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En grupo elijan una proteína y un plásmido en el expresarán y luego purificarán aquella proteína
Deberá encontrar sitios de restricción adecuados en el plásmido de su elección (disponibles en Edmodo o
cualquier otro plásmido disponible comercialmente) y los sitios de reconocimiento de enzimas de restricción
adecuados en el cDNA que codifica su proteína, de modo que pueda ligar su secuencia de ADN en el plásmido
elegido.
En primer lugar tendrá que encontrar la secuencia de ADN que codifica su proteína de elección (usar la base
de datos NCBI). Utilizará programas informáticos disponibles públicamente para identificar sitios de enzimas
de restricción adecuados y diseñará un plásmido recombinante para la expresión (en bacterias, o levaduras,
o plantas, o células de mamífero) de la proteína elegida producto de la clonación de la secuencia de ADN.
Puede utilizar estrategias de tecnología de ADN recombinante para lograr este objetivo; por ejemplo el uso
de PCR (reacción en cadena de polimerasa) para introducir sitios de clonación adecuados donde no existen.
Se evaluará el mapa del plásmido, con sitios de restricción relevantes, mostrando la secuencia de ADN
clonado y la secuencia promotora relevante. También debe incluir la secuencia completa de nucleótidos de
la secuencia de cDNA que codifica la proteína elegida y describir las enzimas que utilizaron en la construcción
del plásmido recombinante. También debe describir un protocolo de purificación para la proteína expresada
haciendo uso del manual “The recombinant protein handbook” (disponible en Edmodo)..
Consulte la información disponible en Edmodo, referencias externas y la hoja de evaluación para esta
tarea.
Tarea Valor
Figura/diagrama que muestre la secuencia de DNA (nucleótidos) de la proteína de su
elección y el cDNA (nucleótidos) de la proteína de su elección. Figura con descripción /2
Mapa con los sitios de enzimas de restricción en la secuencia de nucleótidos que
codifica la proteína que ha elegido /3
Mapa del plásmido seleccionado de acuerdo al huésped donde se lo pretende utilizar
(usar referencias). El mapa muestra los sitios de restricción específicos para la
clonación y los sitios relevantes para expresión /2
Observaciones:
Procedimiento para clonación