Evaluacin de la Inmunidad Innata

Patologa Clnica
Docente: Dra. Ma. Calixta Martnez V.

Ramos Estrada Jessica del Rocio 5MD

Abril 2010

Introduccin

La inmunidad innata constituye la primera lnea de defensa inmunolgica y se caracteriza por poseer mecanismos efectores, como fagocitos y complemento los cuales se activan de forma rpida y vigorosa frente a un antgeno.

Fagocitosis.

Evaluacin del paso inicial de la destruccin bacteriana. Incubar las clulas directamente con partculas opsonizadas clulas q capturan las partculas. Disposicin de un mtodo para distinguir entre las partculas unidas a la superficie y aquellas unidas pero no internalizadas.

Medios qumicos para retirar las partculas unidas a la superficie Tx acido. Tincin de colorantes que obscurecen las partculas unidas a su superficie.

Ensayos cuantitativos que emplean partculas radiactivas o marcadas con fluorescencia que permiten el conteo directo de la fagocitosis en cultivos grandes de PMNs o macrfagos.

Valoracin de Fagocitosis

Prueba Opsonocitofgica

El ndice Fagoctico determina la capacidad de fagocitar de los leucocitos. Se realiza al poner una muestra de sangre perifrica en contacto con una cepa bacteriana, para evaluar el nmero de bacterias fagocitadas tanto por los neutrfilos como por los macrfagos.

Caractersticas de la muestra. -5 ml de sangre venosa -En tubo con anticoagulante a base de citrato de sodio.

Condiciones del paciente -Estar en ayunas

Valores de referencia
Nmero de Bacterias Fagocitadas 0-1 bact/cel 1-20 bact/cel 20-40 bact/cel 40 ms bact/cel Interpretacin Fagocitosis Negativa Fagocitosis Incipiente Fagocitosis Moderada Fagocitosis Excelente

Nota un valor relativamente bajo puede deberse a: mala manipulacin de la muestra, que la tincin no sea correcta, entre otros

Estallido respiratorio.

La prueba aplicada con mas frecuencia de la funcin de los PMNs es la determinacin de la capacidad de estas clulas para producir superoxido (O2).

Ensayo funcional, cuya intencin es identificar la enfermedad granulomatosa funcional (ECG) Trastorno de los fagocitosis bien caracterizado, cuya causa es la deficiencia hereditaria de una de las muchas subunidades de la oxidasa que actuan sobre la forma reducida del NADPH

Adulto normal No estimulado :25.86 % Estimulado con PMA : 76.98 %

Dos ensayos para determinar la capacidad de los PMNs activados para producir superoxido: 1)Prueba de nitroazul tetrazolio (NBT). 2) Prueba de 2`,7`-diclorofluoresceina (DFC), mediante citometria de flujo.

Prueba NTB
El examen de azul de nitro-tetrazolio es una prueba de sangre que mide la capacidad del sistema inmunolgico para convertir al azul de nitro-tetrazolio (NBT) incoloro a un azul fuerte.

Caractersticas de la muestra -10 ml de sangre perifrica -tubo con anticoagulante (heparina) -procesarse antes de 24 hrs

La incubacin de PMNs activados con NBT tiene como resultado la produccin de O2 y la reduccin de la tintura. Ensayo cualitativo que puede ser cuantitativo mediante la extraccin del precipitado azul de los PMNs y su medicin a travs de espectroscopia.

Nios que padecen una deficiencia completa de la actividad de la enzima NADPH oxidasa muestran defectos muy notables de la prueba de NBT, aunque las mutaciones que tienen como consecuencia nicamente una perdida parcial de la funcin se detectan mejor a travs del ensayo cuantitativo.

1. NBT es negativo o bajo, se hace diagnstico de Sndrome de EGC 2. Si el NBT y la produccin de anin superxido tiene valores intermedios, se proceder a buscar la presencia de las protenas de la NADPH oxidasa de los neutrfilos, en estos casos puede tratarse de una enfermedad autosmica recesiva.

Ensayo DFC

Mtodo mas sencillo y reproducible para deteccin de EGC. Formacin de H2O2, el cual deriva de O2 mediante la participacin de la enzima superoxido dismutasa.

El H2O2 se puede cuantificar por medio de la oxidacin del compuesto no fluorescente 2`.7`diclorodihidrofluoresceina (DCFH), el cual se convierte al compuesto fluorescente CDF, que se detecta fcilmente a travs de citometra de flujo.

Los PMNs se incuban con DCFH, la cual penetra las clulas y despus se activan al incubarlo con PMA; casi inmediatamente las clulas se analizan mediante citometra de flujo para determinar el incremento de la fluorescencia promedio de la poblacin de PMNs.

Degranulacion.

Proceso de fusin de lisosomas y fagosomas con la descarga subsecuente del contenido lisosomico dentro del fagolisosoma.

La Degranulacion de los PMNs se puede inducir en clulas en suspensin mediante su Tx con diversos agentes y compuestos activadores que modifican el citoesqueleto de actina de la clula

Las clulas liberaran principalmente el contenido de los grnulos secundarios (lactoferrina) y terciarios (albmina); estos componentes se pueden medir directamente a travs del ensayo ELISA.

Ensayos

liberacin de grnulos primarios

Espacios cerrados

Sistema de fagocitosis frustrada

Molculas de IgG o complejos inmunes termo-agregados se fijan a una caja para cultivo de tejidos PMNs se incuban. Las clulas se unen a los complejos de IgG e intentan fagocitar las partculas.

Al mismo tiempo, los grnulos primarios se fusionan con los fagosomas, los cuales permanecen en la superficie celular; esto finalmente tiene como resultado la liberacin de los componentes de grnulos primarios al medio.

Bibliografa

Interpretacin Clnica del Laboratorio. Gilberto ngel M. 7ed. Editorial Panamericana. Inmunologia basica y clinica. Tristam G. Parslow.10 ed. Editorial El Manual Moderno.