METODOLOGIA

4.1. TIPO DE INVESTIGACION

4.1.1. Experimental 4.1.2. Longitudinal

4.2. AREA DE ESTUDIO

Comunidades: Combuyo y La Llave del municipio de Vinto de la Provincia Quillacollo.
Vinto

4.3. REALIZACIN DE ENCUESTAS 4.4. RECOLECCION DEL MATERIAL VEGETAL

4.5. PREPARACIN DE EXTRACTOS

ENSAYO SMART EN ALAS DE Drosophila melanogaster

1. Recepcin de las moscas 8. Anlisis estadstico
Kastenbaum - Bouwan

2. Sexado

7. Anlisis de alas

6. Seleccin y montaje de alas

SMART

3. Cruzamiento

5. Determinacin de la toxicidad de extractos

4. Tratamiento de larvas de tercer instar de D. melanogaster con extractos

Clasificacin de manchas
Manchas simples
Manchas simples pequeas (MSP)

Manchas simples grandes (MSG)

Mancha gemela (MG)

RESULTADOS Y DISCUSIN

5.1. RECOPILACION DE INFORMACION SOBRE LOS CULTIVOS DE BROCOLI EN LA COMUNIDAD DE COMBUYO

1. INSECTICIDAS UTILIZADOS
6% 9% 40%
Lorsban Plus

3%

21%

Caporal Karate Todorn

21%

Impacto

Folidol

2. DOSIS DE USO DE LOS INSECTICIDAS

18%
12 -16 ml/20 Lt
16 - 20 ml/20 Lt 20 - 25 ml/20 Lt

15%

67%

3. FRECUENCIA DE FUMIGACIN

36%

4 fumigaciones

24%

40%

5 fumigaciones 6 fumigaciones

4. LTIMA FUMIGACIN ANTES DE LA COSECHA

3%

9%

6%

9%

30 DIAS 21 DIAS

30%

14 DIAS

40%

10 DIAS
7 DIAS

5 DIAS

3%

4 DIAS

5.2. RECOPILACION DE INFORMACION SOBRE LOS CULTIVOS DE CEBOLLA EN LA COMUNIDAD DE LLAVE GRANDE
1. INSECTICIDAS UTILIZADOS

6%
12%

3%

21%

Lorsban Plus

9%

Caporal
Karate Thodoron Impacto

49%

Ridomil

2. DOSIS DE USO DE LOS INSECTICIDAS

12% 9%
8 -12 ml/20 Lt 12 -16 ml/20 Lt 16 - 20 ml/20 Lt

49%
30%

20 - 25 ml/20 Lt

3. FRECUENCIA DE FUMIGACIN

36% 18%
3 fumigaciones 4 fumigaciones 5 fumigaciones

46%

4. LTIMA FUMIGACIN ANTES DE LA COSECHA

9%

6%

30 DIAS

18%
21 DIAS 15 DIAS

37%

27%

14 DIAS
10 DIAS 7 DIAS

3%

 El insecticida ms utilizado en la fumigacin de los cultivos de brcoli es el Lorsban Plus y para la cebolla el Caporal. La dosis de uso de los insecticidas son de 16 20 ml para 20 litros de agua. Fumigan 4 veces desde la siembra hasta la cosecha del brcoli y cebolla. La ltima fumigacin que se realiza en los cultivos de brcoli y cebolla es de 14 das antes de la cosecha.

Fichas tcnicas de los insecticidas Lorsban Plus y Caporal: dosis y frecuencia de uso
Cultivo Insecticida Grupo Composicin qumica Dosis insecticida para 20 litros de agua (ml) 30-40 Ultima fumigacin antes de la cosecha (das) 21

Brcoli

Lorsban Plus Piretroide

Clorpirifos

Cebolla

Caporal

Organofos Metamidofos forado cipermetrina

30-50

21

5.2. EVALUACIN DE LA TOXICIDAD

EXTRACTO DE BROCOLI EXTRACTO DE CEBOLLA

Concentraciones evaluadas (%)

12,5 25 50

% DE SOBREVIVENCIA
Cruce ST 86 81 96 Cruce HB 90 94 81

Concentraciones evaluadas (%)

12,5 25 50

% DE SOBREVIVENCIA
Cruce ST 90 92 87 Cruce HB 93 96 84

100
C.N.

91
83

84
95

100
C.N.

88
83

84
95

CONTROLES
Controles Concentraciones evaluadas 100 % 50 % Caporal (+) 25 % 12,5 % 6,25 % 0,23 % 100 % 50 % 25 % 12,5 % Lorsban Plus (+) 6,25 % 0,23 % 0,115 % % DE SOBREVIVENCIA Cruce ST 0 0 0 0 0 3 0 0 0 0 0 0 33 Cruce HB 0 0 0 0 0 89 0 0 0 0 0 0 76

Porcentaje de sobrevivencia de larvas de tercer instar sometidas a los insecticidas Caporal y Lorsban Plus
95,3 %

100

90
80 70 60 50 40 30 20 10 0

83,3 %

88,6 % 76,6 %

HB

33,3 %

ST

3,3 % K(-) K(+) caporal K(+) Lorsban

5.3. EVALUACION DEL POTENCIAL GENOTOXICO

EXTRACTO DE BROCOLI CRUCE ESTANDAR
Genotipo Concentracin ( mM ) N. de moscas Manchas por mosca ( N de manchas ) diagnstico estadsticoa MSP MSG MG TM Total manchas

(N)

(1-2 cls)b
m=2

(>2 cls)b
m=5 m=5 m=2

mwhc
(n)

mwh/flr3

C.N. 12,5 25 50 100

20 20 19 20 20

0,30 0,85 0,95 1,00 2,10

(06) (17) + (18) + (20) + (42) +

0,00 0,00 0,00 0,05 0,05

(00) (00) i (00) i (01) i (01) i

0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

(00) (00) i (00) i (00) i (00) i

0,30 (06) 0,85 (17) 0,95 (18) 1,00 (20) 2,15 (43) + + + +

6 17 18 21 43

aDiagnstico

estadstico de acuerdo con Frei e Wrgler (1988): +, positivo; -, negativo; i, inconclusivo. m, factor de

multiplicacin a fin de evaluar los resultados significativamente negativos. Niveles de significancia a = b = 0,05.
bIncluso

las manchas simples flr3raras. los clones mwh para las manchas simples mwh y para las manchas gemelas.

cConsiderando

CRUCE ALTA BIOACTIVACION

Genotipo Concentracin
( mM )

N. de
moscas (N)

Manchas por mosca ( N de manchas ) diagnstico estadsticoa

MSP (1-2 cls)b m=2 MSG (>2 cls)b m=5 m=5 m=2 MG TM

Total
manchas mwhc (n)

mwh/flr3

C.N. 12,5 25 50 100

20 20 20 20 20

0,50 0,55 0,70 1,00 1,30

(10) (11) i (14) i (20) + (26) +

0,05 0,00 0,00 0,00 0,10

(01) (00) i (00) i (00) i (02) i

0,00 0,05 0,00 0,00 0,00

(00) (01) i (00) i (00) i (00) i

0,55 (11) 0,60 (12) 0,70 (14) 1,00 (20) 1,40 (28) i i i +

11 12 13 19 25

C.P. Caporal 0,23 Lorsban Plus 0,115 16 1,31 (21) + 0,00 (00) i 0,00 (00) i 1,31 (21) + 21 20 2,60 (52) + 0,05 (01) i 0,05 (01) i 2,70 (54) + 52

aDiagnstico

estadstico de acuerdo con Frei e Wrgler (1988): +, positivo; -, negativo; i, inconclusivo. m, factor de

multiplicacin a fin de evaluar los resultados significativamente negativos. Niveles de significancia a = b = 0,05.
bIncluso

las manchas simples flr3raras. los clones mwh para las manchas simples mwh y para las manchas gemelas.

cConsiderando

EXTRACTO DE CEBOLLA CRUCE ESTANDAR

Genotipo Concentracin ( mM ) N. de moscas (N) Manchas por mosca ( N de manchas ) diagnstico estadsticoa MSP (1-2 cls)b m=2 MSG (>2 cls)b m=5 m=5 m=2 MG TM Total manchas mwhc (n)

mwh/flr3

C.N 12,5 25 50 100

20 20 19 20 18

0,30 0,85 1,11 1,00 3,17

(06) (17) + (21) + (20) + (57) +

0,00 0,00 0,11 0,00 0,06

(00) (00) i (02) i (00) i (01) i

0,00 0,00 0,00 0,05 0,00

(00) (00) i (00) i (01) i (00) i

0,30 (06) 0,85 (17) 1,21 (23) 1,05 (21) 3,22 (58) + + + +

6 17 23 21 58

aDiagnstico

estadstico de acuerdo con Frei e Wrgler (1988): +, positivo; -, negativo; i, inconclusivo. m, factor de

multiplicacin a fin de evaluar los resultados significativamente negativos. Niveles de significancia a = b = 0,05.
bIncluso

las manchas simples flr3raras. los clonesmwh para las manchas simples mwh y para las manchas gemelas.

cConsiderando

CRUCE ALTA BIOACTIVACION

Manchas por mosca ( N de manchas ) diagnstico
Genotipo Concentracin ( mM ) N. de moscas (N) MSP (1-2 cls)b m=2 estadsticoa MSG (>2 cls)b m=5 m=5 m=2 MG TM Total manchas mwhc (n)

mwh/flr3

C.N. 12,5 25 50 100

20 20 20 20 20

0,50 (10) 0,85 (17) i 0,80 (16) i 1,60 (32) + 3,35 (67) +

0,05 (01) 0,00 (00) i 0,00 (00) i 0,00 (00) i 0,10 (02) i

0,00 (00) 0,00 (00) i 0,05 (01) i 0,00 (00) i 0,00 (00) i

0,55 (11) 0,85 (17) i 0,85 (17) i 1,60 (32) + 3,45 (69) +

11 17 15 32 69

C.P. Caporal 0,23 Lorsban Plus 0,115 16 1,31 (21) + 0,00 (00) i 0,00 (00) i 1,31 (21) + 21 20 2,60 (52) + 0,05 (01) i 0,05 (01) i 2,70 (54) + 52

aDiagnstico

estadstico de acuerdo con Frei e Wrgler (1988): +, positivo; -, negativo; i, inconclusivo. m, factor de

multiplicacin a fin de evaluar los resultados significativamente negativos. Niveles de significancia a = b = 0,05.
bIncluso

las manchas simples flr3raras.

COMPARACIN DE LA FRECUENCIA TOTAL DE MANCHAS EN EL CRUCE ESTNDAR Y ALTA BIOACTIVACIN, DESPUS DEL TRATAMIENTO CON EL EXTRACTO DE BRCOLI
2.50

2.15

Frecuencia de manchas totales

2.00

1.50

1.40

ST
1.00

0.85 0.55 0.60

0.95

1.00 1.00 0.70

HB

0.50

0.30

0.00

C.N.

12,5

25

50

100

Concentraciones

COMPARACIN DE LA FRECUENCIA TOTAL DE MANCHAS EN EL CRUCE ESTNDAR Y ALTA BIOACTIVACIN, DESPUS DEL TRATAMIENTO CON EL EXTRACTO DE CEBOLLA
3.45
3.50

3.22

3.00

Frecuencia de manchas totales

2.50

2.00

1.60
1.50

ST HB

1.21 1.05 0.85 0.85 0.55 0.85

1.00

0.50

0.30

0.00

C.N.

12,5

25

50

100

Concentraciones

La presencia de las MSP pueden deberse a la prdida de heterocigocidad producida por tres factores : - Mutacin Puntual, que ocurre por un cambio de la regin silvestre para el gen mwh por la expresin recesiva mwh. - No disyuncin, por una migracin anormal de las cromtidas durante la divisin mittica, lo que genera una clula hemicigota la cual expresa el gen recesivo que contenga. - Deleccin, por la prdida de la regin silvestre para el gen mwh, lo que lleva a su expresin.

CONCLUSIONES

- Los insecticidas preferentemente utilizados son: Lorsban Plus para el cultivo de brcoli y para los cultivos de cebolla el Caporal . Entre otros Thodoron, Karate, Impacto, Folidol, Ridomil. - El insecticida Lorsban Plus qumicamente est compuesto por Clorpirifos que segn la OMS es moderadamente txico. Sin embargo el insecticida Caporal que pertenece al grupo Ia se caracteriza por ser extrema y altamente txico, compuesto qumicamente por metamidofos y cipermetrina. - Como control positivo se usaron los insecticidas Caporal y Lorsban Plus a una concentracin de 16 20 ml de insecticida para 20 litros de agua. Mediante el test de SMART se pudo evidenciar que a esa concentracin los insecticidas son txicos, tambin presentan genotoxicidad a concentraciones de 0,23% del insecticida Caporal y 0,015% del insecticida Lorsban Plus.

- Los agricultores utilizan de 4 a 6 veces el insecticida Lorsban Plus en los cultivos de brcoli desde la siembra hasta la cosecha de la misma. En cambio la frecuencia de uso del Caporal es de 3 a 5 veces en los cultivos de cebolla hasta su posterior cosecha.

- Mediante el Test de Mutacin y Recombinacin Somtica (SMART) los extractos de brcoli y cebolla contaminados por residuos de plaguicidas son genotxicas; a concentraciones de 12,5%, 25%, 50% y 100% para el cruce Estndar (ST) de ambos extractos y para el cruce Alta Bioactivacin (HB) a una concentracin de 100% para el extracto de brcoli en cambio para la cebolla a 50% y 100% de concentracin.

RECOMENDACIONES

- La prueba de SMART considerado un mtodo rpido, confiable por la sensibilidad que presenta y fcil de ejecutar, podra ser considerado empleado en el laboratorio Profac de la facultad de Ciencias Farmacuticas y Bioqumicas de la U.M.S.S para el anlisis genotxico de distintos alimentos contaminados con residuos de plaguicidas. Esta investigacin sugiere una gestin preventiva sobre el manejo adecuado de insecticidas a los agricultores de hortalizas de los Distritos de Combuyo y La Llave del Municipio de Vinto, para evitar posibles daos en la salud de la poblacin por el consumo de dichos alimentos.

- A mediano y largo plazo, estructurar una poltica ambiental, coordinada y articulada con las autoridades administrativas locales y la autoridad ambiental regional para realizar evaluacin, control y seguimiento de la problemtica del uso de plaguicidas que genera problemas al medio ambiente y afecta la salud pblica.

GRACIAS