TOXICOLOGA AMBIENTAL INFORME DE LABORATORIO Ensayo de Toxicidad

Integrantes: Fernanda Cortes-Monroy Vernica Daz Francisco Marchant Milena Meneses Urana Olivares Nicolas Ortiz Profesor: Marcelo Fuentes Fecha:

ndice Resumen El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga Lactuca sativa es una prueba en la cual pretende determinar de qu manera pueden influir las condiciones del humedal El Culebrn en la germinacin de las semillas y en el desarrollo de las plntulas durante los primeros das de crecimiento, con esto se busca establecer si existe inhibicin en la germinacin y elongacin de la radcula y del hipocotilo. Para poder determinar esto se realizaron pruebas de laboratorio en las cuales se cultivaron semillas en capsulas de petri con una base de papel filtro y con diluciones de 25%, 50% y 100% de las muestras extradas del humedal. Posteriormente las semillas fueron contadas y medidas luego de su incubacin en un horno en oscuridad por 5 das a 22+2C. Los resultados obtenidos exponen un patrn similar en ambas muestras estudiadas, ya que en el caso del hipocotilo existe un crecimiento por sobre la media, esto a diferencia de la radcula la cual presenta una inhibicin y de acuerdo a la desviacin estndar estos datos no presentan una alta dispersin y su comportamiento es homogneo. Las graficas obtenidas fueron poco representativas debido a la falta de muestras, en la

observando que solo en una de estas se asimil a una curva dosis-respuesta. Dentro de las caractersticas del humedal El Culebrn, como micronutrientes, concentraciones de hierro, y la eutrofizacin, permitieron que la plntula obtuviera de stas las condiciones favorables para su desarrollo.

I. Introduccin Cada da son introducidas al ambiente nuevas sustancias qumicas, es as como la

contaminacin del agua se produce por vertimientos de origen industrial o municipal, residuos agrcolas, drenajes de minas y lixiviados de rellenos sanitarios los cuales son liberados al medio ambiente sin ningn control o por fuentes difusas a travs de la erosin, ( Bohrquez, P. Campos, C. 2007. Evaluacin de Lactuca sativa y Selenastrum capricornutum como indicadores de toxicidad en aguas. Pontificia Universidad Javeriana. Bogot. 16pp.), debido a esto en trminos de consumo de tiempo, espacio y costo, la evaluacin de las mismas mediante la utilizacin de ensayos convencionales con animales resultara impracticable. De esta forma, la necesidad de procedimientos baratos y rpidos para el tamizaje de la toxicidad de sustancias qumicas presentes en muestras ambientales, ha conducido al desarrollo de diferentes bioensayos a corto plazo con sistemas de plantas por las ventajas que stas poseen. ( Torres, M. Garca, M. Hernndez, N. Fernndez, M. 2006. Toxicidad aguda de lixiviados acuosos mediante un ensayo con Lactuca sativa L. INHEM. Cuba. 3pp.) Es por esto que se utilizan ensayos de toxicidad como herramientas que permite detectar y evaluar la capacidad inherente de un agente de producir efectos txicos sobre organismos vivos utilizando especies de prueba (Universidad de Concepcin. 2007. Programa de monitoreo ecotoxicolgico de los efuentes industriales en el rio Cruces, provincia de Valdivia. Centro EULA. Chile. 41pp.) como lo es la Lactuca sativa L. (lechuga comn) cuyas pruebas ayudan a evaluar la calidad de los efluentes y de esta forma prevenir o alertar sobre riesgos en el ecosistema. ( Bohrquez, P. Campos, C. 2007. Evaluacin de Lactuca sativa y Selenastrum capricornutum como indicadores de toxicidad en aguas. Pontificia Universidad Javeriana. Bogot. 16pp.)

Resulta de importancia para el desarrollo regional determinar cul es el posible efecto que genera la contaminacin sobre el estero El Culebrn lugar que representa un importante sitio de nidificacin, descanso y alimentacin para aves de ambientes acuticos, cuya superficie abarca aproximadamente 18 ha asociadas a una biodiversidad faunistica de Becacina, Gaviota Garuma, Huairavillo, Garza Cuca y Chorlos Playeros. (CONAMA. 2002. Estrategia regional y plan de accin de la biodiversidad IV regin Coquimbo. Chile. 20pp.)

II. Objetivos A. Objetivo General Evaluar el efecto toxico de las muestras extradas del Humedal Culebrn, mediante un bioensayo de toxicidad aguda de semillas de lechuga L. sativa, a partir de su elongacin de la radcula e hipocotilo. B. Objetivos Especficos Calcular el promedio y desviacin estndar de la elongacin de la radcula y del hipocotilo de las plntulas de cada repeticin. Determinar el porcentaje de inhibicin de la radcula e hipocotilo para cada dilucin. Construir hipocotilo. curvas- dosis respuesta para el porcentaje de inhibicin de la radcula

III. Materiales y Mtodos Para realizar el ensayo de toxicidad se necesitaron de semillas de lechugas (Lactuca sativa L var. mantecosa), 20 capsulas de petri de 100 mm de dimetro, 20 papeles filtro Whatman nm. 3, pinzas, 4 matraces de aforo, 7 pipetas volumtricas, balanza analtica para masar los reactivos que se utilizaran en el ensayo de toxicidad, 2 probetas de 1 L, 6 vasos precipitados de 100 mL, un botelln con capacidad de 2 L para preparar el agua dura, bolsas plsticas para envolver las capsulas de petri, estufa a 22C o cmara oscura termostatizasa (22+2C). En la preparacin del agua dura reconstituida, se deben masar las cantidades

correspondientes de a 0,49 g MgSO4* H2O, 0,384 g NaHCO3 y 0,016 KCl. En 3 vasos precipitados se debe realizar las diluciones de los reactivos mencionados anteriormente, luego las soluciones de deben adicionar a una probeta con agua destilada para completar 1 L, esta cantidad se debe agregar al botelln, enseguida se debe hacer una cuarta dilucin, para la cual se debe masar 0,24 gCaSO4*2H2O y luego diluir la cantidad necesaria en un vaso precipitado de 100 mL con agua destilada y agitar con una varilla, posteriormente deben agregar los 100 mL de la disolucin y 900 mL de agua destilada al botelln para completar los 2L y formar el agua dura reconstituida. Por otro lado se debe comenzar a preparar las capsulas rotulndose con el nmero de la muestra, dilucin y grupo de laboratorio, estas albergaran las muestras (18 capsulas) y 2 controles negativos, en cada una de estas se debe colocar el papel de filtro whatman nm. 3 y encima 20

semillas de lechuga con la ayuda de una pinza procurando dejar espacio suficiente entre ellas para permitir la elongacin de las races. De las muestras 1 y 2 se preparan 3 diluciones cada una por triplicado; la primera al 100% se lleva a cabo vaceando desde el frasco que contiene la muestra a un vaso precipitado unos 20 mL, de los cuales se depositan con una pipeta volumtrica alrededor de 4 mL en cada una de las tres capsulas; la segunda dilucin al 50% se lleva a cabo vaceando desde el frasco que contiene la muestra 50 mL a un vaso precipitado, este contenido es trasvasijado a un matraz el cual se afora con agua dura reconstituida, desde est se debe depositar con una pipeta volumtrica alrededor de 4 mL en cada una de las tres capsulas; la tercera y ltima dilucin al 25% se lleva a cabo vaceando desde el frasco que contiene la muestra 25 mL a un vaso precipitado, este contenido es trasvasijado a un matraz el cual se afora con agua dura reconstituida, desde est se debe depositar con una pipeta volumtrica alrededor de 4 mL en cada una de las tres capsulas. Para los controles negativos se agrega con ayuda de una pipeta volumtrica alrededor de 4 mL de agua dura reconstituida en cada capsula. Se debe tener en cuenta para todas las capsulas que no deben quedar espacios de aire entre la capsula y el papel lo que dificultara el contacto de la semilla con el agua y por ende alterara los resultados del experimento. Cada capsula debe ser envuelta en una bolsa plstica procurando quede bien sellada para evitar prdidas del agua por evaporacin, luego se introducen en una cmara oscura termostatizada (22+2C), durante un perodo de incubacin de 120 h una vez transcurrido este perodo se realiza la medicin de la radcula y el hipocotilo de cada plntula, considerando la elongacin de la radcula desde el nudo (regin ms engrosada de transicin entre la radcula y el hipocotilo) hasta el pice radicular. La medida de elongacin del hipocotilo se considera desde el nudo hasta el sitio de insercin de los dos cotiledones.

La toxicidad fue evaluada por la medicin de los efectos subletales (inhibicin de la prolongacin de la radcula e hipocotilo). El porcentaje de inhibicin de la prolongacin de la radcula e hipocotilo se realiz mediante la frmula: Inhibicin de crecimiento (IP) = Control- Muestra x100 Control

IP negativo: Se consider estimulacin del crecimiento IP positiva: Txica (inhibicin de la prolongacin) IP: 0 No txica El procesamiento estadstico de toda la informacin se realiz en Microsoft Excel 2007.

IV. Resultados 1. Promedio y desviacin estndar de la elongacin de la radcula y del hipocotilo de las plntulas de cada repeticin. Muestra 1. Tabla I: Dilucin Promedio de elongacin de Desviacin estndar radcula (cm) 25% 50% 100% 1,06 1,06 0,75 0,72 0,66 0,62

Tabla II: Dilucin Promedio de elongacin de Desviacin estndar hipocotilo(cm) 25% 50% 100% 1,73 2,10 1,60 1,27 1,25 1,33

Muestra 2. Tabla III: Dilucin Promedio de elongacin de Desviacin estndar radcula (cm) 25% 50% 100% 0,91 1,14 0,94 0,80 0,57 0,48

Tabla IV: Dilucin Promedio de elongacin de Desviacin estndar hipocotilo(cm) 25% 50% 100% 1,01 1,91 2,12 1,08 0,89 1,40

2. Porcentaje de inhibicin de radcula e hipocotilo para cada dilucin. Muestra 1. Tabla V:

Dilucin % % de inhibicin Radcula 25 50 100 17,06 17,45 41,54

Tabla VI:
Dilucin % 25 50 100 % de inhibicin Hipocotilo -10,21 -33,44 -1,59

Muestra 2. Tabla VII:

% Dilucin 25 50 100 % de inhibicin Radcula 46,27 32,84 44,9

Tabla VIII:
% Dilucion 25 50 100 % de inhibicin Hipocotilo 51,59 8,85 -1,36

3. Curvas- dosis respuesta de inhibicin de la radcula e hipocotilo. Muestra 1.

Curva dosis-respuesta Radicula

Porcentaje de inhibicin crecimiento Radicula 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 25 50 Dosis 100

Series1

Figura 1:

Curva dosis-respuesta Hipocotilo

Porcentaje de inhibicin crecimiento Hipocotilo 0.00 -5.00 -10.00 -15.00 -20.00 -25.00 -30.00 -35.00 -40.00 Dosis Series1 25 50 100

Figura 2:

Muestra 2.

Curva dosis-respuesta Radicula

Porcentaje de inhibicin crecimiento Radicula 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 25 50 Dosis 100

Series1

Figura 3:

Curva dosis-respuesta Hipocotilo

Porcentaje de inhibicin crecmiento Hipocotilo 60 50 40 30 20 10 0 -10 25 50 Dosis 100 Series1

Figura 4:

V. Discusin En el desarrollo de la experiencia se debe tener en cuenta los errores experimentales, como por ejemplo el clculo en las concentraciones de los reactivos, el etiquetado de las muestras, la cantidad de agua que se le adiciona a las capsulas de petri, tambin la temperatura a la cual son incubadas, etc. Lo que puede hacer variar los resultados finales del laboratorio. En relacin a los promedios (tabla I y III), la radcula presento un menor crecimiento que el control negativo (1,28cm). En contraste con el hipocotilo el promedio de elongacin (tabla II y IV) fue mayor al control negativo siendo estos comportamientos representados en la muestra 1 y 2. Comparando el comportamiento de la desviacin en la elongacin de los hipocotilo (tabla II y IV) de ambas muestras con el control negativo (1,03cm) se determina que todas las

desviaciones son mayores que el control, a diferencia de la elongacin de las radculas (tabla I y III) donde el valor correspondiente del control negativo (0,86cm) para la radcula nunca se vio sobrepasado. Debido a esto se puede decir que el crecimiento que presenta la radcula es ms homogneo mientras que el del hipocotilo ser heterogneo teniendo en cuenta que este valor puede verse afectado por el nmero de muertes. (Bibliografa de desviacin en relacin a lo homogneo y heterogneo). A mayor valor de C.V. mayor heterogeneidad de los valores de la variable; y a menor C.V., mayor homogeneidad en los valores de la variable (Cochran y Snedecor, 1981).

La muestra 1 en la inhibicin de la radcula presenta un patrn progresivo al aumentar las concentraciones. Para el hipocotilo no existe inhibicin, debido a que todos los valores son negativos, por lo que demuestra un crecimiento mayor que el control normal. La muestra 2 en la inhibicin de la radcula no sigue un patrn en relacin a las concentraciones, que es lo que se esperara. Para el hipocotilo si existe inhibicin pero esta es inversa pues en el 25% existe una mayor retardo en el 100%. Sealan que se debe considerar, el mayor desarrollo de los modelos vegetales en las muestras con respecto al control, puesto que la exaltacin u hormesis en un punto final no debe

ser interpretada como un efecto favorable o estimulante debido a que es posible que muchos compuestos a bajas concentraciones produzcan exaltacin por ser micronutrientes para los vegetales (Slabbert y Venter (1990) y Castillo (2004)). En relacin a la respuesta por la dosis

suministrada a la lechuga (muestra 1), se verifica una variacin en la medida de la radcula segn el grfico, segn lo investigado, la lechuga es una especie de hoja de gran sensibilidad a asfixias radiculares y deterioros foliares y las formas actuales de regado

(http://bibliotecadigital.innovacionagraria.cl/gsdl/collect/publicac/index/assoc/HASHa474.dir/81 LibroLechuga.pdf?ie=UTF-8&oe=UTF8&q=prettyphoto&iframe=true&width=90%25&height=90%25), adems se sabe que el sistema radicular de la lechuga es muy reducido en comparacin con la parte area, por lo que es muy sensible a la falta de humedad y soporta mal un periodo de sequa

(http://www.litar.cl/boletin_lechugas.pdf), aunque ste sea muy breve, estos datos pueden interpretarse de tal manera que las semillas recibieron una cantidad de agua que no fue necesaria para el crecimiento ptimo de ellas, lo que produjo la inhibicin en el crecimiento de estas.

En la muestra 1 (fig. 1) la grafica es la que ms se asemeja a una curva dosis respuesta, ya que al aumentar concentraciones se acrecienta la inhibicin. La curva del hipocotilo (fig. 2) y la radcula de la muestra 2 (fig. 3) se observa que al 50% existe una desviacin del dato, puesto que al utilizar 3 diluciones (25, 50 y 100%) de las muestras no se cuenta con el ptimo de datos para realizar una curva representativa, debido a que su forma es muy difcil de obtener, por lo que se recomienda realizar una curva dosis-respuesta con un mnimo de 5 o 6 diluciones de la muestra o compuesto a estudiar, de manera que se obtengan valores de toxicidad intermedios entre 100 y 0% (libro bkn). La curva del hipocotilo de la muestra 2 (fig. 4) se presenta de manera inversa a lo esperado, porque en el 25% se alcanza el mayor retardo del crecimiento, mientras que al 100% de concentracin existe una estimulacin del crecimiento, al igual que la figura 2, debido a que existen estudios que evidencian un proceso de eutrofizacin en el estero el culebrn lo que podra explicar el desarrollo de la lechuga, ya que al obtener nutrientes disponibles al momento de realizarse el bioensayo, la planta puede crecer en el tiempo estimado, (cabe destacar que este proceso no es natural en el estero, ya que se produce debido a la ocurrencia de eventos de contaminacin sobre los cuerpos de agua

(http://www.centroneotropical.org/recsos/manual_01.pdf) abriendo la posibilidad a que se encuentren compuestos que no son propios del humedal y que puedan influir en la inhibicin del crecimiento de algunas partes de la lechuga.

Cabe la posibilidad que dentro del humedal el culebrn se encuentre una cantidad de Calcio considerable lo que explicara la variacin de los resultados en cuanto a la inhibicin del crecimiento de la lechuga puesto que este mismo calcio influye en gran medida en la salud de la planta, tanto del sistema radicular como de la parte area

(http://www.hortalizas.com/pdh/?storyid=1179) segn estudios que se han realizado para determinar la importancia del calcio en las plantas, en este caso la lechuga.

VI. Conclusin Se puede inferir que debido a lo obtenido experimentalmente a travs del bioensayo, los promedios y desviaciones encontrados para la radcula (muestra 1 y 2), mostraron una inhibicin en el crecimiento con respecto al control negativo observando un comportamiento homogneo en los datos debido a la desviacin estndar encontrada, en contraste con los resultados obtenidos para el hipocotilo que en la mayora de las muestras presento un crecimiento, exponiendo un comportamiento heterogneo de los datos obtenidos (desviacin estndar). De esto se puede deducir que las caractersticas del humedal permitieron que la plntula posea las condiciones favorables para su desarrollo; cabe destacar que hay presencia de eutrofizacin en el humedal El Culebrn. Con respecto a las curvas-dosis respuesta, la figura 1 es la ms representativa debido a que la inhibicin mostrada en la radcula y el aumento de las concentraciones es directamente proporcional. Las dems figuras son menos representativas puesto que la cantidad de datos para la construccin de la grafica no permite observar el comportamiento exacto de la curva. Finalmente los objetivos planteados del bioensayo de toxicidad fueron cumplidos.

Anexos Tabla IX: Datos obtenidos de la elongacin de la radcula e hipocotilo, con una dilucin del 25% de la muestra 1. 25% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,5 3,7 1,3 2,1 1,0 3,0 1,0 3,1 0,7 3,3 1,0 4,0 1,2 3,0 1,2 4,5 1,2 2,9 1,5 3,0 0,6 3,0 0,8 1,6 0,5 1,2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 25% Hipocotilo (cm) 3,0 2,7 2,1 1,3 2,0 1,6 2,7 1,8 1.8 1,0 2,2 1,2 0,5 0,6 2,5 1,8 0 0 0 0 25% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 2,0 3,1 1,3 2,0 1,1 2,9 2,5 4,1 2,0 2,5 2,0 1,6 1,5 2,5 1,8 2,3 1,8 2,9 1,0 1,2 2,0 2,8 1,5 2,0 2,2 2,5 2,0 2,2 1,0 1,1 1,2 1,3 0 0 0 0 0 0 0 0

Radicula (cm) 2,0 1,4 2,1 0,6 1,1 1,4 2,3 2,0 1,8 1,0 2,0 0,6 0,8 1,0 1,6 1,6 0 0 0 0

Tabla X: Datos obtenidos de la elongacin de la radcula e hipocotilo, con una dilucin del 50% de la muestra 1. 50% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,5 2,8 50% Hipocotilo (cm) 3,0 50% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,9 2,9

Radicula (cm) 1,5

1,0 1,0 1,0 1,2 1,2 0,5 0,8 1,3 1,2 1,2 1,1 1,5 1,8 0,7 0,6 0,6 0,0 0,0 0,0

2,7 2,0 3,0 3,6 2,5 1,3 2,9 3,0 3,5 1,9 1,9 2,9 2,2 1,7 0,9 2,1 0,0 0,0 0,0

1,2 1,5 2,0 0,9 1,5 1,5 1,5 1,0 0,7 1,7 1,7 2,0 2,0 1,5 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

2,7 3,5 3,3 2,0 3,0 3,5 2,8 2,5 2,6 3,0 2,5 2,0 1,8 3,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

1,0 1,0 1,8 2,4 1,5 1,5 1,5 1,0 1,2 2,0 1,0 1,2 1,6 0,5 1,9 0,0 0,0 0,0 0,0

2,5 2,9 2,9 3,2 1,5 2,0 3,0 3,2 3,7 4,0 2,5 2,3 2,4 0,9 3,7 0,0 0,0 0,0 0,0

Tabla XI: Datos obtenidos de la elongacin de la radcula e hipocotilo, con una dilucin del 100% de la muestra 1. 100% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,0 2,0 1,5 3,5 1,0 2,0 1,5 3,3 1,5 3,0 1,0 1,8 1,1 1,5 1,0 3,5 1,5 2,7 1,1 1,7 1,0 2,0 1,0 1,6 100% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,5 2,8 0,7 2,2 1,5 3,0 1,3 3,5 0,5 1,5 1,5 3,0 0,8 2,5 2,0 3,4 1,5 2,5 0,7 1,4 1,2 2,0 1,5 3,4 100% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,0 2,0 1,0 2,0 1,3 2,8 1,2 3,5 1,0 3,0 1,1 2,9 1,5 2,5 1,0 3,0 1,2 2,5 1,0 2,0 0,7 1,2 0,0 0,0

0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

1,0 1,5 1,5 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

3,0 2,5 3,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Tabla XII: Datos obtenidos de la elongacin de la radcula e hipocotilo, con una dilucin del 25% de la muestra 2. 25% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,5 3,3 1,7 2,0 1,6 2,6 2,0 3,3 1,0 1,4 2,0 2,3 1,1 2,4 0,5 1,0 0,8 1,8 1,8 2,3 2,0 1,7 0,4 0,8 1,5 2,2 2,0 2,7 1,4 2,6 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 25% Hipocotilo (cm) 2,7 2,6 2,7 1,3 1,0 0,6 2,1 2,5 2,8 1,8 2,5 1,6 2,1 1,1 0,9 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 25% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 2,1 2,1 1,6 1,3 2,1 1,2 1,5 2,5 2,2 2,3 2,2 2,4 0,6 0,5 0,8 0,6 0,8 1,8 0,9 2,5 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Radicula (cm) 1,6 1,4 1,5 0,2 0,7 0,6 1,7 1,0 2,0 1,6 1,8 1,1 1,8 1,0 0,7 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Tabla XIII: Datos obtenidos de la elongacin de la radcula e hipocotilo, con una dilucin del 50% de la muestra 2. 50% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,2 2,1 0,8 1,6 1,2 2,4 1,0 2,6 1,5 2,0 1,2 2,4 1,8 2,5 2,0 2,8 1,4 3,0 1,8 2,2 1,0 2,0 2,0 2,6 1,8 2,3 0,5 0,7 0,5 0,5 0,6 1,0 0,6 1,1 0,7 1,3 1,1 1,6 0,0 0,0 50% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 0,9 3,0 1,2 1,4 1,1 2,3 1,5 2,6 1,4 2,3 1,2 2,1 2,0 2,4 1,6 2,8 1,8 2,4 1,3 2,9 1,0 2,7 1,0 1,4 1,3 2,7 1,2 2,8 0,5 0,5 0,9 1,0 0,8 2,2 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 50% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 2,1 2,4 1,3 2,3 1,6 2,7 1,0 1,5 1,3 2,0 1,4 2,5 1,4 2,7 1,0 1,2 1,1 1,6 1,6 2,6 0,8 2,0 1,4 3,0 0,8 2,7 2,5 2,9 1,7 1,8 0,5 1,1 2,0 2,4 0,6 0,5 1,0 2,2 0,0 0,0

Tabla XIV: Datos obtenidos de la elongacin de la radcula e hipocotilo, con una dilucin del 100% de la muestra 2. 100% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,4 2,0 1,0 3,0 1,0 3,8 100% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,3 2,5 1,7 2,3 1,3 2,1 100% Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 1,5 2,0 1,1 2,3 1,5 3,0

0,5 0,8 0,5 0,6 0,6 1,4 1,1 2,0 1,0 1,0 1,0 1,0 0,6 0,0 0,0 0,0 0,0

1,3 2,0 2,0 2,2 2,1 3,3 2,4 3,0 2,2 2,1 2,1 2,2 1,4 0,0 0,0 0,0 0,0

1,7 1,4 1,2 1,5 1,7 1,2 1,3 0,5 0,5 1,3 0,7 1,3 1,1 1,1 0,9 0,0 0,0

3,5 2,7 2,8 4,0 2,9 2,4 1,7 0,7 0,8 1,5 1,0 2,9 2,6 3,0 2,3 0,0 0,0

1,1 1,5 0,9 0,8 0,8 1,3 0,7 1,2 0,9 0,5 0,9 1,4 0,6 0,5 0,7 1,1 0,0

3,1 2,6 2,4 3,6 1,7 2,7 1,5 2,1 2,0 1,2 1,6 2,6 0,8 1,7 1,4 10,0 0,0

Tabla XV: Datos obtenidos de la elongacin de la radcula e hipocotilo de los controles negativos. CN 1 Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 2,40 2,50 2,00 2,80 2,00 2,80 2,40 2,10 2,00 2,50 2,10 2,30 1,70 2,50 2,00 2,20 2,00 2,00 1,70 2,20 1,80 2,00 2,00 1,70 1,20 2,40 1,50 1,60 CN 2 Radicula Hipocotilo (cm) (cm) 2,50 2,40 2,50 2,10 2,00 2,50 2,00 2,40 1,80 2,30 1,50 2,50 1,50 2,50 1,70 2,20 1,50 2,20 1,50 2,10 1,20 2,00 1,00 2,00 1,30 1,50 1,00 0,50

0,90 0,50 0 0 0 0

1,00 1,00 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0

Tabla VXI: Promedio y desviacin estndar de radcula de controles negativos Promedio Radcula 1,70 Desviacin estndar 0,86

Tabla XVII: Promedio y desviacin estndar de hipocotilo de controles negativos Promedio Hipocotilo 2,09 Desviacin estndar 1,03