Boala parodontal

- cea mai frecvent condiie inflamatorie cu caracter distructiv din patologia uman; - este o boal inflamatorie cu caracter distructiv ce afecteaz esuturilor de susinere a dinilor (ligamente dento-alveolare, os alveolar) cu formare de pungi parodontale i recesiune gingival; - este determinat de un grup de microorganisme specifice din placa bacterian subgingival.

Boala parodontal este considerat la momentul actual o boal ecologic. Este rezultatul interaciunii ntre anumite microorganisme din biofilmul dentar subgingival i gazd (esuturile parodontale, sistemul de aprare specific i nespecific al organismului).

Microbiologia bolii parodontale

Infecie produs de specii bacteriene care
interacioneaz cu esuturile gazdei, acionnd fie: i celulele
direct, fie ducnd la eliberarea de citokine si ali mediatori ai inflamaiei,

Consecina: distugerea structurilor parodontale.

Clinic
Leziunile din boala parodontal pot fi difereniate n gingivite i parodontite. Diferena ntre aceste forme de boal este legat de prezena:
- recesiunilor gingivale, - a pungilor parodontale i a - pierderii de os alveolar.

Patogenii parodontali
Biofilmul dentar al omului, conform studiilor recente, conine aproximativ 1000 specii bacteriene distincte. Condiiile care trebuie ndeplinite de un microorganism pentru a fi considerat patogen parodontal au fost adaptate de Sigmund Socransky, dup postulatele clasice ale lui Koch.

1. S fie asociat cu boala, numrul microorganis2.

3.
4. 5.

melor fiind crescut n situs-urile bolnave, comparativ cu situs-urile sntoase. Sa fie eliminat sau s scad numeric din situsurile cu evoluie clinic favorabil sub tratament. S induc un rspuns de aprare al gazdei (un rspuns imun celular sau umoral). S reproduc boala la un animal de experien. S prezinte factori de virulen responsabili de distrucia tesuturilor parodontale.

Microbiologia bolii parodontale

Numrul total al bacteriilor din placa
subgingival este de 2 ori mai mare n starea de boal dect n cea de sntate, rspunsul imun fiind crescut n prima situaie. i morfotipurile bacteriene difer n cele 2 situaii. n starea de sntate (predomina gram poyitivii) sunt mai puine spirochete i bacili gram negativi dect n starea de boal.

Patogen

Sntate +++ +++ + +/+/-

PA + + + ++ +/+++

PC + + + + +/+++

BPN + + + ? +/+++

Streptococcus Actinomyces Veillonella Aggregatibacter actinomycetemcomitans

Capnocytophaga Treponeme orale

Porphyromonas gingivalis
Prevotella intermedia

+/-

+
+

++
++

+/++

Tannerella forsythia
Fusobacterium nucleatum

++
+

++
++

?
++

Conform postulatelor lui Socransky speciile bacteriene urmtoare ndeplinesc condiiile pentru a fi considerate patogeni parodontali:

Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, Prevotella intermedia/nigrescens, Tannerella forsythia

Aggregatibacter actinomycetemcomitans
1. Asocierea: prezent n numr crescut n leziunile 2.
din parodontitele agresive localizate (PAL) i n unele leziuni periodontale cronice. Eliminarea: eliminat din leziunile cu evoluie bun dup terapie; detectat n leziunile recurente. Rspunsul gazdei: nivelul local al anticorpilor specifici anti - A. actinomycetemcomitans crescut in PAL (parodontita agresiv localizat).

3.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans
4. Experimente pe animale: capabil sa induc boala la obolanii gnatobiotici. 5. Factori de virulen: A. actinomycetemcomitans produce:
leucotoxine (probabil cel mai studiat factor de virulen), citotoxine, ce induc apoptoza n celulele imune umane, lipopolizaharidul, proteine de legare, vezicule membranare i

au rol important n adeziune i n invazia celulelor epiteliale.

fimbriile

Porphyromonas gingivalis
1. Asociarea: crescut numeric n leziunile perio2.
dontale. Eliminarea: eliminat cu success prin terapie, detectat n leziunile recurente. Rspunsul gazdei: nivelul local i sistemic al anticorpilor anti -P.gingivalis crescut n boala parodontal. Experimente pe animale: deosebit important n reproducerea leziunilor n experimentele pe maimue cynomolgus (infecii mixte, boala parodontal).

3.
4.

Porphyromonas gingivalis

5. Factori de virulen: P. gingivalis produce - diferite proteaze (gingipaine, cistein-proteaze, proteaze arginin i lizin specifice) ce afecteaz integritatea tisular i au rol in eludarea aprrii imune a gazdei; - aderarea la receptorii celulari este urmat de colonizare, care poate fi mediat de hemaglutinine lipopolizaharid i fimbrii; - recent au fost descrise pentru P. gingivalis 6 serotipuri capsulare (capsula inhib fagocitoza, fiind
considerat un important factor de patogenitate, tulpinile capsulate fiind mai virulente dect cele necapsulate).

NOI ABORDRI PRIVIND PATOGENIA BOLII PARODONTALE

Bacterii cheie si patobioni Bacterii GN azaharolitice (P. gingivalis) au fost demult asociate BP Intervenia PG pare mai mult ndreptat spre manipularea rspunsului gazdei i mai puin spre inducerea unui rspuns inflamator: induce afectarea rspunsului imun nespecific Pentru c are rol de dirijor i nu de muzician n orchestr, ar fi bacterie cheie, care acioneaz i n afara afectrii homeostaziei gazdei. Bacteriile cheie pot contribui ns la afectarea homeostaziei Patobionii: comensali care afecteaz homeostazia, rspunsul inflamator i inducerea bolii; nu sunt neaparat n numr mic, dar pot aciona n anumite condiii (imunsupresii, deficite codificate genetic, etc) inducnd inflamaia.

Unii patogeni parodontali (T. denticola, T. forsythia, A. actinomycemtocitans) sunt puternic asociai cu rspunsul inflamator distructiv i n plus afecteaz rspunsul imun al gazdei, ntr-o manier care crete ansele de supravieuire ale altor bacterii spectator. Unele bacterii pot juca ambele roluri: -T. denticola este n cantitate redus n biofilum dentar sungingival sntos, dar crete important n pungile parodontale (deci se comport ca un patobiont); -Totui s-a demosntrat c ar putea s influeneze capacitatea de rspuns a gazdei, contribuind la dezechilibrul homeostaziei, ceea ce l ncadreaz n bacteriile cu rol cheie. - Noi bacterii implicate n BP: (Gram pozitiv) Filifactor alocis,

Peptostreptococcus Desulfobulbus

-Dar i bacterii din genurile: Prevotella, Megashaera, Selenomonas,

Most studies of the bacterial etiology of periodontitis have used either culture-based or targeted DNA approaches, and so it is likely that pathogens remain undiscovered. The purpose of this study was to use culture-independent, quantitative analysis of biofilms associated with chronic periodontitis and periodontal health to identify pathogens and beneficial species. Samples from subjects with periodontitis and controls were analyzed using ribosomal 16S cloning and sequencing. Several genera, many of them uncultivated, were associated with periodontitis, the most numerous of which were gram positive, including Peptostreptococcus and Filifactor. The genera Megasphaera and Desulfobulbus were elevated in periodontitis, and the levels of several species or phylotypes of Campylobacter, Selenomonas, Deferribacteres, Dialister, Catonella, Tannerella, Streptococcus, Atopobium, Eubacterium, and Treponema were elevated in disease. Streptococcus and Veillonella spp. were found in high numbers in all samples and accounted for a significantly greater fraction of the microbial community in healthy subjects than in those with periodontitis. The microbial profile of periodontal health also included the less-abundant genera Campylobacter, Abiotrophia, Gemella, Capnocytophaga, and Neisseria. These newly identified candidates outnumbered Porphyromonas gingivalis and other species previously implicated as periodontopathogens, and it is not clear if newly identified and more numerous species may play a more important role in pathogenesis. Finally, more differences were found in the bacterial profile between subjects with periodontitis and healthy subjects than between deep and shallow sites within the same subject. This suggests that chronic periodontitis is the result of a global perturbation of the oral bacterial ecology rather than a disease-site specific microbial shift. Sursa: J. Clin. Microbiol. August 2005 vol. 43 no. 8 3944-3955

Surse recente: Periodontal DiseasesAdvances in Research and Treatment: 2012 (aprox 270 Ron)
http://books.google.ro/books?id=YZdfH6i7QuIC&pg=PA12&lpg=PA12&dq=Desulfobulbus+perio dontal+disease&source=bl&ots=O5jAv4IsUr&sig=MKtzjV8zKRvMsrcw_Q6l0c2dFSQ&hl=ro&sa=X &ei=GBcoU8_WDKSoywPJ8oFo&ved=0CCkQ6AEwAg#v=onepage&q=Desulfobulbus%20periodo ntal%20disease&f=false

Wednesday, June 20, 2012: 4 p.m. - 5:30 p.m. Presentation Type: Oral Session F. TELES 1, M. PATEL2, R. TELES1, B.J. PASTER1, and S. SOCRANSKY1, 1Forsyth Institute, Cambridge, MA, 2The Forsyth Institute, Cambridge, MA Objective: Prevalence data generated using the Human Oral Microbial Identification Microarray have implicated certain uncultivated/unrecognized bacterial taxa in the etiology of periodontitis. The goal of the present study was to examine levels of these uncultivated/unrecognized taxa in periodontal health and disease subjects. Method: 17 oligonucleotide probes targeting 30 uncultivated/unrecognized taxa were employed. Probes for 4 cultivated taxa and a Eubaere also used. Subgingival biofilm samples from 8 periodontitis (n=56) and 4 periodontally healthy (n=28) subjects were individually examined using the RNA-oligonucleotide quantification technique. Signals were converted to picomolars (pM) of RNA based on standard curves. Significance of differences between groups was tested using the Mann-Whitney test. Oral taxon (OT) designations were used in accord with the Human Oral Microbiome Database. Result: The levels of P.gingivalis, F.nucleatum and the uncultivated/unrecognized taxa Synergistetes (OT 363;453;452), TM7 (OT 346;349), Desulfobulbus (OT 041), Bacteroidetes sp (OT 274) were significantly higher (p<0.01) at sites from periodontitis subjects compared to sites from healthy subjects. When pockets 4mm were compared to shallower sites, significantly higher levels of Streptococcus sp (OT 070;071), Bacteroidetes sp (OT 274) Selenomonas sp (OT 134;442), Synergistetes (OT 360), P.gingivalis, and F.nucleatum were observed (p<0.001). Synergistetes (OT 360), TM7 (OT 346;349), Capnocytophaga sp (OT 335), Desulfobulbus (OT 041) and Selenomonas sp (OT 134;442) were the most frequently detected uncultivated/unrecognized taxa in sites from periodontitis subjects (42%, 36%, 34%, 28% and 26% of sites, respectively). While all taxa probed for were detected in periodontitis subjects, 17 uncultivated/unrecognized taxa and 2 cultivable species were never found in sites from healthy subjects, including P.gingivalis. Conclusion: The uncultivated/unrecognized taxa Streptococcus sp (OT 070;071), Bacteroidetes sp (OT 274) Selenomonas sp (OT 134;442), Synergistetes (OT 360), Synergistetes (OT 363;453;452), TM7 (OT 346;349), Desulfobulbus (OT 041), Capnocytophaga sp (OT 335) might be associated with periodontal diseases. This abstract is based on research that was funded entirely or partially by an outside source: NIH;NIDCR R03-DE021742-01; U01-DE021127-01 Keywords: Bacterial, Biofilm, Microbiology and Periodontal disease Sursa: https://iadr.confex.com/iadr/2012rio/webprogram/Paper166153.html

Clasificarea bolii parodontale

1999 ADA (American Dental Association)
1.Gingivita asociat cu biofilmul bacterian neasociat cu biofilmul bacterian 2.Parodontita cronic (PC) localizat generalizat - >30% din dini afectai

sunt

Clasificarea bolii parodontale

3. Parodontita agresiv (PA) localizat generalizat >30% din dini sunt afectai;

Severitatea se apreciaz pe baza adncimii pungii (PD =

(CAL = clinical attachment level):

periodontal pocket depth) i a pierderii de ataament gingival

uoar 1 ~2 mm; medie 3 ~ 4 mm; sever 5 mm;

4. Parodontita din bolile sistemice 5. Boala parodontal necrozant (BPN) gingivita ulceronecrotic parodontita ulceronecrotic

Clasificarea bolii parodontale

6.Abcese ale esutului periodontal abces gingival abces parodontal abces pericoronal
7.Parodontita asociat cu leziuni endodontice

Clasificarea bolii parodontale

Modificri aduse de aceast clasificare: parodontita adultului a fost nlocuit cu
parodontita cronic; eliminarea termenilor de parodontit recurent i parodontit refractar; nlocuirea termenului de parodontit cu debut precoce cu parodontita agresiv; nlocuirea termenului de parodontit ulcero necrozant cu boala parodontal ulcero necrozant

Biofilmul dentar asociat cu boala parodontal

inceputul secolului trecut - consecina

acumulrii plcii subgingival i a diminurii rspunsului imun, precum i a creterii susceptibilitii odat cu vrsta;

Etiologia bolii parodontale

Teoria nespecific - boala parodontal
este rezultatul elaborrii de produi toxici de ctre ntreaga flora a plcii. Teoria specific - anumite tipuri de plac sunt patogene, iar patogenitatea depinde de prezena sau de numrul mare al unor microorganisme specifice.

Teoria ecologic
boala parodontal este rezultatul modificrilor habitatului (nutrieni, pH, potenial redox). selecia bacteriilor patogene este influenat direct de schimbrile de mediu; boala nu are o etiologie specific; orice specie cu anumite caracteristici poate contribui la evoluia bolii.

Teoria ecologic
Astfel semnificaia clinic a speciilor nou
descoperite poate fi stabilit pe baza caracterelor fiziologice ale fiecreia; boala poate fi prevenit nu numai prin atacul intit asupra patogenilor parodontali, ci i prin interferarea cu presiunea selectiv a factorilor de mediu responsabili de nmulirea lor.

Grupurile de bacterii din biofilmul dentar subgingival

Grup Grupul violet Grupul galben Grupul verde Grupul portocaliu Specii bacteriene

Veillonella parvula Actinomyces odontolyticus Streptococcus spp. Eikenella corrodens Capnocytophaga spp. Prevotella intermedia/ nigrescens Micromonas micros Campylobacter rectus Fusobacterium nucleatum Porphyromonas gingivalis Tannerella forsythia, Treponema denticola

Grupul rou

Microbiologia bolii parodontale

Numrul total al bacteriilor din placa
subgingival este de 2 ori mai mare n starea de boal dect n cea de sntate, rspunsul imun fiind crescut n prima situaie. Morfotipurile bacteriene difer n cele 2 situaii: n starea de sntate sunt mai puine spirochete i bacili gram negativi, dect n starea de boal.

Patogen

Sntate +++ +++ + +/+/-

PA + + + ++ +/+++

PC + + + + +/+++

BPN + + + ? +/+++

Streptococcus Actinomyces Veillonella Aggregatibacter actinomycetemcomitans

Capnocytophaga Treponeme orale

Porphyromonas gingivalis
Prevotella intermedia

+/-

+
+

++
++

+/++

Tannerella forsythia
Fusobacterium nucleatum

++
+

++
++

?
++

Concluzie:
- biofilmul dentar subgingival al strii de sntate poate gzdui n cantiti foarte mici patogeni parodontali, ei fiind incapabili s concureze cu bacteriile Gram pozitive zaharolitce dominante.

 La

acumularea biofilmului, rspunsul inflamator care apare duce la creterea fluxului lichidului crevicular gingival cu alterarea status-ului nutriional local; acesta duce la nmulirea bacteriilor proteolitice Gram negative, creterea pHului i scderea potenialului redox. Proteazele interfer cu controlul gazdei asupra rspunsului inflamator, agravat i prin creterea continu a masei bacteriilor Gram negative.

 Biofilm subgingival stare de sntate

domin bacterii Gram pozitive zaharolitice; Biofilm subgingival inflamaie domin bacteriile Gram negative proteolitice.

 Trecerea de la gingivit la parodontit

depinde de 3 factori: susceptibilitatea gazdei; prezena bacteriilor patogene; prezena bacteriilor protectoare.

Motivele care fac ca etiologia bolii parodontale s nu fie pe deplin elucidat:

diversitatea speciilor bacteriene din placa
subgingivala asociat bolii parodontale, variaiile n compoziia florei de la un individ la altul, diferenele n rspunsul gazdei la aciunea diferitelor specii bacteriene , etc

Asocierea bacteriilor suspectate cu boala parodontal

Foarte puternic
Aggregatibacter actinomycetemcomitans Porphyromonas gingivalis

Puternic
Fusobacterium nucleatum Prevotella intermedia

Moderat
Streptococcus constellatus Parvimonas micra

Tannerella forsythia

Campylobacter rectus Eikenella corrodens

www.topleyonline.com

Actinomyces viscosus Actinomyces odontolyticus

Treponema denticola

Microbiologia bolii parodontale

Microbiota parodontal sistem ecologic
complex, cu multe interaciuni structurale i fiziologice ntre bacteriile rezidente i ntre bacterii i gazd; nivelele crescute ale unor bacterii consecina bolii; lipsa leziunii numr mic de bacterii, susceptibilitate sczut a gazdei, diferene de virulen intraspeciii;

Microbiologia bolii parodontale

Bacteriile protectoare: ocup spaiul vital ce ar putea fi populat
de bacteriile patogene; inhib aderena bacteriilor la parodoniu; inactiveaz anumii patogeni.

Rolul virusurilor n boala parodontal

Citomegalovirusul (CMV) i virusul EpsteinBarr (VEB); Efect citopatic pe fibroblati, celule epiteliale, celule inflamatorii; Supresia mecanismelor de aprare a parodoniului care permite multiplicarea patogenilor parodontali; Alterarea micromediului care devine propice pentru nmulirea patogenilor parodontali;

Mecanisme patogenice n boala parodontal

Adeziunea, coagregarea, invazia; Producerea de exotoxine; Constituienii celulari; Producerea de enzime; Eludarea rspunsului imun;

Invazia

Speciile bacteriene ader (aderena fiind un

factor de virulen) la dinte, esuturi, sau placa preexistent. Bacteriile pot ptrunde n esuturile gazdei prin ulceraii ale epiteliului gingival, microorganisme fiind observate n spaiul intercelular al esutului gingival. O alt modalitate de invazie tisular o reprezint penetrarea direct.

Producerea de exotoxine

Aggregatibacter actinomytemcomitans

produce o leucotoxin cu efect inhibitor asupra polimorfonulearelor neutrofile. Alte toxine produse de aceast bacterie sunt: toxina care induce resorbia osoas, epiteliotoxine.

Constituienii celulari

endotoxinele

bacteriilor Gram negative produc leucopenie, activeaz factorul XII i sistemul complement pe cale altern, conduc la apariia fenomenului Shwartzman, au efect citotoxic, induc resorbia osoas; metabolii cu rol n distrugerea tisular - acizi grai, acidul butiric, acidul propionic, amine, compui volatili cu sulf, indol, amoniac, glicani.

Peptidoglicanul activeaz complementul

stimuleaz sistemul monocito-macrofagic stimuleaz resorbia osoas stimuleaz macrofagele s produc prostaglandine i colagenaze.
Fimbriile (Fim A), hemaglutininele i proteinazele, au un rol important n colonizarea i invazia esutului parodontal i n aderarea la suprafaa rdcinii dentare de la baza pungii parodontale. Capsula joac un rol n distrugerea tisular precum i n eludarea rspunsului imun.

Producerea de enzime

colagenaze (Porphyromonas gingivalis, Aggrega hialuronidaze, gelatinaze, aminopeptidaze,

tibacter actinomycetemcomitans);

fosfolipaze, fosfataza acid i alcalin (A. actinomycetemcomitans); proteaze (A. actinomycetemcomitans, Porphy-

hexokinaze, proteinaze (Prevotella).

romonas gingivalis);

Eludarea rspunsului imun

Aderena, invazia bacterian, localizarea intracelular au
rol n eludarea rspunsului imun al gazdei. Aceti factori influeneaz att rspunsul celular, ct i pe cel umoral.

PMN sunt influenate de leucotoxine i substane

chemotactice. Imunoglobulinele sunt inactivate i distruse de proteaze. Mediatorii inflamaiei i citokinele eliberate la nivel tisular accentueaz inflamaia parodoniului. Autoanticorpii autoreactivi pot contribui detaarea epiteliului gingival i deci, la progresia leziunilor parodontale.

PATOGENI PARODONTALI
Puternic asociai boli parodontale:

Aggregatibacter actinomycetemcomitans Porphyromonas gingivalis Tannerella forsythia Treponema denticola

- Aggregatibacter actinomycetemcomitans - BGN, imobil, capnofil, zaharolitic. - Caractere de cultur: colonii mici, convexe,
n form de stea pe agar-snge. - Factori de patogenitate:
- ataare la nivelul epiteliului oral, prin intermediul adezinei; - ulterior migreaz spre placa supragingival i se ataeaz prin fimbrii, care mediaz ataarea, mpreun cu un polimer extracelular; - ataarea la esuturi dure sau prin co-agregare, la alte bacterii; - poate urma migrarea spre placa subgingival, cu invazia esuturilor periodontale, mpreun cu alte bacterii.

Produce: colagenaze, proteaze, hialuronidaze, gelatinaze, aminopeptidaze, fosfolipaze, fosfataza acid i alcalin, proteaze.

Porphyromonas gingivalis
BGN, anaerob, imobil, azaharolitic Caractere de cultur: calonii maro-negre, pe

agar-snge. Habitat: n cantiti reduse n starea de sntate dar i n gingivite Crete numeric n BP (cantitativ mai important, direct proporional cu adncimea pungii) n situs-uri parodontale deteriorate, sau n forme progresive.

Porphyromonas gingivalis
ataarea la celule epiteliale orale i celule

endoteliale; invazie urmat de ataare, prin fimbrii; produce: colagenaze si proteaze.

Tannerella forsythia

BGN, anaerob, formeaz coloni hemolitice pe AS. Habitat: mai ales n placa subgingival, mpreun

cu Fusobacterium nucleatum. Crete numeric n profunzimea pungii parodontale, cu izolarea de la nivelul peretelui (ceea ce
demonstreaz vecintate). capacitatea invaziv a esuturilor

de

Produce: colagenaze si proteaze.

Treponema denticola

- Dimensiuni: 5-20 m&0.1-0.5 m. - Vizualizare la microscopul cu cmp ntunecat:

bacterie spiralat, helicoidal, cu micri de rsucire (ce permit mobilitatea i invazia i prin prezena flagelilor filamente axiale dispuse longitudinal, ntre peretele celular i membrana extern).

- Bacterii anaerobe, rezidente ale microbiotei indigene (subgingival anaerobioz). - Cresc numeric cel mai mult n BP (comparativ cu alte bacterii saprofite, implicate n BP).

Treponema denticola
Ataare la structuri ale matricei extracelulare
metabolizabile i proteine).

(ME): fibronectin, fibrinogen, laminin, heparin-7 (pentru a achiziiona surse de peptide

Structuri de legare: proteina major de

suprafa (PMS o adezin care formeaz pori la nivelul membranelor celulare) i dentisilina (proteaz seric) care mediaz i legarea la P.

gingivalis.

Dentisilina lipoprotein, care acioneaz mpreun cu

alte proteine accesorii, formnd complexul chimotripsinlike proteazic.

Treponema denticola
Consecine: distruge proteinele matricei extra
celulare (ME), dar i alte proteine, n cursul procesului inflamator. Hidrolizeaz angiotensina I, activeaz metaloproteazele ME, care moduleaz rspunsul chemokinelor i citokinelor, degradnd colagenul de la nivelul ME. Produce hialuronidaz i condroitinaz - cu rol n degradarea ME). Concluzie: proteina major de suprafa i dentisilina importante n ataare i invazie.

Detecia patogenilor parodontali

Metode clasice:
- Microscopie (fond luminos, fond negru/ntunecat, contrast de faz), - Detecie de antigene bacteriene (IFI, ELISA), sau a unor enzime BANA; - Cultivarea - implic nsmnarea prelevatelor din leziune, izolarea i identificarea patogenilor parodontali.

Metode moderne:
- Metodele de biologie moleculara implic detecia i analiza materialului genetic: hibridizare, PCR, RFLP, secveniere.

Metode de diagnostic microbiologic n boala parodontal

Microscopia optic:
cu fond luminos cu fond negru cu contrast de faz

Cultivarea Tehnici PCR Teste imunoenzimatice ELISA, BANA Imunofluorescena Gaz lichid cromatografie Alte teste

Diagnostic microbiologic
1. Recoltare: Proba biofilm bacterian subgingival; Etape:
izolarea dintelui; ndeprtarea mecanic a plcii supragingivale; uscare; recoltarea probei cu ajutorul conurilor de hrtie de filtru;

2.Transport:
maxim 30 minute

mediu de transport : bulion thioglicolat cu resazurin

Examenul microscopic
Frotiuri colorate Gram
rapid, ieftin i util pentru pacient; rol n stabilirea prognosticului; justific continuarea investigaiei microbiologice;

Microscopia cu fond negru/ntunecat i contrast de faz utile pentru

evidenierea spirochetelor

Incubarea probelor - 37C n anaerobioz, 5-7 zile.

Alte sisteme de identificare

Detectare de enzime preformate (constitutive)
cu substrate cromogene sau fluorogene Rapid ANA, Rapid ID 32 A, BBL Crystal, API ZYM CDC Presumpto plates I, II, III agar Lombard Dowell Microbe Lynx System spectroscopie de mas

GLC gaz /lichid cromatografie

Evideniaz produi finali ai metabolismului bacterian:
acizi grai cu lan scurt acizi grai cu lan lung

Tehnici de biologie molecular (vezi i PIM)

Real time PCR Micro-IDent

ELISA - Enzyme Linked

Immunosorbent Assay

- identificarea reaciilor AgAc, prin marcaj enzimatic

ELISA

BANA
Test colorimetric Testul pozitiv indic prezena:
Treponema denticola, Porphyromonas gingivalis i Bacteroides forsythus n prob. Detectarea unei activiti enzimatice: aceste bacterii produc hidroliza unui peptid sintetic, benzoil DL- arginin- naftilamnei (BANA) .

JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, July 1990, p. 1551-1559 WALTER J. LOESCHE, et all

Treponema denticola, Porphyromonas (Bacteroides)

anaerobic species frequently associated with adult forms
gingivalis, and Bacteroides forsythus are among the

of periodontal disease. These organisms hydrolyze the synthetic peptide benzoyl-DL-arginine-naphthylamide (BANA), and such enzyme activity can be detected in the plaque and related to clinical disease and the presence of spirochetes.

..In this investigation, the liquid BANA assay was

compared with a commercially developed BANA assay which employed a paper format and which could be read after a 15-min incubation.

Imunofluorescena

Alte tehnici
FISH (Fluoresecence in situ hybridi Electroforez n gel de poliacrilamid
duodecil sulfat

zation) hibridizare fluorescent in situ

Concluzii
Cultivarea i PCR cele mai folosite Nici o metod nu poate fi considerat per
se de referin Combinarea de teste cea mai buna metod

Antibiograma
Antibiograma ATB ANA (BioMerieux) nu mai este
acceptat
EX: ATB ANA susceptibility test. The ATB ANA strips (bioMrieux, Marcy

lEtoile, France) permit determination of the susceptibility of anaerobic bacteria to antibiotics in a semisolid medium under conditions similar to those used for the agar dilution method. A suspension of no. 3 McFarland standard was prepared by homogenizing without shaking C. difficile colonies in 0.85% saline buffer, and 200 l was transferred into an ampoule of ATB-S medium; 135 l was then distributed into each cupule of the strip containing dehydrated antimicrobial agents. The strips were incubated for 24 h at 37C in an anaerobic atmosphere. The turbidimetries of the cupules were observed by visual reading, and interpretation was performed according to the manufacturers recommendations. The breakpoints to be used for interpretation of the results were as follows: 1 to 4 g/ml for erythromycin, 2 g/ml for clindamycin, 8 g/ml for tetracycline, 4 to 16 g/ml for rifampin, and 16 g/ml for chloramphenicol.

Sistemul Vitek si E-Test

 Abstract: Abstract. The aim of the present investigation was to determine the

susceptibility of Prevotella intermedia, Porphyromonas gingivalis, Fusobacterium and Peptostreptococcus micros to metronidazole in vitro. Two methods were applied on each isolated strain: agar dilution and epsilometer Etest. A total of fifty three wild test strains (13 P.intermedia, 14 P.gingivalis, 14 F.spp and 12 P.micros) were isolated from patients with periodontitis. The Etest appears to be a simple, rapid and reliable method for the metronidazole susceptibility testing. The results show that all P.intermedia, P.gingivalis and F.spp strains were susceptible to metronidazole. The mean values of minimal inhibitory concentration obtained with the agar dilution method were, respectively, 0.98 g/ml, 0.122 g/ml and 0.242 g/ml. For P. micros, the minimal inhibitory concentration was of 12.14 g/ml. Comparatively to break points, only 60% of P.micros strains seem to be susceptible, in vitro, to metronidazole. This study demonstrated the excellent activity of metronidazole against P.intermedia, P.gingivalis, F.spp except perhaps for P.micros. Keywords: metronidazole; minimal inhibitory concentration; anaerobic bacteria; periodontal disease; human study

Terapia cu antibiotice
Antibiotice beneficiu versus folosire n
exces, cu afectarea ecologiei orale. Scop: controlul biofilmului, nu eliminarea lui. Sensibilitatea la antibiotice a patogenilor parodontali variaz considerabil, terapia empiric este, deci, dificil.

 Sensibilitatea bacteriilor componente ale

biofilmului difer de cea a bacteriilor n stare planctonic din cauza:

penetrabilitii sczute a antibioticelor n structura biofilmului; bacteriile din biofilm pot avea intele de atac ale antibioticelor modificate, sau chiar acestea pot lipsi; straturile profunde ale biofilmului pot constitui un mediu nefavorabil aciunii antibioticelor.

Categoriile de pacieni ce pot beneficia de antibioterapia sistemic:

pacienii cu parodontite agresive; pacienii cu parodontite cronice severe; pacienii cu parodontit cu manifestri sistemice; parodontite cu pierderi progresive de ataament dup tratament corect; abces parodontal cu extinderea n lojile nvecinate i adenopatie sever; boala parodontal necrozant cu starea general influenat.

Cum alegem un antibiotic?

n funcie de identitatea patogenilor
parodontali. n funcie de sensibilitatea in vitro a patogenilor parodontali.

Terapia sistemic cu antibiotice

Metronidazol: 3x500mg, 7-10 zile Amoxicilin: 3x500mg, 7-10 zile Amoxicilin + acid clavulanic: 3x500mg, 710 zile Clindamicin: 4x300mg, 7-10 zile; Metronidazol+amoxicilin+acid clavulanic.

Terapia cu antibiotice
Penicilina, amoxicilina:
bactericide; 50% dintre bacilii gram negativi anaerobi produc lactamaze. asocierea cu acid clavulanic.

Terapia cu antibiotice
Clindamicina:
aciune foarte bun pe anaerobi; toate tulpinile de Eikenella corrodens i rezistente;

Aggregatibacter actinomycetemcomitans sunt

Terapia cu antibiotice
Tetraciclina:
spectru larg; bacteriostatic; multe tulpini de anaerobi au dobndit rezisten;

Terapia cu antibiotice
Metronidazol:
antibioticul de elecie n infeciile produse de anaerobi; nu acioneaz pe facultativi anaerobi (E. corrodens, A. actinomycetemcomitans).

Tratament local
Produse
cu eliberare controlat de tetraciclin, metronidazol (geluri, polimeri, fibre). Antiseptice: hipocloritul de sodiu, clorhexidina, compui cationici biguanidici, hyaluronan, triclosan (n geluri, sprayuri, ape de gur, paste de dini, gume de mestecat)

Tratamentul local cu antibiotice

apare rapid rezistena; are mai puine reacii adverse dect terapia sistemic; compliana este bun; mai scump dect terapia sistemic;

 Tratamentul cu antibiotice nu nlocuiete

tratamentul mecanic stomatologic. Combinarea tratamentului mecanic cu antibioterapia sistemic sau local d rezultate statistic mai bune dect fiecare din ele luate separat.

Concluzie Tratamentul i prevenia Controlul plcii dentare - Respectarea igienei orale - Folosirea apelor de gur cu clorhexidin - Detrartraj regulat ndeprtarea factorilor locali - Carii dentare - Infecii endodontice - Infecii ale maxilarelor Tratament - Chirurgical - Antibiotic - amoxicilin, metronidazol, tetraciclin - n cazul implicrii anaerobilor amoxicilina i/ sau metronidazol - parodontita juvenil mai sunt indicate tetraciclinele - local sub form de geluri (tetraciclina) sau folii resorbabile (metronidazol) Gingivita ulcero-necrotic acut penicilin+metronidazol Gingivitele simple antiseptice orale