CLASE 10

INMUNIDAD CELULAR

Lic. TM Alejandro Retamal Salazar

CITOTOXICIDAD MEDIADA POR CELULAS

1. Citotoxicidad directa especfica: es la llevada a cabo por los (TC), que estn restringidos por el haplotipo propio MHC-I, y que poseen CD8+ como molculas correceptoras. Citotoxicidad directa inespecfica: las clulas agresoras naturales (NK) reconocen determinantes inespecficos de clulas tumorales o infectadas con ciertos virus. Citotoxicidad celular dependiente de Acs: es un mecanismo indirecto por el que clulas matadoras como NK, eosinfilos, etc., interaccionan con el Ag, por medio de puentes de Ac previamente unidos a receptores para Fc de la clula.

2.

3.

INMUNIDAD
Mecanismos inmunes

1- inespecficos Innatos
repetitivos

no desarrollan memoria inmunolgica

2- Especficas o adaptativas

Fagocitosis

Patgenos Reconocidos y eliminados por los fagocitos

Los fagocitos poseen diferentes receptores que reconocen componentes microbianos e inducen fagocitosis: -CD14 (receptor de LPS) -CD11b/CD18 (CR3 receptor de C) -Receptor de Manosa -Receptor de Glucano.

Patgenos Reconocidos y eliminados por los fagocitos

La unin de bacterias a estos receptores innatos producen la activacin del fagocito. La activacin resulta en la sntesis y liberacin de citoquinas y la induccin de mediadores lipdicos de la inflamacin

Patgenos Reconocidos y eliminados por los fagocitos

La unin a estos receptores incrementa la fagocitosis y promueve la destruccin de bacterias en los lisosomas.

TIPOS DE RESPUESTA INMUNE Respuesta Innata Inmunidad Natural 1er encuentro con el Ag No exposicin previa No se modifica con posteriores exposiciones

TIPOS DE RESPUESTA INMUNE

Respuesta Adquirida 1er encuentro respuesta dbil Se modifica con subsecuentes exposiciones Especificidad y Memoria Receptor codificado genticamente de manera somtica

Linfocitos T CD4
Linfocitos Th Tipo LTh1 Tipo LTh 2 IL2 TNFb IFNg IL3, 4, 6, 10, 13 Intracelular Antitumoral Extracelular Inflamacin

Intracelular/Antitumoral

Extracelular/Inflamacin

Las molculas de MHC I presentan pptidos provenientes del citosol

Las protenas citoslicas se degradan en fragmentos (pptidos) en el proteosoma, un clomplejo compuestos por varias proteasas. Los pptidos generados estn inaccesibles a la molcula de MHC unida al TAP (protenas trasportadoras de pptidos desde el citosol) El transporte mediado por el TAP acerca el pptido a la molcula de MHC. Cuando el pptido adecuado se presenta, la hendidura se cierra, y la molcula de MHC es exportada

proteosoma

La respuesta a bacterias intracelulares est coordinada por citoquinas liberadas por las clulas TH1 estimuladas por Ags proteicos

Activacin de macrfagos en la respuesta TH1

Los TH1 se denominan tambin LT inflamatorias
cytokines

La activacin de los macrfagos permite eliminar los patgenos intracelulares.

ACTIVACION DE LT CITOTOXICOS
I. Con clula dendrtica madura II. Con clulas presentadoras con menor nivel de coestimulacin

B7

LTh1
activacin
CD infectada

LTCD8+ vrgen

Clula presentadora

IL-2

LT CD8+ efector

IL-2 B7

Las seales de activacin:

1. Complejo TcR-MHC I-pptido 2. CD28 - B7 3. IL-2 rIL-2 (autcrino)

Especficas o adaptativas

1- Linfocitos T (Funcin reguladora)

- Th CD4+ - Tc CD8+

2- Linfocitos B y los Acs 3- Linfocitos NK ADCC

Etapa de induccin de la respuesta CTL-CD8

Interacciones entre la clula blanco y LT CD8+ efectores

Muestreo Reconocimiento especfico

Apoptosis

MHC-I

CD28

Reorganizacin del citoesqueleto y liberacin de mediadores txicos

La exposicin del complejo pptido-MHC de clase I en la superficie celular permite LTC la eliminacin selectiva de la clula infectada

LT CD8 ctx
Liberan: TNF beta Perforinas Inducen apoptosis

CITOTOXICIDAD MEDIADA POR CTL (Especfica) Actan en dos fases: 1.Activacin y diferenciacin de los precursores TC (linfocitos citotoxicos)hasta CTL 2.Fase efectora: destruccin de la clula diana, a su vez diferenciable en: Adhesin y formacin del conjugado entre el CTL y la clula diana Golpe letal Disociacin del CTL Destruccin de la clula diana.

Activacin y diferenciacin de los CTL

Requieren de 3 seales: 1.La seal especfica suministrada por la interaccin entre su complejo TCR-CD3-CD8 con el MHC-I de CPA profesional infectada (v.g.: una clula dendrtica interdigitante) 2.La seal coestimulatoria suministrada por la misma clula (unin entre B7 y CD28). 3.La interleucina IL-2.

Activacin y diferenciacin de los CTL

Tc de memoria tienen menos requerimientos 1. No requieren obligatoriamente la seal coestimulatoria.
2. No requieren obligatoriamente la ayuda de Th, ya que al unirse de modo especfico a una clula propia infectada que le suministre el pptido adecuado, provoca que el LTc produzca no slo receptores de IL-2, sino niveles adecuados de IL-2 capaces de autoactivarlas.

Activacin y diferenciacin de los CTL

la proliferacin y diferenciacin del LT (virgen o de memoria) hasta que se convierte en LT citoltico (CTL). El CTL se caracteriza por: poseer ms citoplasma que el TC, poseer grnulos densos, rodeados de unidad de membrana (llamados a veces granulosomas) y un Ap de Golgi

Fase efectora: Ataque y destruccin de la clula diana

1) 2) 3) 4) Formacin del conjugado Golpe letal Disociacin del CTL Destruccin de la clula diana

Ataque y destruccin de la clula diana

Monmeros de perforina contenida en los granulosomas llegan a la memb de la clula diana, y en presencia de Ca++ se polimerizan para formar cilindros huecos de poliperforina (con unas 20 unidades), que atraviesan la bicapa lipdica. Se forma un canal (con un dimetro de 520 nm) que es permeable a iones, y que puede provocar la lisis osmtica de la clula diana (aunque su papel principal es servir como canal para dejar pasar a otros componentes de los grnulos).

CONTENIDO DE GRANULOS TOXICOS

PERFORINAS

Polmero de perforina ensamblado en la clula blanco.

MAC en una membrana bacteriana

Mecanismo de apoptosis inducida por grnulos citotxicos

Granzima B
pro-caspasa

Activacin de cascada enzimtica

endonucleasa inactiva

activacin

Hay otros mecanismos de induccin de apoptosis: ej. va FAS-FAS-L

Ataque y destruccin de la clula diana

Los canales: permiten la entrada de otras sustancias del granulosoma que inducen la apoptosis de la clula diana.

No siempre el efecto poliperforina es la lisis.

de

la

Pueden entrar fragmentinas (granzimas) que inducen la fragmentacin de los cromosomas en mltiplos de nucleosoma.

Ataque y destruccin de la clula diana

Induccin de Apoptosis, a travs de: Granzima B activa a la ICE (enzima convertidora de Interleuquina)

Ligando Fas del CTL y receptor Fas de la celula diana La consecuencia es: fragmentacin del ADN

Etapa efectora de la respuesta CTL-CD8

Respuesta citotxica
Interaccin inicial: LTCD8 y Cel blanco por molculas no especific Interaccin no especifica de Ag: las cel se separan

Reconocimiento especifico unin estable y liberacin de molec efectoras

Muerte de la celula diana y liberacin de LTCD8+

Respuestas especficas
Los LT CD8 citotxicos son el mecanismo principal Las clulas CD8 CTL Reconocen Ags virales citoslicos asociados a MHC I Requiere la produccin de citoquinas por los LT CD4+

Lisis de las clulas infectadas Produccin de citoquinas con actividad interfern (IFNg)

Tc

Th

Natural Killer
Son linfocitos con actividad citotxica innata, no expresan TCR ni maduran en el Timo. Poseen receptores capaces de detectar ausencia de molculas MHC. Funcionan con receptores que reconocen azcares por ejemplo:NKRP1 y otro inhibidor que sondea la membrana: KIR, si hay MHC no hay lisis, si no hay MHC el KIR no puede salvar a la clula blanco. Usado por virus para evadir la RI.

Interaccin de receptores inhibidores de clula NK con molculas de histocompatibilidad

HLA-I

HLA-I

autlogo

No autlogo

Ausencia HLA-I

Virus

(NK)
Se desarrollan en la MO a partir de
un progenitor comn de clulas linfoides. linfocitos grandes y con grnulos citoplasmticos. con capacidad para matar lneas celulares tumorales in vitro. Sin necesidad de activacin o inmunizacin previa. Los mecanismos lticos son los mismos que

los de los CTL FasL y exocitosis de

perforinas y granzimas. Matan en las fases iniciales de la infeccin: virus, patgenos intracelulares.

Respuesta a citoquinas por clulas NK

Se activan en presencia de INF- y e IL-12 IL15, IL-18 producida por DC IL-12 + TNF- induce la produccin de INF- por las clulas NK Las clulas NK:
Contienen algunas infecciones virales hasta el desarrollo de LT citotxicos especificas de Ag Intervienen en el Control de infecciones intracelulares: Listeria, Toxoplasma, leishmania

Citotoxicidad mediada por NK

NK son linfocitos granulares grandes, "inespecficos", pertenecientes al sistema de inmunidad natural 5% de las clulas linfoides en sangre, carecen de los marcadores de LT y LB. El mecanismo citotxico de las clulas NK es parecido al de los linfocitos citolticos (CTL), pero carecen de especificidad y de memoria, Tienen importante rol en los primeros das de una infeccin viral, al eliminar clulas en las que el virus se est multiplicando. Constituyen un mecanismo efector celular temprano, antes de que lleguen los LTC,

Citotoxicidad mediada por NK

Modelo de 2 receptores para explicar cmo reconocen estas clulas inespecficas a las clulas infectadas por virus o tumorales. Se piensa que las NK reciben seales de dos receptores de modo que distinguen entre clulas sanas y enfermas. Segn este modelo, el receptor NKR-P1 se une a oligosacridos de glucoprotenas de superficie de la clula enferma, procedentes de glucosilaciones anmalas. Esta seal le indica a la NK que debe prepararse para matar a la clula con la que ha contactado, pero para ello debe de ocurrir simultneamente una ausencia de seal procedente de otro receptor, el Ly-49.

Citotoxicidad mediada por NK

El receptor Ly-49 de la clula NK se une a ciertos alelos de molculas MHC-I. Cuando una clula NK se encuentra ante una clula normal, aunque reciba la seal de NKR-P1, no la mata, ya que la interaccin entre Ly-49 y las MHC-I enva una seal a la NK para que detenga su mecanismo de muerte. En cambio, muchas clulas enfermas (por virus o tumorales) presentan un bajo nivel de MHC-I, por lo que el mecanismo dependiente de NKR-P1 no se ve frenado.

Las clulas NK reconocen sus dianas sin restriccin por MCH mediante varios tipos de receptores

Receptor Fc de la IgG (FcRIIIa CD16)

Se unen a clulas cubiertas de IgG Citotoxicidad dependiente de anticuerpos (ADCC)

Receptores activadores (KAR):

Reconoce molculas en la superficie de las clulas nucleadas

Receptores inhibidores (KIR)

Reconocen molculas MHC clase I

Receptores de las clulas NK

Distinguen entre clulas infectadas y no infectadas Reconocen lo propio alterado
2 tipos de receptores
Receptor inhibidor (KIR) Inhiben la reaccin ltica Son especficos para molculas de clase I del MCH Previenen la destruccin de clulas normales Matan selectivamente clulas con niveles bajos o nulos de molculas de clase I del MCH

Receptor activador (KAR) Desencadena el killing de las clulas NK Varios tipos de receptores (lectinas

Virus

Toma de decisiones por clulas NK

Virus

Expresin de clase I y lisis por clulas NK

Todas las clulas nucleadas expresan normalmente molculas de clase I del MCH Pueden no expresar molculas en: Infeccin intracelular Transformacin neoplsica Clulas anormales Prdida de la seal inhibitoria del KIR Muerte de la clula diana

Acciones biolgicas de las clulas NK

Respuesta citotxica
Exocitosis citotoxinas

Molculas de membrana FasL

Inmunomodulacin

Produccin de citoquinas

Mecanismos de accin citotxica

Exocitosis polarizada de grnulos con citotoxinas NK cell

Molculas de membrana FasL

caspasas

NK cell

Lisis celular mediada por perforinas y granzimas

Entrada de granzimas: Serin proteasas inductoras de apoptosis

Citoquinas que regulan la actividad de las clulas NK

IL-2
IL-12 IL-15
Estimula citotoxicidad, proliferacin y produccin de citoquinas
Estimula citotoxicidad, proliferacin y produccin de citoquinas Estimula citotoxicidad, proliferacin y produccin de citoquinas

IFN-g IFN-a/b
IL-10

Estimula citotoxicidad Estimula citotoxicidad

Inhibe produccion de citocinas

IFN-g

Citoquinas secretadas por clulas NK

Induccin respuesta Th1. Activacin de monocitos y macrfagos

TNF
GMCSF

Mediador de la respuesta inflamatoria. Activa monocito y L.T. Accin ltica

Factor estimulante de colonias de granulocitos/macrfagos Inmunosupresin Induce proliferacin y diferenciacin de precursores hematopoyticos Inmunosupresin

TGF-b
IL-3 IL-10

NK T
Son un subtipo de LT con dos posibles fenotipos: CD4+ y CD4- CD8- (DN). Expresan 1. receptores de clulas NK 2. Un TCR semi-invariante, restricto por la molcula de histocompatibilidad CD1d. Se considera que participan en la respuesta inmune innata pues sus TCR son semiinvariantes Su capacidad de secretar inmediatamente grandes cantidades de citoquinas cuando sus TCR son activados les confiere un papel inmunoregulador.

Las clulas NKT proporcionan cooperacin a las clulas B que es restringida por CD1d
Son tan eficientes como los linfocitos CD4+ TH0 para promover in vitro la proliferacin de linfocitos B autlogos, y la produccin de Ig. Los dos mayores subtipos de clulas NKT expresan niveles comparables de CD40L y citoquinas, e inducen niveles similares de proliferacin de clulas B. Las clulas NKT CD4+ inducen altos niveles de produccin de Ig.

Implicaciones clnicobiolgicas de las clulas NK

* Defensa antitumoral
* Defensa antimicrobiana

Implicaciones inmunopatognicas
* Enfermedades autoinmunes: artritis reumatoide, PTA (purpura)
* Fracaso de la tolerancia injerto placentaria * Rechazo de trasplantes * Enfermedad de injerto frente a husped