You are on page 1of 34

Universidad Autónoma de Nuevo León Facultad de Ciencias Químicas Químico Farmacéutico Biólogo Aplicaciones de Química Orgánica

Métodos de tinción

Alejandra Jiménez Martínez 1553120 Laura Elena Tamez Salazar 1528409 Karina Jazmín Alcántara Solano1509537

Teñidos

Métodos de tinción

Visualización de microorganismos
Sin teñir

Métodos de tinción
Ventajas:
 Observar adecuadamente morfología de microorganismos.
 Proporcionan contraste preciso.  Establecer información complementaria que no podría ser observada por examen fresco.  Conocer características.

Factores que afectan a toda técnica de tinción  Pureza del colorante  Concentración del colorante  pH del colorante  Conservación del colorante  Elaboración  Técnica empleada  Cantidad de muestra  Realizar correctamente el frotis  Tiempos de tinción .

Clasificación de Colorantes Colorantes Origen Comportamiento químico Naturales Artificiales Ácidos Aniónicos .

Naturales  Extraídos de animales y plantas.  Ejemplo: hematoxilina(extraido del tronco de una planta que por oxidación se origina hemateina). azul de índigo(extracto de leguminosa o el carmín de la cochinilla) .

violeta de genciana.Artificiales  Obtenidos del alquitrán de hulla. . son colorantes de anilina y se distinguen colorantes ácidos y básicos. fucsina básica. así como colorantes neutros  Ejemplos: el cristal de violeta. acido pícrico azul de metileno etc.. que pueden presentarse formando sales.

corresponden a colorantes citoplasmáticos. por que los citoplasmas de las células se consideran básicos y captan bien los colorantes ácidos  Ejemplo: eosinas. ..Ácidos o aniónicos  Aquellos donde la carga del radical colorante es negativa. auraminas etc.

Métodos de tinción  Tinciones bacterianas  Tinción simple  Tinción negativa  Tinciones diferenciales  Tinción de Gram  Tinción de Zhiel-Neelsen  Tinción es espiroquetas  Tinciones estructurales  Tinciones específicas  Tinción de flagelos  Tinción de cápsulas  Tinción de esporas .

Tipos de tinciones:  Sin Tinción: no se utiliza ningún colorante. por lo que todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad. se utiliza un solo colorante. .  Simple: Se utiliza para distinguir el tamaño arreglo y forma.

Azul Metileno de Loeffler.Afinidad por carga con componentes de la superficie de la célula (Tinta china. Azul de lactofenol) • Directa: tiñe la bacteria • Negativa: tiñe el fondo pero no a la bacteria .

pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas. Es un modo de aumentar el contraste de las células en microscopia óptica. Lo que se ve. es el perfil de las células. por tanto.  Ejemplo: la tinta china (una suspensión de partículas de carbono coloidal) o la nigrosina (colorante negro insoluble en agua).Tinción negativa  Es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir pero se colorea un cambio el medio que las rodea. .

. Diferencial: Separar y clasificar los microorganismos observados de acuerdo a sus características. cápsulas y esporas. se utiliza más de un tinte  Ejemplos: Tinción Gram y Ácido resistente  Específica: Para identificar estructuras  Ejemplos: Tinción de flagelos.

Tinciones diferenciales  Características:  Permite detectar distintos tipos de células. .  Se necesita fijación previa (generalmente calor).  Nos permite visualizar morfología y otras características. siendo el último de contraste.  Se utilizan dos colorantes.

Tinciones diferenciales Tinción de Gram Tinción de Ziehl-Neelsen Tinción de espiroquetas .

Este distinto comportamiento es debido a la distinta composición de la pared bacteriana.  Primer colorante básico (Cristal violeta o violeta de genciana)  Mordiente (lugol)  Agente decolorante  Colorante de contraste o segundo colorante .Tinción de Gram  Se puede clasificar en dos grupos: Gram + y Gram –.

.

Tinción de Gram .

 Las bacterias que resisten la decoloración son de color rojo y las que no. .Tinción Ziehl-Neelsen  Tinción ácido-alcohol resistente  Colorantes altamente concentrados  Presencia de calor  Las microbacterias son coloreadas de rojo por la Fucsina. se ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como tinción de contraste. por ejemplo: tuberculosis y lepra.  Se utiliza para diagnóstico y estudio de enfermedades producidas por bacterias ácido-resistentes.

. Visualización de Mycobacterium tuberculosis usando la tinción de Ziehl-Neelsen.

gramnegativas y de paredes flexibles. se une muy específicamente a la espiroqueta. al ser altamente básico. Treponema Pallidum .  Las espiroquetas son bacterias finas. helicoidales.Tinción de espiroquetas  Esta basada en la propiedad del nitrato de plata amoniacal que.

 Espiroquetas en digestivo de conejo .

 Las bacterias que retienen el primer tinte se consideran "acidorresistentes“ porque resisten el lavado ácido. Las células retienen el tinte. . se lava el portaobjetos con una solución ácida y aplica un colorante diferente. se tiñe y se calienta.  Este tipo de bacterias está asociado con tuberculosis y otras infecciones.Tinción Ácido-Resistente  Se coloca una pequeña porción de una muestra sobre un portaobjetos de vidrio.

.  Los microorganismos ácido-resistentes se caracterizan por tener una pared celular gruesa de cera (lipoidal) que contiene ácido micólico . Las familias Mycobacteriae y Nocardiaceae son ácido resistente.

2-ácido micólico. 4-peptidoglicano. 5-membrana plasmática. Pared celular micobacterial: 1-lípidos externos. 8-esquema de la pared celular. 3polisacáridos (arabinogalactano). . 6-lipoarabinomanano (LAM). 7-fosfatidilinositol manosido.

Así tenemos: • • Flagelos Esporas • • Capsulas Corpúsculos metacrómicos .Tinciones estructurales  Son aquellas que utilizan más de un colorante sirven diferenciar distintas estructuras bacterianas.

 •Utiliza 2 tintes:  Ácido tánico (agente mordante: engruesa los flagelos)  Rosalina (colorante que los define) .Tinción de flagelos  Tipo de tinción en la que se pueden visualizar el(los) flagelo(s).

 Son solubles en agua. glicoproteínas y polipéptidos. sistema inmunológico)  La cápsula se compone de polisacáridos.Tinción de Cápsulas Cápsula: estructura gelatinosa secretada por algunas bacterias capas de polisacáridos o proteínas que revisten el exterior de un bacteria  Función: adherencia y formación de biopelículas (capas de crecimiento bacteriano) y protección contra fagocitosis (macrófagos. .

Métodos de tinción de cápsulas  Metodo de Burri   Tinción simple Nigrosina al 1% como colorante  Metodo de Antony  Realizar frotis sin fijar  Cubrir con violeta de genciana 2 min  Lavar con CuSO4 En este se observan los microorganismos claros con un halo ligeramente oscuro pero sin teñir con un fondo negro  Secar. rotular y observar a inmersión Las cápsulas presentarán un color azul cielo sobre los microorganismos que presentaran un azul violáceo mas oscuro .

forma metabólicamente inactiva y altamente resistente  En condiciones ambientales hostiles ocurre esporogénesis la cual forma la endospora. ocurre germinación. lo cual forma la célula vegetativa (bacteria). .Formación de esporas como método de sobrevivencia Esporas.  En condiciones ambientales favorables.

Tinción de esporas  Tinte primario. . tiñe las células vegetativas. decolora la célula vegetativa. requiere calor para la penetración de este tinte. remueve el exceso de tinte.Verde Malaquita.  Agente decolorante: Agua.  Contratinte: Safranina.

 Coloque tinte safranina (30 seg).  Observe y dibuje la coloración.  Seque la laminilla en papel “bibulous”. pero no hierva. .  Espere 5 minutos.  Enjuague la laminilla con agua destilada. Si durante los 5 minutos el tinte se seca añada más tinte.Pasos para la tinción de esporas  Cubrir frotis con tinte verde malaquita y permita que el colorante humee. morfología y arreglo de las bacterias bajo el microscopio.

la safranina. estas ultimas se tiñen con el contracolorante rojo. y en azul el material de fondo. fluorescencia azul-blanca bajo luz UV Flagelos Gram Se emplean una variedad de colorantes para teñir los flagelos.Colorantes microbiológicos comunes Colorante Principio Naranja acridina Fluorocromo que se intercala con el acido nucleico. que aparecen de color rosa-rojo. que es eliminado de las células gramnegativas durante la decoloración. Tinción bacteriana diferencial. fluorescencia naranja-amarilla bajo la luz UV Fluorocromo que se une a la celulosa de las paredes celulares fúngicas. Colorante de contraste que tiñe los microorganismos y el material de fondo. Colorante de contraste inespecífico. Rodamina auramina Blanco calcoflúor Fluorocromo inespecífico que se une a los ácidos micólicos de las paredes celulares de los organismos ácido-resisitentes. Tiñe en lavanda los hongos y Pneumocystitis. las bacterias grampositivas retienen el complejo violeta cristal-yodo. fluorescencia naranja la luz UV. Colorante de contraste que tiñe los ácidos micólicos en la pared celular de los microorganismos acidorresistentes. cambiando las características ópticas del colorante. pero no la capsula. Tinta china Kinyoun Yodo lugol Azul toluidina O .

fcen.S. ISBN: 84-8174162-0  Brooks G.uba. 2003.A.F. Editorial Harcourt Brace. Editorial El Manual Moderno S. Microbiología Médica. 2ª edición.C..A. Microbiología Médica.S.htm .N.ar/SeminarioTinciones. España. 1997.microinmuno. Microbiología. Villaverde M. Kobayashi G..R. Butel J. España.Referencias  Murray P. ISBN: 968-426-717-7  Granados R. ISBN: 84-9732-123-5  http://www. Ornston E. de C. Rosenthal K... Editorial Thomson.V.qb. 1996.. México... Pfaller M.S..