CINETICA ENZIMATICA

k1 S k1 k -1 k2 P

E+S

ES

E+P

k -1

Las reacciones enzimticas se ajustan a dos tipos de cinticas, que son:

Hiprbolas rectangulares: Enzimas que siguen la Michaelis-Menten Sigmoidales: Enzimas alostricas que fenmenos de cooperatividad

cintica

de

muestran

Propusieron una ecuacin de velocidad que explica el comportamiento cintico de las enzimas

CINTICA ENZIMTICA

E + S ES E + P [E]<<[S] Velocidad inicial (Vo)

ECUACION DE MICHAELIS-MENTEN
VMAX = Velocidad mxima de la reaccin.

Km = constante de michaelis

Vmax
Valor Terico Mximo
Vmax es una constante Vmax es la rapidez terica mxima de la reaccin pero NUNCA es obtenida realmente Para obtener Vmax se requiere que todas las molculas de enzima se encuentren unidas con el sustrato.

Km (cte. de Michaelis)

Concentracin de sustrato a la cual la velocidad de la reaccin es de Vmax. sustrato.

Medida inversa de la afinidad de la enzima por el

Tiene unidades de concentracin. Km es una constante derivada de las constantes de

velocidad

1.-

ECUACION DE MICHAELIS-MENTEN

Km>>[S]

Km<<[S]

Mtodo Grfico
Doble recproco o Ec. de Lineweaver-Burk

* (-1)

Dado el siguiente grfico, calcular Km y Vmax de la enzima X.

1/V
4

-4

-2

1/[S]

1.A partir de los siguientes resultados determine: Cul es el valor de Km: Cul es el valor de Vmax:
Vo (M/s) 5,0 7,5 10,0 10,7 12,5 13,6

[s] (mM) 0,2 0,4 0,8 1,0 2,0 4,0

CONSTANTE CATALITICA
kcat: permite describir la velocidad lmite para cualquier reaccin catalizada por una enzima a saturacin.

K cat = Vmax / [ET]

K cat = Vmax / [ET]

NUMERO DE RECAMBIO

Nmero de molculas de sustrato convertidas en producto en una unidad de tiempo, por una molcula de enzima cuando la enzima est saturada de sustrato.

PARMETROS ENZIMTICOS

INHIBICION ENZIMATICA

 Una inhibicin competitiva se puede superar aumentando la concentracin de sustrato.

Mecanismos de regulacin enzimtica

Mecanismos de regulacin de enzimas

Regulacin por modificacin covalente
Quinasa

+ ATP
Fosfatasa
Inactiva

P + ADP

Activa

Mecanismos de regulacin de enzimas

Regulacin por retroalimentacin

Mecanismos de regulacin de enzimas

Rompimiento Proteoltico

Zimgeno

Enzima activa

Mecanismos de regulacin de enzimas

Regulacin alostrica:

UNION REVERSIBLE Y NO COVALENTE DE UN MODULADOR ALOSTERICO. PUEDE SER UN METABOLITO O UN COFACTOR.

1.- Uno de los parmetros cinticos importantes es el valor de Km. Mientras mayor sea el valor de Km, menor es la afinidad de la enzima por el sustrato. Es correcta esta aseveracin? Explique brevemente y fundamente su respuesta. 2.- Se mide la velocidad de una reaccin catalizada por una enzima en funcin de la concentracin del sustrato. Esta reaccin se realiza en presencia y ausencia de un inhibidor especfico (I). Los datos obtenidos se indican en la siguiente tabla: Velocidad (mol/min) Sin inhibidor Con inhibidor 10.4 4.1 14.5 6.4 22.5 11.3 33.8 22.6 40.5 33.8

[S] (M) 0.3 x 10-5 0.5 x 10-5 1.0 x 10-5 3.0 x 10-5 9.0 x 10-5

a) Cules son los valores de Vmax y KM en ausencia y presencia del inhibidor? b) Qu tipo de inhibidor es I?

3.- Defina y explique qu es el nmero de recambio de una enzima 4.- Explique el mecanismo de accin general de una enzima (su funcionamiento), respecto a la reaccin qumica que cataliza, en trminos de la Energa Libre de la reaccin. 5.- Defina sitio activo y sitio de unin al sustrato de una enzima. 6.- Defina los siguientes conceptos: a) Holoenzima b) Apoenzima c) Cofactor d) Coenzima e) Enzima alostrica

7.- La penicilina se inactiva por la enzima penicilinasa, que tambin se conoce como B-lactamasa). Se determin la cantidad de penicilina hidrolizada por minuto, en una solucin que contiene 10-9 g de penicilinasa, y los valores se expresaron en funcin a la concentracin de penicilina: Determine por regresin lineal los valores de Km y Vmax de la enzima: Con los valores obtenidos por regresin lineal para Km y Vmax y la ecuacin de Michaelis Mentel, determine la velocidad de la reaccin si la concentracin de sustrato es 0,18 M.

[S] (M)
1,25 1,67 2,5 5,0 10,0

Velocidad (mol/min)
1,72 2,04 2,63 3,33 4,17

8.- Si la cintica del ejercicio anterior se determina en presencia de un inhibidor diferente se tienen los siguientes datos: Cul es el valor de Km y Vmax en ausencia de inhibidor: Cul es el valor de Km y Vmax en presencia de inhibidor: Que tipo de inhibidor es I: Cual es la velocidad de la reaccin en presencia y ausencia de inhibidor se la [S]= 0,13mM: Explique el efecto que tienen el inhibidor sobre la velocidad de la reaccin:

[S] (mM) 3 5 10 30 90

Velocidad (mmol/ml/min) Sin inhibidor Con inhibidor 10,4 2,1 14,5 2,9 22,5 4,5 33,8 6,8 40,5 8,1