utiliza otros métodos genéticos para aumentar la variabilidad de las plantas. El método de la mutagénesis inducida, por ejemplo, permite producir cultivares de rendimiento elevado. Actualmente, los fitotécnicos trabajan, no sólo en el terreno, sino también en el laboratorio con un medio ambiente controlado. Los progresos realizados en las disciplinas científicas, como la fisiología vegetal

y la fitogenética, permiten realizar manipulaciones

genéticas con las plantas, a nivel de células y partes aisladas (FAO-OIEA, 1985).

Un laboratorio corriente de cultivo de tejidos debe disponer de los instrumentos y aparatos necesarios

microelementos esenciales que son: magnesio, zinc, cobre, boro, molibdeno y cloro. Las concentraciones

Se sabe que hay varias clases de hormonas del

para lavar y almacenar la vidriería (cristalería), preparar

de los macro y micronutrientes varían en función de

y

esterilizar medios nutrientes, realizar manipulaciones

las distintas composiciones de los medios. Los medios,

asépticas, efectuar cultivos en condiciones controladas

actualmente utilizados, contienen hierro, ligado por

y

evaluar los cultivos. El primer paso importante de la

quelatos (mezcla de Fe y EDTA). El EDTA férrico

técnica general de cultivo de tejidos es el lavado adecuado de la vidriería. Después de lavarse con detergente, la vidriería se enjuaga cuidadosamente, primero con agua del grifo y luego con agua destilada. Las lavavajillas automáticas son muy útiles, especialmente en los laboratorios grandes. Los tubos de ensayo (tubos de cultivo), las pipetas y los objetos pequeños, tales como: los portafiltros, los tamices y los instrumentos de laboratorio se lavan en la lavadora ultrasónica. El agua de tubería convencional no es adecuada para los medios de cultivo de los tejidos vegetales, ni para ser utilizada en el laboratorio. Mediante métodos de purificación se obtiene agua exenta de pirógenos, gases y materias orgánicas. El método más común, y preferido, para purificar el agua es el tratamiento por desionización, seguido de una o dos destilaciones del agua, en alambique de vidrio (destilador). Para la preparación de medios nutrientes

Los elementos minerales son esenciales para el

(ácido etilendiaminotetraacético) continúa disponible independiente del pH de los medios. La tiamina es, con mucho, el aditivo vitamínico más importante. El ácido nicotínico, la piridoxina y el pantotenato, así como otras vitaminas del complejo B, también son útiles para el crecimiento in vitro. El inositol, con una concentración de aproximadamente 100 miligramos por litro estimula, generalmente, el crecimiento del trozo extraído de una planta, denomin