Objectivos de aprendizagem Identificar a terminologia utilizada; Caracterizar e diferenciar os grupos de organismos estudados a

nvel estrutural, reprodutivo, metablico, e da sua importncia ecolgica.

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14

1. Microbiologia
Microbiologia o estudo dos microrganismos, um grupo vasto e diverso de seres que existem na forma unicelular ou formando pequenos grupos de clulas, ou ainda na forma subcelular (e.g. vrus). Uma clula microbiana capaz de executar todas as funes vitais crescimento, produo de energia e reproduo - independentemente de quaisquer outras clulas, sendo portanto diferente das clulas de plantas ou animais. Os objectos de estudo desta cincia biolgica - microrganismos - ou organismos microscpicos, podem ser divididos em dois grandes grupos: (i) seres celulares, que inclui as clulas procariotas, protozorios, algas e fungos e (ii) seres subcelulares, que inclui os vrus (e outros).

1.1 Vrus
Os vrus, por vezes designados seres subcelulares1, no so organismos vivos. Os vrus (viries ou partculas virais) so constitudos por fragmentos de cido nucleico envolvidos por uma cpsula proteica, e no tm a capacidade de crescer ou de se reproduzir por meios prprios, estando para isso dependentes da maquinaria metablica das clulas que infectam (clulas hospedeiras). Os vrus so frequentemente muito especficos para os seus hospedeiros, no infectando, ou se reproduzindo fora deles (e.g. os bacterifagos que infectam exclusivamente bactrias). Devido sua simples estrutura e incapacidade de reproduo, pensou-se inicialmente que constituiriam uma forma intermdia entre a no-vida e a vida. Cr-se, presentemente, que tm a sua origem, em segmentos de DNA ou RNA de clulas procariotas e eucariotas, que de algum modo se tornam independentes destas. Todos os organismos vivos, desde as bactrias s plantas e aos animais superiores, se encontram infectados por vrus, embora a maioria no manifeste sinais da sua presena no hospedeiro. Muitos vrus so, no entanto, causadores de inmeras doenas nos seres humanos (e.g. varicela, rubola, papeira, encefalite viral, mononucleose, gripe, constipao, febre amarela, poliomielite, raiva e SIDA), e tm sido implicados em certos tipos de cancro, como a leucemia. Os vrus so ainda causadores de
1

Outros seres subcelulares so os virides (fragmentos nus de RNA i.e. sem invlucro), os plasmdeos (fragmentos nus de DNA), os pries (protenas envolvidas em doenas como a encefalopatia espongiforme bovina; BSE) e os virinos (quase s protena com um pouco de cido nucleico).

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enormes perdas na agricultura, silvicultura e na produtividade dos ecossistemas naturais. O controlo de uma infeco viral difcil, dado que as partculas virais se integram completamente no metabolismo da clula hospedeira, o que dificulta a utilizao de meios de controlo qumico, danosos para as clulas. O uso de antibiticos (que selectivamente matam bactrias, mas no a clula hospedeira) tambm intil, neste caso, uma vez que estes actuam em caractersticas do metabolismo dos seres vivos, que os vrus no possuem. A imunizao2 parece assim, ser o mtodo de controlo viral mais efectivo. Os vrus so classificados com base nas suas caractersticas estruturais e no tipo de hospedeiro onde se replicam (Anexo 1.1).

Imunizao: qualquer procedimento em que microrganismos especficos e/ou material antignico, ou anticorpos pr-formados, so introduzidos num corpo para nele desenvolver uma resposta imunitria, especfica, de proteco.

1.1.1 Estrutura dos vrus

Os vrus variam quanto sua forma e dimenso (10-1000 nm de dimetro). Muitos apresentam uma estrutura icosadrica (Fig. 1.1a, e-g) ou helicoidal (Fig. 1.1h), que corresponde a vrus de forma praticamente esfrica ou em bastonete, respectivamente. Os vrus complexos apresentam uma estrutura mista, que no apenas icosadrica ou helicoidal. Adicionalmente podem ter outras estruturas (Fig. 1.1d). Muitos vrus tm ainda um invlucro externo rico em lpidos e protenas (geralmente glicoprotenas; Fig. 1.1c e Fig. 1.2b).

(a) adenovirus

(b) rabdovirus

(c) vrus de herpes (d) bacterifago

(e) poliomavirus

(f) picornavirus

(g) X174 virus 1 m

(h) tubulovirus

Figura 1.1 - Diversidade morfolgica e dimenso de alguns vrus.

Independentemente da sua complexidade estrutural, todos os vrus so formados por uma nucleocpside, composto pelo cido nucleico (RNA ou DNA, nunca ambos) e pela cpsula proteica envolvente ou cpside. A cpside constituda por um nmero reduzido de protenas distintas que se organizam com um padro especfico e repetitivo em torno do cido 16

nucleico (Fig. 1.2a). O genoma nos vrus mais simples constitudo por uma nica molcula de cido nucleico, enquanto que nos vrus complexos podem haver vrias cpias do genoma viral. O genoma viral - DNA ou RNA - pode estar na forma de cadeia simples ou dupla. A molcula de cido nucleico viral contem um conjunto de instrues simples que geralmente apenas inclui aquelas associadas com a replicao dos cidos nucleicos do vrus, e com a formao das protenas da cpside e do invlucro (essenciais infeco de novas clulas). Os vrus mais complexos podem conter adicionalmente algumas protenas enzimticas3 especficas (Fig. 1.2b).
0

Estes enzimas especficos dos vrus tm geralmente funes durante o processo de infeco ou de replicao viral.

sub-unidade proteica da cpside RNA nucleocpside

glicoprotena s bicamada lipdica RNA sub-unidade proteica da cpside (b) invlucro

10 nm

20 nm

(a)

Figura 1.2 - (a) Estrutura do vrus de mosaico do tabaco (TMV). O RNA assume uma configurao helicoidal, rodeado por sub-unidades proteicas da cpside; o centro da partcula viral oco. (b) Esquema do vrus da gripe.

1.1.2 Infeco viral

A infeco viral definida como a invaso de um hospedeiro por um vrus, com a subsequente instalao e reproduo do mesmo (Fig. 1.3). Num primeiro passo, os vrus geralmente aderem a receptores especficos da superfcie da clula hospedeira4 (o que explica parcialmente a especificidade do vrus para o seu hospedeiro). Em seguida, o genoma viral entra na clula, o que pode acontecer de diversos modos. Por exemplo, o genoma viral pode ser "injectado" atravs da parede celular da bactria, ficando a cpside no seu exterior, como acontece com os bacterifagos, ou a partcula viral pode ser totalmente endocitada pela clula, como no caso do vrus HIV do sndroma da imuno-deficincia adquirida (vrus do SIDA). Uma vez no interior da clula, o cido nucleico viral pode tomar controlo da maquinaria celular do hospedeiro, impedindo-o de funcionar normalmente e desviando o seu metabolismo para a sntese dos componentes das partculas virais. Consequentemente, a clula hospedeira

A natureza do receptor varia com o vrus, podendo este ser uma protena, um lipopolissacrido, o flagelo ou pilo, no caso de bacterifagos, ou uma glicoprotena no caso de vrus de clulas eucariotas.

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lisa e os novos vrus so libertos, podendo cada um deles recomear um novo ciclo de infeco. Os vrus que provocam a lise da clula hospedeira so designados vrus virulentos. Alternativamente, o cido nucleico viral pode ser incorporado no genoma da clula hospedeira, de um modo estvel, no causando a sua lise. O genoma viral , assim, transferido num estado latente - para as suas clulas filhas e descendentes: tais vrus so designados vrus temperados. Um vrus pode apresentar um ciclo ltico ou um ciclo lisognico, consoante apresenta um comportamento virulento ou temperado (Fig. 1.3).

Figura 1.3 - Ciclo lise da clula ltico e ciclo lisognico de um bacterifago. No ciclo ltico, o bacterifago existe "montagem" de como DNA viral livre novos vrus no citoplasma da bactria hospedeira; o DNA viral "dirige" a replicao de produo de novas genoma viral partculas virais pelo induo de DNA prviral a hospedeiro. No ciclo vrus vegetativo lisognico, o DNA do bacterifago integrado no cromossoma circular da bactria (DNA prviral).

clula no infectada

CICLO LTICO

vrus adere parede celular

DNA viral injectado na bactria reduo a DNA prviral CICLO LISOGNICO DNA viral integrado no genoma bacteriano

reproduo de bactria lisognica

1.2. Bacteria e Archaea: as clulas procariotas

5

Robert H. Whittaker (1969).

No sistema tradicional de classificao de cinco reinos5, os organismos procariotas constituam o reino Monera, sendo os restantes quatro reinos, eucariotas, o Protista, o Fungi, o Plantae e o Animalia. Os organismos do reino Monera, tradicionalmente conhecidos por bactrias, so as mais antigas formas de vida na Terra, tendo surgido h cerca de 3,5 bilies de anos e tendo sido as nicas existentes durante os primeiros 2 bilies de anos. Estes organismos constituem estruturalmente as mais simples,

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embora as mais abundantes formas de vida no planeta; sero, neste livro, referidos como procariotas no seu conjunto. A anlise comparativa das sequncias genticas de rRNA permitiu, nas ltimas duas dcadas, distinguir a existncia de dois grupos de organismos procariotas, que correspondem a duas linhas evolutivas distintas6: Archaea (arquebactrias) e Eubacteria ou Bacteria (eubactrias ou bactrias). Os dois grupos assemelham-se na estrutura da sua clula procariota, no entanto diferem em vrias caractersticas estruturais, bioqumicas e fisiolgicas7. A maioria dos procariotas so eubactrias. As espcies de arquebactrias habitam geralmente em ambientes com extremos de temperatura, pH, salinidade ou de potencial redutor (e.g. as fontes termais cidas, os fundos ocenicos ou os lagos salgados).

Woese, C. et al. (1990).

ver Bacelar-Nicolau, P. e Azeiteiro, U.M., 2001, Introduo Biologia, Captulo 6.

1.2.1 Estrutura
A maioria dos procariotas so seres unicelulares, com um dimetro celular que varia entre 1 e 5 m8. Entre os diversos tipos de morfologia celular (Fig. 1.4), os trs mais comuns so o cocos (forma esfrica), o bastonete linear (forma cilndrica) e o bastonete curvo (de forma helicoidal, espirilos e espiroquetas).
(c) (a) cocos (b) (e) (d) bastonetes lineares (f) (g)
8

Ver Nicolau, P.B. e Azeiteiro, U.M., 2001, Introduo Biologia, Quadro II.4. Existem, contudo, algumas excepes a esta regra, das quais referimos o notvel Epulopiscium fishelsoni, simbionte no estmago de um peixe, que atinge cerca de 0,5 mm de comprimento.

bastonetes curvos

Figura 1.4 - Esquema de alguns tipos de procariotas, de acordo a sua morfologia: (a) Neisseria, (b) Micrococcus; (c) Bacillus, (d) Azotobacter, (e) Hyphomicrobium, (f) Vibrio cholerae, (g) Bdellovibrio.

As clulas procariotas diferem das eucariotas em trs aspectos essenciais9: (i) organizao e replicao do genoma - o genoma formado por um cromossoma circular de DNA que se encontra livre no citoplasma, existindo frequentemente plasmdeos com informao adicional; o processo de mitose est ausente e a clula divide-se por fisso binria; (ii) no existem estruturas ou compartimentos intracelulares membranares diferenciados; o plasmalema pode, em certos casos, apresentar invaginaes e manter algumas funes anlogas s dos organelos de clulas eucariotas (ex. invaginaes membranares onde se localizam pigmentos fotossintticos responsveis por fotossntese, em espcies fotossintticas); (iii) no apresentam quaisquer estruturas de suporte interno (i.e. citoesqueleto).

Recorde a organizao celular procariota: ver Nicolau, P.B. e Azeiteiro, U.M., 2001, Introduo Biologia, Captulo 2.

19

10

As propriedades do teste de colorao Gram tm uma enorme importncia na classificao fentica, uma vez que geralmente reflectem diferenas fundamentais na estrutura da parede celular das eubactrias, estando tambm correlacionadas com muitas outras caractersticas das eubactrias. A importncia da colorao de Gram est patente na classificao apresentada na 1 edio do "Bergey's Manual of Systematic Bacteriology" (ver Anexo 1.2).

Todas as clulas procariotas, com a excepo dos micoplasmas, esto protegidas por uma parede celular. A parede celular da maioria das eubactrias contem um peptidoglicano, que lhes caracterstico. Este formado por cadeias lineares polissacardicas de dois glcidos (N-acetilglucosamina e cido N-acetil-murmico, que se alternam), interligadas por pequenos polipptidos (Fig. 1.5). As eubactrias so comumente classificadas em dois grupos, com base nas caractersticas da parede celular (e detectadas pelo teste de colorao de Gram10): gram-positivas e gram-negativas. -G-M-G-M-G-M-G-M-G-M-G-G-M-G-M-G-M-G-M-G-M-G-G-M-G-M-G-M-G-M-G-M-G- ligaes peptdicas

- pptidos livres G - N-acetil-glucosamina M - cido N-acetil-murmico

Figura 1.5 - Esquema do peptidoglicano da parede celular das eubactrias.

A parede celular gram-positiva relativamente simples, embora mais espessa que a gram-negativa (Fig. 1.6). A parede gram-negativa uma estrutura complexa, formada por uma monocamada de peptidoglicano e por uma membrana externa de natureza lipopolissacardica, ligadas entre si por ligaes lipoproteicas. Os lipopolissacridos da membrana externa das eubactrias gram-negativas so frequentemente txicos, protegendo os procariotas patognicos contra as defesas das clulas hospedeiras. A parede celular das arquebactrias no possui peptidoglicano.

exterior da clula membrana externa peptidoglicano plasmalema interior da clula

exterior da clula peptidoglicano plasmalema interior da clula

(a)

(b)

Figura 1.6 - Esquema da parede celular (a) gram-negativa e (b) gram-positiva.

Muitos procariotas possuem uma camada gelatinosa, externa parede celular, que se designa por cpsula. As cpsulas constituem uma proteco adicional das clulas procariotas, nomeadamente aumentando a resistncia dos procariotas patognicos contra as defesas do hospedeiro. Alguns tipos de cpsulas podem aumentar a capacidade de adeso de clulas ao substrato.

20

Em certas condies adversas ao crescimento (e.g. temperaturas elevadas), alguns procariotas so capazes de formar endsporos11. Os endsporos so estruturas formadas no interior da clula procariota, com paredes espessas que envolvem o genoma e uma pequena poro do citoplasma celular, e que permitem ao organismo manter-se num estado de vida latente durante dcadas ou mesmo sculos (e.g. procariotas que vivem em rochas encontradas at 2 km abaixo da crosta terrestre ou no gelo dos glaciares). Flagelos e fmbrias12 so apndices externos das clulas procariotas ligados ao plasmalema. As fmbrias ou pilos (dimetro de 7,5 - 10 nm) tm geralmente uma funo de adeso ao substrato ou a outras clulas. Alguns pilos so especializados em manter as clulas interligadas, e possibilitam a transferncia de DNA durante o processo de conjugao13 (pilos sexuais). Os flagelos tm funes de locomoo.

11

O endsporo, em condies favorveis, germina numa nova clula. endsporo

germinao de endsporo

12

flagelos e pilos: pilos

1 m
13

flagelo

1.2.2 Mobilidade
Muitos procariotas tm a capacidade de se movimentar, e a maioria locomove-se por meio de flagelos (Fig. 1.7a). Os flagelos procariotas (distintos daqueles dos eucariotas14) so filamentos constitudos por uma protena, flagelina. Encontram-se ancorados no plasmalema, tm um comprimento de 3 - 12 m e um dimetro de 10 - 20 nm. Os flagelos podem dispor-se ao redor da clula, ou concentrar-se num ou em ambos os plos da clula (Fig. 1.7b). Propulsionam a clula atravs de movimentos rotativos. Outros procariotas apresentam um movimento deslizante15 sobre superfcies slidas atravs de mecanismos ainda pouco conhecidos. Alguns procariotas aquticos, incluindo as cianobactrias, movem-se na coluna de gua (ascendendo ou descendendo) por ajustamentos do volume de gs em vesculas gasosas presentes no citoplasma. Alguns procariotas so capazes de taxias, movendo-se em direco, ou na direco oposta a um estmulo (gradiente qumico, de oxignio ou trmico). Na quimiotaxia, a clula responde a um estmulo qumico movendo-se, por exemplo, na direco de um nutriente (quimiotaxia positiva) ou afastando-se de um composto txico (quimiotaxia negativa).

Processo de conjugao, evidenciando a participao do pilo. receptora ((F-) plasmdeo pilo dadora (F+)
14

Flagelo eucariota: estrutura complexa formada por microtbulos (9 pares com arranjo circular em redor de 2 centrais) envolvidos por membrana. O seu movimento tipo chicote. Corte transversal: microtbulo radial microtbulo central

15

Movimento deslizante: movimento

excreo de mucilagem

21

filamento gancho exterior da clula membrana externa peptidoglicano interior da clula plasmalema corpo basal peritrcos polar monotrco

polares multitrcos

(a)

(b)

Figura 1.7 - (a) Esquema do flagelo de uma eubactria gram-negativa e (b) possveis disposies de flagelos na superfcie da clula.

1.2.3 Variao gentica

Os procariotas no tm mitose ou meiose, reproduzindo-se unicamente por via assexuada, por um processo de diviso celular chamado fisso binria. As clulas procariotas apresentam, no entanto, variao gentica quer por processos de mutao quer por recombinao gentica.
16

Mutao: uma modificao, estvel, e hereditria da sequncia de cidos nucleicos do genoma de um organismo, que tipicamente resulta na formao de um novo alelo e de um novo fentipo.

A mutao16 constitui a maior fonte de variao gentica em procariotas. Tendo em conta que o ciclo de vida de um procariota muito rpido, variando entre alguns minutos a horas, as mutaes favorveis podem ser rapidamente propagadas a uma descendncia considervel. precisamente a velocidade com que as mutaes se acumulam que torna os procariotas to adaptveis ao meio ambiente. No caso das clulas patognicas, este facto pode constituir um problema devido rapidez com que estas se tornam resistentes a antibiticos. Em procariotas existem trs processos de recombinao gentica (Fig. 1.8): (i) transformao, em que genes (fragmentos de DNA ou plasmdeos) provenientes do ambiente externo so incorporados no genoma celular; (ii) conjugao, em que os genes so transferidos directamente de um procariota para outro; (iii) transduo, em que os genes so transferidos entre procariotas e vrus (e.g. bacterifagos). Notese, no entanto, que os processos de recombinao gentica em procariotas envolvem a passagem unilateral de uma quantidade varivel de DNA, em nada comparvel ao processo de meiose em eucariotas, em que ambas clulas parentais contribuem com genomas homlogos para o zigoto.

22

plasmdeo

F+

F-

DNA livre cromossoma bacteriano incorporao de DNA

destruio de DNA do hospedeiro cromossoma bacteriano sntese de componentes virais

pilo contacta com a clula

integrao de DNA no genoma bacteriano nova infeco por vrus libertos Transformao com fragmentos de DNA

partcula transdutora factor F replica e transferido

F+

F+

Conjugao cruzamento F+ X FTransduo por bacterifago

Figura 1.8 - Processos de recombinao gentica em procariotas.

1.2.4 Diversidade metablica e nutrio

Os procariotas desenvolveram uma imensa diversidade de metabolismos17, nomeadamente no que refere fonte de carbono, fonte de energia e dador de hidrognio/electres (H2/e-) para a cadeia respiratria. Em funo das suas caractersticas metablicas e nutritivas, os organismos podem ser agrupados em quatro tipos principais de nutrio (Tabela 1.1). Um organismo autotrfico ou heterotrfico, consoante obtm carbono a partir de um composto inorgnico (geralmente CO2) ou de um composto orgnico (e.g. glucose). Os procariotas desenvolveram diversos metabolismos energticos podendo usar a luz como fonte de energia organismo fototrfico - ou compostos qumicos - organismo quimiotrfico. Os organismos podem ainda ser classificados em litotrficos ou organotrficos, consoante o composto dador de H2/e- para a cadeia
17

Metabolismo: estudo de todas as reaces qumicas que ocorrem numa clula. O metabolismo inclui as reaces anablicas (biossntese) e catablicas. Ver Nicolau, P.B. e Azeiteiro, U.M. (2001) "Introduo Biologia", Captulo 3.
nutrientes energia energia produto de excreo

Anabolismo

componentes Catabolismo celulares fonte de energia

23

respiratria , respectivamente, um composto orgnico ou inorgnico (e.g. H2S, NH3, Fe2+). Existem ainda metabolismos mixotrficos que combinam caractersticas de metabolismos autotrficos e heterotrficos, podendo obter energia a partir de compostos inorgnicos e carbono a partir de compostos orgnicos. Por exemplo, em determinadas condies, certas espcies de eubactrias heterotrficas acidfilas so capazes de obter energia a partir da oxidao do io Fe2+. Os microrganismos podem ser tambm caracterizados em funo da sua relao com o oxignio (O2). O oxignio o aceitador final de electres da cadeia respiratria mais comum e os organismos que o utilizam dizem-se aerbios. No entanto, certos procariotas desenvolveram sistemas que utilizam outros compostos (e.g. H2SO4, NO3-, Fe3+), alternativamente ao oxignio, pelo que so chamados anaerbios. Um organismo pode ser anaerbio facultativo ou anaerbio obrigatrio, consoante poder usar O2 (quando este se encontra presente) ou no; neste ltimo caso o O2 geralmente txico.
Tabela 1.1 - Principais tipos de nutrio
Tipo de nutrio* Litofoto-autotrofismo Fonte de energia, H2/electres, e carbono Dador de H2/e-: inorgnico Energia: luz Fonte de C: CO2 Dador de H2/e-: orgnico Energia: luz Fonte de C: orgnico (CO2 tambm pode ser usado) Dador de H2/e-: inorgnico Energia: qumica Fonte de C: CO2 Exemplo Algas Sulfobactrias (verdes e roxas) Cianobactrias Assulfobactrias roxas Assulfobactrias verdes

Organofoto-heterotrofismo

Litoquimio-autotrofismo

Organoquimio-heterotrofismo

Dador de H2/e-: orgnico Energia: qumica Fonte de C: orgnico

Eubactrias sulfuricantes Eubactrias oxidantes de hidrognio Eubactrias nitrificantes Eubactrias ferro-oxidantes Protozorios Fungos Maioria das eubactrias nofototrficas, vrias arquebactrias

* existem outros tipos de nutrio em procariotas.

de notar ainda que o metabolismo energtico dos procariotas varia dependendo das condies ambientais. Por exemplo, Escherichia coli, uma eubactria gram-negativa, apresenta (i) respirao aerbia na presena de O2, (ii) respirao anaerbia na ausncia de O2 e presena de

24

NO3- (sendo o nitrato o aceitador final de electres), ou (iii) metabolismo fermentativo na ausncia de O2 ou na presena de qualquer elemento orgnico. Metabolismo do azoto O azoto um nutriente essencial, constituinte de protenas e cidos nucleicos. Enquanto que os eucariotas se encontram limitados quanto s formas como podem assimilar o azoto, os procariotas desenvolveram diversos metabolismos para a sua assimilao e utilizao, sendo assim de extrema importncia no ciclo biogeoqumico deste elemento (Fig. 1.9). A capacidade de fixar azoto atmosfrico (N2), convertendo-o a amnio (NH4+) que directamente incorporado na matria orgnica, nica entre os procariotas, sendo caracterstica de algumas espcies incluindo algumas cianobactrias. Para alm do processo de fixao de azoto, alguns quimioautotrficos, como o gnero Nitrosomonas, convertem NH4+ a NO2e outros, como certas espcies de Pseudomonas, convertem NO3- ou NO2a N2 (processo de desnitrificao).

Reduo assimilativa de NO3 (muitos gneros)

NO3 Desnitrificao

Nitrificao (Nitrobacter Nitrococcus) Desulfovibrio Clostridium

N orgnico

Fixao N2 (Azotobacter, bact. fotossintticas)

N2 + N2O

NO2 Nitrificao (Nitrosomonas Nitrosococcus) aerobiose anaerobiose aerobiose/anaerobiose

Mineralizao (muitos gneros)

NH4+

Figura 1.9 - Ciclo biogeoqumico do azoto ilustrando a participao essencial de alguns procariotas nas suas diversas reaces.

1.2.5 Importncia ecolgica

A sua enorme diversidade metablica e plasticidade fisiolgica explicam o facto de se encontrarem em praticamente todos os habitats terrestres conhecidos. Os procariotas tm uma funo essencial nos ciclos biogeoqumicos (C, N, S, Fe e outros), participando em diversas transformaes qumicas, e reciclando os compostos orgnicos (em conjunto com os fungos). Em particular, alguns procariotas so os nicos organismos capazes de fixar o

25

18

e.g. ver Galopim Carvalho, A.M., 1996.

de

azoto atmosfrico tornando-o acessvel para utilizao por todas as restantes formas de vida. Os procariotas so tambm, em grande parte, responsveis pelas condies atmosfricas e terrestres que conhecemos na Terra actual. As cianobactrias tero sido, por exemplo, as responsveis pela converso da atmosfera redutora primordial na atmosfrica aerbia actual18. Muitas eubactrias formam associaes simbiticas com outros microrganismos procariotas, ou com eucariotas. Um exemplo comum deste tipo de associao o da flora intestinal dos mamferos. As mitocndrias e cloroplastos, existentes em clulas eucariotas, tero sido tambm procariotas ancestrais que formaram endossimbioses com outras clulas procariotas. Alguns procariotas so patognicos causando doenas em animais e plantas. So responsveis por muitas doenas em humanos como a tuberculose (Mycobacterium tuberculosis), a clera (Vibrio cholerae), a lepra (Mycobacterium leprae), o tifo (Rickettsia prowazekii), a difteria (Corynebacterium diptheriae), a lcera pptica (Helicobacter pylori) ou as cries dentrias (Streptococcus). A implementao de medidas de saneamento pblico e a utilizao de antibiticos para combater estes agentes patognicos diminuiu consideravelmente a sua incidncia (note-se, no entanto, que existe uma rpida evoluo de espcies resistentes aos antibiticos). Os procariotas so tambm de grande importncia em processos industriais. A industria alimentar usa eubactrias na produo do cido ctrico e vinagre, de diversos aminocidos e enzimas, e especialmente na produo de cido lctico, que usado na produo da maioria dos queijos e iogurtes. Muitos dos antibiticos hoje utilizados (e.g. estreptomicina, aureomicina, eritromicina e tetraciclina) so produzidos por eubactrias do gnero Streptomyces. Os antibiticos parecem ser substncias produzidas para competir com outros microrganismos na natureza. A industria farmacutica cultiva vrias espcies de Streptomyces para a produo destes antibiticos.

26

1.2.6 Classificao
Sistemas de classificao em procariotas A taxonomia19 (Gr. taxis, arranjo ou ordem + nomos, lei ou nemein, distribuir ou governar) definida como a cincia da classificao biolgica. O grupo bsico em taxonomia de procariotas, assim como noutros organismos, a espcie. No entanto, a definio do termo "espcie" em Microbiologia difere daquela utilizada para os organismos superiores. Em organismos superiores, uma "espcie" pode ser definida como um grupo de organismos, ou populao natural, que se cruza entre si, e est isolado reprodutivamente dos outros grupos. Apesar de esta definio ser suficiente para definir espcies com reproduo sexuada, no o obviamente no caso dos procariotas, que se reproduzem assexuadamente. Adicionalmente, as diferenas fenotpicas, que na grande parte dos casos constituem a caracterizao essencial na qual se baseia a classificao dos organismos superiores no so a base da classificao dos procariotas, dado que as diferenas morfolgicas entre estes, mesmo quando observados com o microscpio electrnico, no so suficientes para os destinguir, classificar e identificar de modo conveniente. As espcies de organismos procariotas caracterizam-se pelas suas diferenas a nvel fenotpico e genotpico. Uma espcie procariota uma coleco de estirpes que partilham um nmero elevado de caractersticas estveis e diferem significativamente dos restantes grupos de estirpes. Uma estirpe uma populao de organismos que descendem de um nico organismo ou de uma cultura pura20. Uma vez feita a caracterizao dos microrganismos com base num conjunto de caractersticas taxonmicas relevantes, estas podem ser usadas para construir um sistema de classificao21, ou para identificar o microrganismo em causa como membro de um dos taxa reconhecidos. Os sistemas de classificao podem ser construdos de dois modos. Os organismos podem ser agrupados com base nas suas semelhanas produzindo sistemas fenticos, ou com base nas suas provveis relaes evolutivas produzindo sistemas filogenticos22. Sistemas de classificao filogenticos tm sido difceis de desenvolver para bactrias e outros microrganismos, principalmente devido inexistncia de boas evidncias fsseis (utilizadas na construo de sistemas filogenticos). Recentemente, a comparao directa de material gentico ou dos seus produtos (e.g. RNA, protenas) tem permitido obviar este problema. Neste contexto, o desenvolvimento dos computadores e da Taxonomia Numrica foram de enorme importncia. A Taxonomia Numrica23 pode ser definida como o
19

Num senso lato esta consiste em trs ramos (separados, mas interrelacionados): -Classificao: arranjo de organismos em taxa (s. taxon) baseadas em semelhanas ou parentesco evolutivo, -Nomenclatura: cdigos internacionalmente aceites que regem a denominao de grupos taxonmicos, -Identificao: ramo prtico da taxonomia, consiste no processo de determinao de que uma estirpe pertence a um determinado taxon reconhecido.
20

As estirpes de uma nica espcie podem diferir umas das outras de muitas formas: biovars so variantes de estirpes bacterianas caracterizadas por diferenas bioqumicas e fisolgicas; morfovars diferem entre si morfologicamente e serovars tm diferentes propriedades antignicas. A estirpe tipo de uma espcie bacteriana assim designada por ser, geralmente, uma das primeiras a ser estudada e a mais extensivamente caracterizada, embora nem sempre seja a mais representativa.

21

ver Bacelar-Nicolau, P. e Azeiteiro, U.M., 2001, Introduo Biologia, Captulo 6.

22

filogenia (Gr. phylon, tribo ou raa + genesis, gerao ou origem).

23

ver Sneath e Sokal (1973).

27

24

a designao "clssica" deve-se ao facto de serem utilizados, em exclusividade, at ao fim da primeira metade do sc. XX.

agrupamento, por mtodos numricos, de unidades taxonmicas em taxa, com base nas suas caractersticas. A classificao resultante baseada na semelhana geral, obtida por comparao de muitas caractersticas, a que se d igual peso ou importncia. As caractersticas com relevncia para a taxonomia de procariotas podem ser agrupadas em dois tipos. Os estudos de taxonomia clssica24 incluem as caracterizaes morfolgica, fisiolgica, metablica e ecolgica dos microrganismos (Tabela 1.2). Estes mtodos so teis em identificao rotineira e tambm do alguma informao filogentica. Os estudos de caracterizao molecular, desenvolvidos durante a segunda metade do sc.
Tabela 1.2 - Algumas caractersticas clssicas usadas em taxonomia de procariotas.
Morfolgicas -Clula: forma e dimenso -Colnia: forma, pigmentao -Caractersticas ultraestruturais -Reaco a coloraes -Endsporos -Clios e flagelos -Incluses celulares Fisiolgicas -Temperatura (intervalo e valor ptimo) -pH (intervalo e valor ptimo) -Sensibilidade a inibidores e antibiticos -Tolerncia osmtica -Relao com o oxignio -Necessidades salinas -Tipo de mobilidade -Luminescncia -Pigmentos fotossintticos -Produtos secundrios de metabolismo Metablicas -Tipo geral de nutrio -Fontes de carbono e azoto -Fontes de energia -Produtos de fermentao -Mecanismos de conservao de energia -Pigmentos fotossintticos -Produtos secundrios de metabolismo

25

A percentagem de G+C no DNA reflecte a sua sequncia de bases e varia como se segue: G+C (mol%) = (G+C)/(G+C+A+T) x 100
26

Hibridao de DNA. A semelhana entre dois genomas pode ser comparada por estudos de hibridao de cidos nucleicos. Numa mistura de DNA em cadeia simples (obtido por desnaturao), os segmentos com sequncias de bases que so complementares associam-se espontaneamente formando DNA de cadeia dupla. A percentagem de DNA associado uma medida da semelhana entre os dois genomas: genoma A genoma B desnaturao DNA em cadeia simples (desnaturado) associao espontnea

XX devido aplicao de tcnicas analticas (e.g. electroforese e cromatografia) e de mtodos de taxonomia numrica, permitiram a DNA hbrido parcialmente caracterizao de padres biomoleculares dos microrganismos, em associado em cadeia dupla particular protenas e cidos nucleicos. Nestes, incluem-se a comparao de sequncias de aminocidos de protenas, tcnicas de anlise de DNA 27 David Bergey, Professor de 25 Bacteriologia na Universidade (composio de bases azotadas G+C , estudos de hibridao de cidos da Pensilvania, EUA, nucleicos26) e mais recentemente a anlise comparativa de sequncias publicou em 1923, conjuntamente com quatro genticas de cidos nucleicos (em particular de 16S rRNA). As tcnicas de colegas, uma classificao das caracterizao molecular, dado que visam produtos directos dos genes, ou bactrias que podia ser utilizada na identificao de os prprios genes, fornecem considervel informao filogentica.
espcies bacterianas - o Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. Este manual encontra-se presentemente na 9 edio. O Bergey's Manual of Systematic Bacteriology foi publicado em 1984.

O sistema de taxonomia de procariotas actualmente aceite pela comunidade de microbilogos encontra-se publicado no "Bergey's Manual of Systematic Bacteriology"27, cuja 1 edio data de 1984-1989 (Anexo1.2). O sistema de classificao apresentado nessa edio

28

principalmente fentico, uma vez que os mtodos de caracterizao disponveis data28 no permitiam classificar as bactrias satisfatoriamente com base em relaes filogenticas. Nas ltimas duas dcadas, no entanto, a taxonomia de clulas procariotas tem tido uma rpida evoluo, devido ao crescente conhecimento da biologia dos organismos procariotas, ao desenvolvimento dos computadores e utilizao de caractersticas moleculares para determinar as suas relaes filogenticas. As relaes filogenticas entre organismos so ilustradas na forma de rvores filogenticas (Quadro I.1; Figs. 1.10 e 1.11). Estas rvores filogenticas, na sua grande maioria derivadas das sequncias de 16S rRNA, podero ir sofrendo alteraes medida que novos dados so recolhidos e analisados. Note-se, no entanto, que uma informao filogentica mais completa dever ser obtida pela anlise conjunta de caractersticas moleculares e fenotpicas. A classificao filogentica, com base nas sequncias de rRNA, observadas nas figuras 1.10 e 1.11, e a classificao anterior principalmente fentica evidenciam "desajustes" considerveis. Assim, muitos taxa definidos fenotipicamente no so filogeneticamente homogneos, estando os seus membros distribudos em diversos grupos filogenticos, com base na classificao filogentica. Verifica-se tambm frequentemente que caractersticas fenotpicas com grande peso na anterior classificao "fentica" no tm importncia filogentica. Por exemplo, as bactrias fototrficas esto dispersas em diferentes grupos filogenticos e na proximidade de bactrias no fototrficas (e no agrupadas num grupo parte, como acontecia na anterior classificao), o que pode sugerir que a capacidade fotossinttica tenha existido num grupo vasto e fosse perdida em algumas das suas linhas evolutivas. Cocos, bastonetes e espirilos aparecem tambm dispersos nos diversos grupos filogenticos, sugerindo que a morfologia celular dos procariotas no um indicador forte para a proximidade de parentesco. Um outro exemplo o dos micoplasmas, anteriormente colocados numa diviso separada, Mollicutes, que aparecem filogeneticamente prximos das eubactrias gram-positivas, apesar de no possurem parede celular.

28

Caractersticas de taxonomia clssica, como a morfologia e dimenso celular, reaco de colorao ao teste Gram, relao com O2, mobilidade, presena de endsporos, modo de produo de energia, etc.

29

Quadro I.1 - rvores filogenticas

As relaes filogenticas so ilustradas na forma de diagramas ramificados ou rvores. Uma rvore filogentica constituda por ramos que se ligam a ns. Os ns representam unidades taxonmicas como espcies ou genes, sendo os ns mais externos os organismos vivos. Uma rvore filogentica pode ter uma escala de tempo, ou alternativamente o comprimento dos seus ramos pode representar o nmero de alteraes genticas que ocorreram entre dois ns. Uma rvore pode ainda possuir uma raiz (a) ou no (b): ambas estabelecem relaes filogenticas, embora a primeira fornea um n que serve de ancestral comum, e indique uma via evolutiva a partir dele, enquanto que a segunda no o faz.

A C
ns ramo

B D

D C
(a)

(b) Exemplos de rvores filogenticas. (a) rvore sem raiz, ligando quatro unidades taxonmicas; (b) rvore com raiz.

A
As rvores filogenticas so obtidas por comparao de sequncias moleculares. As sequncias de nucletidos dos organismos a estudar so alinhadas, comparadas, e determinado o nmero de posies diferentes entre as duas sequncias, ao que se chama distncia evolutiva. Os organismos so seguidamente agrupados em funo do grau de semelhana das suas sequncias moleculares, com a utilizao de mtodos numricos.

Taxonomia de procariotas Como j referido, Carl Woese e os seus colaboradores agruparam os organismos vivos em trs domnios29, com base nas molculas de 16S rRNA: Archaea, Bacteria ou Eubacteria, e Eucarya, sendo os procariotas divididos nos grupos Archaea e Bacteria. Arquebactrias e eubactrias assemelham-se na estrutura das suas clulas procariotas, mas diferem em vrias caractersticas. As eubactrias (Gr. eu, bom + bakterion, basto pequeno) ou "bactrias verdadeiras", compreendem a maioria dos procariotas conhecidos. Entre outras caractersticas, as bactrias possuem paredes celulares com um peptidoglicano que contem cido murmico (ou esto filogeneticamente 30

29

Domnio: nvel taxonmico superior ao reino.

prximas de procariotas com paredes celulares semelhantes) e tm lpidos de membrana com cidos gordos de cadeia linear e com ligaes ster. As arquebactrias diferem das bactrias no que refere a (1) composio da parede celular, que no possui cido murmico, (2) composio dos lpidos de membrana, ramificados, com cadeias alifticas, e ligaes ter, (3) tRNA, que no possuem timina em determinados segmentos, (4) ribossomas, de composio e forma distintas, e (5) RNA polimerases distintas. As arquebactrias tm sido, na sua maioria, isoladas de habitats extremfilos e possuem geralmente um metabolismo quimioautotrfico. As arquebactrias so, pela classificao corrente, divididas em cinco grupos: metanognicas, redutoras de sulfato, halfilas extremas, hipertermfilas metabolisadoras de S0 e arquebactrias desprovidas de parede celular. As Archaea dividem-se em dois filos, com base nas suas sequncias de rRNA (Fig. 1.10): - o filo Euryarchaeota (Gr. eurus, largo + archaios, primitivo), engloba predominantemente as arquebactrias metanognicas e halfilas; tambm rene arquebactrias termfilas e arquebactrias redutoras de sulfato (termoplasmas e termococos). - o filo Crenarchaeota (Gr. crene, fonte + archaios) engloba os organismos termfilos e hipertermfilos que metabolisam enxofre (ordens Thermoproteales e Sulfolobales). Recentemente foram descobertos e englobados neste reino alguns organismos que so inibidos por enxofre, ou vivem nas profundidades ocenicas a baixas temperaturas. Os Crenarchaeota so assim mais diversos do que originalmente se pensava.
Halobacterium halobium Halococcus morrhuae Thermoplasma acidophilum Methanobacterium thermoautotrophicum Methanobacterium bryantii Pyrococcus furiosus Thermococcus celer Thermofilum pendens Thermoproteus tenax Sulfolobus acidocaldarius Desulfurococcus mobilis Pyrodictium occultum Crenarchaeota Termococos Metanognicas Halobactrias Termoplasma Euryarchaeota

Figura 1.10 - Filogenia das Archaea. A rvore baseada em comparaes de 16S rRNA. Fonte: The Ribossomal Database Project.

31

O domnio Bacteria extremamente diverso, dividindo-se em 23 grupos distintos de procariotas, com base nas sequncias de rRNA, alguns dos quais aqui so sumariamente apresentados (Fig. 1.11): - Filo Aquificae. Constitui a linha evolutiva mais antiga entre as bactrias; engloba organismos gram-negativos autotrficos, como Aquifex e Hydrogenobacter, que usam H2 para produzir energia. Aquifex ("produtor de gua") produz gua, ao utilizar H2 para reduzir O2. Este grupo inclui alguns dos organismos mais termfilos. - Filo Thermotogae. Composto por organismos que so possivelmente representativos da segunda linha evolutiva mais antiga entre as bactrias. Estes organismos so anaerbios, termfilos, fermentativos, gramnegativos e possuem cidos gordos raros nas suas membranas. - Filo Deinococcos-Thermus. Grupo que inclui bactrias extremamente resistentes radiao; existe apenas uma ordem, Deinococcales, e uma famlia, Deinococcaceae, com trs gneros. O gnero Deinococcus gram-positivo, enquanto que Deinobacter geralmente gram-negativo. Os membros deste filo contm elevados nveis de carotenides (possivelmente com uma funo protectora contra as radiaes) e lpidos de membrana que lhes so nicos. - Filo Chloroflexi. Grupo de bactrias gram-negativas com uma classe e duas ordens. Muitos dos seus membros so conhecidos por assulfobactrias verdes. Chloroflexus, um dos seus representantes, so bactrias fototrfica anoxignica de movimento deslizante, enquanto que Herpetosiphon uma bactria no-fototrfica, respiratria, tambm com movimento deslizante. Ambos os gneros possuem peptidoglicanos pouco usuais e no tm lipopolissacridos na sua membrana externa. - Filo Cyanobacteria. Grupo que rene as bactrias fototrficas oxignicas.
30

O ciclo dos cidos tricarboxlicos oxida acetilCoA a CO2 e gera NADH e FADH2 posteriormente oxidados na cadeia transportadora de electres; o ciclo tambm fornece molculas de carbono para biossntese.

- Filo Chlorobia. O grupo contem bactrias fototrficas anoxignicas conhecidas por sulfobactrias verdes. Os seus membros incorporam redutivamente o CO2 atravs do ciclo dos cidos tricarboxlicos30 (em vez do Ciclo de Calvin) e oxidam sulfureto de hidrognio (H2S) a enxofre elementar (S0), que se acumula no exterior das clulas.

32

Aquifex pyrophilus Thermotoga maritima

Deinococcus radiodurans Thermus aquaticus Assulfobactrias verdes Chloroflexus aurantiacus Corynebacterium glutamicum Mycobacterium tuberculosis Micrococcus luteus Gram-positivas de elevado G+C Streptomyces griseus Frankia sp. Fusobacterium ulcerans Fusobactrias Staphylococcus aureus Bacillus cereus Enterococcus faecalis Gram-positivas de baixo G+C Streptococcus pyogenes Mycoplasma pneumoniae Clostridium perfringens Anabaena "cylindrica" Synechococcus lividus Cianobactrias Oscillatoria sp. Chlamydia trachomatis Planctomicetes Planctomyces maris Chlorobium limicola Sulfobactrias verdes Flexibacter litoralis Cytophaga aurantiaca Bacteroidetes Flavobacterium hydatis Bacteroides fragilis Fibrobacteres Fibrobacter succinogenes Treponema pallidum Espiroquetas Borrelia burgdorferi Campylobacter jejuni -Proteobacteria Helicobacter pylori Desulfovibrio desulfuricans Bdellovibrio bacterivorous -Proteobacteria Myxococcus xanthus Rickettsia rickettsii -Proteobacteria Proteobacteria Caulobacter crescentus Rhodospirillum rubrum Vibrio cholerae Escherichia coli -Proteobacteria Pseudomonas aeruginosa Neisseria gonorrhoeae Alcaligenes denitrificans -Proteobacteria Nitrosococcus mobilis

Aquificae Thermotogae Deinococcos-Thermus

Figura 1.11 - Filogenia das Eubacteria. A rvore baseada em comparaes de 16S rRNA. Fonte: The Ribossomal Database Project.

- Filo Proteobacteria. Grupo de organismos extremamente numeroso e complexo. Apesar de serem filogeneticamente prximos, os seus membros apresentam grande diversidade morfolgica, fisiolgica e de modos de vida. O reino encontra-se dividido em cinco grupos, com base nas sequncias de RNA: -Proteobacteria - O grupo inclui a maioria das formas oligotrficas. Rhodospirillum e outras assulfobactrias roxas so fototrficas. Alguns gneros tm metabolismos pouco comuns, como a metilao (e.g. Methylobacterium), a quimiolitotrofia (Nitrobacter), e a fixao de N2 (Rhizobium). Tambm aqui se encontram alguns microrganismos patognicos como Rickettsia e Brucella. Cerca de metade dos membros deste grupo apresentam estruturas morfolgicas distintivas como as prostecas31 (Caulobacter, Hyphomicrobium). -Proteobacteria - A subdiviso -proteobacteria sobrepe-se metabolicamente com a -proteobacteria. No entanto, as proteobacteria tendem a metabolisar as substncias que se difundem

31

Prosteca: extenso da clula, incluindo plasmalema e a parede celular, que mais estreita do que a clula madura. prosteca

33

aps decomposio orgnica, em zonas anaerbias. Alguns destes microrganismos utilizam H2 (Alcaligenes), NH4+ (Nitrosomonas), CH4 (Methylobacillus), ou cidos orgnicos volteis (Burkholderia).
32

A via metablica de Embden-Meyerhof degrada glucose a piruvato; tambm conhecida por via glicoltica; ver Bacelar-Nicolau, P. e Azeiteiro, U.M., 2001, Introduo Biologia, Captulo 3.
33

A via das pentoses fosfato oxida glucose 6-fosfato a ribulose 5-fosfato, e seguidamente converte esta molcula numa variedade de acares de C3 a C7; forma diversos produtos importantes (NADPH, pentoses e outros acares) e pode ainda servir de via degradativa de glucose a CO2.
34

-Proteobacteria - As -proteobacteria so compostas por 14 ordens e 22 famlias. So geralmente quimioorganotrficas, anaerbias facultativas e fermentativas, existindo, no entanto, uma considervel diversidade metablica no que respeita ao seu metabolismo energtico. Algumas usam a via metablica de Embden-Meyerhof32 e a via das pentoses fosfato33 (e.g. famlias Enterobacteriaceae e Vibrionaceae), enquanto que outras, aerbias, usam a via metablica de EntnerDoudoroff34 e a via das pentoses fosfato (e.g. famlias Pseudomonaceae e Azotobacteriaceae). Algumas so fototrficas (e.g. Chromatium), metilotrficas (Methylococcus) ou oxidantes de enxofre (Beggiatoa). -Proteobacteria - A subdiviso -proteobacteria contem sete ordens e 18 famlias. A maioria dos membros das -proteobacteria pode ser colocada num de trs grupos: (1) bactrias que predam outras bactrias, e.g. Bdellovibrio, (2) ordem Myxococcales, que rene mixobactrias frutificantes; as mixobactrias frequentemente tambm predam outras bactrias, e (3) bactrias anaerbias redutoras de sulfato (SO42-) ou S0 (com produo de H2S), que oxidam nutrientes orgnicos (e.g. Desulfovibrio). -Proteobacteria - A -proteobacteria uma subdiviso pequena, composta por uma ordem e duas famlias. Nela se incluem dois importantes gneros patognicos: Campylobacter e Helicobacter. - Filo Firmicutes. Este grupo, tambm conhecido por Bactrias grampositivas de baixo contedo G+C, constitudo por organismos cujo teor de G+C do DNA inferior a 50 %. A maioria destes organismos grampositiva e heterotrfica. Os micoplasmas encontram-se tambm includos neste grupo apesar de no possurem parede celular e (consequentemente) reagirem como gram-negativas. Este grupo apresenta uma considervel diversidade morfolgica (cocos, bastonetes lineares, espirilos e formas pleomrficas35, no caso dos micoplasmas). Alguns membros formam endsporos. As bactrias gram-positivas de baixo G+C dividem-se em trs subgrupos: Clostridia - A classe Clostridia contem trs ordens e 11 famlias. Os membros deste grupo so geralmente anaerbios, embora diversos em termos de morfologia e dimenso. Alguns gneros formam endsporos (e.g. Desulfotomaculum, Clostridium).

A via metablica de EntnerDoudoroff converte glucose a piruvato e gliceraldedo 3fosfato.

35

Pleomrfico: refere-se a uma clula procariota que tem uma morfologia varivel, no possuindo uma forma caracterstica nica.

34

Mollicutes - A classe Mollicutes contem uma ordem e trs famlias. Os seus membros, comumente designados micoplasmas, so desprovidos de parede celular. As clulas so, assim, pleomrficas e coloram gramnegativo, dado no possurem parede celular. As clulas so geralmente imveis. Bacilli Grupo que compreende uma grande variedade de bastonetes ou cocos, gram-positivos, aerbios ou anaerbios facultativos. A classe Bacilli tem duas ordens, Bacillales e Lactobacillales. Alguns gneros formam endsporos. Esta seco contem muitos gneros importantes do ponto de vista mdico e industrial, e.g. Bacillus, Lactobacillus, Streptococcus, Enterococcus, Listeria e Staphylococcus. - Filo Actinobacteria. Este grupo, tambm conhecido por Bactrias grampositivas de elevado contedo G+C, constitudo por organismos cujo teor de G+C do DNA superior a 5055 %. Os membros deste grupo so procariotas com uma enorme diversidade morfolgica, desde cocos, a bastonetes regulares ou irregulares, e hifas ramificadas. Nenhuma destas bactrias produz endsporos verdadeiros, embora muitas formem esporos assexuados e algumas tenham ciclos de vida complexos. As paredes celulares apresentam considervel variao na sua composio qumica, em particular no peptidoglicano. A taxonomia deste grupo complexa. Aqui se renem gneros como Corynebacterium, Micrococcus, Mycobacterium, Nocardia e os actinomicetes. - Filo Planctomycetes e filo Chlamydiae. Os membros destes fila so muito distintos de outros procariotas, em funo das sequncias de rRNA. Os Planctomycetes so clulas cocides/ovides ou em forma de pra, geralmente unicelulares, e no possuem peptidoglicano na parede celular; dividem-se por gemulao e podem formar apndices (no-prostecados); muitos apresentam mobilidade por flagelos ou movimentos deslizantes. Ao contrrio dos Planctomycetes, o gnero Chlamydia, ordem Chlamydiales, composto por parasitas obrigatrios (alguns dos quais so agentes patognicos da espcie humana); estes pequenos organismos so cocos unicelulares, sem apndices e que no formam peptidoglicano. - Filo Spirochaetes. Os membros deste grupo, espiroquetas, incluem clulas gram-negativas de forma helicoidal, mveis, caracterizados por uma morfologia e um mecanismo de mobilidade nicos. Possuem flagelos periplsmicos que se localizam no espao entre o cilindro protoplsmico (que contem o citoplasma e nucleide) e uma membrana externa, de natureza particular; estes flagelos conferem mobilidade clula apesar de no contactarem directamente com o meio exterior. As espiroquetas so

35

quimioheterotrficas, podendo ser de vida livre, simbiontes ou parasitas. O reino tem uma classe, Spirochaetes, trs famlias, e treze gneros. - Filo Bacteroidetes. Grupo dividido em trs classes: Bacteroidetes, Flavobacteria e Sphingobacteria (conhecidos respectivamente por Bacterides, Flavobactrias e Esfingobactrias). Bactrias de movimento deslizante, importantes do ponto de vista ecolgico.

1.3 Protistas
Quando Whittaker popularizou o sistema de classificao de cinco reinos, em 1969, o reino Protista agrupava todos os organismos eucariotas unicelulares. Nas duas dcadas seguintes, os limites deste reino foram alargados passando a incluir alguns fila de organismos multicelulares que eram anteriormente classificados como plantas (Algae) ou fungos (e.g. Oomycetes). Assim, este grupo constitui um reino, filogeneticamente eclctico, formado por todos os organismos eucariotas que no so fungos, plantas ou animais. A maioria dos protistas so unicelulares, embora a grande parte dos seus fila incluam organismos multicelulares. De algum modo, classificar todos os protistas num mesmo reino reflecte a nossa ignorncia sobre o modo como os diferentes tipos de organismos se relacionam uns com os outros. No entanto, muito trabalho est a ser desenvolvido neste campo (em particular, comparaes de sequncias genticas de rRNA) e, de prever que dentro em breve o "tradicional" reino Protista seja substitudo por um arranjo filogentico mais correcto. Nas seces seguintes iremos centrar-nos nas caractersticas de 12 fila de Protistas (note-se que a maioria dos taxonomistas reconhece hoje a existncia de 30 a 40 fila nos Protista). Os fila so apresentados, agrupados, em funo do tipo de nutrio predominante em cada grupo, em protozorios (protistas tipo-animal), protistas tipo-fungo, e algas (protistas tipo-planta) de modo a enfatizar a diversidade de funes ecolgicas destes organismos.

1.3.1 Protozorios: Protistas tipo-animal

O termo Protozoa significa "primeiros animais". Os Protozorios so, na sua maioria, organismos heterotrficos que se alimentam de bactrias, de outros protistas e de matria orgnica morta, havendo contudo alguns 36

protozorios simbiticos ou parasitas. Os protozorios so "tradicionalmente" subdivididos em fila, dependendo, em parte, dos seus diversos modos de locomoo e nutrio (Tabela 1.3).
Tabela 1.3 - Alguns fila de Protozoa (nutrio principalmente por ingesto)
Grupo Filo
Rhizopoda Sarcodina

Descrio sumria
Amibas nuas e com concha; locomoo e nutrio com o uso de pseudpodes. Reproduo assexuada. Maioria de vida livre.

Foraminifera

Exclusivamente marinhos. Locomoo e nutrio com o uso de pseudpodes estreitos e interconectados que saem de compartimentos calcrios com arranjo espiralado.

Actinopoda (Heliozorios e Radiozorios)

Organismos planctnicos, geralmente com simetria esfrica. Utilizam axopdia (pseudpodes estreitos, radiais, suportados por microtbulos internos) na sua nutrio e flutuao. Os radiozorios possuem esqueletos internos de silcio, embora os heliozorios no os possuam.

Esporozorios

Apicomplexa

Organismos parasitas em hospedeiros animais. Ciclos de vida complexos com formas produtoras de esporos (contm um complexo apical) e quistos (em geral). Sexualidade por singamia.

Flagelados

Zoomastigophora Locomoo e nutrio com o uso de flagelos. Maioria unicelular; alguns formam colnias. Reproduo assexuada por fisso binria; sexualidade conhecida em alguns membros. Maioria parasita. Ciliophora Locomoo e nutrio com o uso de clios. Maioria unicelular; alguns formam colnias ssseis. Reproduo assexuada por fisso binria; sexualidade envolvendo conjugao. Maioria de vida livre, muitos simbiontes e alguns parasitas.
pseudpode ncleo

Ciliados

Os membros do filo Rhizopoda (Gr. rhiza, raiz + podos, p) - amibas e seus semelhantes - so protistas unicelulares, heterotrficos e no possuem flagelos (Fig. 1.12). A maioria de vida livre embora alguns sejam parasitas. No apresentam meiose ou qualquer modo de sexualidade; reproduzem-se por processos assexuados. Os Rhizopoda formam um fuso mittico semelhante ao da maioria dos eucariotas embora as fases da mitose no sejam observadas em muitos dos seus membros. A locomoo

vacolo digestivo

vacolo contrctil

Figura 1.12 - Esquema de Amoeba, membro do filo Rhizopoda.

37

processa-se por meio de pseudpodes (Gr. pseudo, falso + podos, p), projeces de citoplasma que se estendem, ancorando a extremidade, e "puxam" a amiba. De um modo semelhante, os pseudpodes englobam partculas de alimento. No seu movimento esto envolvidos microfilamentos de actina e de miosina, semelhantes aos encontrados nos msculos. Alguns Rhizopoda formam quistos resistentes. Em espcies parasticas, como Entomoeba histolytica (agente causador de desinteria amebiana), a formao do cisto possibilita amiba resistir digesto pelo seu hospedeiro. Quando as condies se tornam favorveis, o cisto quebra-se libertando quatro, oito ou mais amibas (formadas por mitose no interior do cisto) no tracto digestivo do hospedeiro. A infeco primria d-se no intestino do hospedeiro, frequentemente atacando de seguida o fgado e outros rgos. O cistos so dispersos pelas fezes e transmitidos por gua, comida, moscas, ou contacto directo. Os Foraminifera (L. foramen, pequeno buraco + ferre, ter) so exclusivamente marinhos. Possuem conchas (contendo carbonato de clcio) com pequenos poros atravs dos quais saem pequenas extenses de citoplasma, com funes na formao da concha, nutrio e locomoo (Fig.1.13). Muitos Foraminifera formam simbioses com algas, que vivem sob a sua concha, e que lhes fornecem compostos orgnicos fotossintetizados. Todos os membros do filo Apicomplexa (anteriormente designados Esporozorios) so parasitas de animais. Estes organismos disseminam-se na forma de pequenas clulas denominadas esporozitos. A maioria dos Apicomplexa possui ciclos de vida complexos, com estgios sexuados e assexuados, caracterizados por uma alternncia de geraes haplide e diplide; geralmente necessitam de dois ou mais hospedeiros de espcies diferentes para completar o ciclo de vida. Um exemplo de Apicomplexa so as espcies de Plasmodium, agente causador da malria (Fig. 1.14). Todos os anos cerca de 300 milhes de pessoas so infectadas e at 2 milhes morrem desta doena.

Figura 1.13 - Globigerina bulloides, membro do filo Foraminifera.

38

4. O mosquito pica outro humano, assim infectando uma nova vtima com esporozitos de Plasmodium. 3. Os zigotos enquistam-se nos tecidos musculares. Concomi -tantemente d-se a meiose, seguida de mitoses que resultam na formao de esporozitos. Estes migram para as glndulas salivares do mosquito.

HOMEM

5. Os esporozitos infectam as clulas do fgado e dividem-se originando os merozitos.

merozitos fgado clula do fgado hemcias

MEIOSE esporozito

6. Os merozitos infectam as hemcias e a se dividem por mitose sendo libertos na corrente sangunea, periodicamente, causando as febres caractersticas da malria.

zigoto (2n)

MOSQUITO FECUNDAO gmetas

1. Mosquito fmea do gnero Anopheles pica um humano infectado e "recebe" gametcitos de Plasmodium no sangue ingerido.

7. Alguns merozitos dividem-se formando gametcitos, e completam o ciclo de vida numa nova fmea de Anopheles.

2. Formam-se os gmetas, ocorre fecundao e formam-se zigotos no tubo digestivo do mosquito.

Figura 1.14 - Ciclo de vida do Plasmodium vivax, membro do filo Apicomplexa.

A designao do filo Zoomastigophora provm da presena de flagelos, que utilizam para a locomoo (Gr. mastix, flagelo). Os Zoomastigophora (tambm designados zooflagelados) so heterotrficos e absorvem molculas do ambiente ou capturam presas por fagocitose. Alguns dos membros deste filo so formas livres, outros simbiticos, outros ainda so parasitas, como Trypanosoma brucei, o agente causador da doena do sono (Fig.1.15).
membrana dobra de pelcula ondulante flagelo associado retculo endoplsmico aparelho de Golgi corpo basal do flagelo

ncleo mitocndria flagelo livre ribossoma

Figura 1.15 - Esquema de clulas de Trypanosoma.

Os membros do filo Ciliophora (Gr. cilium, pestana) so clulas heterotrficas, com elevado grau de complexidade, e sem parede celular (Fig. 1.16). A sua denominao deve-se presena de clios, utilizados na locomoo e nutrio. A maioria dos Ciliophora possui dois ncleos: um macroncleo, que contem centenas de cpias de genoma e que controla o metabolismo celular e a reproduo assexuada, e um microncleo, que contem uma nica cpia de genoma e tem funes na reproduo sexuada. As partculas nutritivas podem ser encaminhadas pelo movimento sncrono dos clios at uma "boca", onde so fagocitadas e incorporadas

39

em vacolos digestivos. Os Ciliophora formam, para alm dos vacolos digestivos, vacolos para regular o balano hdrico da clula - vacolos contrcteis. Os Ciliophora so geralmente dulaqucolas e de vida livre.
extremo anterior

vacolo contrctil anterior macroncleo microncleo clios vacolo de fagocitose

poro anal cavidade bocal vacolo contrctil posterior extremo posterior

Figura 1.16 - Esquema de um Paramecium, membro do filo Ciliophora. Note-se o percurso das partculas nutritivas fagocitadas: so incorporadas em vacolos digestivos, onde so digeridas (pela aco de enzimas e cido clordrico); as molculas resultantes passam para o citoplasma, e o contedo residual expelido para o exterior da clula, quando os vacolos se fundem com uma regio do plasmalema designada poro anal. Este organismo, como outros protistas, incorpora gua, por osmose, proveniente do meio ambiente. O excesso de gua regulado por vacolos contrcteis que periodicamente se expandem e contraem (ao esvaziar o seu contedo).

1.3.2 Protistas tipo-fungo

Os membros dos fila Myxomycota, Acrasiomycota e Oomycota assemelham-se a fungos na sua aparncia e estilo de vida, mas diferem destes na organizao celular, reproduo e ciclos de vida (Tabela 1.4).
Tabela 1.4 - Fila de Protistas tipo-fungo
Filo
36

Descrio sumria
Forma plasmdio. Saprfitas sexuada.
36

Saprfita: organismo que obtm os seus nutrientes de matria orgnica morta.

Myxomycota

de vida livre. Nutrio holozica .

37

Clulas biflageladas. Corpos frutferos envolvidos na reproduo

37

Nutrio holozica: tipo de nutrio animal, que envolve a digesto de outro organismo ou de componentes de outro organismo, por fagocitose, com a subsequente formao de vacolo digestivo.

Acrasiomycota

Clulas nuas, com celulose na composio da parede. Ausncia de flagelos. Nutrio holozica. Apresentam pseudoplasmdio filamentoso. Corpos frutferos envolvidos na reproduo assexuada.

Oomycota

Estrutura somtica composta por hifas (de dimetro varivel). Esporos biflagelados. Parede celular com celulose. Saprfita ou parasitas. A maioria aqutica ou vive no solo.

40

Os membros do filo Myxomycota passam a maior parte do seu ciclo de vida formando uma massa amebide, cenoctica38, chamada plasmdio (Fig. 1.17). Alimentam-se por fagocitose, englobando partculas slidas por intermdio de pseudpodes. O plasmdio toma, frequentemente, uma forma filamentosa, que consiste numa adaptao que aumenta a rea de superfcie do organismo em contacto com o substrato (fonte de alimento, oxignio e gua). Quando em condies de secura ou deficincia de alimentos, o plasmdio cessa o crescimento e formam-se corpos frutferos, com funes de reproduo sexuada, chamados esporngios. As clulas da extremidade do esporngio dividem-se por meiose e originam esporos haplides, resistentes, que apenas germinam quando as condies se tornam favorveis ao crescimento somtico. As clulas resultantes da germinao dos esporos podem ser nuas39 ou flageladas, mas em qualquer dos casos, fundem-se em pares (amebide-amebide ou flageladaflagelada) formando um zigoto. O zigoto por mitose nucleares origina um novo plasmdio.
esporngio jovem

38

Cencito: estrutura formada por uma massa de citoplasma multinucleado, sem divises membranares ou paredes individualizando clulas.

39

Clulas nuas ou amebides: sem flagelos.

plasmdio

zigoto FECUNDAO clulas nuas esporos MEIOSE

esporngio maduro

2n
clulas flageladas

Figura 1.17 - Ciclo de vida de um membro do filo Myxomycota.

Os membros do filo Acrasiomycota, ao contrrio dos Myxomycota, passam o maior do ciclo de vida como organismos unicelulares (Fig. 1.18). Quando em condies de deficincia alimentar, estas clulas amebides agregam-se em estruturas multicelulares, os pseudoplasmdios40, que posteriormente do origem a esporocarpos, produtores de esporos assexuados. Em condies ambientais favorveis, os esporos germinam e novas clulas amebides emergem, terminando a fase assexuada do ciclo de vida. No fase sexuada do ciclo de vida, duas clulas amebides fundem-se formando um zigoto diplide. O zigoto cresce alimentando-se de outras clulas haplides, e forma uma clula gigante, que produz uma

40

Pseudoplasmdio: estrutura multicelular constituda por clulas amebides que, contrariamente ao verificado com os plasmdios, mantm a sua individualidade. Esta estrutura, com uma forma cilndrica forma-se por resposta a um composto qumico - acrasina - segregado pelas clulas.

41

parede celular resistente. Esta clula gigante, resistente, divide-se por meiose, seguida por vrias mitoses, formando-se assim novas amibas haplides que emergem quando a parede celular quebra.

amiba

amibas agregadas

MEIOSE REPRODUO SEXUADA

2n

n
esporos

REPRODUO ASSEXUADA

zigoto FECUNDAO

esporocarpo (corpo frutfero)

colnia pseudoplasmdio

Figura 1.18 - Ciclo de vida de Dictiostelium, membro do filo Acrasiomycota.

41

Os mldios da videira e da batata so causados respectivamente por Plasmopara viticola por Phytophthora infestans.

O filo Oomycota inclui e.g. os mldios e os fungos aquticos (designao que se deve anterior incluso dos Oomycota no reino Fungi). Estes organismos so constitudos por hifas cenocticas, uma adaptao anloga dos membros do reino Fungi, mas cujas paredes contm celulose na sua composio. A maioria vive em ambientes aquticos, ou no solo, embora alguns sejam parasitas de plantas41. Alguns Oomycota aquticos parasitam peixes. Os membros do filo Oomycota distinguem-se dos restantes protistas pela estrutura dos seus esporos mveis, zosporos (biflagelados). A reproduo sexuada envolve gametngios femininos, oognios, e gametngios masculinos, anterdeos. O zigoto formado desenvolve paredes resistentes, resultando numa clula chamada osporo, que d o nome ao filo. O ciclo de vida de um membro do filo Oomycota encontra-se esquematizado na figura 1.19.

42

oognio MEIOSE quisto REPRODUO ASSEXUADA zosporo

anterdeo

n
FECUNDAO

REPRODUO SEXUADA zigotos (osporos)

zoosporngio

2n

zigoto em germinao

Figura 1.19 - Ciclo de vida de um membro do filo Oomycota.

1.3.3 Algas: Protistas tipo-planta

O termo alga refere-se geralmente a organismos aquticos relativamente simples e fotoautotrficos. excepo dos procariotas cianobactrias (tambm conhecidas por algas azuis), os organismos designados por algas so eucariotas e includos no reino Protista, na classificao de cinco reinos, pela maioria dos sistematas. semelhana dos membros do reino Plantae, todas as algas tm clorofila a, como pigmento fotossinttico principal. No entanto, diferem consideravelmente no seu complemento de pigmentos acessrios (outras formas de clorofila, carotenides, xantofilas e ficobilinas), a mistura dos quais se reflecte nas cores caractersticas das algas. A diversidade das algas tambm patente na morfologia e estrutura do talo, na estrutura dos seus cloroplastos, composio qumica da parede celular, compostos de reserva, e no nmero, tipo e posio de flagelos42, assim como em aspectos relacionados com a reproduo. Neste livro, consideramos apenas trs fila que incluem organismos multicelulares: Heterokontophyta, Rhodophyta e Chlorophyta. O filo Heterokontophyta inclui, para alm das classes Bacillariophyceae Chrysophyceae e Xanthophyceae, constitudas por organismos unicelulares ou coloniais, a classe Phaeophyceae, constituda pelas algas de maior dimenso e grau de complexidade estrutural (e.g. Laminaria, Fucus, Sargassum). As Phaeophyceae (Gr. phaios, castanho), ou algas castanhas, so todas multicelulares e a maioria marinha. A sua caracterstica cor castanha ou verde-azeitona deve-se aos pigmentos acessrios presentes nos cloroplastos. Algumas apresentam uma diferenciao que se assemelha

42

ver Nicolau, P.B. e Azeiteiro, U.M., 2001, Introduo Biologia, Captulo 6, Tabela 6.7.

43

43

esquema de alga evidenciando o aerocisto (aer.).

aer.

aos dos tecidos e rgos das plantas (Fig. 1.20). Estas semelhanas so, contudo, analogias e no homologias. O termo talo usado para designar o corpo da alga que se assemelha a uma planta, no tem razes, caules ou folhas. O talo geralmente constitudo por um disco de fixao, que fixa a alga ao substrato, um estipe e lminas, o seu principal tecido fotossinttico. Algumas algas castanhas possuem aerocistos43 que mantm as lminas erectas. Uma outra adaptao apresentada por algumas Phaeophyceae consiste na presena de celulose e polissacridos gelatinosos nas paredes celulares, que simultaneamente lhes conferem proteco fsica contra a agitao das ondas e batimento nas rochas, e as impede de desidratar durante a exposio ao ar na mar baixa. Uma variedade de ciclos de vida evoluiu entre as Phaeophyceae (Fig. 1.20), os mais complexos dos quais, incluem uma alternncia heteromrfica de geraes.
lmina
ESPORFITO clulas na superfcie da lmina desenvolvem-se em esporngios MEIOSE

estipe

zo poros (dois tipos)

disco de fixao

GAMETFITO GAMETFITO

zigoto

gmeta gmetas FECUNDAO

2n

gametfito maduro

Figura 1.20 - Ciclo de vida da Laminaria, Phaeophyceae do filo Heterokontophyta.

Figura 1.21 - Microcladia coulteri, membro do filo Rhodophyta.

Os membros do filo Rhodophyta (Gr. rhodos, vermelho), ou algas vermelhas, so na sua maioria marinhos (Fig. 1.21). Apesar da sua denominao, nem todas as Rhodophyta so vermelhas. Espcies adaptadas a viver a diferentes profundidades diferem na proporo relativa dos pigmentos acessrios, o que resulta em algas de cores que variam do quase negro, (guas profundas) ao vermelho (profundidade moderada), ou esverdeadas (perto da superfcie). Algumas espcies tropicais no tm pigmentos, e vivem heterotroficamente, como parasitas de outras algas vermelhas. Algumas algas vermelhas de zonas intertidais, tm a

44

particularidade de incorporar carbonato de clcio nas paredes celulares, o que as torna no comestveis por invertebrados marinhos. A maioria das Rhodophyta so multicelulares, formando um talo filamentoso que se encontra fixo ao substrato por um disco de fixao. Os seus ciclos de vida so extremamente diversos, e frequentemente apresentam alternncia de geraes. No possuem formas flageladas nos seu ciclos de vida (os gmetas so transportados pelas correntes de gua). O filo Chlorophyta (Gr. chloros, verde) inclui organismos multicelulares, bem como unicelulares. So maioritariamente dulaqucolas. Muitas espcies unicelulares vivem livres (plncton, solo hmido, neve), ou como simbiontes com protozorios ou invertebrados (contribuindo para a dieta do hospedeiro). As Chlorophyta encontram-se tambm em associaes simbiticas com fungos, conhecidas por lquenes (ver Quadro I.2). Para alm das formas unicelulares (e.g. Chlamydomonas; Fig. 1.22a), existem formas coloniais, constitudas por clulas individuais (e.g. Volvox; Fig. 1.22b), ou formas filamentosas multinucleadas, obtidas por divises nucleares sucessivas, sem a ocorrncia de citocinese (e.g. Bryopsis; Fig. 1.22c), ou ainda formas multicelulares (e.g. Ulva; Fig. 1.22d). Cada uma destas trs formas coloniais e multicelular, ter evoludo por linhas evolutivas distintas a partir de um ancestral unicelular, flagelado, comum.

(a)

(b)

(c)

(d)

Figura 1.22 - Alguns membros do filo Chlorophyta: (a) Chlamydomonas, (b) Volvox; (c) Bryopsis; (d) Ulva.

semelhana das plantas, dos quais parecem ser os organismos ancestrais, as Chlorophyta tm paredes celulares de natureza celulsica, clorofila a e b, e armazenam produtos fotossintetizados sob a forma de amido. A maioria das Chlorophyta apresentam ciclos de vida complexos, com fases sexuais e assexuadas. A reproduo assexuada envolve a formao de zosporos, que se desenvolvem directamente num novo indivduo. A reproduo sexuada envolve a fuso de gmetas, geralmente biflagelados (provenientes de indivduos distintos). Muitas espcies apresentam alternncia de geraes, mas em que a gerao gametfita

45

geralmente dominante sobre a esporfita (ao contrrio da maioria das plantas; Fig. 1.23).
zosporos

44

Pirenide: regio diferenciada do cloroplasto que o local de formao de amido nas cianobactrias.

MEIOSE 2n zigoto
REPRODUO SEXUADA vacolos contrcteis ncleo parede celular flagelos cloroplasto pirenide REPRODUO ASSEXUADA

clula adulta SINGAMIA + clula produtora de gmetas

clula produtora de zosporos

Figura 1.23 Estrutura e ciclo de vida da Chlamydomonas.

1.4 Fungos
Os organismos do reino Fungi so distintos dos restantes no seu modo de nutrio, organizao estrutural, crescimento e reproduo. Os fungos so eucariotas e, na sua maioria, multicelulares, no entanto no tm diferenciao em tecidos. So organismos filamentosos, constitudos por hifas. Todos os fungos so heterotrficos, tendo desenvolvido um tipo de nutrio osmotrfica, com digesto externa dos alimentos. Os fungos tm reproduo assexuada e sexuada, mas em qualquer dos casos o produto final destas so (geralmente) esporos. Um caso particular de heterogeneidade gentica ocorre no ciclo sexual dos fungos: o dicarion. Os fungos encontram-se principalmente em habitats terrestres, embora alguns sejam aquticos. Em associaes simbiticas, formando lquenes, encontram-se distribudos numa variedade de habitats inspitos, como os frios desertos da Antrctica ou as tundras rcticas. Outros, existem nos tecidos vivos de plantas e, outros ainda, formam associaes mutualistas com insectos (trmites e formigas).

46

Os fungos so os principais decompositores da celulose e lenhina, os componentes maioritrios da material vegetal (a maioria dos procariotas no consegue digerir a parede celular vegetal).

1.4.1 Estrutura
O corpo vegetativo45 da maioria dos fungos geralmente imperceptvel a olho nu, estando organizado em redor e dentro dos tecidos que constituem a sua fonte de alimento. Os fungos, com a excepo das leveduras46, so formados por hifas, que no seu conjunto formam o miclio (Fig.1.24). Hifas so pequenos filamentos (dimetro mdio de 5 a 10 m) constitudos por uma parede celular tubular que envolve o plasmalema e o citoplasma. As hifas podem ser divididas em clulas atravs de septos, que raramente formam uma barreira completa (excepto para as clulas reprodutoras). Na maioria das hifas, o citoplasma e os organelos (incluindo o ncleo) movem-se livremente passando atravs de poros nos septos. Os fungos no possuem tecidos diferenciados, no entanto as hifas podem sofrer transformaes e apresentar diferenciaes que correspondem a adaptaes a funes especficas como a fixao, a nutrio (Fig. 1.25) ou reproduo (caixas de texto 54 e 55).
corpo frutfero
45

Vegetativo: refere-se a uma clula, organismo ou estgio de vida, em que a nutrio e o crescimento predominam.
46

RE

RE

hifas

Leveduras: fungos unicelulares, a maioria dos quais se inclui no filo Ascomycota, embora tambm existam membros nos outros fila (40 gneros; 350 espcies). Reproduzem-se assexuadamente por fisso celular ou gemulao (formao de uma clula menor a partir de uma maior). Algumas leveduras reproduzem-se sexuadamente, formando ascos ou basdios, sendo portanto classificadas como Ascomycota ou Basidiomyota. Outros fungos podem apresentar crescimento leveduriforme ou miceliano dependendo da disponibilidade de nutrientes. As leveduras so comercialmente importantes na fermentao e industria de panificao.
47

PC Pl G

PS

vac

Quitina: polmero de Nacetil-glucosamina em ligaes -1, 4.

(a)

(b)

Figura 1.24 - Representao esquemtica de uma (a) hifa e (b) miclio. M, mitocndria; G, Aparelho de Golgi; RE, retculo endoplsmico; V, vescula; vac, vacolo; R, ribossoma; N, ncleo; Pl, plasmalema; PC, parede celular; PS, poro do septo.

O citoplasma fngico tem o complemento de organelos e estruturas membranares das clulas eucariotas, estando os cloroplastos no entanto ausentes. Os ncleos das clulas fngicas so relativamente pequenos, e o processo de mitose difere dos outros organismos pois o envelope nuclear permanece intacto e o fuso mittico forma-se no seu interior. As paredes

47

celulares das hifas so constitudas essencialmente por quitina e hemiceluloses. A quitina um polissacrido linear47, mais resistente do que a celulose degradao microbiana. Em condies ptimas de crescimento, o miclio pode crescer cerca de 1 km por dia. Este crescimento rpido possvel devido livre circulao de citoplasma no interior das hifas (atrs mencionado) que possibilita que grandes quantidades de protenas e outros materiais sintetizados sejam canalizados para a extremidade das hifas em crescimento.
hifa

esporangiforo

haustrios hifa rizides corte transversal de folha

hifa nemtode anel

(a)

(b)

(c)

Figura 1.25 - Algumas adaptaes das hifas fngicas: (a) rizides, ramificaes com funes de fixao e presumivelmente alimentao; (b) haustrio, prolongamento de hifa para o interior das clulas do hospedeiro com funes de fixao e/ou de alimentao; (c) armadillha, modificao de hifa que permite capturar presas.

1.4.2 Nutrio
Os fungos so heterotrficos, mas em contraste com os animais obtm os seus nutrientes por absoro. O fungo excreta enzimas hidrolticas sobre os seus alimentos (digesto externa) e as molculas orgnicas resultantes so absorvidas pelas hifas. Este modo de nutrio por absoro - nutrio osmotrfica ou absorptiva - especializa os fungos como saprfitos, parasitas ou simbiontes mutualistas. A maioria dos fungos so organismos saprfitos, ou seja absorvem os nutrientes de material orgnico morto (e.g. animais, troncos de rvores) que decompem. Os fungos parasticos absorvem os nutrientes de clulas ou organismos vivos; alguns destes so espcies patognicas. Fungos mutualistas tambm absorvem nutrientes de outros organismo vivo, mas retribuem com funes que beneficiam o organismo associado (e.g. micorrizas e lquenes; ver Quadros I.2 e I.3). Alguns fungos possuem adaptaes das hifas armadilhas - que lhes permitem ser predadores. A adaptao mais comum a secreo de substncias adesivas pelas hifas, de modo que organismos que passem por perto fiquem presos. Uma adaptao mais dramtica predao 48

apresentada por algumas espcies de fungos que vivem no solo; as hifas destes fungos formam anis (Fig. 1.25c) com trs clulas, com um dimetro semelhante ao de nemtodes. O contacto de um nemtode com o anel estimula as clulas, que entumecem prendendo o nemtode. Em qualquer dos casos, as hifas rapidamente invadem as presas e as digerem.

1.4.3 Reproduo
A reproduo dos fungos pode ser sexuada, assexuada ou parassexuada48. Na reproduo sexuada, duas clulas diferenciadas (gmetas) de hifas de indivduos geneticamente compatveis fundem-se49. Nesta fuso podemos considerar duas fases distintas: plasmogamia (fuso do citoplasma) e cariogamia (fuso dos ncleos). Nos fungos mais simples, a cariogamia segue-se quase imediatamente aps a plasmogamia, enquanto que nos fungos mais complexos estes dois processos se separam temporalmente, levando existncia de dicarions (estruturas, vegetativas ou reprodutoras, dicariticas50). Numa hifa dicaritica (possui dois ncleos por compartimento), os ncleos mantm-se separados coexistindo durante a maior parte do ciclo de vida do fungo. As mesmas hifas so heterocariticas (estrutura heterocarion) pois contm ncleos geneticamente distintos no mesmo compartimento. Se os ncleos forem todos geneticamente idnticos a hifa um homocarion. Um monocarion (em oposio a dicarion) uma hifa em que cada compartimento tem apenas um ncleo. Quando, por fim, se d a cariogamia, forma-se um zigoto que imediatamente se divide por meiose. Desta diviso formam-se quatro esporos sexuais. O ncleo dos fungos sempre haplide, com a excepo do zigoto que diplide. Em qualquer dos casos, a reproduo baseia-se na formao de esporos estruturas especializadas para a reproduo, sobrevivncia e disperso51. Os esporos dos fungos so muito diversos em tamanho e forma. So geralmente unicelulares, delimitados do corpo fngico, e caracterizados por uma actividade metablica mnima; germinam quando encontram condies favorveis. Os esporos, como j referido, podem ser formados por um processo sexuado ou assexuado. Os fungos possuem trs tipos de estruturas reprodutivas: (i) esporngios, estruturas envolvidas na produo de esporos (ii) gametngios, estruturas no interior das quais se formam os gmetas, (iii) condios, esporos assexuados, multinucleados, no produzidos em esporngios.
48

Parassexualidade: fenmeno que constitui um mecanismo alternativo sexualidade para reduzir um ncleo diplide a haplide, com a obteno de uma nova composio gentica.
49

Nos fungos, no existe distino entre estruturas femininas e masculinas, ou indivduos femininos e masculinos; mas uma distino entre tipos geneticamente compatveis.
50

As estruturas dicariticas tm algumas propriedade dos diplides, pois ambos os genomas so transcritos.

51

Os esporos so dispersos, geralmente pelo vento, a distncias enormes; j foram encontrados esporos de fungos a mais 160 km acima da crosta terrestre.

49

1.4.4 Classificao
52

Alguns autores ainda consideram o esquema de classificao em divises, um termo botnico que um vestgio de sistemas de classificao anteriores, em que fungos estavam agrupados com as plantas.
53

Consideraremos um esquema taxonmico que classifica as (cerca de 100.000) espcies fngicas em trs fila52: Zygomycota, Ascomycota e Basidiomycota. A distino entre os vrios grupos feita principalmente com base nos modos e estruturas reprodutoras (Tabela I.5). Alguns autores referem adicionalmente o filo Chytridiomycota. Outros grupos, tradicionalmente includos no reino Fungi, como os membros do filo Oomycota, so actualmente includos no reino Protista53. Um grupo de fungos, a que chamamos fungos imperfeitos (cerca de 17.000 espcies) no formam estruturas reprodutoras sexuais. Tcnicas de taxonomia molecular (e.g. sequenciao de cidos nucleicos) possibilitam incluir estes organismos num dos trs fila, descrevendo-os como fungos assexuados.
Tabela 1.5 - Caractersticas dos fila do reino Fungi
Filo Zygomycota Ascomycota Basidiomycota

Diferem em diversas caractersticas fundamentais, como (i) os seus esporos mveis, (ii) as paredes ricas em celulose, (iii) o padro de mitose e (iv) as hifas diplides.

n. de espcies reproduo assexuada reproduo sexual septos

600 esporagisporos zigsporos ausentes

60.000 condios

25.000 fragmentos, condios

ascsporos, produzidos basidisporos, em ascos produzidos em basdios presentes, perfurados Presentes, perfurados, especializados

Filo Zygomycota Estes fungos so principalmente terrestres e vivem no solo, ou em plantas e animais em decomposio. Alguns formam micorrizas. Os Zigomycota tm as hifas septadas, excepto quando formam as estruturas reprodutoras, esporngios e gametngios. O nome do grupo deriva de estruturas caractersticas chamadas zigsporos. Um exemplo tpico deste grupo o bolor preto do po, Rhizopus stolonifer (Figura 1.26).
54

Segundo outros autores, o zigsporo um dicarion, i.e. a cariogamia d-se aquando da germinao do zigsporo: os ncleos fundem-se formando zigotos (ncleos diplides), que se divide por meiose (produto da qual se formam os esporos).

A reproduo sexuada ocorre com fuso de gametngios (compartimentos multinucleados e individualizados por septos completos), formando-se um zigsporo54 (contendo um ou mais zigotos) de paredes espessas, e temporariamente dormente. Quando se renem as condies propcias, o zigoto divide-se por meiose, e o zigsporo inicia a sua germinao, formando um esporngio que dispersa os esporos (produzidos

50

sexuadamente; cada um incorpora um ncleo haplide resultante da meiose). Neste grupo, a reproduo assexuada muito mais frequente do que a reproduo sexual. Os esporos assexuados so formados em esporngios (individualizados por septos), na extremidade de hifas especializadas chamadas esporangiforos. Os esporos so libertos e podem ser dispersos pelo vento.
Tipo + n Tipo + esporngio esporangiforo esporos
FUSO DE HIFAS

Tipo -

Tipo zigsporo germinado

MEIOSE

gametngios zigsporo

2n

Figura 1.26 - Ciclo de vida de Rhizopus stolonifer, um membro do filo Zigomycota

Filo Ascomycota Organismos to diversos morfologicamente, como as leveduras, os bolores comuns e as trufas so Ascomycota. Neste grupo incluem-se muitos fungos parasitas de plantas, mas tambm fungos simbiotrficos como os que constituem os lquenes ou micorrizas. O termo Ascomycota deriva da presena de estruturas reprodutoras caractersticas, em forma de saco, os ascos. Os ascos so formados no interior de corpos de frutificao macroscpicos, os ascocarpos.55. A caracterstica fase dicaritica mais extensa nos Ascomycota do que nos Zygomycota. Os Ascomycota podem reproduzir-se assexuadamente, produzindo esporos nus, os condios, na extremidade de hifas especializadas chamadas conidiforos (Fig. 1.27). No ciclo de reproduo sexuada, duas hifas haplides, geneticamente compatveis, diferenciam estruturas reprodutoras denominadas ascognios e anterdeos, respectivamente. O ascognio (gametngio feminino) recebe os ncleos haplides do anterdeo (gametngio masculino). O ascognio d, assim, origem a hifas

Exemplos de frutificaes de Ascomycota: 1. Ascos livres

ascos clulas do hospedeiro

55

2.

Periteca
ascos

3.

Apoteca

ascos

51

dicariticas que crescem e eventualmente formam o ascocarpo. Os ascos individualizam-se na extremidade das hifas do ascocarpo pela formao de um septo completo. Aps cariogamia, o zigoto divide-se por meiose originando quatro ncleos haplides, e cada um destes divide-se por mitose; os oito ncleos resultantes do origem a ascsporos.

REPRODUO ASSEXUADA

Tipo +

condios ascognios

plasmogamia
asco REPRODUO SEXUAL

ascsporos

Tipo anterdeos conidiforo

56

asco

Alguns exemplos de basidiocarpos (a regio com linha mais escura corresponde ao tecido frtil) 1.Lycoperdon (Licoperdo, Bufa-de-lobo)

ascsporo germinado ascsporos MEIOSE 2n

Figura 1.27 - Ciclo de vida de um Ascomycota. No canto inferior esquerdo, um pormenor dos ascos, contendo ascsporos.

Filo Basidiomycota
2. Polyporus (Poliporcea)

3. Psalliota

Entre os Basidiomycota esto, por exemplo, os cogumelos, as ferrugens e os licoperdos. O ciclo de vida dos Basidiomycota (Fig. 1.28) inicia-se com a germinao de esporos e a consequente formao de hifas monocariticas e homocariticas (miclio primrio). Nos Basidiomycota, a plasmogamia ocorre numa fase inicial do ciclo de vida, formando-se um miclio dicaritico (miclio secundrio) que cresce e se organiza em frutificaes, os basidiocarpos. Os basidiocarpos apresentam uma grande diversidade morfolgica e estrutural56. Na extremidade das suas hifas formam-se estruturas tipicamente em forma de clava, os basdios, em que ocorre cariogamia e meiose, produzindo-se quatro basidisporos que se mantm inseridos em esterigmas (projeces na superfcie do basdio) at maturao. A reproduo assexuada nos Basidiomycota rara, comparativamente com a reproduo sexuada.

4. Phallus impudicus

52

basidiocarpo lminas basdio CARIOGAMIA miclio secundrio Tipo + fuso de hifas + e MEIOSE Tipo miclio primrio (monocarion) basidisporo s n esterigma
zigoto

2n

Figura 1.28 - Ciclo de vida de um Basidiomycota. No canto inferior direito, vse um pormenor dos basdios contendo basidisporos nos esterigmas.

1.4.5 Importncia ecolgica

Assim como os procariotas, os fungos tm um tremendo impacto nos ecossistemas, como decompositores, possibilitando a reciclagem do material orgnico e a disponibilizao de nutrientes inorgnicos para utilizao por outras formas de vida. Em particular, os fungos so os principais decompositores de celulose e lenhina, os componentes maioritrios do material vegetal (uma vez que a maioria dos procariotas no consegue digerir a parede celular vegetal). So para alm disso, nas cadeias alimentares da maioria dos ecossistemas, alimento para diversos animais, incluindo o homem. Contudo, os fungos tambm atacam matria viva causando avultadas perdas a nvel biolgico e econmico. Alguns fungos so patognicos, incluindo os causadores do p de atleta e de infeces pulmonares. As plantas so particularmente susceptveis a doenas causadas por fungos. Alguns fungos que atacam colheitas alimentares so adicionalmente txicos para os humanos. Os fungos tm grandes aplicaes em processos industriais, sendo e.g. utilizados na produo de diversos antibiticos (e.g. penicilina) e esterides (que resultam da actividade do miclio). So tambm utilizados na industria da panificao, na industria de lacticnios (ex. queijos Brie, Camembert, Roquefort), na fermentao da cerveja e vinho, e na produo

53

de aromatizantes na industria alimentar. Fungos que atacam diversos materiais naturais e manufacturados (vidro, cermica madeira, cabedal, etc.) podem tambm representar um potencial interesse tanto para fins industriais como para limpeza do meios ambiente.

Quadro I.2 - Lquenes

Lquenes so associaes simbiticas entre um fungo -micobionte- (Ascomycota, ou mais raramente um Basidiomycota) e um organismo fotossinttico ficobionte- (cianobactria ou alga verde). A grande parte do corpo vegetativo visvel do lquen so tecidos do fungo, no interior dos quais se encontram clulas do parceiro fotossinttico (cianobactria ou alga verde, ou ambas). O fungo cria e mantm condies favorveis vida das clulas fotossintticas, quanto ao fornecimento de gua e de sais minerais, e proteco contra luz de intensidade elevada. O parceiro fotossinttico, por seu lado, sendo autotrfico, sintetiza compostos orgnicos (e liberta O2) que so utilizados pelo fungo. As caractersticas desta simbiose, possibilita-lhes conquistar habitats em que no viveriam quando Estrutura do lquen em situao de vida independente.
miclio camada de algas sordios

O corpo vegetativo do lquen morfolgica e fisiologicamente distinto daquele de cada um dos parceiros da simbiose, quando vivem separadamente. Note-se, no entanto, que a maioria dos fungos encontrados nos lquenes no so capazes de viver independentemente. Distinguem-se trs tipos principais de lquenes, de acordo com a sua morfologia: crustceos, foliceos, fruticulosos. A reproduo dos lquenes uma combinao dos processo de reproduo sexuada do fungo (com produo de e.g. ascsporos) e assexuada das algas ou cianobactrias. Alternativamente, os lquenes podem Lquen crustceo Lquen fruticuloso reproduzir-se por fragmentao ou pela formao de estruturas especializadas, como os sordios (pequenos conjuntos de algas envolvidas por hifas). Os dois componentes do lquen podem ainda, em condies favorveis, associar-se de novo e formar uma nova liquenizao.

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Quadro I.3 - Micorrizas

As micorrizas (Gr. mykes, fungo + rhizae, raiz) so associaes mutualistas entre as razes de plantas e as hifas fngicas. O miclio do fungo micorrzico aumenta grandemente a rea de superfcie das razes da planta, aumentando assim a absoro de gua e sais minerais pela planta. O fungo, por seu lado, obtm compostos orgnicos sintetizados pela planta. Os fungos envolvidos nestas associaes simbiticas (de carcter permanente) so membros dos trs fila estudados, Zigomycota, Ascomycota e Basidiomycota. A anatomia da simbiose micorrzica varia consoante o tipo de fungo envolvido: (i) as endomicorrizas so infeces internas das razes (no se observam hifas na sua superfcie) por Zygomycota, e ocorrem em cerca de 80% das plantas; (ii) as ectomicorrzas so infeces externas das razes, em que as hifas do fungo, geralmente Basidiomycota mas tambm Ascomycota, envolvem as razes de determinadas rvores (e.g. pinheiro, carvalho, faia) e arbustos. A importncia deste tipo de associaes est patente no facto de cerca de 95% das plantas vasculares serem micorrizadas, desde os musgos s plantas com flor.

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Questes de aprendizagem
Aps o estudo deste captulo o leitor dever ser capaz de responder s seguintes questes: 1.1 Descreva as mais importantes caractersticas dos domnios em que C. Woese classifica os seres vivos. 1.2 Indique algumas caractersticas que diferenciam os 5 grupos de proteobactrias. 1.3 Compare as estruturas de uma clula procariota, protista e fngica. 1.4 Compare o tipo de nutrio apresentado por procariotas e fungos. 1.5 Como pode associar os processos energticos de fermentao, respirao aerbia e respirao anaerbia aos os quatro tipos principais de nutrio? 1.6 Compare os ciclo de vida caractersticos dos trs fila do reino Fungi. 1.7 O que entende por micorrizas? 1.8 Compare, em termos de produto final, os processos de recombinao gentica em procariotas com o processo de meiose em eucariotas.

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