La palabra Microbiologa se compone, etimolgicamente, de 3 palabras de raz griega:

mikros (= muy pequeo), bios (= vida), logos (= ciencia, estudio) y significa pues literalmente: "ciencia o estudio de la vida pequea. Segn sto, podemos definir la microbiologa como la ciencia que estudia los microorganismos, o sea, los seres vivos que son tan pequeos que no son observables a simple vista, dicho de otra manera, los organismos microscpicos o microorganismos. stos microorganismos incluyen seres vivos pertenecientes a varios grupos: procariotas (bacterias), eucariotas (hongos, microalgas y protozoos) y virus (no celulares). Los microorganismos, "son un grupo grande y diverso de seres vivos que pueden existir como clulas individuales o como agrupaciones simples de clulas. Una clula microbiana sola es, generalmente, capaz de llevar a cabo los procesos vitales de crecimiento, respiracin y reproduccin con independencia de otras clulas del mismo tipo o de tipo diferente"

BREVE HISTORIA
La Microbiologa nace con el microscopio:
El nacimiento de la Microbiologa estuvo vinculado al invento y posterior desarrollo de los microscopios. Un comerciante holands, Antony van Leeuwenhoek (16321723), construy los primeros microscopios, rudimentarios pero con un alto poder de resolucin que le permitieron 1676 el descubrimiento de "animaculos" en el agua y en otros fluidos. Describi y dibuj con precisin lo que hoy conocemos como protozoos, algas, levaduras y bacterias as como los hemates y los espermatozoides. El microscopio de van Leeuvenhoek era un instrumento compuesto de una lente biconvexa fija y un tornillo de desplazamiento para el objetivo. Su procedimiento de medida consista en comparar los elementos que vea con objetos de dimensiones conocidas como un grano de mijo. Se sorprenda al comprobar que sus "animaculos" eran de tamao al menos 1000 veces inferior al de dicho grano.

Microbios en nuestras Vidas:

Los Microbios y el bienestar Humano:
Algunos microorganismos viven en los seres humanos y en los animales y son necesarios para mantener su salud. Algunos microorganismos se usan para producir alimentos y productos qumicos (Biotecnologa). -Usando ADN recombinante, las bacterias pueden producir substancias importantes como protenas, vacunas, y enzimas. Los microorganismos degradan las plantas y animales muertos y reciclan elementos qumicos para ser usados por plantas y animales vivos. Se usan bacterias para descomponer materia orgnica en aguas de alcantarillado. Los procesos de Biorremediacin usan bacterias para limpiar basuras txicas. En terapia gentica, se usan virus para portar sustitutos para genes defectuosos o perdidos en las clulas humanas. En agricultura se usan bacterias genticamente diseadas para proteger las plantas de la escarcha y los insectos y mejorar el perodo de almacenamiento de los de productos.

Los Microbios y las enfermedades Humanas:

Aunque todos tenemos microorganismos dentro y sobre el cuerpo (constituyen la microbiota normal o flora habitual del ser humano), algunos microorganismos producen enfermedades. Las caractersticas de las especies de microbios productores de enfermedades y la resistencia del husped son factores importantes para determinar si una persona contraer una enfermedad. Una enfermedad infecciosa es aquella en la que los patgenos invaden a un husped susceptible. Una enfermedad infecciosa emergente es una enfermedad nueva o cambiante que muestra un aumento de su incidencia en el pasado reciente o la potencialidad de aumentar en el futuro cercano.

Qu es una Infeccin?
Implantacin y desarrollo de seres vivos patgenos en un organismo, accin morbosa de los mismos y reaccin orgnica consecutiva. Cuando un vertebrado se infecta con un microbio patgeno, su organismo desarrolla rpidamente un sistema interno de defensa (respuesta inmune especfica) que se caracteriza fundamentalmente por dos aspectos: -Contribuye a la recuperacin de la enfermedad -Produce una proteccin ante una posterior reinfeccin . El estudio de esta "respuesta inmune" ha dado origen a un nuevo campo de la ciencia: la Inmunologa, que estudia el proceso mediante el cual las sustancias extraas que se introducen en un organismo (Antgenos) provocan la aparicin de clulas especficas y de protenas circulantes (Anticuerpos) con una gran afinidad por dichos antgenos. Estudia asi mismo las propiedades, interacciones y funciones de estas clulas y protenas.

Diagnstico de la enfermedad infecciosa

Es importante documentar la presencia de una infeccin, determinar su naturaleza especfica y administrar lo ms rpidamente posible la terapia adecuada durante el curso de la enfermedad. Tanto la mortalidad como la morbilidad se pueden reducir en forma significativa si se inicia pronto el tratamiento adecuado.
El dignstico de las enfermedades infecciosas se basa en dos aspectos bien diferentes: -El clnico: se basa en el estudio de los sntomas y signos clnicos que la enfermedad produce en el paciente -El del laboratorio: se basa en la demostracin de la presencia del agente productor de la enfermedad o de la huella que ste ha dejado en su contacto con el sistema inmunolgico del individuo.

El laboratorio de Microbiologa, a la hora de prestar ayuda al mdico clnico ante las enfermedades infecciosas, ofrece tres caminos diferentes con objetivos bien diferenciados:

Desde el campo de la Bacteriologa y de la Micologa es posible:

- Aislar e identificar bacterias u hongos patgenos a partir de especmenes clnicos. - Proporcionar baremos de susceptibilidad antimicrobiana que permitan implantar una adecuada antibioterapia. (Desde finales de 1940 se han utilizado diversas variantes de la tcnica de difusin en disco. Se ha establecido una metodologa estandarizada que valora dimetros de zonas en correlacin con la concentracin inhibitoria mnima). (paneles MicroScan -> diluciones seriadas de antibitico en las filas de pocillos. Tcnicas de difusin en placa de gar con discos impregnados de antibitico)

Desde el campo de la Serologa es posible: -Determinacin de la presencia de patgenos en el organismo (deteccin directa de sus antgenos) - Determinacin de la huella que estos patgenos dejan en el sistema inmunolgico del paciente (deteccin y cuantificacin de los anticuerpos que nuestro organismo produce contra dicho patgeno)

Desde el campo de la Virologa es posible:

- Aislar e identificar virus a partir de especmenes clnicos

El antibiograma
Por qu realizar un antibiograma? -El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios antibiticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones teraputicas individuales. -El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolucin de las resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala de un servicio, un centro de atencin mdica, una regin o un pas, es como puede adaptarse la antibioterapia emprica, revisarse regularmente los espectros clnicos de los antibiticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de prevencin en los hospitales.

Sensibilidad bacteriana a los antibiticos

Para un determinado antibitico, una cepa bacteriana es: Sensible, si existe una buena probabilidad de xito teraputico en el caso de un tratamiento a la doss habitual. Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o muy reducida. No es de esperar ningn efecto teraputico sea cual fuere el tipo de tratamiento. Intermedia, cuando el xito teraputico es imprevisible. Se puede conseguir efecto teraputico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la posologa). Ciertas molculas son representativas de un grupo de antibiticos. Los resultados (S, I, R) obtenidos con estas molculas pueden ser ampliados a los antibiticos del grupo, que en ese caso no es necesario ensayar . Este hecho permite ensayar un nmero reducido de antibiticos, sin limitar por ello las posibilidades teraputicas.

TINCIN GRAM
Es una tincin diferencial, clasificando a las bacterias en Gram + y Gram -, de acuerdo a las propiedades de su pared celular: LOS PASOS A SEGUIR:
1 Fijamos la muestra mediante calor. 2 Violeta cristal (Tie todas las bateras, gram + y -) 1. 3 Fijamos con Lugol, 1. 4 Decoloremos con una mezcla alcohol-cetona (los gram - se decoloren). 5 Safranina (colorante de contraste, tie a los gram -), 1.

. En la tincin se observarn de color azulvioleta las gram + y de color rosa las gram
se observan estreptococos gram + y bacilos gram -.

Ejemplos de algunos grupos de bateras que no se tien con esta tcnica, por lo que podemos usar:
Gnero Legionella: uso de tincin de Diertele, Gimenez o Fluorescencia. Gnero Treponema: tincin argntica o de Fontana-Tribondeau Gnero Mycoplasma: tincin de Giensa. Gnero Mycobacterium: tincin Zeil-Nilsen.

PRUEBAS BIOQUIMICAS
1. Fermentacin de la lactosa (Mc Conkey)
Es un medio slido, diferencial y selectivo. Se usa para la discriminacin de bacterias con capacidad de fermentar la lactosa (Lac + y -).Composicin g/l : - Peptona 20.0 : fuente de nitrgeno y carbono para las Lac -. - Lactosa 10.0 : fuente de carbono para las Lac +. - Sales biliares 2.5 : le confiere carcter selectivo, inhibiendo el crecimiento de Gram +. - Cloruro sdico 5.0 : para mantener la tonicidad del medio (evitar osmosis). - Rojo neutro 0.05 : indicador que va hacer que el medio vire de coloracin. Si las bacterias son Lac +, producirn cidos derivados de la fermentacin que darn al medio un aspecto rosceo; si por el contrario son Lac -, el medio se basificar por el uso de la peptona y se tornar amarillo.

2.

Agar Hierro de Kliger (KIA)

Es un medio slido y diferencial. El fundamento se basa en la capacidad de fermentacin de dos azucares (glucosa y lactosa), en la produccin de c. sulfhdrico y en la produccin de gas. Composicion g/l:
Extracto de carne 3.0 Peptona 20.0 Glucosa 1.0 Extracto de levadura 3.0 Lactosa 10.0 Cloruro sdico 5.0 Tiosulfato sdico 0.5 : fuente de azufre, las bacterias lo reducen produciendo c. sulfhdrico (precipitado negro)

Citrato frrico amnico 0.5

Rojo de fenol 0.03 : indicador, si vira a rosceo , indica basicidad del medio, si es amarillo indica acidificacin (derivada de c. de la fermentacin)

Interpretacin del Kliger:

NC o SC: no cambio o sin cambio

LC, Alk o K : alcalinidad

H2S o subndice s: si produce c. sulfhdrico

G: productora de gas

Ejemplo: A/As indica que es fermentador de glucosa, lactosa y productor de sulfhdrico

1 Fermentador glucosa, productor c. sulfhdrico y de gas. 2 3 Fermentador glucosa, lactosa y productor de gas.

3. Prueba del Indol

Pone de manifiesto la presencia de la encima Triptofanasa en nuestras bacterias, si esta presente degradar el triptofano y liberar al medio Indol, para revelar su presencia usaremos el reactivo de Kovac; si hay indol se formar un anillo rojo en la superficie, sino este ser amarillo. Para esto sembramos en caldo con triptofano.
Indol+ Indol-

4. Citrato de Simmons
Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como nica fuente de carbono y compuesto amoniacales como nica fuente de nitrgeno. El medio contiene citrato sdico, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador; este se tornar azul cuando el medio se basifica. Las bacterias que metabolizan el citrato liberan iones amonio al medio (degradacin del fosfato amnico) lo que provoca que este se alcalinice y el indicador vire azul.

5. Agar Hierro Lisina (LIA)

Si la bacteria posee la enzima descarboxilasa (LDC). el medio contiene como indicador Purpura de Bromocresol, cuando la lisina se descarboxila, el medio se acidifica y el indicador vira amarillo en el fondo. Si es productora de c. sulfhdrico, en cuyo caso el precipitado negro nos impedir ver si es LDC + o -. Si es productora de gas.
1. LDC -, NO H2S, PRODUCTORA GAS. 2. LDC + -, PRODUCTROA H2S Y GAS. 3. LDC - , NO H2S, PRODUCTORA DE GAS

6. Agar Urea de Christensen

Pone de manifiesto la actividad de la enzima ureasa, para degradar la urea en dos molculas de amoniaco. El medio lleva como indicador Rojo fenol, que se torna amarillo cuando es negativo y rosa cuando es positivo. Hay que tener precaucin por que tambin puede ocurrir que no se produzca cambio de coloracin, en este caso es negativo. el medio posee un color rosceo (mucho menos intenso que los verdaderos positivos) lo que puede llevarnos a error (considerar falsos positivos).

API 20E
(Sistemas de identificacin multipruebas)
es un sistema de identificacin rpida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram -. Bsicamente consta de 21 tests bioqumicos estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rpido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioqumica distinta. La prueba nmero 21, la oxidasa, se hace de forma independiente a la tira.

Prueba ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX

Reaccin / Enzimas Beta-galactosidasa Arginina deshidrolasa Lisina descarboxilasa Ornitina descarboxilasa Utilizacin del citrato Produccin de H 2 S Ureasa Triptfano desaminasa Produccin de indol Produccin de acetona (Voges-Proskauer) Gelatinasa Fermentacin/oxidacin de glucosa Fermentacin/oxidacin de manitol Fermentacin/oxidacin de inositol Fermentacin/oxidacin de sorbitol Fermentacin/oxidacin de ramnosa Fermentacin/oxidacin de sacarosa Fermentacin/oxidacin de melobiosa Fermentacin/oxidacin de amigdalina Fermentacin/oxidacin de arabinosa Citocromo oxidasa

0104140

Shigella flexneri Salmonella paratyphi A Pasteurella multocida Yersinia enterocolitica Pasteurella multocida Shigella boydii Acinetobacter calcoaceticus Achromobacter sp. Alcaligenes faecalis Alcaligenes sp. Proteus mirabilis Salmonella paratyphi A Proteus vulgaris Proteus mirabilis Pasteurella sp. Klebsiella ozaenae Shigella sonnei

0104452
0104504 0104521 0140004 0144042 0206042 0210004 0210004 0210004 0314000 0504512 0676001 0776000 1000004 1014743 1104112

1214012

Yersinia pseudotuberculosis Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa

1214773
2206004 2504752 3005573

Salmonella spp.
Enterobacter cloacae Aeromonas hydrophilia Salmonella cholerasuis

3246527
4004550 4004550 4104100 4357106 4404112 4404510 4404540 4504010 4604552 4704500 5004024 5044124 5046753 5100100

Salmonella typhi
Salmonella gallinarun Vibrio parahemolyticus Salmonella gallinarum Salmonella cholerasuis Salmonella tiphy Salmonella pullorum Salmonella spp. Salmonella cholerasuis Pseudomonas cepacea Vibrio cholerae Serratia odorifera Yersinia ruckeri

5104111 5104542 5144572 5207323 5255573 5346761 5314173

Hafnia alvei Salmonella arizonae Escherichia coli Serratia rubidae Klebsiella oxytoca Serratia marcescens Enterobacter gergoviae

5317761
5704412 5704552 6004540 6144204 6404112 6504750 6604512 6704342

Serratia marcescens
Salmonella arizonae Salmonella arizonae Salmonella typhi Plesiomonas shigelloides Salmonella spp. Salmonella spp. Salmonella spp. Salmonella spp.

6704532
6704752 7244126 7305773 7704752 7704752

Salmonella spp
Salmonella gallinarum Aeromonas hydrophila Enterobacter cloacae Salmonella arizonae Salmonella spp.

Escala de Mc Farland
La utilidad de la escala es poder realizar suspensiones bacterianas ajustadas a un patrn, generalmente se suele usar el 0,5 Mc Farland, para esto se toma una muestra de nuestra bacteria y la inoculamos en un tubo con solucin salina, en el momento en que se produzca un poco de turbidez ya estamos en el 0,5 (de forma visual). La finalidad, es establecer una relacin entre una precipitacin qumica y una suspensin bacteriana. Creamos 10 estndares (en la tabla aparece la composicin de estos) y por espectrofotometra, creamos una recta patrn, de forma que vamos a poder detectar la concentracin de nuestras diluciones bacterianas (de manera aproximada, ya que depende de factores como el tamao de la bacteria, la formacin de agregados,...). La escala se basa en la capacidad de precipitacin del cloruro de bario en presencia de cido sulfrico.

Antibiograma
Se usa para establecer de una forma relativamente cuantitativa, la actividad de un conjunto de antibiticos. El mtodo se basa en la formacin de halos de inhibicin del crecimiento en una placa inoculada homogneamente por accin de discos antibiticos de concentracin conocida, la difusin de este hacia el medio va a originar la inhibicin del crecimiento. Posteriormente mediremos el dimetro del halo generado, para comprobar la efectividad del antibitico (existen tablas que en funcin de los mm del halo, determinan si la bacteria es resistente o no).

Antibiticos agrupados por familia: su origen y su espectro de accin.

Familia Antibitico Espectro de accin Origen Cocos Cocos Bacilos Bacilos Gram + Gram - Gram Gram + Penicillium notatum y P. + + + chrysogeum (Sntesis) + + + -

- lactaminas Penicilinas G M

Penicilina G Penicilina V Meticilina Oxaciclina Ampicilina Carbencilina Cefalosporina C Cefalotina Cefaloridina Estreptomicina Neomicina Framicetina Paromomicina Kanamicina Gentamicina Tobramicina

(Sntesis)

Cefalosporina

Cephalosporium acremonium

Ligosacaridos

Streptomyces griseus S. fradiae S. lavendulae S. rhimosus S. kanamyceticus Micromonospora monopores S. tenebrarius

Tetraciclina

Tetraciclina Clorotetraciclina Dimetilclorotetra ciclina Oxitetraciclina Cloranfenicol Tianfenicol Eritromicina Oleandomicina Espiramicina Kitamicina Lincomicina Virgimicina

S. texasi S. aureofaciens S. aureofaciens S. rimosus S. venezuelae (Sntesis) S. erythraeus S. antibioticus S. ambofaciens S. kitasaensis S. lincolnensis S. virgineae S. pristinae-spiralis S. mediterranee S. mediterranee Bacillus polymyxa B. licheniformis B. brevis Fusidium coccineum S. spheroides S. orientalis Nocardia lurida

Cloranfenicol Macrolidas

Sinergistina

+ + + + + + +

+ + + + -

+ + + + -

+ + -

Rifamicina Polipptidos bsicos Antibiticos aislados

Rifamicina SV Rifampicina Polimixina Bacitracina Tirotricina Fucidanina Novobiocina Vancomicina Ristocetina

Clasificacin de los principales antibiticos segn su modo de accin.

Modo de accin Inhibicin de sntesis de la pared Antibiticos Penicilina Bacitracina Novobiocina Cicloserina Vancomicina Ristocetina Polipptidicos bsicos: Polimixinas Bacitracina Tirotricina Mitomicina Acido nalidixico Actinomicina Novobiocina

Accin sobre la membrana

Replicacin del DNA

Transcripcin del DNA Traduccin del RNAm (sntesis de protenas) Inhibicin de la sntesis

Macrolidas Sinergistina Lincomicina Tetraciclina Cloranfenicol Aminosidas

anomalas en la lectura del cdigo

Fig.1

Fig.2

Fig.3

Fig.4