Adhesión y señalización de células endoteliales

Camilla Cerutti​ y ​Anne J. Ridley ​⁎

Abstracto
Las células endoteliales recubren los vasos sanguíneos y proporcionan una interfaz
dinámica entre la sangre y los tejidos. Se remodelan para permitir que leucocitos,
fluidos y moléculas pequeñas entren en los tejidos durante la inflamación y las
infecciones. Aquí comparamos las redes de señalización que contribuyen a la
permeabilidad endotelial y la migración transendotelial de leucocitos, centrándose
particularmente en señales mediadas por pequeñas GTPasas que regulan la
adhesión celular y el citoesqueleto de actina. La señalización de Rho y Rap GTPasa
es importante para ambos procesos, pero difieren en que las señales se activan
localmente bajo leucocitos, mientras que la permeabilidad endotelial es un evento
más amplio que afecta a toda la célula. Algunas moléculas desempeñan un papel
único en uno de los dos procesos y, por lo tanto, podrían dirigirse a alterar
selectivamente la permeabilidad endotelial o la migración transendotelial de
leucocitos.

Palabras clave: ​células endoteliales, uniones Adherens, uniones estrechas, Rho,

GTPasas, Rap GTPasas, citoesqueleto de Actina, señalización celular

1. Introducción
Las células endoteliales (EC) forman una barrera semipermeable para separar la
corriente sanguínea de los órganos y tejidos subyacentes y controlar el transporte
de fluidos, solutos y células a través de las paredes de los vasos sanguíneos. La
barrera está mediada por adhesiones de células endoteliales incluyendo uniones
estrechas (TJ), uniones adherentes (AJ) y una variedad de otras moléculas de
adhesión que incluyen PECAM-1 y nectinas, que están conectadas al citoesqueleto
de actina a través de diferentes moléculas adaptadoras ( ​Fig. 1 ). La arquitectura y
la composición de las uniones de células y células varía entre los lechos vasculares
dependiendo de los requisitos específicos del órgano ​[1] , ​[2]​. Además de mantener
la adhesión entre EC, las uniones célula-célula controlan la permeabilidad vascular y
la migración de leucocitos mediante un complejo equilibrio entre múltiples moléculas
de señalización ( ​Fig. 1​, ​Fig. 2​ ) ​[3]​ , ​[4]​ .
Figura 1

Las principales proteínas transmembrana en las uniones célula-célula endoteliales. ​Las

células endoteliales se alinean en el torrente sanguíneo y están constantemente expuestas al
estrés por cizalladura del fluido (panel superior). El panel inferior muestra las principales
proteínas transmembrana en las uniones célula-célula endoteliales (derecha). Están asociados
con uniones estrechas o uniones adherentes como se indica, con la excepción de PECAM-1,
que no está asociado con ningún tipo de unión. Se informa que tres genes diferentes de
claudina, JAM y nectina se expresan en células endoteliales (números / letras indicadas bajo
el nombre de la proteína). Las proteínas intracelulares unen las proteínas transmembrana al
citoesqueleto de actina. Hay moléculas de unión adicionales, como CD99 y ESAM, que se
omiten para mayor claridad.

Figura 2

Moléculas de señalización que regulan la permeabilidad vascular. ​Las principales

proteínas de unión que regulan la permeabilidad vascular se muestran en la célula derecha. La
celda izquierda muestra ejemplos de receptores que aumentan la permeabilidad vascular y las
moléculas de señalización intracelular que contribuyen a esta respuesta, centrándose en
aquellos regulados por Rho y Rap GTPasas. ROS, especies de oxígeno reactivo.

TJs regulan la difusión de iones y solutos polares y bloquean la penetración de

grandes macromoléculas a través de EC. Los TJ están formados por moléculas de
adhesión celular homófila occludin, claudinas y moléculas de adhesión de unión
(JAM) ( ​Fig. 1 ) ​[5] , ​[6] . Las claudinas son las principales proteínas que forman
barreras, en particular la claudina-5 es crítica para la permeabilidad endotelial in vivo
e in vitro ​[7]​. La ocludina y las claudinas están relacionadas con zonula ocludens
(ZO) -1, ZO-2, ZO-3, cingulina y otros complejos proteicos, que median la
interacción entre las moléculas de adhesión y los filamentos de actina ​[5]​. La familia
JAM está compuesta por tres proteínas estrechamente relacionadas JAM-A, -B y -C,
y por el receptor coxsackie y adenovirus (CAR). Los JAM median la interacción
célula-célula endotelial y regulan la migración transendotelial de leucocitos (TEM) ​[8]
. Tanto JAM como CAR regulan la permeabilidad al soportar la función y el
ensamblaje de TJ ​[9]​ .
VE-cadherina es el componente transmembrana clave de AJs endoteliales y se
expresa solo en EC ​[10] . La VE-cadherina junto con PECAM-1 inicia y mantiene el
contacto célula-célula endotelial, uniendo los CE para dar soporte mecánico al
endotelio y proporcionar estabilidad a la unión endotelial ​[11] , ​[12] . Los AJ pueden
regular la expresión de los componentes TJ y la organización TJ sigue la formación
AJ ​[11] , ​[13] . Además, AJs y TJs están interconectados ​[14] , por ejemplo, la
diafonía de las proteínas ZO con AJs ​[15]​. VE-cadherina está vinculada
indirectamente a través de su cola citoplásmica a los filamentos de actina por un
complejo de proteínas que incluyen α- y β-cateninas, placoglobina (γ-catenina),
p120-catenina, vinculina y α-actinina ( ​Fig. 1 ) ​[16] , que son vitales para la
estabilidad de las uniones y también para la apertura y el cierre dinámicos de las
uniones ​[17]​ .

Aquí discutimos los roles de las uniones endoteliales de células y células en la

señalización que conducen a cambios en la permeabilidad endotelial y durante la
migración transendotelial de leucocitos (TEM), con un enfoque particular en las
pequeñas GTPasas.

2. Regulación de pequeñas GTPasas

Varios miembros de la superfamilia Ras de pequeñas GTPasas contribuyen a la
adhesión de células endoteliales y, por lo tanto, regulan la permeabilidad endotelial
y / o la TEM de leucocitos. Estos incluyen Rap1, Rap2 y varias familia de Rho
GTPases ( ​Fig. 2 , ​Fig. 3​) La mayoría de las pequeñas GTPasas ciclan entre una
conformación inactiva unida a GDP y una conformación activa unida a GTP. Este
ciclo está regulado por factores de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF),
que catalizan el intercambio de GDP por GTP, activando así las proteínas, y por las
proteínas activadoras de GTPasa (GAP), que estimulan la hidrólisis de GTP e
inactivan las proteínas. La interacción entre las pequeñas GTPasas y sus efectores
aguas abajo a menudo requiere su localización a las membranas, que está mediada
por la modificación postraduccional por los lípidos (prenilación y / o palmitoilación)
[18] , ​[19] . Por ejemplo, se requiere geranilgeranilación de Rho GTPasas para la
permeabilidad inducida por trombina en EC ​[20]​. Algunas pequeñas GTPasas se
inhiben al unirse a las proteínas que las extraen de las membranas, incluidos los
inhibidores de la disociación de nucleótidos de guanina (GDI) y las proteínas 14-3-3
[21] , ​[22] . Las pequeñas GTPasas se activan rápidamente por los receptores de la
superficie celular, y una sola GTPasa puede interactuar con múltiples objetivos
aguas abajo para inducir un rango de respuestas celulares en una forma
espacio-temporal, dependiendo del estímulo y el tipo de célula ​[19]​ .
Fig. 3

Moléculas de señalización que regulan la migración transendotelial de leucocitos. ​La unión de los
leucocitos y la transmigración a través de las células endoteliales es un proceso de múltiples pasos,
que implica una variedad de diferentes moléculas de adhesión en los leucocitos y las células
endoteliales (panel superior). Durante la migración transendotelial, las moléculas de adhesión
endotelial ICAM-1, VCAM-1 y PECAM-1 interactúan con leucocitos y transmiten señales a la célula
endotelial (panel inferior), lo que promueve el proceso de transmigración. La celda izquierda muestra
señales que implican RhoG, Rac1 y Rap1 GTPasas; la celda derecha muestra señales que involucran a
RhoA. LBRC, compartimiento de reciclaje de borde lateral; ROS, especies de oxígeno reactivo.

3. Señalización a las uniones endoteliales en la

permeabilidad vascular
Las uniones endoteliales célula-célula se remodelan dinámicamente en respuesta a
estímulos extracelulares múltiples, que aumentan o disminuyen transitoriamente la
permeabilidad endotelial y regulan de ese modo la entrada de solutos y
macromoléculas polares en los tejidos del torrente sanguíneo ( ​figura 2 ) ​[4] . Por
ejemplo, los estímulos proinflamatorios como la trombina, la histamina y el TNFα
aumentan la permeabilidad, mientras que los mediadores antiinflamatorios como la
esfingosina 1-fosfato (S1P) y la angiopoyetina-1 disminuyen la permeabilidad ​[23] .
El aumento de la fuga de barrera vascular se asocia con la interrupción de las
uniones endoteliales, en particular AJs ​[10] , y se produce en enfermedades como el
cáncer, la aterosclerosis, la diabetes, la hipertensión, la inflamación y la isquemia
[24]​, ​[25] . Además, las malformaciones cavernosas cerebrales (MCP) son
enfermedades hereditarias o esporádicas que se asocian con la desorganización de
las uniones de vasos microvasculares cerebrales venosos y un aumento de la
permeabilidad ​[26]​ .

3.1. Señales que aumentan la permeabilidad endotelial

Los estímulos proinflamatorios aumentan la permeabilidad a través de una
combinación de cambios en AJ, TJ y el citoesqueleto de actina asociado ( ​Fig. 2 ).
La composición e integridad de AJ está regulada por cambios en la fosforilación de
las proteínas de unión. Por ejemplo, la trombina activa la serina / treonina quinasa
proteína quinasa C (PKC) α, que induce el desensamblaje del complejo
VE-cadherina mediante la fosforilación de p120ctn ​[27] . En ECs estimulados por
VEGF, Src media la activación de Rac1, lo que conduce a la fosforilación de
VE-cadherina a través de la serina / treonina quinasa PAK, y por lo tanto aumenta la
permeabilidad endotelial ​[28] . El LPS activa la familia Rab GTPasa Rab5, que ​media
la internalización de VE-cadherina, dando como resultado un aumento de la permeabilidad
[29]​ .

La fosforilación de la tirosina de los componentes AJ también se asocia con una

mayor permeabilidad. En las EC no estimuladas, el receptor y las proteínas tirosina
fosfatasas citoplásmicas (PTP) se localizan en AJs endoteliales y desfosforilan los
componentes de AJ para reducir la permeabilidad ​[17] , ​[30] , ​[31] . Por ejemplo, la
tirosina fosfatasa SHP2 se asocia con β-catenina en VE-cadherin / p120 /
plakoglobin complejos ​[32] . El agotamiento de SHP2 mejora la fosforilación de
componentes complejos AJ conduce a aumento de la permeabilidad en respuesta a
la trombina ​[32] , ​[33] . El TNFα aumenta la fosforilación de tirosina de VE-cadherina
para mejorar la permeabilidad vascular ​[34] , ​[35]​. La fosforilación VE-cadherin
Tyr685 es necesaria para la permeabilidad inducida por VEGF e histamina in vivo
[36] . Además, se informó que la fosforilación de VE-cadherina en Tyr658 y Tyr685
era necesaria para aumentar la permeabilidad y la endocitosis de VE-cadherina en
respuesta a bradiquinina e histamina ​[37]​ .

Los contactos célula-célula endoteliales están relacionados con el citoesqueleto de

actina, que es fundamental para la estabilidad de la unión y contribuye a los
cambios en la permeabilidad vascular ​[38] . Los factores inductores de
permeabilidad desestabilizan las uniones célula-célula al cambiar la orientación del
haz de actina, que pasa de ser paralela a las uniones a ser perpendicular. Los
filamentos de actina perpendiculares, incluidas las fibras de tensión, imponen una
fuerza mecánica sobre las uniones y alteran su integridad ​[39] , ​[40] , ​[41] . RhoA
induce fibras de estrés y aumenta la contractilidad que conduce a una mayor
permeabilidad vascular en respuesta a una variedad de estímulos extracelulares
que incluyen trombina e histamina ( ​Fig. 2​) RhoA activa la serina / treonina quinasa
ROCK, que fosforila la subunidad MYPT1 de la fosfatasa de la cadena ligera de
miosina trimérica (MLC), inhibiendo así su actividad enzimática ​[42] , ​[43] . La
posterior fosforilación incrementada de MLC conduce a un aumento de la
contractilidad de la actomiosina. RhoA se requiere para una mayor permeabilidad en
respuesta a varios estímulos, incluidos la trombina y el TNF α ​[44] . Curiosamente,
RhoB y RhoC también se activan por la trombina ​[45] , y RhoB promueve la
contracción sostenida inducida por la trombina ​[46].​. Por el contrario, la activación
de RhoA por angiopoyetina-1 conduce a la estabilización de la unión célula-célula e
inhibe la permeabilidad inducida por VEGF, y esta respuesta depende de la formina
mdi1 activada por Rho, pero no de la ROCK ​[47] . Esto sugiere que el efecto de
RhoA en las uniones depende de si activa ROCK, promoviendo la contractilidad de
la actomiosina, o sobre mDia1, que estimula la polimerización de la actina ​[48]​ .

El aumento de la permeabilidad a menudo refleja la pérdida de proteínas TJ a partir

de las uniones, lo que está relacionado con la señalización mejorada de RhoA /
ROCK. Por ejemplo, ROCK induce la fosforilación de claudin-5 y occludin ​[49] . El
TNFα aumenta la permeabilidad al inducir una disminución de claudina-5 en las
uniones a través de ROCK1 y ROCK2 ​[50] . LPS induce la pérdida de proteínas TJ y
el aumento de la permeabilidad endotelial a través de la activación de RhoA por
p115RhoGEF ​[51] . En el complejo TJ, ZO-1 está unido a la cingulina que está unida
al citoesqueleto de actina ( ​figura 1 ). La cingulina promueve la función de barrera
endotelial in vitro e in vivo ​, en parte al interactuar e inhibir el RhoA GEF-H1 ​[52] ,
[53]​, mientras que la proteína de tipo cingulina JACOP se asocia con p114RhoGEF
para mantener las TJ y AJ endoteliales, presumiblemente mediante la estimulación
de la actividad de RhoA en las uniones célula-célula ​[15] . Esto indica que el sitio de
activación de RhoA, y cuál de sus objetivos estimula, determina si inhibe o estimula
la interrupción de la unión.

3.2. Señales que reducen la permeabilidad

Los estímulos que reducen la permeabilidad y promueven la función de barrera
endotelial generalmente actúan a través de tres pequeñas GTPasas, Rap1, Rac1 y
Cdc42, y como se describió anteriormente en algunos casos RhoA, que actúan
juntas a través de redes de señalización interconectadas ( ​figura 2 ). Por ejemplo, la
trombina inicialmente aumenta la permeabilidad endotelial a través de RhoA, pero
también aumenta la generación de S1P, que luego estimula la activación de Rac1,
lo que da como resultado una mayor integridad de la barrera para revertir la
permeabilidad inducida por la trombina ​[54]​ .

La integridad de la unión endotelial se ve reforzada por estímulos que elevan los

niveles de cAMP, tales como adrenomedulina, prostaciclina, prostaglandina E2 y
agonistas β-adrenérgicos, que reducen la permeabilidad de la CE ​[55] . cAMP activa
directamente el RapGEF Epac, que activa Rap1 ​[56] . Hay dos proteínas Rap1,
Rap1a y Rap1b. Rap1b es el más expresado en EC, pero la depleción de Rap1a
reduce la función de barrera de EC más que la depleción de Rap1b, lo que podría
explicarse por su colocalización con VE-cadherin en AJs ​[57]​ .

Rap1 actúa a través de múltiples vías para promover la adhesión mediada por
VE-cadherina y mantener la función de barrera ​[56] . En primer lugar, conduce a la
activación de Rac1 y Cdc42, que a su vez fortalecen las uniones célula-célula
endoteliales. Por ejemplo, Epac1 / Rap1 actúan a través de Rac GEFs Tiam1 y
Vav2 para promover la activación de Rac1 ​[55] . Además, los eritrocitos circulantes
o las plaquetas liberan S1P que activa Rac1 aguas abajo de Rap1 a través de Akt,
lo que lleva a la estabilización de la barrera endotelial ​[58] , ​[59] . Rap1 también
promueve el ensamblaje de un complejo mecanosensor de unión de PECAM1,
VE-cadherina y VEGFR2 en respuesta al estrés de cizallamiento, que luego activa
Rac1 a través de Vav2 y Tiam1 para aumentar la función de barrera ​[60] , ​[61]​, ​[62] .
Finalmente, Rap1 activa Cdc42 a través de RhoGEF FGD5 para promover la
estabilización de la unión célula-célula ​[63]​ , ​[64]​ .

Además de activar Rac1 y Cdc42, Rap1 actúa a través de varios mecanismos para
reducir la actividad de RhoA / ROCK, lo que resulta en una mayor función de barrera
endotelial ( ​Fig. 2 ). Actúa a través de su efector Rasip1, que recluta el RhoGAP
ARHGAP29 para inhibir la actividad de RhoA y ROCK ​[65] , ​[66]​. Rasip1 también
disminuye la formación de fibras de estrés y la permeabilidad endotelial por
interacción directa con el corazón del receptor transmembrana de vidrio (HEG1) ​[67]
. Además, Rap1 controla la barrera endotelial mediante el reclutamiento de su
efector CCM1 / KRIT1 a las uniones EC, lo que reduce las fibras de estrés y la
actividad de RhoA en los CE ​[68] , ​[69]​. A diferencia de Rap1, el agotamiento de
Rap2 aumenta la resistencia a la barrera endotelial, aunque no se conoce el
mecanismo por el que la función de barrera de Rap2 altera ​[70]​ .

Rac1 aumenta la estabilidad unión CE y por lo tanto reduce la permeabilidad, tanto

mediante la estimulación de la extensión de lamellipodia para cerrar las brechas
intercelulares y mediante la inducción de montaje de haces de F-actina cortical y la
reducción de la tensión de actomiosina ​[71] , ​[72] . Además, el estrés de
cizallamiento actúa a través de VE-cadherina, Tiam1 y Rac1 para reducir el nivel de
fosforilación de la tirosina en ocludina, lo que lleva a la mejora de la barrera ​[73] ,
aunque la tirosina fosfatasa implicada en esta vía no ha sido identificada, la
angiopoyetina-1 reduce la ocludina. fosforilación de tirosina a través de la proteína
tirosina fosfatasa N-2 y promueve la interacción ocludina con ZO-1 para mejorar TJs
[74] , y por lo tanto, será interesante probar si esta fosfatasa actúa aguas abajo de
Rac1.

Rac1 actúa a través de varios efectores aguas abajo para mediar la estabilización
de unión, incluido IQGAP1, que se une a Rac1 y Cdc42, e interactúa con
activadores de la polimerización de actina (N-WASP, complejo Arp2 / 3) para
promover el ensamblaje AJ ​[75] , ​[76] . Por el contrario, se ha informado que Rac1
aumenta la permeabilidad aguas abajo de VEGF a través de la fosforilación
mediada por PAK de un motivo altamente conservado dentro de la cola intracelular
de VE-cadherina, Ser665, dando como resultado la internalización de cadherina VE
[47] . VEGF activa VEGFR2 que se asocia con VE-cadherina y activa Rac1 a través
de Src y RacGEF Vav2 ​[47] . El VEGF también puede actuar a través del
intercambiador de Rac 1 dependiente de fosfatidilinositol (3,4,5) -trifosfato (P-Rex1)
para activar Rac1 y aumentar la permeabilidad​[77] . Por lo tanto, es probable que el
efecto de Rac1 sobre la permeabilidad dependa del contexto celular.

Además de activarse aguas abajo de Rap1, Rac1 se activa localmente en las

uniones célula-célula, en parte a través de RhoGEFs Trio y Tiam1, que interactúan
con VE-cadherina ​[44] , ​[78] , ​[79] , ​[80] . Por otro lado, los mediadores inflamatorios
tales como LPS, TNFα, angiotensina 2 y trombina reducen la actividad de Rac1 lo
que resulta en la apertura de la unión y el aumento de la permeabilidad ​[81] . RhoB
inhibe la actividad de Rac1 en las uniones al reducir el tráfico de Rac1 a las uniones
célula-célula. La expresión de RhoB es inducida por las citocinas inflamatorias TNFα
e IL-1β, y promueve la contracción sostenida de la CE sobre la exposición a la
trombina en el contexto de la inflamación ​[46]​ .
Como Rac1, Cdc42 es importante para mantener AJs ​[82] , ​[83] , ​[84] . Por ejemplo,
Cdc42 restaura la función de barrera endotelial sobre la estimulación con trombina
[85] . El aumento de la permeabilidad endotelial inducida por la pérdida o
desestabilización de VE-cadherina aumenta la actividad de Cdc42 ​[84]​, ​[86] , lo que
presumiblemente promueve la restauración de las uniones. In vivo, se requiere
Cdc42 para la adhesión célula-célula endotelial durante el desarrollo, y es necesaria
para la polaridad endotelial ​[87]​ .

Cdc42 actúa a través de varios mecanismos para estimular el ensamblaje AJ.

Promueve el transporte de VE-cadherina después de Golgi a AJs ​[88] y controla la
unión de α-catenina con β-catenina y la interacción del complejo VE-cadherina con
el citoesqueleto de actina ​[84] . Además, Cdc42 controla la organización de actina
pensó dos vías: primero a través de sus efectores PAK2 y PAK4 que regulan la
actomiosina de unión, y en segundo lugar a través de N-WASP que se requiere para
el ensamblaje de la actina de unión ​[87] . También se ha informado que Cdc42
actúa a través de la proteína quinasa C PKC1 atípica para mediar en la adhesión de
células endoteliales in vivo ​[89]​ .

En general, la permeabilidad endotelial refleja las acciones combinadas de múltiples

moléculas de señalización, incluidas pequeñas GTPasas, quinasas y fosfatasas,
que modifican directamente las moléculas de unión y actúan sobre el citoesqueleto
de actina asociado para alterar la integridad de las uniones ( ​figura 2​ ).

4. Señalización en las uniones endoteliales y

migración transendotelial leucocitaria
La TEM de leucocitos es esencial tanto en inmunosurvencias como durante el daño
o la infección tisular ​[90] , ​[91] . El TEM es un proceso único en el cual un leucocito
se comprime a través del endotelio e implica una señalización dinámica entre los
leucocitos y las EC que conduce a los cambios en la morfología requerida para TEM
( ​Fig. 3​ ).

Los leucocitos cruzan el endotelio a través de una cascada de pasos múltiples que
involucra la captura, enrollamiento, adhesión y rastreo de leucocitos, seguida de
migración de leucocitos a través del endotelio en presencia de fuerzas de cizalla
ejercidas por el flujo sanguíneo ( ​Fig. 3 ) ​[92] , ​[93] , ​[94] . Los leucocitos pueden
atravesar el endotelio a través de dos rutas diferentes: paracelular, a través de las
uniones célula-célula, o transcelular, a través del cuerpo celular endotelial ​[95] , ​[96]
. La elección de la ruta depende del tipo de célula de ​transmigración, el sitio de TEM y
el tipo de endotelio vascular ​[97] , ​[98]​. Además, la ruta de la diapedesis depende de
la integridad de la unión endotelial: es más probable que las células T tomen una
ruta transcelular cuando las uniones se fortalecen ​[99]​ .
Varias moléculas de adhesión expresadas por EC contribuyen a TEM, incluyendo
ICAM-1 y / o VCAM-1 en la superficie luminal y PECAM-1 y / o JAM en las
membranas basolaterales ​[8] , ​[93] , ​[100] . La expresión y la regulación de estas
moléculas depende de la tensión de cizallamiento del flujo de sangre, las citoquinas
proinflamatorias y quimiocinas, el lecho vascular y la rigidez del tejido ​[101]​ , ​[102]​ .

4.1. Arrastre de leucocitos y extensión endotelial de estructuras de

atraque
Los leucocitos inicialmente se arrastran sobre CE antes de arrestar y transmigrar. La
interacción de la integrina leucocitaria LFA-1 / αLβ2 con ICAM-1 activa RhoA ​[94] .
RhoA promueve la rigidez de la superficie endotelial, mejorando la migración de
leucocitos sobre ella y, por lo tanto, la capacidad de los leucocitos para encontrar un
sitio para TEM. ICAM-1 activa RhoA a través de RhoGEF LARG (Rho GEF asis- tido
por leucemia, ARHGEF12) y el agotamiento de LARG endotelial reduce la
proliferación de leucocitos en los CE ​[103]​ .

Los CE a menudo extienden protuberancias dinámicas similares a microvellosidades

conocidas como estructuras de atraque o copas transmigratorias alrededor de
leucocitos adherentes ( ​Figura 3 ) ​[94] . Estas estructuras contribuyen a TEM,
probablemente al aumentar el área de contacto leucocito-endotelio con una
interrupción mínima de la barrera y para ayudar a los leucocitos a extender las
protuberancias para cruzar el endotelio ​[104] . Inicialmente ICAM-1 y VCAM-1 se
agrupan en estructuras similares a anillos alrededor del leucocito, seguidas por la
protrusión de la membrana apical. El anclaje de ICAM-1 al citoesqueleto de actina a
través de proteínas adaptadoras, tales como filamina y cortactina, es esencial para
la formación de anillos ICAM-1 y leucocitos TEM ​[105]​ , ​[106]​ , ​[107]​ .

Se requiere Rac1 para la agrupación ICAM-1, mientras que RhoG controla la

protrusión de la membrana ( ​Fig. 3 ). RhoG se activa mediante la unión de ICAM-1
al GEF SGEF específico de RhoG ​[108] . ICAM-1 también se asocia y activa el GEF
Trio, que activa Rac1 y luego RhoG a través de sus dos dominios RhoGEF ​[109] .
Curiosamente, la expresión de Trio está fuertemente regulada positivamente por
estimulación de TNFα, lo que sugiere que el ensamblaje de la estructura de
acoplamiento está acoplado a la inducción de ICAM-1 y VCAM-1 ​[109]​ .

4.2. Cruzando el endotelio y cerrando el poro de transmigración

Para TEM paracelular, se producen dos eventos de señalización una vez que el
leucocito está anclado al endotelio: internalización VE-cadherina local a través de
vesículas recubiertas de clatrina y afluencia de proteínas de membrana y membrana
que incluyen PECAM-1 desde un compartimiento de reciclado de borde lateral
(LBRC) al TEM sitio ​[110]​ , ​[111]​ , ​[112]​ , ​[113]​ .

La apertura de la unión implica la señalización de VCAM-1 a VE-cadherina. La

interacción de VCAM-1 con la integrina leucocitaria VLA-4 induce la activación de
Rac1 y la producción subsiguiente de especies de oxígeno reactivo intracelular
(ROS) por NADPH oxidasa ​[114] . Esto a su vez activa la tirosina quinasa rica en
prolina (Pyk2) ​[115] que luego fosforila VE-cadherina en Tyr658 y Tyr731 resultando
en la pérdida local de la función de cadherina VE, apertura de la unión y aumento de
TEM ( ​Fig. 3 ) ​[36] , ​[116] , ​[117] , ​[118] . La inhibición de esta vía, a través de la
PI3-quinasa p110α, Pyk2 y Rac1, reduce TEM ​[114] , ​[118]​, ​[119] ,​[120] . Rac1, ROS
y Pyk2 también inducen la disociación de VE-PTP de VE-cadherina, dando lugar a
un aumento de la fosforilación de tirosina de la cadherina VE y de la internalización
de VE-cadherina facilitando así la transmigración ​[3] , ​[31] , ​[113] , ​[121] . Además, la
señalización endotelial estimula la contractilidad de la actomiosina de la unión y
actúa sobre las proteínas de unión célula-célula, lo que conduce al desensamblaje
de la unión transitoria y local esencial para la TEM de los leucocitos ​[94]​, ​[122]​ .

Múltiples proteínas se asocian con la fracción LBRC durante TEM incluyendo

PECAM-1, que es importante para TEM ​[123] , ​[124] . La interacción homotípica
PECAM-1 inicia el reclutamiento del LBRC en el sitio de interacción leucocitaria.
Esto está relacionado con el reclutamiento localizado del canal de Ca2 + TRPC6,
que aumenta el Ca2 + intracelular y se requiere para la etapa final de TEM, similar a
PECAM-1 ​[125] . El aumento de Ca 2+ intracelular desencadena la contractilidad de
la actomiosina por la cinasa de la cadena ligera de miosina (MLCK), que se requiere
para TEM ​[102]​. PECAM-1 también está involucrado en TEM transcelular, ya que la
agrupación de ICAM-1 en EC no es suficiente para promover la vía transcelular si
PECAM-1 está bloqueado ​[126]​ .

Endotelial RhoA se activa localmente por ICAM-1 durante TEM a través del
reclutamiento de los RhoGEFs LARG y Ect2 ​[45] , ​[97] . La actividad de RhoA es
máxima durante la etapa final de extravasación, y media la remodelación de actina F
endotelial para formar estructuras circulares alrededor de leucocitos
transmigratorios, que previenen la pérdida vascular durante la diapedesis
leucocitaria y promueven el cierre de poro y la transmigración ​[97]​ .

5. Conclusiones y perspectivas futuras

La permeabilidad endotelial y la TEM de leucocitos implican mecanismos de
señalización intracelular similares, que incluyen la señalización Rho y Rap GTPasa,
la unión célula-célula y la remodelación de la F-actina, y por lo tanto, ha sido difícil
separar los dos procesos de forma mecánica. Sin embargo, una diferencia clave
entre ellos es cuándo y dónde ocurren las señales en EC. Para la TEM de
leucocitos, los receptores se activan localmente en EC debajo y alrededor del
leucocito ​[94] , mientras que para la permeabilidad endotelial los receptores
generalmente se activan en toda la membrana plasmática de la EC y / o las uniones
célula-célula ​[4] . Además, TEM no implica un aumento en la permeabilidad
vascular, sino que existen mecanismos para asegurar una fuga mínima ​[36] , ​[97]
,​[127] . Además, los estímulos que conducen a la permeabilidad vascular
generalmente actúan en cuestión de minutos ​[23] , mientras que la TEM de los
leucocitos durante la inflamación requiere una regulación positiva de los receptores
de unión a los leucocitos en los CE ​[91]​ .

Aunque varios mecanismos de señalización son similares entre la permeabilidad

endotelial y TEM, también hay señales que difieren, que podrían manipularse para
inhibir uno u otro proceso. Por ejemplo, se han informado diferencias en la
fosforilación de la tirosina VE-cadherina entre los dos procesos ​[36] , ​[128] . Las
investigaciones futuras deberían identificar cómo estos sitios de fosforilación median
los cambios locales frente a los globales en las uniones de las CE. Además, RhoG
hasta ahora solo está implicado en TEM ​[108]​. Por otro lado, Rap1, RhoA y Rac1
están involucrados en ambos procesos. Sin embargo, es probable que formen parte
de complejos proteicos diferentes porque los receptores transmembrana implicados
en la permeabilidad y TEM son diferentes. Aunque se han identificado varios GEF
para contribuir a la permeabilidad y al TEM, las investigaciones futuras deberían
tener como objetivo identificar qué objetivos aguas abajo y GAP de Rho y Rap
GTPasas son críticos para la permeabilidad vascular frente al TEM de los
leucocitos.

A diferencia de los leucocitos TEM, comparativamente se sabe poco sobre la

contribución de la señalización de la CE al cáncer TEM. Se han implicado múltiples
receptores en las CE para mediar la TEM de las células cancerígenas, pero se sabe
poco de sus funciones mecánicas más allá de simplemente facilitar la adhesión
[129] . Recientemente, Ephrin-1 se identificó como un ligando en EC que estimula la
fosforilación de tirosina de EphA2 en células cancerígenas, induciendo repulsión de
células y conduciendo a una disminución de TEM de células de cáncer de mama
[130] . Será interesante determinar cómo otros receptores contribuyen a la
señalización dinámica entre las células cancerosas y los EC.

En conclusión, los cambios en la permeabilidad vascular y la TEM de los leucocitos

están orquestados por una combinación de pequeñas GTPasas, proteínas quinasas
y fosfatasas, que coordinan los cambios a las uniones célula-célula endotelial con el
citoesqueleto de actina. Dirigirse a estas moléculas de señalización podría usarse
para reducir la inflamación y las enfermedades autoinmunes.