ANALISIS E IDENTIFICACION DE CLOSTRIDIUM DIFIFICILE Clostridium difficile es un bacilo Gram positivo anaerbico esporulado, responsable de

la mayor parte de las diarreas nosocomiales en poblacin adulta, tanto en hospitales como en casas de reposo. Clostridium difficile se diagnostica por medio de pruebas de laboratorio hechas con una muestra de las heces de la persona infectada. Si hay una infeccin por Clostridium difficile presente, la prueba mostrar la existencia de toxinas de Clostridium difficile en las heces de la muestra. 1.En 1979, George et al desarrollaron un medio llamado CCFA (agar cicloserinacefoxitina-fructosa), que es un medio sin sangre, basado en el agar de yema de huevo de McClung y Toabe con fructosa como reemplazo de la glucosa . BD Clostridium Difficile Agar with 7% Sheep Blood es una modificacin de la frmula original de CCFA. La concentracin de peptona se ha reducido a un nivel comparable a otros medios utilizados para C. difficile, y las concentraciones de cicloserina y cefoxitina se han reducido dado que la frmula original produca un nivel excesivo de inhibicin . Se ha omitido el uso de yema de huevo puesto que C. difficile da resultados negativos a la lecitinasa y lipasa y el medio inhibe la mayora de los dems clostridios. La sangre de carnero proporciona nutrientes y permite una buena formacin de esporas y deteccin de una fluorescencia verde bajo luz UV de onda larga
7,5. 6 5

La peptona y la fructosa suministran las fuentes necesarias de nitrgeno y carbono. Los fosfatos mantienen el pH. La cicloserina y cefoxitina son agentes selectivos para suprimir las bacterias acompaantes. 2.Este medio se utiliza para el aislamiento de C. difficile a partir de muestras fecales. Se debe utilizar muestras de deposicin fecal reciente (idealmente 10 20 mL de heces acuosas) de pacientes con colitis seudomembranosa presuntiva. Los resultados del anlisis de heces slidas formadas posiblemente no contribuyan al diagnstico de dicha afeccin. En especial, los pacientes hospitalizados que presentan diarrea durante

o pronto despus del tratamiento antibitico deben someterse a la prueba de infeccin de C. difficile y de colitis seudomembranosa. Clostridium difficile es muy sensible a la luz. Por tanto, las muestras fecales deben ser recientes y se han de procesar en el plazo de 2 horas si no se utilizan medios de transporte anaerobios (vase tambin CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Si las muestras se colocan en frascos con medios de transporte anaerobios, se puede aceptar un tiempo de transporte ms prolongado, pero no superior a las 24 horas. No congelar las muestras Procedimiento de anlisis Tan pronto como se recibe la muestra en el laboratorio, inocularla en una placa de BD Clostridium Difficile Agar with 7% Sheep Blood y extender la muestra para aislamiento. Dado que algunas cepas de C. difficile tal vez no crezcan debido a las propiedades selectivas del medio, se aconseja incluir un medio no selectivo tal como BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood o BD CDC Anaerobe Agar with 5% Sheep Blood. Dado que algunos organismos anaerobios facultativos presentan el potencial de producir reacciones similares a C. difficile, se recomienda incluir una placa de agar sangre incubada en atmsfera aerobia con el fin de confirmar que el aislado es un anaerobio obligado. Los medios anaerobios deben reducirse antes de la inoculacin colocndolos en condiciones anaerobias durante 6 24 h antes de su utilizacin. Una manera fcil y eficaz de obtener las condiciones anaerobias adecuadas es mediante el uso de sistemas anaerobios BD GasPak. PA-254406.03 - 3 Incubar de inmediato en condiciones anaerobias a 35 37 C durante al menos 48 h. Independientemente del sistema anaerobio utilizado, es importante incluir un indicador de anaerobiosis tal como el indicador anaerobio desechable BD GasPak.