VIII Jornadas de Transferencia de Tecnologa sobre Microbiologa del Fango Activo (2012), Sevilla. Spain.

Asociacin Cientfica Grupo Bioindicacin de Sevilla

Anlisis de las correlaciones entre la abundancia de bacterias nitrificantes, parmetros operacionales y fsico-qumicos relacionados con el proceso biolgico de nitrificacin en fangos activos
Andrs Zornoza1, Liz Avendao1, Daniel Aguado1, Luis Borrs2, Jos Luis Alonso1
1Instituto

Universitario de Investigacin de Ingeniera del Agua y Medio Ambiente. Universitat Politcnica de Valncia. Camino de Vera, s/n, 46022 Valencia, Spain. E-mail: anzorzor@upv.es, lizawil@posgrado.upv.es, daaggar@hma.upv.es, jalonso@ihdr.upv.es

2Departamento

de Ingeniera Qumica. Universitat de Valncia. Dr Moliner, 50 - 46100 Burjassot, Valencia, Spain. E-mail: luis.borras-falomir@uv.es

1.

INTRODUCCIN

La nitrificacin biolgica consiste en la oxidacin del in amonio a nitrito y posteriormente a nitrato. Durante este proceso, bacterias oxidantes de amonio (BOA; Nitrosomonas y Nitrosospira), arqueas oxidantes de amonio (AOA) y bacterias oxidantes de nitritos (BON; Nitrobacter, Nitrococcus, Nitrospina y Nitrospira) realizan una respiracin aerbica a partir de donadores inorgnicos de electrones (Mota et al., 2005). El nitrgeno presente en las aguas residuales urbanas generalmente se encuentra en forma de amonio, urea, cido rico, protenas, azcares aminados y aminas, entre otros. El nitrgeno orgnico es transformado a in amonio por la actividad microbiana; los microorganismos proteolticos degradan las protenas hasta aminocidos, que a su vez son degradados a amonio por los organismos amonificantes (Cataln, 1997), con lo que el amoniaco o el in amonio son reintroducidos en el ciclo del nitrgeno. La urea, el compuesto orgnico con mas nitrgeno, es hidrolizada por la enzima ureasa hasta amonaco y anhdrido carbnico, por lo que la liberacin del amoniaco se produce

antes de llegar las aguas residuales a la estacin depuradora (Cataln, 1997). Para completar el ciclo, los iones nitrato y nitrito son convertidos al estado gaseoso N 2 o N 2 O mediante la accin de las bacterias desnitrificantes (Cataln, 1997). Las bacterias nitrificantes se encuentran en una gran variedad de hbitats, incluyendo agua dulce (agua potable y aguas residuales), agua de mar, agua salobre y en el suelo. Las principales especies presentes en los fangos activos son auttrofas, es decir, utilizan el dixido de carbono o carbono inorgnico como fuente de carbono para la sntesis de material celular. Por cada molcula de dixido de carbono asimilado, se oxidan aproximadamente 30 molculas del in amonio o 100 molculas de nitrito. Debido a la gran cantidad de iones amonio y nitrito necesarios para asimilar dixido de carbono, las bacterias nitrificantes tienen una velocidad de crecimiento muy baja (Gerardi, 2002).

1.1.

Factores que afectan a la nitrificacin

El proceso de nitrificacin es un paso crtico en la depuracin de aguas residuales, debido a la baja tasa de crecimiento de las bacterias nitrificantes y a la extrema sensibilidad a los

Anlisis de las correlaciones de bacterias nitrificantes en fangos activos

inferiores a 6.5 la velocidad de nitrificacin se reduce de forma brusca (Gonzlez et al., 2010). La alcalinidad disminuye durante el proceso de nitrificacin debido a la generacin de iones hidrgeno y de iones nitrito (Gerardi, 2002). Durante la oxidacin del amonio tambin se produce cido nitroso, con el resultado de una disminucin de la alcalinidad.

cambios del sistema y a diversas sustancias inhibidoras que impiden su crecimiento y actividad. Este proceso se encuentra bajo la influencia de distintos factores que se sealan a continuacin (Gonzlez et al., 2010; Bitton, 1994):

1.1.1. Temperatura
La temperatura en el reactor biolgico (Tr) es el factor operacional con ms influencia en el crecimiento de las bacterias nitrificantes. Hay una importante reduccin en la tasa de nitrificacin a medida que disminuye la Tr, por el contrario, la tasa de crecimiento de las bacterias nitrificantes aumenta dentro del rango de 8C a 30C, con un aumento del 10 % por cada incremento de 1C en el caso del gnero Nitrosomonas (Gerardi, 2002). En general, la velocidad del proceso disminuye mucho para valores bajos de Tr, siendo muy difcil que se lleve a cabo la nitrificacin a temperaturas por debajo de los 10C. En estas condiciones es necesario operar con alta edad del fango (EF) para que se pueda llevar a cabo el proceso de forma eficaz (Gonzlez et al., 2010). Por encima de los 10C la nitrificacin aumenta casi de forma proporcional a la Tr. Las bacterias del gnero Nitrosomonas aisladas de los fangos activos tienen una tasa de crecimiento ptima a 30C, por lo que esta se considera la Tr ideal para que tenga lugar el proceso de nitrificacin. Las temperaturas bajas inhiben el crecimiento de Nitrobacter de forma ms drstica que en Nitrospira, por lo que es comn que los iones nitrito se acumulen en estas condiciones (Gerardi, 2002).

1.1.3. Oxgeno
La concentracin de oxgeno disuelto en el reactor (OD) puede convertirse en un factor limitante para el crecimiento de las bacterias nitrificantes, reducindose estas significativamente a concentraciones bajas de OD (Gonzlez et al., 2010). La concentracin ptima de OD para lograr una ptima nitrificacin se sita en 2 - 3 mg/L. Los factores responsables de la limitacin de OD en el proceso de nitrificacin son la falta de difusin de oxgeno a travs de los flculos y la competencia en el consumo de oxgeno por otros organismos aerobios. El aumento de la concentracin de OD puede acelerar la nitrificacin, permitiendo una mejor penetracin de este en los flculos y por tanto su acceso a las bacterias nitrificantes (Gerardi, 2002). El OD debe estar bien distribuido en el tanque de aireacin y su nivel no se recomienda que sea inferior a 2 mg/L. Para oxidar 1 mg de amonio son necesarios 4.6 mg de O2 (Bitton, 1994). La cantidad de OD afecta a la actividad de las bacterias nitrificantes en funcin de la Tr. A niveles bajos de OD se puede producir una nitrificacin parcial (Yen et al., 2010).

1.1.2. Alcalinidad y pH
El pH influye sobre la tasa de crecimiento de las bacterias nitrificantes. Se ha observado que la tasa mxima de nitrificacin se produce a valores de pH entre 7.2 y 9.0 aproximadamente, mientras que con valores

1.1.4. Amonio y nitrito

Los nutrientes pueden afectar y limitar la sntesis celular y el crecimiento bacteriano. Los principales nutrientes inorgnicos necesarios para los microorganismos son: N,

Zornoza et al.

S, P, K, Mg, Ca, Fe, Na y Cl (Madigan et al., 2009). El crecimiento de las BOA y BON siguen la cintica de Monod y dependen de las concentraciones de amonio y de nitrito respectivamente (Bitton, 1994).

correlacin significativa con la variabilidad de BOA. En algunos estudios se propone la independencia entre la poblacin de BOA, BON y algunos parmetros operacionales y fsico-qumicos en el proceso de nitrificacin. Sin embargo, la eficiencia del proceso en las estaciones depuradoras de aguas residuales (EDAR) es el resultado de la interaccin entre todas las variables. A pesar de que el diseo y operacin de varias EDAR sea muy similar, se pueden dar situaciones muy diferentes y por lo tanto distintos rendimientos. La modificacin de los parmetros, contemplados desde un punto de vista independiente y basada en la experiencia de otras instalaciones, supone asumir un alto compromiso principalmente cuando dicha modificacin suponga un incremento en el coste de explotacin, por ejemplo en el gasto energtico. De ah el inters de la divulgacin de metodologas prcticas y sencillas que permitan estudiar y evaluar la influencia de todas las variables sobre el proceso de nitrificacin en plantas depuradoras a escala real. El presente estudio tiene como objetivo establecer las relaciones entre la abundancia de BOA, BON y los distintos parmetros operacionales, fsico-qumicos del afluente y rendimientos de eliminacin del nitrgeno en el efluente de la EDAR QB, utilizando el anlisis de correlacin bivariante. La relacin entre los rendimientos de eliminacin del nitrgeno y parmetros operacionales y fsico-qumicos referidos a este trabajo ha sido descrita por Zornoza et al. (2011). La abundancia de la poblacin de BOA y BON en la EDAR QB ha sido descrita por Avendao (2011). Los resultados obtenidos han permitido definir los parmetros operacionales y fsicoqumicos asociados con la abundancia de

1.1.5. Relacin entre la Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO 5 ) y el Nitrgeno Kjeldahl Total (NKT)
El agua residual afluente al proceso de fangos activos contiene una elevada concentracin de materia orgnica y otros nutrientes que son utilizados por las bacterias como fuente de carbono y energa para su metabolismo, crecimiento y reproduccin. La fraccin de organismos nitrificantes disminuye al aumentar la proporcin de DBO 5/NKT. En procesos combinados de eliminacin de carbono y de nitrificacin esta proporcin es superior a 5, mientras que en los procesos en los que se separan ambos procesos, en la etapa de nitrificacin la proporcin es superior a 3 (Bitton, 2011).

1.1.6. Sustancias toxicas

Las bacterias nitrificantes son muy sensibles a numerosas sustancias txicas que pueden inhibir su crecimiento, lo que provoca una disminucin en la tasa de nitrificacin o una interrupcin del proceso, por la muerte de las bacterias implicadas, debido a una elevada toxicidad (Bitton, 1989). Los compuestos orgnicos ms txicos para las bacterias nitrificantes son el cianuro, la tiourea, los fenoles, las anilinas y los metales pesados (plata, mercurio, nquel, cromo, cobre y zinc) (Bitton, 1994). Wells et al. (2009) observaron que a pesar de que el cromo, nquel, mercurio, cadmio, zinc y cobre demostraron tener efectos inhibitorios sobre la actividad de las BOA en cultivo puro y mixto, slo la presencia de cromo y nquel en el afluente tienen una

Anlisis de las correlaciones de bacterias nitrificantes en fangos activos

DBO 5 , mientras que el da 3 se llev a cabo un anlisis completo del afluente y efluente. El objetivo del primer anlisis fue estudiar la influencia de la carga orgnica y del segundo establecer el rendimiento del proceso biolgico. El da 4 se procedi al anlisis completo del licor mezcla. Los parmetros se determinaron siguiendo los procedimientos normalizados (APHA 1998). La fraccin filtrada (f) se obtuvo utilizando un filtro de lana de vidrio (Whatman GF/C), con un tamao nominal de poro de 1.2 m, y la fraccin soluble (s) se obtuvo a travs de un filtro de 0.45 m (Grady, 1989).

bacterias nitrificantes y por tanto, de mayor relevancia para el control del proceso de nitrificacin. Se han establecido tambin aquellos parmetros no limitantes del proceso de nitrificacin; temperatura y oxigeno disuelto en el reactor, este ltimo de gran inters por el ahorro de coste de explotacin para la EDAR.

2. 2.1.

MATERIAL Y MTODOS Toma de muestras

Las muestras se tomaron en la EDAR QB, que trata un caudal de 39.748 m3/da (datos EPSAR 2010) y una poblacin de 141.689 habitantes equivalentes. Cuenta con un proceso biolgico llevado a cabo en cuatro reactores AO de geometra rectangular (75x20x4.5 m). Se han realizado campaas de muestreo con una frecuencia quincenal durante un ao desde diciembre de 2008 hasta diciembre de 2009 (24 campaas). Cada una de ellas se ha desarrollado durante cuatro das consecutivos repartidos de la siguiente forma: en los tres primeros das (1, 2 y 3) se muestre el afluente al reactor, en el tercer da (3) se muestre tambin el efluente del decantador secundario. Estas muestras fueron compuestas, es decir, se obtuvieron a partir de la mezcla de muestras simples horarias en relacin al caudal. En el cuarto da (4) se tom una muestra simple de licor mezcla en la salida del reactor biolgico.

2.3.

Parmetros operacionales

2.2.

Parmetros fsico-qumicos

Los das 1 y 2 se analizaron en el afluente al reactor la DQO total, DQO soluble (DQOs) y

Los parmetros operacionales fueron calculados segn Metcalf y Eddy (1991) (tabla 1). Debido a la inercia en el proceso biolgico de algunos parmetros operacionales, como la carga orgnica afluente al reactor biolgico (Salvad et al., 1993), se han calculado para su estudio distintos parmetros con valores promedio de la carga msica (CM) y tiempo de retencin hidrulico en el reactor biolgico (TRHr). En el caso de la EF, esta fue calculada a partir del sumatorio de las variables correspondientes hasta un mximo de siete das anteriores a la toma de muestras del licor mezcla (da 4). De esta forma, se obtuvieron para su estudio siete expresiones distintas (EF1-EF7). Los valores de OD en el reactor fueron distribuidos en tres intervalos (ODb, ODm y ODa) y expresados en porcentaje de tiempo (%). Los datos correspondieron a medidores en continuo situados en la parte final del reactor biolgico.

Zornoza et al.

Tabla 1. Parmetros operacionales.

Parmetro Smbolo Unidades Observaciones TRHr1: da 3 TRHr2a: promedio das 2 y 3 TRHr2b: promedio das 1 y 2 TRHr3: promedio das 1, 2 y 3 CM1: da 3 CM2a: promedio das 2 y 3 CM2b: promedio das 1 y 2 CM3: promedio das 1, 2 y 3 EFX. Donde X = n das anteriores empleados en e l sumatorio de las variables ODb: < 0.8 mg/L ODm: 0.8-2 mg/L ODa: >2 mg/L

Tiempo de retencin hidrulico en reactor

TRHr3, TRHr1, TRHr2a, TRHr2b

horas

Carga msica

CM1, CM2a, CM2b, CM3 EF1, EF2, EF3, EF4, EF5, EF6, EF7 Tr ODb, ODm, ODa

kg DBO 5 /kg SSVLM.d kg DQOs/kg SSVLM.d

Edad del fango Temperatura rector Oxgeno disuelto reactor

das C %

Tabla 2. Sondas moleculares utilizadas.

Sonda EUB 338 I EUB 338 II EUB 338 III Nso 1225 Nse1472 Nmo218 NEU Secuencia (5-3) GCTGCCTCCCGTAGGAGT GCAGCCACCCGTAGGTGT GCTGCCACCCGTAGGTGT CGCCATTGTATTACGTGTGA2 ACCCCAGTCATGACCCCC CGGCCGCTCCAAAAGCAT CCCCTCTGCTGCACTCTA Especificidad Bacteria Planctomycetes Verrumicrobiales Proteobacteria 3 N. europea Nitrosomonas oligotropha Nitrosomonas halophila, eutropha y europea Nitrosomonas sp. Nm104. Competidora4 Nitrospira spp. Competidora4 Nitrobacter spp. Competidora4 40 45 50 35 40 % FA1 Referencia Amann (1990) Daims et al. (1999) Daims et al. (1999) Mobarry et al. (1996) Juretschko et al. (1998) Gieseke et al. (2001) Wagner et al. (1995) Wagner et al. (1995)

CNEU Ntspa 662 CNtspa 662 NIT 3 CNIT 3

1FA:

TTCCATCCCCCTCTGCCG GGAATTCCGCGCTCCTCT GGAATTCCGCTCTCCTCT CCTGTGCTCCATGCTCCG CCTGTGCTCCAGGCTCCG

40 35

Wagner et al, (1995) Daims et al. (2001) Daims et al. (2001) Wagner et al. (1996) Wagner et al. (1996)

Porcentaje de formamida. 2Modificada con 4 bases LNA (Alonso et al,.2009). 3AOB. 4Sin marcar para aumentar la especificidad de la sonda correspondiente Ntspa662 o NIT3.

2.4. Identificacin y bacterias nitrificantes

cuantificacin

de

Se utiliz la tcnica FISH para la identificacin de la comunidad general de bacterias as como de BOA y BON, utilizando para ello las sondas moleculares descritas en la tabla 2. Despus de realizada la identificacin, se procedi a la toma de imgenes para la cuantificacin de bacterias. Esta consisti en

la captura de 20-25 campos por cada sonda y muestra analizada. El anlisis de imagen se realiz mediante el programa MATLAB 7.1, descomponiendo la imagen en escala de grises con valores de 0 (negro) a 225 (blanco) y facilitando de esta forma el conteo de pxeles (Borras, 2008). Las imgenes tomadas fueron introducidas en el software de cuantificacin desarrollado por Borras (2008), obteniendo el porcentaje y desviacin estndar del rea ocupada por las bacterias

Anlisis de las correlaciones de bacterias nitrificantes en fangos activos

mostraron al menos alguno de los dos niveles de significacin. El tratamiento estadstico de los datos se realiz con el programa SPSS versin 19.

nitrificantes en funcin del total de la comunidad bacteriana presente (sonda EUBmix). Adems, dicho porcentaje de rea fue convertido a mg SSVLM/L.

2.5.

Anlisis estadstico 3. RESULTADOS

Se realiz un anlisis bivariante con el fin de evaluar la relacin lineal entre la abundancia de bacterias nitrificantes y el resto de variables, calculndose para ello los coeficientes de Pearson (C.P) y Spearman (C.S). Previamente se realiz una transformacin logartmica de aquellas variables que no mostraron una distribucin normal (variable = ln [variable + 1]) (Esteban et al., 1991), considerndose significativas las relaciones entre parmetros cuando p < 0.05 y p < 0.01. En las tablas de resultados se han omitido aquellos coeficientes que no

Las seales positivas de hibridacin de la poblacin de BOA correspondieron a las sondas Nso 1225 y Nmo 218 (figura 1 y 2), mientras que las correspondientes a las sondas NEU y Nse 1472 fueron escasas y negativas respectivamente. Las seales positivas de hibridacin de la poblacin de BON correspondieron a la sonda Ntspa 662 (figura 3), mientras que las correspondientes a las sondas NIT 3 y Nsr 1156 fueron negativas.

Fig. 1- A) AOB. Nso 1225 B) mismo campo. EUB338mix, 600x.

Fig. 2- A) AOB. N. oligotropha, Nmo 218 B) mismo campo. EUB338mix, 600x.

Zornoza et al.

Fig. 3-1 A) NOB. Nitrospira sp., Ntspa 662 B) mismo campo. EUB338mix, 600x.

Los resultados de abundancia de la poblacin de BOA y BON se resumen en la tabla 3. Los rendimientos de eliminacin de nitrgeno (rN-NH 4 y rNKTs) y los rangos de operacin de las distintas variables durante el periodo de estudio se resumen en las tablas 4, 5 y 6.
Tabla 3. Valor medio, mnimo, mximo y desviacin estndar (DE) de la abundancia de bacterias nitrificantes.
Sonda Nso1225 Nmo218 Ntspa662 Ud. % mg SSVLM/L % mg SSVLM/L % mg SSVLM/L Media 4.0 78.4 2.8 54.2 1.6 31.1 Mn.-mx. 1-6 15.7-149.5 1-5 15.7-99.6 0.1-4 1.5-82.0 DE 1.9 40.1 1.4 27.7 1.1 21.1

Tabla 5. Valor medio, mnimo, mximo y desviacin estndar (DE) de los parmetros operacionales.
Parmetro CM1 (Kg DBO 5 /kg SSVLM.d) CM2a (Kg DBO 5 /kg SSVLM.d) CM2b (Kg DBO 5 /kg SSVLM.d) CM3 (Kg DBO 5 /kg SSVLM.d) CM1 (Kg DQOs/kg SSVLM.d) CM2a (Kg DQOs/kg SSVLM.d) CM2b (Kg DQOs/kg SSVLM.d) CM3 (Kg DQOs/kg SSVLM.d) EF1 (das) EF2 (das) EF3 (das) EF4 (das) EF5 (das) EF6 (das) EF7 (das) TRHr1 (h) TRHr2a (h) TRHr2b (h) TRHr3 (h) ODb (%) ODm (%) ODa (%) Media 0.25 0.23 0.18 0.20 0.23 0.21 0.16 0.18 39.9 11.9 12 11 10.8 10.8 10.8 14.3 15.4 18.4 17 33 62 5 Mn.-mx. 0.09-0.85 0.10-0.64 0.08-0.33 0.08-0.47 0.10-0.92 0.09-0.69 0.06-0.29 0.10-0.49 3.0-785 2.9-52 3.5-36 4.6-28 5.1-32 5.3-31 5.2-29 8.7-25 10.7-23.6 14.8-24.4 13.5-22 5-69 12-95 0-40 DE 0.16 0.12 0.07 0.09 0.17 0.12 0.06 0.09 155 10.3 7.2 5.7 6.1 6.1 5.7 3.3 2.6 2.3 2 18 19 10

Tabla 4. Valor medio, mnimo, mximo y desviacin estndar (DE) de los rendimientos y estados del nitrgeno en el afluente (Afl) y efluente (Efl) al reactor.
Parmetro NKTs (mg/L) NKTs (mg/L) rNKTs (%) N-NH 4 + (mg/L) N-NH 4 + (mg/L) rN-NH 4 + (%) N-NO 2 - (mg/L) N-NO 3 - (mg/L) Efl. Efl. Afl. Efl. Afl. Efl. Media 45 11.1 78 40 9.2 80 1.36 6.2 Mn.-mx. 24-72 1.0-36.0 45-96 24-62 0.1-32.6 42-100 0.04-5.67 0.4-11.1 DE 16 10.4 17 12 9.7 19 1.47 2.6

Tabla 6. Valor medio, mnimo, mximo y desviacin estndar (DE) de los parmetros fsico-qumicos en el afluente.
Parmetro T. aninicos (mg/L) DQOs1 (%) DQOs2a (%) DQOs2b (%) DQOs3 (%) Nquel (mg/L) Zinc (mg/L) Fenoles (mg/L) Sulfatos (mg/L) Cloruros (mg/L) DB0 5 /NKT DB0 5 f/NKTs DQOs/NKTs Media 3.3 52 51 47 49 0.13 2.10 0.94 221 341 4.5 3.3 4.9 Mn.-mx. 1.2-7.5 42-75 43-70 28-63 37-61 <0.02-0.45 0.18-4.02 0.37-2.05 159-293 133-520 2.7-7.9 1.9-8.0 2.9-10.1 DE 1.8 8 6 6 5 0.18 1.32 0.49 35 94 1.1 1.4 1.5

La poblacin de BOA present en general una correlacin negativa moderada y alta frente a las formas ms reducidas del nitrgeno (NKTs y N-NH 4 +) y correlacin positiva respecto a sus rendimientos de eliminacin (tabla 7).

Anlisis de las correlaciones de bacterias nitrificantes en fangos activos

La CM present de forma general una moderada correlacin positiva frente a la poblacin de BOA y BON (tabla 8). Las CM expresada como CM2b mostr valores de correlacin ms bajos que el resto de expresiones (CM1, CM2a y CM3). Los coeficientes obtenidos de la CM calculada con el parmetro DQOs fueron aproximadamente del mismo orden que los calculados con la DBO 5.

Los valores ms elevados fueron observados con la sonda Nso1225, que representa a Nitrosomonas sp. Por el contrario, la poblacin de BON (sonda Ntspa, que representa a Nitrospira sp.) present escasa correlacin significativa con N-NO 2 - y N-NO 3 . De todas las expresiones de la EF (EF1EF7), tan solo la EF3 y EF4 mostraron correlacin significativa con Nitrosomonas oligotropha (C.S; 0.43* y 0.41* respectivamente).

Tabla 7. Coeficientes de correlacin entre los rendimientos y estados del nitrgeno del efluente y la poblacin de BOA y BON.
NKTs Nso1225 (%) Nso1225 (mg SSVLM/L) Nmo218 (%) Nmo218 (mg SSVLM/L) Ntspa662 (%) Ntspa662 (mg SSVLM/L) C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S 0.41* 0.43* -0.72** -0.72** -0.71** -0.73** -0.46* -0.49* -0.43* -0.57* rNKTs 0.87** 0.77** 0.85** 0.73** 0.63** 0.59** 0,62** 0.61** N-NH 4 + -0.73** -0.74** -0.73** -0.75** -0.58** -0.60** -0.54** -0.68** rN-NH 4 + 0.85** 0.79** 0.83** 0.78** 0.63** 0.69** 0.62** 0.74** N-NO 2 N-NO 3 -

Nivel de significacin: ** p < 0.01, * p < 0.05

Tabla 8. Coeficientes de correlacin entre la carga msica y la poblacin de BOA y BON.

CM1 (DBO 5 ) Nso1225 (%) Nso1225 (mg SSVLM/L) Nmo218 (%) Nmo218 (mg SSVLM/L) Ntspa662 (%) Ntspa662 (mg SSVLM/L) C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S -0.48* -0.51* -0.46* -0.45* -0.55** -0.41* -0.52** -0.53** -0.48* -0.44* -0.60** -0.46* -0.47* -0.46* -0.43* -0.54** -0.49* -0.52** -0.48* -0.46* -0.56** -0.41* -0.55** -0.54** -0.61** CM2a (DBO 5 ) -0.54** -0.53** -0.60** -0.43* CM2b (DBO 5 ) -0.43* -0.45* -0.49* CM3 (DBO 5 ) -0.54** -0.52** -0.60** CM1 (DQOs) -0.58** -0.61** -0.63** -0.65** -0.41* CM2a (DQOs) -0.57** -0.52** -0.63** -0.54** -0.47* -0.43* -0.55** -0.52* -0.50* -0.44* -0.58** -0.51* -0.48* -0.42* -0.51* -0.49* -0.48* -0.57** -0.49* -0.46* CM2b (DQOs) -0.43* CM3 (DQOs) -0.55** -0.50* -0.62** -0.55** -0.42*

Nivel de significacin: ** p < 0.01, * p < 0.05

El TRHr present correlacin positiva frente a Nitrosomonas oligotropha y Nitrospira sp. , siendo el TRHr2a la expresin

que mostr mayores niveles de significacin (tabla 9). No se observ correlacin significativa con el OD y la Tr.

Zornoza et al.
Tabla 9. Coeficientes de correlacin entre el tiempo de retencin hidrulico, oxgeno, temperatura en el reactor y la poblacin de BOA y BON.
TRHr1 Nso1225 (%) Nso1225 (mg SSVLM/L) Nmo218 (%) Nmo218 (mg SSVLM/L) Ntspa662 (%) Ntspa662 (mg SSVLM/L) C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S 0.42* 0.44* 0.43* 0.41* TRHr2a TRHr2b TRHr3 ODb ODm ODa Tr

0.55**

Nivel de significacin: ** p < 0.01, * p < 0.05

Tabla 10. Coeficientes de correlacin entre los tensioactivos aninicos, DQO soluble afluente al reactor y la poblacin de BOA y BON.
TA Nso1225 (%) Nso1225 (mg SSVLM/L) Nmo218 (%) Nmo218 (mg SSVLM/L) Ntspa662 (%) Ntspa662 (mg SSVLM/L) C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S -0.44* %DQOs1 -0.73** -0.68** -0.75** -0.65** -0.50* -0.47* -0.55** -0.52* -0.47* -0.46* -0.46* -0.52* %DQOs2a -0.46* -0.48* -0.57** -0.49* -0.59** -0.44* -0.51* -0.50* -0.46* -0.42* -0.46* -0.42* -0.50* -0.41* -0.48* -0.46* -0.44* -0.41* %DQOs2b %DQOs3

Nivel de significacin: ** p < 0.01, * p < 0.05

La concentracin de tensioactivos aninicos (TA) present correlacin negativa con Nitrosomonas sp., mientras que el porcentaje de DQO soluble present correlacin negativa con la poblacin de BON y BOA (tabla 10). El %DQOs1 present el mayor nmero de coeficientes de correlacin significativos, especialmente elevados en el caso de Nitrosomonas sp. La concentracin de nquel, zinc, fenoles

y sulfatos no present correlacin significativa con la poblacin de BOA y BON, mientras que Nitrosomonas sp. mostr moderada correlacin negativa con la concentracin de cloruros (tabla 11). Las relaciones DBO 5 /NKT y DQOs/NKTs se correlacionaron negativamente con la poblacin de BOA y BON, siendo los coeficientes ligeramente superiores en el caso de DQOs/NKTs. La relacin no present coeficientes DBO 5 f/NKT significativos.

10

Anlisis de las correlaciones de bacterias nitrificantes en fangos activos

Tabla 11. Coeficientes de correlacin entre parmetros fsico-qumicos afluente al reactor y la poblacin de BOA y BON.
Nquel Nso1225 (%) Nso1225 (mg SSVLM/L) Nmo218 (%) Nmo218 (mg SSVLM/L) Ntspa662 (%) Ntspa662 (mg SSVLM/L) C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S C. P C. S -0.54* -0.57* Zinc Fenoles Sulfatos Cloruros DB0 5 /NKT -0.55** -0.53* -0.53* -0.47* -0.48* -0.48 -0.50* -0.51* -0.43* -0.44* DB0 5 f/NKT s DQOs/NKTs -0.62** -0.54** -0.61** -0.47* -0.48* -0.43* -0.50* -0.55** -0.54**

Nivel de significacin: ** p < 0.01, * p < 0.05

4.

DISCUSIN del proceso de

4.1. Rendimientos nitrificacin

La correlacin significativa encontrada entre la presencia de BOA y el rN-NH 4 + y rNKTs puso de manifiesto la buena seal de hibridacin detectada de las sondas Nso 1225 y Nmo 218, as como la adecuada metodologa empleada en el tratamiento y cuantificacin de las imgenes (Borras, 2008). Las diferencias significativas encontradas de los coeficientes de correlacin entre Nitrosomonas oligotropha y Nitrosomonas sp., con valores ms elevados en el caso de este ltimo, podran indicar la presencia de otras especies de BOA en las muestras analizadas. La ausencia de correlaciones significativas entre BON y NNO 3 - pudo ser debida a la eficiencia en el proceso de desnitrificacin.

tasa de crecimiento de las BOA y BON (Gerardi, 2002). La Tr, al ser una variable que viene impuesta por la estacionalidad, determina la EF a mantener en el reactor biolgico. Segn los resultados obtenidos, la abundancia de BOA y BON no se asociaron en general de forma significativa con la EF, a pesar del aumento observado en el rendimiento de nitrificacin debido al aumento de la EF (Zornoza et al., 2011). Ambos resultados indicaron que el aumento de la EF no origin un aumento en la abundancia de bacterias nitrificantes y si un aumento en la actividad metablica de dichas bacterias. La Tr, en el rango 14-29 C, no present una influencia significativa sobre la abundancia de BOA y BON.

4.3. Carga msica y porcentaje de DQO soluble

Los elevados coeficientes de correlacin indicaron que los periodos de altas CM originaron una disminucin de la poblacin de BOA y BON. Durante estos periodos se incrementa la posibilidad de acceso de la materia orgnica no oxidada del selector anxico a la zona xica, dndose condiciones que favorecen el crecimiento y la respiracin de la poblacin hetertrofa, y por

4.2. Edad del fango y temperatura en el reactor biolgico

La EF y la Tr estn ntimamente relacionas en el proceso de nitrificacin debido a la baja

Zornoza et al.

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consiguiente un mayor consumo de oxgeno y condiciones limitantes para la poblacin bacteriana auttrofa. No se observaron diferencias significativas entre las distintas expresiones de la CM, debido probablemente a que las variaciones diarias de la EDAR QB no fueron bruscas. De todas ellas, la CM2b fue la que present los valores menos significativos. Los coeficientes de correlacin obtenidos de la CM calculada con el parmetro DQOs fueron del mismo orden que los calculados con la DBO 5 , lo que demuestra su inters como parmetro de rutina operacional de carga, siendo adems ms rpido su clculo (de horas, frente a los cinco das necesarios para la determinacin de la DBO 5 ). Segn los resultados obtenidos, existe una influencia negativa debido al aumento en porcentaje de DQO soluble sobre la abundancia de bacterias nitrificantes, especialmente en Nitrosomonas sp. El aumento de la fraccin soluble, aunque no diferencie entre fraccin biodegradable y lentamente biodegradable, implica una mayor disponibilidad de materia orgnica y por tanto condiciones favorables de crecimiento y respiracin de la poblacin hetertrofa frente a la auttrofa. La expresin del porcentaje de DQO soluble, da anterior (%DQOs1) al anlisis del licor mezcla (da 4), se presenta como la expresin ms adecuada en el control de la abundancia de BOA y BON.

este un factor limitante del proceso. Este hecho podra estar de acuerdo con los resultados encontrados por Schramm et al. (1999), que indican que el gnero Nitrospira es ms competitivo con niveles bajos de oxgeno que el gnero Nitrobacter, siendo el primero dominante en el presente estudio (Avendao, 2011). En este sentido, existe la posibilidad de colonizacin del fango activo de determinadas gneros de BON con requerimientos bajos de OD, y por tanto, de gran inters por el ahorro energtico que supone la reduccin de los niveles de OD en el tanque de aireacin.

4.5. Tiempo de retencin hidrulico en el reactor

Un aumento del TRHr puede minimizar el efecto negativo que origina las altas CM sobre la abundancia de BOA y BON. La relacin entre ambas variables fue corroborada a travs de la obtencin de coeficientes de correlacin significativos, indicando que un aumento del TRHr favorece la presencia de bacterias nitrificantes.

4.6.

DBO5 /NKT, DBO 5f/NKTs, DQOs/NKTs

4.4.

Oxgeno disuelto

El OD en QB se situ por debajo de 2 mg/L el 95% del tiempo. Estos valores se encontraron en el intervalo 0.5-1.9 mg/L, en cuyo rango el proceso de nitrificacin se considera ineficiente (Bitton, 1994). No se observaron coeficientes de correlacin significativos con los niveles de OD mantenidos en el reactor biolgico, no siendo

Los resultados obtenidos sobre la disminucin de la actividad nitrificante en relacin con el aumento de la proporcin de DBO 5 /NKT coinciden con los de Bitton (2011), observndose una disminucin de la poblacin de BOA y BON al aumentar dicha proporcin. El aumento de esta relacin se produce debido a un aumento de materia orgnica disponible, lo que favorece el crecimiento y respiracin de las bacterias hetertrofas frente a las auttrofas. La relacin DQOs/NKTs present mayor grado de significacin que la DBO 5 /NKT, convirtindose en una alternativa interesante para el control del proceso debido a la

12

Anlisis de las correlaciones de bacterias nitrificantes en fangos activos

inters para el control de la carga msica. 3. El porcentaje elevado de DQO soluble afluente al reactor se asoci negativamente con la abundancia de bacterias nitrificantes, especialmente en Nitrosomonas sp.. La determinacin de dicho porcentaje en el da anterior al anlisis del licor mezcla (%DOOs1) se presenta como una variable de inters a controlar. 4. La edad del fango no se asoci de forma significativa con la abundancia de BOA y BON. 5. La temperatura en el reactor biolgico no se asoci de forma significativa con la abundancia de BOA y BON. 6. La concentracin de oxgeno disuelto en el reactor no se asoci de forma significativa con la abundancia de bacterias nitrificantes, aun estando en el intervalo considerado como poco eficiente (<2 mg/L). 7. Un alto tiempo de retencin hidrulico en el reactor se asoci positivamente con la abundancia de BOA y BON. 8. La relacin DQOs/NKTs se asoci negativamente con la abundancia de BOA y BON. Esta se presenta como una alternativa plausible frente a la relacin, ya conocida, DBO 5 /NKT. 9. La concentracin de zinc, nquel, sulfatos y fenoles no se asoci negativamente con la abundancia de bacterias nitrificantes. 10. La concentracin de cloruros y tensioactivos aninicos se asoci negativamente con la abundancia de Nitrosomonas sp.

rapidez de la determinacin de la DQO frente a la DBO 5 .

4.7.

Sustancias txicas

Los resultados respecto a las sustancias toxicas estudiadas indican que la concentracin de estas no causaron un efecto negativo sobre la abundancia de BOA y BON, a pesar de que la concentracin de nquel origin un efecto negativo en la actividad de las bacterias nitrificantes (Zornoza et al., 2011). Tan solo la concentracin de cloruros y tensioactivos aninicos presentaron un efecto negativo en la abundancia de BOA.

5.

CONCLUSIONES

Aunque la metodologa de estudio tenga aplicacin prctica para las EDAR, las conclusiones obtenidas, deben tomarse como recomendaciones u orientaciones para el control en el resto de instalaciones. El estudio del grado de las correlaciones significativas entre la abundancia de BOA, BON y los distintos parmetros operacionales, fsico-qumicos del afluente y rendimientos de eliminacin del nitrgeno relacionados con el proceso biolgico de nitrificacin mostr que: 1. La buena seal de hibridacin detectada de las sondas de BOA y BON junto con la metodologa empleada en su cuantificacin permiten el control del rendimiento de eliminacin de nitrgeno en el proceso de nitrificacin. 2. Altas cargas msicas se asociaron negativamente con la abundancia de BOA y BON. El parmetro DQO soluble sera un parmetro de gran

Zornoza et al.

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AGRADECIMIENTOS
Este estudio forma parte del proyecto de investigacin ESTUDIO INTEGRADO DEL PROCESO DE FANGOS ACTIVOS financiado por la Entidad Pblica de Saneamiento de Aguas Residuales de la Comunidad Valenciana (EPSAR) y el proyecto CGL2008-02310 del Ministerio de Economa y Competitividad. Agradecer la colaboracin de la empresa AVSAEGEVASA y del Subprograma MICINN PTA2011.

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Anlisis de las correlaciones de bacterias nitrificantes en fangos activos

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