Quim. Nova, Vol. 31, No.

8, 1966-1972, 2008 Micropartculas nanorrevestidas contendo uM frMaco Modelo hidrofbico: preparao eM etapa nica e caracterizao biofarMacutica

Artigo

Gislane scholze domingues e slvia stanisuaski Guterres* Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Ipiranga, 2752, 90610-000 Porto Alegre - RS, Brasil ruy carlos ruver beck Departamento de Farmcia Industrial, Centro de Cincias da Sade, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima, 1000, 97105-900 Santa Maria RS, Brasil adriana raffin pohlmann Instituto de Qumica, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonalves, 9500, 91501-970 Porto Alegre RS, Brasil Recebido em 22/8/07; aceito em 12/6/08; publicado na web em 31/10/08

NANOCAPSULE-COATED MICROPARTICLES PREPARED IN ONE STEP: CHARACTERIZATION AND IN VITRO DRUG RELEASE PROFILES EVALUATION. The aim of this work was to prepare and characterize spray-dried nanocapsule-coated microparticles obtained in one step, using indomethacin as a hydrophobic drug model and poly(-caprolactone) or Eudragit RS100, as polymers. Nanocapsule-coated microparticles showed micrometric mean sizes (10 - 15 m) and a reduced surface area (75 85 m2g-1) compared to the raw material (214 m2g-1). Microparticles coated with Eudragit RS100-nanocapsules showed a better control of the drug release. The release profiles fit to the monoexponetial model and to the Power Law. The mechanism of the indomethacin release from the microparticles is non-Fickian and depends on the particles desagglomeration.

Keywords: indomethacin; microparticles; nanocapsules.

introduo No mbito farmacutico, os sistemas coloidais polimricos caracterizam-se como partculas polimricas de tamanho nanomtrico (nanopartculas) contendo um frmaco, que se encontram suspensas em uma fase aquosa. Esses sistemas tm demonstrado muitas potencialidades no aumento da eficcia de frmacos, na diminuio da toxicidade ou, ainda, no desenvolvimento de sistemas de liberao modificada.1 Devido principalmente sua fase aquosa, estas suspenses coloidais so bastante suscetveis a alteraes fsico-qumicas e contaminao microbiolgica durante o armazenamento.2,3 Nesse sentido, a secagem por asperso (spray-drying) foi proposta por nosso grupo de pesquisa para a converso desses sistemas dispersos aquosos em sistemas slidos microparticulados, empregando o dixido de silcio coloidal (Aerosil 200) como adjuvante de secagem. Considerando que os frmacos antiinflamatrios no-esterides tm sido foco de nossas pesquisas e que sua nanoencapsulao permite a reduo significativa dos efeitos txicos de frmacos desta classe sobre a mucosa gastrintestinal,4-6 demonstramos a aplicao desta tcnica de secagem para a obteno de produtos secos microparticulados a partir de diferentes tipos de nanopartculas polimricas contendo indometacina ou diclofenaco.6,7 Estes produtos secos so compostos pelo dixido de silcio coloidal, na forma de aglomerados micromtricos, revestidos com nanopartculas polimricas (nanocpsulas estrutura vesicular ou nanoesferas estrutura matricial).7,8 De acordo com esses trabalhos,4-8 as suspenses de nanopartculas (nanocpsulas ou nanoesferas), contendo um frmaco associado, empregadas nos estudos de secagem apresentavam dimetros mdios entre 200 e 300 nm, quando avaliadas por espalhamento de luz dinmico na forma lquida original. No caso da secagem de suspenses de nanocpsulas, as anlises morfolgicas por microscopia eletrnica
*e-mail: nanoc@farmacia.ufrgs.br

de varredura mostraram aps asperso a presena de nanoestruturas na superfcie das micropartculas com tamanhos compatveis queles determinados nas suspenses originais.6-9 O modelo esquemtico para esses sistemas encontra-se representado na Figura 1a. Por outro lado, Pohlmann e colaboradores,8 aps a secagem de suspenso de nanoesferas, observaram uma diminuio no dimetro das nanoestruturas presentes na superfcie das micropartculas, em relao ao dimetro determinado na forma lquida original, evidenciando a ocorrncia da alterao da sua organizao estrutural durante a asperso. Esta alterao foi atribuda liberao do tensoativo lipoflico durante o processo de secagem, que se encontrava disperso na matriz polimrica das nanoesferas, com conseqente reduo no dimetro das nanoestruturas adsorvidas superfcie dos ps. Esta alterao estrutural decorrente da secagem de suspenses de nanoesferas resultou em um impacto importante sobre a atividade biolgica dos sistemas, como demonstrado atravs de estudos comparativos da tolerncia gastrintestinal em ratos, de nanocpsulas e nanoesferas contendo indometacina ou diclofenaco antes e depois da secagem;4,5,10 enquanto que tanto as nanocpsulas quanto as nanoesferas foram eficientes na diminuio da toxicidade gastrintestinal dos frmacos quando em suspenso aquosa, somente os produtos secos contendo nanocpsulas mantiveram esta propriedade protetora frente aos efeitos ulcerativos dos frmacos. Aps os relatos do nosso grupo a respeito do desenvolvimento, caracterizao e aplicao da tcnica de secagem por asperso para a obteno de produtos secos contendo nanopartculas polimricas, outros grupos de pesquisa tm se dedicado ao estudo destes sistemas, adotando a secagem por asperso como alternativa para transpor a limitada estabilidade fsico-qumica das suspenses de nanopartculas11,12 ou, ainda, desenvolver sistemas microparticulados de administrao intrapulmonar de frmacos.13 Com relao s potencialidades no mbito tecnolgico, Mller14 demonstrou o emprego destes produtos secos obtidos a partir da

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secagem de suspenses de nanocpsulas por asperso, como intermedirios para a preparao de formas farmacuticas derivadas, como cpsulas de gelatina dura. Entretanto, torna-se importante ressaltar que esta estratgia aplicvel a frmacos de elevada potncia, normalmente administrados em baixas dosagens. Isto explicado pela limitada capacidade de carga das nanocpsulas, o que leva obteno de produtos secos (micropartculas de nanocpsulas e dixido de silcio aglomeradas) com baixa dosagem de substncia ativa, no atingindo a dose teraputica. Visando contornar essa limitao, uma segunda estratgia foi concebida (Figura 1b), associando o frmaco ao adjuvante de secagem e empregando a suspenso nanoestruturada apenas como material de revestimento e sistema controlador da liberao do frmaco.15 Esses novos sistemas foram chamados de micropartculas revestidas com nanopartculas (nanoparticle-coated microparticles). At o momento, esta segunda estratgia foi estudada e aplicada a dois modelos de frmacos, o diclofenaco e a dexametasona, cujas micropartculas foram revestidas com suspenses de nanocpsulas, nanoesferas ou nanodisperso, empregando Eudragit S100 como polmero.15-18 No desenvolvimento desta nova estratgia foram relatados dois mtodos de preparao para as micropartculas nanorrevestidas. O primeiro chamado de mtodo de preparao em etapa nica foi aplicado ao modelo hidroflico (diclofenaco sdico), enquanto que o segundo chamado de mtodo em duas etapas foi aplicado aos modelos hidroflico e hidrofbico (diclofenaco sdico e diclofenaco cido).15

caractersticas fsico-qumicas das micropartculas nanorrevestidas: a poli(-caprolactona), um polister biodegradvel e o Eudragit RS 100, um copolmero acrlico (Figura 2). As micropartculas nanorrevestidas foram caracterizadas quanto ao teor de frmaco, dimetro mdio e potencial zeta aps ressuspenso, anlise morfolgica (MEV), determinao da rea superficial e tamanho de poros, anlise granulomtrica e avaliao do perfil de liberao in vitro do frmaco. Os perfis de liberao foram analisados matematicamente atravs de mtodos modelo-dependentes, para se determinar a velocidade de liberao da indometacina e aplicando-se, pela primeira vez para esses sistemas, a Lei da Potncia (modelo de Korsmeyer-Peppas) para descrever o mecanismo de liberao do frmaco a partir de micropartculas nanorrevestidas.

Figura 2. Estrutura molecular da (a) indometacina, (b) poli(-caprolactona) e (c) Eudragit RS 100

parte eXperiMental Materiais Indometacina foi obtida da Sigma (St. Louis, EUA); os polmeros, poli(-caprolactona) (PCL, MM 65000 Da) da Aldrich (Strasbourg, Frana) e poli(acrilato de etila-co-metacrilato de metila-co-metacrilato de trimetilamnio etila clordrico) (Eudragit RS 100, ERS, MM 150000 Da) da Degussa (So Paulo, Brasil). Os tensoativos monooleato de sorbitano e polissorbato 80 foram adquiridos da Delaware (Porto Alegre, Brasil) e a mistura de triglicerdeos dos cidos cprico e caprlico da Brasquim (Porto Alegre, Brasil). O dixido de silcio coloidal (Aerosil 200) foi adquirido da Degussa (So Paulo, Brasil). Os demais reagentes e solventes empregados apresentaram grau analtico ou cromatogrfico, dependendo da finalidade e foram utilizados como recebidos. Mtodos Preparao das suspenses de nanocpsulas As suspenses de nanocpsulas foram preparadas (n = 3) utilizando o mtodo da deposio interfacial dos polmeros pr-formados, descrito por Fessi e colaboradores.19 A fase orgnica composta de acetona (267 mL), polmero (1000 mg, PCL ou ERS), monooleato de sorbitano (383 mg) e leo (3102 mg) foi vertida na fase aquosa (533 mL) contendo polissorbato 80 (383 mg), sob agitao magntica moderada. O volume final foi reduzido a 100 mL de suspenso em um evaporador rotatrio, a 40 C. Caracterizao das suspenses de nanocpsulas O dimetro mdio das partculas em suspenso foi determinado (n = 3) atravs de espalhamento de luz dinmico (Zetasizer Nanoseries,

Figura 1. Representao esquemtica das micropartculas nanorrevestidas, frmaco associado s nanopartculas (a) ou ao adjuvante de secagem (b)

De acordo com os resultados demonstrados por Beck e colaboradores,15 o maior potencial, considerando-se o controle da liberao do frmaco pela camada de nanopartculas revestindo o ncleo contendo o frmaco, foi demonstrado para as formulaes preparadas em duas etapas, tanto para o modelo hidroflico quanto para o hidrofbico. Em relao ao sistema de revestimento, os melhores resultados no controle da liberao e da permeao do frmaco atravs de clulas Caco-2 e na capacidade protetora, frente ao efeito irritativo do diclofenaco sobre a mucosa gastrintestinal, foram demonstrados pelas micropartculas revestidas a partir de suspenses de nanocpsulas.15,17,18 Considerando que at o momento a estratgia do revestimento de micropartculas a partir de suspenses de nanopartculas, empregadas como material de revestimento, atravs do mtodo de preparao em etapa nica, foi aplicada somente a um modelo de frmaco hidroflico, os objetivos deste trabalho foram preparar e caracterizar micropartculas nanorrevestidas em etapa nica, empregando um frmaco modelo hidrofbico, a indometacina (Figura 2). Suspenses de nanocpsulas foram empregadas como material de revestimento devido a suas maiores potencialidades demonstradas nos estudos anteriores.5,15 Alm disso, foi avaliada a influncia do emprego de dois polmeros diferentes na preparao destas nanocpsulas sobre as

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Malvern Instrumens, Inglaterra), diluindo-se as amostras 500 vezes em gua purificada (sistema Milli-Q). O potencial zeta foi determinado aps diluio de 500 vezes das suspenses em soluo de NaCl 1 mmol L-1 (Zetasizer Nanoseries, Malvern Instruments, Inglaterra). Foram utilizadas clulas capilares fechadas (DTS1060) para as leituras e as medidas foram realizadas em triplicata. Os valores de pH das suspenses de nanocpsulas foram determinados diretamente nas suspenses atravs de um potencimetro (Modelo B474, Micronal, Brasil), previamente calibrado com solues-tampo pH 4,0 e 7,0. Preparao em etapa nica das micropartculas nanorrevestidas contendo indometacina A indometacina (0,075 g) e o dixido de silcio coloidal (1,5 g) foram pesados e adicionados suspenso (50 mL) de nanocpsulas vazias, mantendo-se sob agitao durante 3 min para posterior asperso (Mini Spray Dryer MSD 1.0, Labmaq, So Paulo, Brasil, segundo as condies operacionais descritas na Tabela 1. Foram preparadas formulaes de micropartculas a partir de suspenses de nanocpsulas de PCL (M1) ou Eudragit RS 100 (M2). tabela 1. Condies operacionais utilizadas na secagem por asperso das micropartculas nanorrevestidas em equipamento MSD 1.0 Parmetros Condio Fluxo de alimentao 0,2 L/h Fluxo de ar 500 NL/h Presso de ar comprimido 3 kgf/cm2 Temperatura de entrada do ar de secagem 150 5 C Temperatura de sada do ar de secagem 80 5 C Capa de fluido (dimetro 0,8 mm do bico atomizador) Sistema de aspirao 0,6 NMC (0,6 m3/min) caracterizao das micropartculas nanorrevestidas Determinao do teor de umidade As micropartculas (M1 e M2) foram submetidas avaliao por mtodo coulomtrico por Karl Fischer com reagente de Karl Fischer segundo a Farmacopia Brasileira 4 ed.20 Determinao do teor de indometacina A quantificao da indometacina nos ps foi realizada atravs de cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). A deteco foi realizada na regio do UV a 254 nm, sendo a fase mvel composta por acetonitrila/gua (65:35 v/v), contendo 50 mmol L-1 trietilamina, cujo pH foi ajustado a pH 3,3 (aparente) com cido fosfrico. O fluxo da fase mvel foi de 1,0 mL min-1 e o volume de injeo de 20 L.21 Foi utilizado um cromatgrafo Perkin Elmer S-200 com detector UV-VIS e injetor S-200. A fase estacionria empregada foi uma coluna Nova-Pak C18 Waters (3,9 X 150 mm). O mtodo analtico foi validado de acordo com os seguintes parmetros:22 linearidade (y = 92460x 36109, r2 = 0,999, n = 6), faixa de concentrao entre 1 e 40 g mL-1, preciso (DPR intra-dia = 1,55 - 1,95%; DPR interdia = 1,68%), exatido (99,93 1,02%) e especificidade (no houve interferncia dos adjuvantes na quantificao da indometacina). A preparao da amostra foi realizada pela adio da acetonitrila sobre uma quantidade determinada de p, seguida por uma agitao magntica durante 120 min e centrifugao a 3500 g durante 10 min. A soluo sobrenadante foi filtrada a 0,45 m e injetada no sistema cromatogrfico.

Determinao do dimetro aps ressuspenso em gua O dimetro mdio das partculas foi determinado aps disperso do p em gua (em volume equivalente ao das suspenses originais). O dimetro foi determinado em Zetasizer (Nanoseries, Malvern, Inglaterra).9 As micropartculas nanorrevestidas redispersas em gua foram filtradas atravs de membrana 0,45 m e diludas com gua purificada (sistema Milli-Q). As medidas foram realizadas em dispositivo de poliestireno (n =3). Determinao do potencial zeta aps ressuspenso em gua O potencial zeta foi determinado (n = 3) aps disperso dos ps em gua (Zetasizer Nanoseries, Malvern Instruments, Inglaterra), empregando volume equivalente ao das suspenses originais.9 As disperses aquosas de micropartculas nanorrevestidas foram filtradas (0,45 m) e diludas em soluo de NaCl 1 mmol L-1. Avaliao morfolgica atravs de microscopia eletrnica de varredura A anlise microscpica (superfcie e forma) dos ps foi realizada atravs de microscopia eletrnica de varredura (Jeol Scanning Microscope, JSM-5800, Toquio, Japo). As amostras foram previamente metalizadas com ouro (Jeol Jee 4BSVG-IN, Tquio, Japo) e as fotomicrografias foram obtidas utilizando-se uma voltagem de 20 kV e aumentos entre 1000 a 45000 vezes. As anlises foram realizadas no Centro de Microscopia Eletrnica da UFRGS. Determinao da rea superficial e da distribuio de tamanho de poros As reas superficiais e a distribuio do tamanho de poros das micropartculas e do Aerosil 200 foram determinadas nas amostras previamente desgaseificadas, em equipamento volumtrico, utilizando nitrognio como gs de adsoro-dessoro. Foi empregado um equipamento de fabricao prpria (Laboratrio de Slidos e Superfcies, Instituto de Qumica, UFRGS) dotado de um sistema de vcuo, obtido pelo emprego de uma bomba de vcuo turbomolecular (Edwards, West Sussex, Inglaterra). As medidas de presso foram determinadas utilizando-se um barmetro capilar de mercrio e os resultados comparados a um padro de referncia de alumina. A anlise dos resultados foi realizada utilizando o mtodo BET (Brunauer, Emmett e Teller)23 e o mtodo BJH (Barret, Joyner, Halenda),24 para a determinao da rea superficial e da distribuio de poros, respectivamente. Anlise granulomtrica A anlise granulomtrica das amostras foi realizada a seco por difratometria a laser atravs de um equipamento Beckman CoulterTornado (Beckmann Instruments, USA). A anlise foi realizada no Laboratrio de Tecnologia de Partculas do Instituto de Pesquisas Tecnolgicas, IPT/SP. O valor de SPAN foi empregado como medida da disperso granulomtrica, o qual relaciona os valores encontrados de dimetros das partculas correspondentes a 10, 50 e 90% da distribuio acumulada para uma amostra. As medidas de d(4,3) foram calculadas a partir das determinaes dos volumes mdios das partculas.25 Avaliao do perfil de liberao in vitro da indometacina O perfil de liberao in vitro do frmaco foi avaliado (n = 3) atravs de um equipamento dotado de clula de fluxo. Este equipamento consistiu em clulas de vidro contendo uma membrana de fibra de vidro (AP25, Millipore), conectadas a uma bomba peristltica (Miliplus 3, Gilson) atravs de cnulas de silicone. O meio de dissoluo (intestinal simulado sem enzimas pH 6,8 26) foi mantido em banho termostatizado a 37,0 0,5 C. O fluxo do meio de dissoluo

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foi de 1 mL min-1. Esta metodologia garante as condies sink ao experimento,27 por ser um sistema aberto de passagem do meio de liberao a um fluxo constante. A massa de micropartculas utilizada foi correspondente a 1,5 mg de indometacina As amostras foram coletadas em tempos pr-determinados durante 200 min e analisadas atravs de CLAE, empregando a metodologia descrita anteriormente e validada para o teste de liberao in vitro, que demonstrou ser linear na faixa de concentrao entre 1 e 40 g mL-1 (y = 92460x 36109, r2 = 0,999, n = 6); precisa (DPR intra-dia e inter-dia menor que 2,0%), exata (101,52 2,63%) e especfica (no houve interferncia dos adjuvantes na quantificao da indometacina).22 Para a avaliao matemtica dos perfis de liberao foram aplicados os mtodos modelo-dependentes mono e biexponencial.28 A Lei da Potncia foi aplicada para determinar o mecanismo de liberao do frmaco a partir das micropartculas. Este modelo semi-emprico relaciona exponencialmente a liberao de uma substncia com o tempo,29 sendo o valor de n utilizado para caracterizar o mecanismo de liberao. A adequabilidade dos modelos aos dados experimentais foi avaliada com o auxlio do programa MicroMath Scientist 3.0 (Micromath, EUA), comparando-se os modelos entre si com base nos seguintes parmetros: critrio de seleo de modelo (MSC), coeficiente de correlao (r) e ajuste grfico. resultados e discusso suspenses de nanocpsulas As suspenses de nanocpsulas apresentaram dimetros mdios compatveis com os sistemas nanoestruturados preparados pelo mtodo da deposio interfacial de polmeros pr-formados (Tabela 2).1,4 Conforme pode ser observado, as nanocpsulas preparadas com Eudragit RS 100 apresentaram dimetro mdio e valores de pH inferiores queles encontrados para as nanocpsulas preparadas com poli(-caprolactona). Estas diferenas esto de acordo com aquelas observadas anteriormente por Schaffazick e colaboradores30 no desenvolvimento de nanocpsulas contendo melatonina, empregando os mesmos polmeros. Em relao ao potencial zeta (Tabela 2), as suspenses preparadas com Eudragit RS 100 apresentaram valores positivos (+23,4 1,5 mV), que podem ser atribudos carga positiva dos grupamentos amnio quaternrio presentes no polmero. Este resultado corrobora aquele encontrado por Ubrich e colaboradores,31 que ao avaliarem o potencial zeta de nanocpsulas de Eudragit RS e RL contendo ciclosporina, preparadas pelo mesmo mtodo empregado em nosso estudo, tambm verificaram valores positivos do potencial zeta para estas formulaes (entre +49 e +63 mV). Por outro lado, as formulaes preparadas com a poli(-caprolactona) apresentaram potencial zeta negativo (-23,3 0,3 mV) decorrente da presena dos grupamentos ster do polmero e de acordo com valores anteriormente descritos na literatura para formulaes preparadas com este polmero.9 Micropartculas nanorrevestidas em etapa nica As micropartculas nanorrevestidas contendo indometacina (M1 e M2) preparadas a partir das suspenses de nanocpsulas, previamente tabela 2. Caractersticas fsico-qumicas das suspenses de nanocpsulas (DP: desvio padro referente triplicata de lote) Polmero PCL ERS Dimetro (nm DP) 374 12 161 3 pH DP 5,5 0,2 4,4 0,3 Potencial zeta (mV DP) -23,3 0,3 +23,4 1,5

caracterizadas, apresentaram aspecto pulverulento, com valores de rendimento do processo entre 77 e 70% para as formulaes M1 e M2, respectivamente. Valores semelhantes (70%) foram relatados por Beck e colaboradores15 na preparao de micropartculas nanorrevestidas em etapa nica, empregando um frmaco-modelo hidroflico. Por outro lado, esses valores so superiores queles relatados para a obteno destas micropartculas em duas etapas, contendo diclofenaco como frmaco hidrofbico (41-51%15; 63%)17. As formulaes apresentaram teores de umidade inferiores a 1%, confirmando a eficincia do processo de secagem, e teores da indometacina entre 94,4 e 135,5%, para as formulaes M1 e M2, respectivamente. Os valores de recuperao acima de 100% para as formulaes preparadas com o Eudragit RS (M2), podem ser explicados pela segregao do p durante a etapa de secagem, devido adeso de componentes cmara de secagem e conseqente concentrao do frmaco nos produtos finais, que est relacionada com as condies experimentais, ao tipo de sistema nanoestruturado e s caractersticas do frmaco.15,18 A observao morfolgica das micropartculas nanorrevestidas atravs de MEV (Figura 3) em baixa magnificao demonstrou partculas esfricas e com ampla distribuio de tamanho para ambas as formulaes (Figura 3, M1a e M2a). Atravs desta visualizao pode ser observado um pequeno aumento no tamanho das micropartculas preparadas com Eudragit RS 100 em relao quelas preparadas com poli(-caprolactona). Entretanto, ambas as formulaes demonstraram micropartculas com dimetros menores que aqueles observados para o suporte de secagem, o dixido de silcio coloidal - Aerosil 200 comercial (Figura 3, Aa). A observao morfolgica destas formulaes em magnificaes superiores (45.000x) permitiu a visualizao de estruturas de dimetro nanomtrico revestindo a superfcie das micropartculas compostas pelo Aerosil 200 e indometacina (Figura 3, M1b e M2b), enquanto que o suporte de secagem apresentou apenas uma superfcie rugosa (Figura 3, Ab), corroborando os resultados previamente publicados empregando outros frmacosmodelo e diferentes mtodos de preparao.15-18 Para se avaliar a influncia deste nanorrevestimento sobre a rea superficial, foram determinados o volume, o tamanho e a distribuio

Figura 3. Fotomicrografias das formulaes de micropartculas nanorrevestidas M1(PCL) e M2 (ERS); e do Aerosil 200 (A) [(a) largura da barra 10 m, (b) largura da barra 0,5 m]

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de poros das formulaes empregando mtodos baseados na isotermas de adsoro e dessoro de nitrognio. Os resultados foram analisados empregando-se os mtodos de BET e BJH.23,24 As reas superficiais (Tabela 3) das formulaes M1 e M2 foram semelhantes entre si, mas inferiores quela apresentada pelo suporte de secagem (Aerosil 200). Esta reduo das medidas de rea superficial pode ser atribuda presena das nanoestruturas recobrindo os espaos interparticulares do Aerosil 200.16-18 Resultados semelhantes foram encontrados por Beck e colaboradores17 para micropartculas contendo um frmaco hidrofbico (diclofenaco) revestidas com nanocpsulas, atravs de um processo baseado em duas etapas (61 cm2 g-1). Entretanto, esta reduo na rea superficial tambm poderia estar relacionada a um aumento no tamanho de partculas das formulaes. Atravs da anlise conjunta dos valores de tamanho de partculas e rea superficial (Tabela 3) possvel rejeitar esta ltima hiptese. As amostras M1 e M2 apresentaram tamanhos mdios de aglomerados menores (10 e 15 m, respectivamente) que os aglomerados de Aerosil 200 (22 m) e as reas superficiais de M1 e de M2 foram menores que a do Aerosil 200. Esses resultados demonstram que a diminuio da rea foi devida ao nanorrevestimento das micropartculas. Alm disso, ambas as formulaes apresentaram volumes de poros inferiores (0,093 cm3 g-1 para M1 e 0,102 cm3 g-1 para M2) ao apresentado pelo Aerosil 200 (0,307 cm3 g-1), com distribuio de tamanho inferior a 6 nm (grficos no apresentados), confirmando que o nanorrevestimento foi responsvel pela diminuio da rea superficial. Essa reduo dos volumes de poros foi semelhante quela relatada anteriormente para micropartculas nanorrevestidas a partir de nanocpsulas polimricas, empregado um mtodo de preparao em duas etapas (0,04 cm3 g-1) e um frmaco modelo hidrofbico (diclofenaco).17 A anlise granulomtrica das formulaes (Tabela 3) foi efetuada em equipamento Beckman Coulter (Tornado) que determina os dimetros dos ps a seco. O SPAN, que representa uma medida da disperso granulomtrica, foi de 2,45 para a formulao M1, de 1,76 para a formulao M2 e de 1,52 para o Aerosil 200. Valores de SPAN prximos ou inferiores a 2 indicam que as partculas podem ser consideradas adequadas para administrao oral.23 Para se avaliar o comportamento dos sistemas aps a ressuspenso em gua, foram medidos os dimetros mdios e os potenciais zeta de disperses aquosas dos ps microparticulados (Tabela 4). Analisandose os valores de dimetros mdios obtidos a partir dos filtrados das disperses de micropartculas em gua, pode-se observar que estes sistemas apresentam um comportamento de desaglomerao aps tabela 3. rea superficial, volume de poros, dimetro mdio e distribuio granulomtrica das micropartculas nanorrevestidas (formulaes M1 - (PCL) e M2- (ERS) e do suporte de secagem (Aerosil 200) rea Volume superficial de poros d (4,3) m* SPAN** (m2 g-1) (cm3 g-1) M1 78 0,093 10 2,4 M2 85 0,102 15 1,8 Aerosil 200 214 0,307 22 1,5 *d (4,3) m: dimetro mdio em volume; **SPAN: disperso granulomtrica Formulao tabela 4. Dimetros das partculas e potenciais zeta das formulaes M1 (PCL) e M2 (ERS) aps ressuspenso em gua Formulao M1 M2 Dimetro (nm DP) Potencial zeta (mV DP) 432 159 -22,9 2,3 368 332 -11,5 4,2

a ressuspenso, dando origem a partculas com dimetros mdios entre 300 e 400 nm, com ampla faixa de distribuio granulomtrica, observada pela anlise dos desvios-padro determinados para ambas as amostras. Em relao ao potencial zeta, enquanto que os valores determinados no filtrado da disperso dos ps no apresentaram uma alterao significativa para as formulaes preparadas com poli(-caprolactona) (M1) em relao s suspenses originais, a formulao preparada com Eudragit RS 100 (M2) apresentou uma alterao significativa. Na suspenso original o valor de potencial zeta foi positivo (+23,4 1,5 mV) enquanto que aps a ressuspenso o respectivo filtrado apresentou um potencial zeta negativo (-11,5 4,2 mV). Esta alterao pode ser atribuda formao de sal do grupamento carboxlico da indometacina com os grupamentos amnio quaternrios do polmero. A neutralizao de cargas e o excesso de indometacina na superfcie das estruturas poderiam levar diminuio do potencial zeta. Para comprovar esta hiptese foi avaliado o potencial zeta das suspenses de nanocpsulas preparadas a partir do Eudragit RS 100 contendo indometacina (1,5 mg/mL), que apresentaram um valor de +19,2 2,4 mV. Atravs da comparao deste valor com aquele determinado para a suspenso de nanocpsulas para o revestimento, sem indometacina (+23,4 1,5 mV), verificou-se uma tendncia diminuio do potencial zeta pela presena da indometacina. Alm disso, o Aerosil 200 presente nos ps tambm pode alterar o potencial de superfcie das partculas. Para que essas afirmativas fossem verificadas, foram preparadas micropartculas nanorrevestidas a partir de nanocpsulas de Eudragit RS 100, omitindo-se a adio da indometacina. Estas micropartculas foram ressuspensas em gua, filtradas e analisadas, apresentando um potencial zeta de -17,8 1,5 mV. Estes resultados demonstram que apesar da indometacina ocasionar uma diminuio do potencial zeta, a presena do Aerosil 200 o fator mais importante na alterao (diminuio) dos valores de potencial zeta aps a ressuspenso em gua das micropartculas nanorrevestidas (M1), em relao aos valores determinados nas suspenses originais. Aps a ressuspenso das micropartculas nanorrevestidas, o processo de desaglomerao leva exposio de xidos das superfcies do SiO2 diminuindo o potencial zeta. A avaliao dos perfis de liberao in vitro da indometacina a partir das micropartculas nanorrevestidas (formulaes M1 e M2), em meio intestinal simulado (pH 6,8) foi realizada em equipamento dotado de clula de fluxo, comparativamente, durante 200 min. A partir deste tempo a concentrao de frmaco nas alquotas atingiu o limite de quantificao da indometacina pelo mtodo analtico empregado. A modelagem matemtica dos resultados (MicroMath Scientist) mostrou que a equao monoexponencial foi a que melhor descreveu o comportamento dos dados experimentais (Figura 4), com coeficiente de correlao (r) prximo a 1, semelhante ao que foi observado por Beck e colaboradores17 para a liberao de diclofenaco, em pH 7,4, a partir de micropartculas nanorrevestidas com nanocpsulas de Eudragit S100. Atravs da modelagem foi possvel calcular as constantes cinticas da liberao do frmaco (k). Para fins comparativos, foi tambm analisado o perfil de liberao da indometacina pura, que foi previamente cominuida. Os parmetros calculados para todas as amostras esto apresentados na Tabela 5. A indometacina pura apresentou uma velocidade de dissoluo (k = 0,0222 min-1) superior s velocidades de liberao da indometacina a partir das micropartculas ( k = 0,0135 e 0,0106 min-1, para as formulaes M1 e M2, respectivamente). Estes resultados demonstram a eficincia destes sistemas no controle da liberao da indometacina. Realizando-se a comparao entre as formulaes preparadas a partir de nanocpsulas de diferentes polmeros, podese observar uma menor velocidade de liberao (k = 0,0106 min-1) a partir das micropartculas nanorrevestidas com nanocpsulas de

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Micropartculas nanorrevestidas contendo um frmaco modelo hidrofbico

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Figura 4. Perfis de dissoluo e ajustes ao modelo monoexponencial da indometacina e das formulaes M1 (PCL) e M2 (ERS). As linhas correspondem aos perfis modelados usando a equao monoexponencial

tabela 5. Parmetros do modelo monoexponencial para as formulaes M1 (PCL), M2 (ERS) e indometacina triturada Parmetro Formulao M1 k (min-1) r MSC Formulao M2 k (min-1) r MSC Indometacina (matria-prima) k (min-1) r MSC Mdia DP 0,0135 0,0008 0,9955 0,0018 4,3630 0,3833 0,0106 0,0006 0,9959 0,0015 4,1430 0,4119 0,0222 0,0028 0,9985 0,0014 5,5691 0,7073

nas suspenses originais e aps a ressuspenso das micropartculas em gua, comentadas anteriormente. O modelo de Korsmeyer-Peppas28,29 foi aplicado com o objetivo de descrever o mecanismo de liberao da indometacina a partir das micropartculas nanorrevestidas, atravs da anlise dos valores de n. Foram encontrados valores de n superiores a 0,85 (Tabela 6) para ambas as formulaes, sugerindo uma liberao de acordo com um modelo no-Fickiano. Considerando a geometria esfrica, esses va. lores indicam o modelo super caso-II para descrever o mecanismo de liberao da indometacina a partir das formulaes M1 e M2. Neste caso, a velocidade de difuso do solvente para a partcula muito maior que o relaxamento do polmero, sendo esse fator determinante da liberao.29 O resultado reforado pelo baixo inchamento em meio aquoso apresentado pelos polmeros empregados neste estudo (dados no mostrados). Desta maneira, o modelo super caso-II pode ser descrito para as micropartculas nanorrevestidas preparadas em etapa nica, as quais seriam constitudas de conjunto de partculas menores nanorrevestidas e aglomeradas, cujo mecanismo de liberao a desaglomerao das micropartculas (eroso da partcula por fenmeno fsico). Na Figura 5 est representada esquematicamente esta proposio de modelo de liberao da indometacina a partir das micropartculas nanorrevestidas preparadas em etapa nica. A partir da entrada do meio de dissoluo (penetrao do solvente), as micropartculas sofrem desaglomerao, o que leva ao aumento de rea superficial com conseqente dissoluo da indometacina. Como pode ser observado a partir dos resultados encontrados na avaliao dos perfis de liberao das formulaes M1 e M2, o tipo de polmero utilizado na preparao das nanocpsulas polimricas empregadas como material de revestimento influencia o acesso do solvente s micropartculas, alterando a velocidade de desaglomerao do sistema, e conseqentemente, a velocidade de liberao do frmaco. Alm disso, a interao da indometacina com os polmeros de natureza fsico-qumica diferente, podendo tambm influenciar na velocidade de liberao do frmaco. tabela 6. Parmetros da Lei da Potncia para as formulaes M1 (PCL) e M2 (ERS) Parmetro Formulao M1 a n r MSC Formulao M2 a n r MSC Mdia DP 0,9345 0,1049 1,0245 0,0425 0,9983 0,0003 5,2142 0,1451 0,7122 0,2154 1,0307 0,0733 0,9934 0,0017 3,8587 0,2408

Eudragit RS 100 (M2) em relao quela obtida (k = 0,0135 min-1) a partir da micropartculas nanorrevestidas com poli(-caprolactona) (M2). Essa reduo nos valores da constante de liberao atravs do nanorrevestimento de micropartculas a partir de nanocpsulas tambm foi observada em estudo anterior, onde a liberao do diclofenaco a partir das micropartculas preparadas em duas etapas apresentava uma menor velocidade de liberao (k = 0,0283 min-1) em relao a mistura fsica constituda do frmaco e do dixido de silcio coloidal (k = 0,0497 min-1).17 Adicionalmente, foram calculados os tempos de meia-vida (tempo necessrio para que 50% do frmaco fossem liberados ou dissolvidos). O tempo de meia-vida de dissoluo para a indometacina pura foi de 31 min, enquanto que as micropartculas nanorrevestidas apresentaram tempos de meia-vida de liberao do frmaco de 51 e 65 min, para as formulaes M1 e M2, respectivamente. Pela comparao entre os tempos de meia-vida apresentados pelas diferentes formulaes de micropartculas (M1 e M2) pode-se observar claramente o maior controle de liberao do frmaco a partir da formulao revestida com nanocpsulas de Eudragit RS 100 (M2). A possvel interao molecular e conseqente formao de sal, entre o grupamento carboxlico da indometacina e o grupamento amnio quaternrio do polmero Eudragit RS 100, tambm pode ser responsvel pelo perfil de liberao mais lento da formulao M2. Esta hiptese de interao molecular entre a indometacina e o Eudragit RS 100 sustentada pelas alteraes observadas no potencial zeta

Figura 5. Esquema do mecanismo de desaglomerao a partir das micropartculas nanorrevestidas, as setas indicam a penetrao do solvente

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concluso Foi possvel obter micropartculas nanorrevestidas preparadas em etapa nica empregando um frmaco-modelo hidrofbico, a indometacina, utilizando-se como polmeros a poli(-caprolactona) ou o Eudragit RS 100. As micropartculas nanorrevestidas apresentaram aspecto pulverulento e atravs de MEV foram observadas partculas esfricas que apresentaram nanoestruturas adsorvidas a sua superfcie, caracterizando o nanorrevestimento. Este recobrimento nanoestruturado levou a uma diminuio das reas superficiais e dos volumes de poros destas micropartculas, quando comparadas ao suporte de secagem (Aerosil 200). Os estudos de liberao in vitro demonstraram a influncia do polmero sobre as caractersticas de liberao da indometacina a partir das micropartculas nanorrevestidas, sendo que o modelo monoexponencial foi o mais adequado para descrever os perfis de liberao. O nanorrevestimento ocasionou um aumento no tempo de meia-vida de liberao da indomentacina quando comparada com a dissoluo do frmaco puro. A formulao preparada a partir de nanocpsulas de Eudragit RS 100 apresentou maior controle da liberao da indometacina, quando comparada quela obtida a partir de micropartculas preparadas com a suspenso de poli(-caprolactona). A anlise dos perfis atravs do modelo de Korsmeyer-Peppas mostrou que o mecanismo de liberao no-Fickiano, sendo super caso-II. Um modelo de liberao da indometacina a partir das micropartculas nanorrevestidas baseado na desaglomerao das micropartculas foi proposto. aGradeciMentos CAPES, FAPERGS e Rede de Nanocosmticos/CNPq/MCT pelo financiamento e tambm ao Prof. Dr. E. V. Benvenutti pelo auxlio na determinao das reas superficiais dos ps. referncias
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