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Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri Faculdade de Cincias Biolgicas e Sade Departamento de Farmcia Disciplina: Diagstico Laboratorial

Parasitologia

Diagnstico da Filariose Linftica

Docente: Helen Rodrigues Martins Discentes: Arthur Rocha Gomes Igor Ibrahim Neiva Pedro Henrique Silva
Dezembro 2013

Introduo
At o presente momento, oito espcies de

filrias podem parasitar o ser humano:


Wuchereria bancrofti, Brugia malai,

B.timori, Loa loa, Manzonella ozardi, M


perstans, M.streptocerca e Onchocerca

volvus

Wuchereria bancroftiana

Vermes adultos ( Sistema linftico) Microfilrias ( corrente sangunea)

A filariose bancroftiana, doena exclusiva do homem, causada por um parasito intravascular conhecido como W. bancrofti, transmitido pelo Culex quinquefasciatus

As manifestaes clnicas podem ser


causadas tanto pelos vermes adultos

quanto pelas microfilrias.

Vermes adultos

Microfilrias

Leses Linfticas

Leses extralinfticas

Assintomtico Manifestaes Agudas: Linfangite retrgrada

Manifestaes crnicas: linfedema, hidrocele, quilria e elefantiase

Eosinofilia Pulmonar: Asma bronquica

Manzonella ozardi

Verme adulto:Mesentrio/ Tecido conjuntivo do peritnio

Onchocerca volvulos

Vive dentro dos ndulos cutneos

Diagnstico

Avaliar histria clnica e epidemiologia Mtodos Parasitolgicos

Mtodos Sorolgicos
Mtodos Moleculares

Mtodos de Imagem

Mtodos Parasitolgicos

Exame fresco (20 a 60 L)

- Observao motilidade
- 3 lminas por paciente

- Colher durante pico parasitemia

Gota espessa (20 60 L) -Observao morfologia

-3 lminas por paciente


-Coleta entre 23:00h e 01:00h - Alta sensibilidade em altas parasitemias.

*Vantagens: -Baixo custo

-Simplicidade
-Rapidez -Permite visualizar com nitidez caractersticas morfolgicas importantes para diferenciao (gota espessa).

*Desvantagens -Horrio de coleta (23h 01h)

-Baixa sensibilidade em baixas parasitemias

Concentrao de Knott - Diluir 1 parte de sangue em 10 de formalina a 2%. (1/10) - Centrifugao - Microfilrias no sedimento - Gota espessa e colorao pela Hematoxilina de Carrazzi.

*Vantagens:

- A utilizao de aprox. 1ml de sangue aumenta


sensibilidade do teste. - Permite identificao de microfilrias em

baixas parasitemias.
- Formalina permite que o exame seja realizado vrios dias aps coleta.

*Desvantagens:

- Morte e imobilizao dos parasitos

Membrana de policarbonato
- possvel coletar at 10ml de sangue. -Filtrao do sangue em Membrana de Policarbonato.

-Material na membrana depois


corado e observado ao ptico.

* Vantagens:

- Maior sensibilidade (golden test)


- Possibilidade de investigar baixas

parasitemias.

*Desvantagens:
- Alto custo

Mtodos Sorolgicos
Pesquisa de Ac est descredenciada Risco de Reaes cruzadas com outros Helmintos
Pesquisa de Ag: ELISA e ICT

ELISA
- Utilizao de anticorpo

monoclonal bovina).

Og4C3 (obtido de filria

- J comercializado o Kit com Og4c3

*Vantagens: - Colheita da amostra pode ser feita a qualquer hora do dia.

- Reconhece antgenos dos vermes


adultos mesmo em amicrofilarmicos (70%). *Desvantagens

- Alto custo
- Positividade ps-cura

Teste de imunocromatografia rpida em


carto - Utilizao de anticorpo monoclonal AD12 (obtido da W. Bancrofti) - Pesquisa de antgenos dos vermes

adultos

* Vantagens:
- Simplicidade - Rapidez (15 min) - Pode ser feito a qualquer hora do dia *Desvantagens: - Alto custo - Positividade por vrios anos

Mtodos Moleculares

PCR

- No detecta DNA livre


- Mais utilizada na monitorizao da

transmisso no inseto vetor


- Tambm utilizada no diagnstico da

oncocercose (sensibilidade maior que na


noduloctemia)

Mtodos de imagem
Ultra-sonografia - Demonstrao de vermes adultos (in vivo) em segmentos de vasos linfticos. - Sinal da dana da filria

-Diagnostica vermes adultos mesmo em indivduos amicrofilarmicos

-Contribui para um controle de cura

mais eficiente, podendo medir


diretamente a ao da droga sobre o

parasito.

At os anos 1980, a nica maneira direta para confirmar um diagnstico de infeco por W. bancrofti foi atravs de: Identificao de microfilrias (MF) no sangue perifrico usando contagem cmera Filtrao por membrana de policarbonato Mtodo de gota espessa Tcnica de Knott

Desvantagens destes mtodos: Baixas sensibilidades (no permite a determinao exata da verdadeira prevalncia da infeco). S identificam infeco filaria por meio de microfilaremia Inconvenientes quanto ao horrio de coleta do sangue (pico de microfilaremia ocorre entre 23:00-01:00).

Nos anos 1990, foram feitos avanos significativos no diagnstico de Filariose linftica (FL) com o surgimento de novas ferramentas de diagnstico : Utilizao de antgenos recombinantes para a deteco de anticorpos especficos. PCR para a deteco de DNA filarial. Visualizao de vermes adultos vivos (AW), utilizando ultra-som (US) Deteco de antgeno filarial circulante(CFA )

Atualmente, as ferramentas de diagnstico padro so US e deteco de CFA, que esto comercialmente disponveis na forma de kits.

Recentes avanos em vrias reas do conhecimento relacionado a FL levaram utilizao de novas abordagens para diminuir a gravidade e impacto da doena. A introduo de novas ferramentas de diagnstico para a deteco da infeco por W. bancrofti visa abrir novas possibilidades em termos de interromper a transmisso e, consequentemente, a eliminao da filariose.

Fatores importantes a serem considerados para assegurar a eficincia da triagem e vigilncia para filariose bancroftiana so: Sensibilidade Especificidade Rapidez Simplicidade Portanto, avaliar o desempenho de novos mtodos de diagnstico um passo importante para a eliminao da transmisso.

Local: na Regio Metropolitana do Recife . Amostra: pacientes do sexo masculino com microfilaremia

N: 256 pacientes

Objetivo:
Identificar quais dos mtodos o mais sensvel para o diagnstico da infeco: -Antgeno filarial circulante (CFA): Og4C3ELISA e ICT card test -Ultra-som (US)

Resultados e Discusso

As sensibilidades das duas tcnicas (Og4C3ELISA e ICT card test) para a deteco de CFA (circulao do antgeno filarial) foram semelhantes: ambos com um elevado grau de sensibilidade (96,69 %) . A percentagem de resultados positivos de ultra-sons (US) era 73,44%. Vermes adultos (AW) vivos no foram detectados em 68 (26,56%) indivduos atravs do exame de ultra-som (US).

Resultados e Discusso

O mtodo CFA (antgeno filarial circulante) foi mais sensvel do que o mtodo US (ultra-son) na identificao de indivduos infectados (Tabela I). Isso se deve provavelmente ao fato de que o verme adulto (AW) pode ser localizado em locais do corpo que no seja genitais masculinos, tais como o escroto (descrito como local preferido de AW).

Resultados e Discusso

A relao entre a densidade de MF/mL e os resultados quantitativos e qualitativos dos testes Og4C3 (unidade de ag/mL) e o carto ICT (positivo/negativo), respectivamente, mostrou um aumento significativo no nvel de antgeno em Og4C3 e na percentagem de testes positivos utilizando o carto ICT proporcional ao aumento na carga de parasitas, principalmente quando a densidade de microfilaremia foi maior do que 100 MF/mL de sangue (Tabelas II , III) . O teste do carto ICT no conseguiu detectar CFA em nove dos 78 indivduos com contagem MF menos de 100 MF/mL.

Resultados e Discusso

Resultados e Discusso

Resultados e Discusso

A comparao entre os US e a densidade de MF por mL mostrou que a percentagem de testes nos quais o sinal de movimento das filrias (FDS) poderia ser visto significativamente aumentado em proporo com o nmero de MF(Tabela IV). Nos pacientes com uma densidade de microfilria > MF 500/mL, AW pode ser visualizado por US em 82,56 % (Tabela IV).

Resultados e Discusso

Resultados e Discusso

CFA agora considerado uma ferramenta promissora para o diagnstico de FL, tanto a nvel individual e comunitrio.

Devido simplicidade e convenincia deste mtodo, sendo possvel realizar o teste utilizando amostras de sangue recolhidas em qualquer altura do dia.

Resultados e Discusso

O carto ICT, tem sido adotado como ferramenta importante para estudos da comunidade e avaliao rpida de endemicidade filarial em programas de controle da filariose bancroftiana: Devido sua simplicidade e preciso. Porm, em grandes pesquisas, pode ser difcil para examinar as placas, demora a uma demora na leitura dos resultados. Essa demora poderia contribuir para a m interpretao dos resultados e pode aumentar o nmero de falsos positivos.

Resultados e Discusso
Os autores concordam com resultados encontrados por Grove e Davis (1978), que sugerem que: - A deteco de anticorpos de microfilrias depende da liberao relativa da MF para a corrente sangunea e a produo de anticorpos contra aqueles MF.

Local: Cidades de Olinda e Campina Grande, localizadas no nordeste do Brasil

Amostra: pacientes examinados pelo mtodo de gota


espessa (TBF) e teste do carto ICT

-rea Endmica N: 625 pessoas -rea No-Endmica N: 110 pessoas

Objetivo

Avaliar a validade do teste carto ICT em uma pesquisa realizada em uma rea endmica do Nordeste do Brasil. A especificidade do teste tambm foi avaliada em moradores de uma rea no endmica.

Resultados e Discusso

Resultados e Discusso

Resultados e Discusso

Resultados significativos: 38 (6,1%) foram positivas pela tcnica de gota espessa e 198 (31,7%) pelo teste do carto ICT (Tabela 2) Dentre 38 pessoas mf positivo pelo TBF, 2 (5,3%) foram negativas pelo teste do carto ICT, enquanto 162 (27,6%) indivduos negativos pela TBF foram positivas pelo teste do carto de TIC (Tabela 1).

Resultados e Discusso

Resultados e Discusso

No houve diferena estatisticamente significativa na prevalncia de microfilrias ou antigenemia de acordo com a faixa etria (Tabela 2). A prevalncia de microfilaremia e antigenemia foram ligeiramente maior no sexo masculino do que do sexo feminino (Tabela 2). A sensibilidade global do teste do carto ICT foi de 94,7% (36/38). Os dois falsos negativos eram do sexo feminino na faixa etria 26-39 anos (Tabela 2) .

Resultados e Discusso

Resultados e Discusso
rea no endmica : 110 moradores , 39 (35,5%) do sexo masculino e 71 (64,5%) do sexo feminino com idades entre 10 e 78 anos (mdia de 39,6 5,1 SD) foram examinados. Sendo que, 78 (70,9 %) foram negativas e 32 (29,6 %) apresentaram uma ligeira marca de rosa na linha de teste que foi interpretado como um resultado positivo, de acordo com as instrues do fabricante. Todos os soros foram testados por ELISA Og4C3 e no mostraram valores de densidade ptica (OD) acima do padro 1 e 2, confirmando o estado de infeco negativa.

Resultados e Discusso

Resultados e Discusso
A especificidade do carto ICT variou entre 72,4% e 100%, com base na prevalncia da filariose na populao (Fig. 1) Portanto, como mostrado na Figura 1, uma elevada especificidade para o teste do carto ICT obtida apenas quando se assumir uma prevalncia da filariose mais de 25%.

Resultados e Discusso
Em termos de custo, o TBF tem um preo mais baixo que o teste do carto ICT. No entanto, certas caractersticas do teste do carto ICT provou ser extremamente vantajoso: -Alta sensibilidade -Capacidade de oferecer diagnstico rpido -Sem necessidade de procedimentos laboratoriais complexos -No h necessidade de tcnicos especializados.

Resultados e Discusso

Estas caractersticas combinadas superou o preo mais baixo do TBF, tornando-se a mais uma opo global de custo-benefcio, justificando assim o seu uso como uma ferramenta de diagnstico na triagem em reas endmicas. Por outro lado, o teste no parece adequado para o acompanhamento e avaliao de programas de controle: devido um nmero considervel de indivduos infectados permanecem positivos por mais de dois anos aps o tratamento com DEC. Uma vez que a prevalncia da filariose tende a cair durante a aplicao das medidas de controle, torna-se importante utilizar testes com maior especificidade e valor preditivo , conseqentemente, maior positiva . O uso de tais mtodos permitir que as intervenes sejam direcionados para os indivduos infectados, que so responsveis pela manuteno da cadeia de transmisso em reas focais .

Mansonella ozzardi / M. perstans

O mtodo da gota espessa de sangue o mais confivel, pois permite visualizar com nitidez o espao ceflico e caudal, disposio dos ncleos caudais e formato da cauda, que so caractersticas morfolgicas que diferenciam as espcies de microfilrias sanguneas que ocorrem no Amazonas.

Referncias

ROCHA, Abraham et al. Comparison of tests for the detection of circulating filarial antigen (Og4C3-ELISA and AD12-ICT) and ultrasound in diagnosis of lymphatic filariasis in individuals with microfilariae. Mem. Inst. Oswaldo Cruz [online]. De 2009, vol.104, n.4, pp 621-625. ISSN 00740276. http://dx.doi.org/10.1590/S0074-02762009000400015. BRAGA, Cynthia et al. Field Evaluation of the Whole Blood Immunochromatographic test for rapid Bancroftian Filariasis Diagnosis in the Northeast of Brazil.Rev. Inst. Med. Chem. trop. S. Paulo [online]. 2003, vol.45, n.3, pp 125-129. ISSN 00364665. http://dx.doi.org/10.1590/S0036-46652003000300002. Guia de vigilncia epidemiolgica e eliminao da filariose linftica Ministrio da Sade De Carli, GA. Parasitologia Clnica NEVES, DP e colaboradores. Parasitologia Humana