Fuente de las Enzimas

De donde se obtienen las enzimas? (Propsito)

- Plantas - Animales - MICROORGANISMOS

Enzimas microbianas glucosa isomerasa -galactosidasa Proteasas bacterianas Enzimas de Plantas Papaina (Papaya) ficina (Higos) Bromeleina (pia) Enzimas animales tripsina lipasa (pancreas) renina (estomago de ternero)

90% de enzimas industriales son de origen microbiano

- Microorganismos son faciles de cultivar en condiciones controladas: Altos rendimientos de enzimas

Consideraciones de seguridad
Infinidad de microorganismos: Amplia variedad de enzimas Limitado numero de microorganismos son usados - Usar el mismo microorganismo para la obtencion de diversas enzimas - Las condiciones de cultivo, metabolismo ya son conocidas y dan resultados exitosos

Consideraciones de seguridad
Usar enzimas o microorganismos aprobados por las autoridades reguladoras de produccion industrial - GRAS (generally regarded as safe) FDA. Nuevas enzimas: se debe demostrar la inocuidad

Microorganismos geneticamente modificados

Microorganismos que expresan un gen que proviene de otro organismo a traves de de la tecnologia del DNA recombinante. Microorganismos que han sido modificadso para sobre expresar la enzima deseada (productor eficiente) Quimosina (manufactura de quesos)

Microorganismos geneticamente modificados

Microorganismos (celulas totales) vs enzimas purificadas

Alta especificidad no es necesaria Purificacion de enzima no es necesaria (Catalizador barato) La actividad enzimatica es mas estable dentro de la celula La enzima puede requerir de la regeneracion del cofactor/co-sustrato. Entonces: - Las celulas pueden estar en reposo o muertas. - Las celulas estan vivas pero solo se mantiene el nivel nutricional sin permitir el crecimiento BIOCATALIZADORES

Preparacion de enzimas
Enzimas son utilizadas en diferentes grados de pureza Usos para propositos cientificos, medicinales o analiticos Alta pureza (90-100%) Alta pureza enzimatica requiere de procesos caros: - Centrifugacion - Precipitacion - Cromatografia de afinidad - Cromatografia de intercambio ionico - Filtracion en gel (Cromatografia de exclusion molecular) - Cristalizacion

BIOTRANSFORMACION BIOCONVERSION AGENTE BIOLOGICO SUSTRATO Medio de cultivo

ENZIMA

DOWNSTREAM PROCESSING Formulacin del producto

FERMENTACION

SEPARACION Y PURIFICACION

PRODUCTO

EFLUENTES

SELECCION

ESTERILIZACION

MODOS DE OPERACION

SELECCIN DE OPERACIONES Y PROCESOS

GENETICA Recombinantes Hibridos Mutantes

PREPARACION TIPO DE REACTOR DISEO Y FORMULACION

CEPAS, LINEAS CELULARES, CLONES

MICROBIANAS VEGETALES ANIMALES

Naturales (wild-type)

Screening Colecciones de cultivos

Aplicaciones tecnicas de las enzimas

Anlisis /Diagnstico Autoanalizadores Tiras reactivas ELISA Biosensores

Transformaciones enzimaticas

Tratamiento del papel

Almidon L-aminoacidos Aspartame Uso tcnico e industrial de las enzimas

Area de alimentos Panificacion Productos lacteos Jugos, vinos Cerveza

Esteres, grasas y aceites Compuestos quirales

Glucosa isomerasa

Detergentes Tratamiento de cuero textiles Uso medicinal

ANALISIS
Ventaja: Alta

especificidad enzimatica.

Determinacion de un analito (sustrato) No requiere procesos de separacion

Sustrato (+ Cosustrato ox/red) Producto (+ Cosustrato ox/red) + H

Analito puede ser cuantificado por: -Siguiendo la velocidad de conversion (Metodo cinetico) - Determinando la concentracion despues de una conversion completa (metodo de punto final)

 Sustrato o Producto poseen espectros altos de absorbancia, conviene medir consumo de sustrato o formacion de producto Azucares, Proteinas, Lipidos

CH2 CH2 CH2 O O O AG AG AG

Lipasa + Agua

R COOH
CH2 OH CH2 CH2

R COOH R COOH Acidos grasos libres

OH O H Glicerol

Areas del Analisis enzimatico

Area Clinica Determinacion de metabolitos Plasma, Suero, Orina, LCR, etc Biociencias: Bioquimica y Microbiologia Area de analisis ambiental

Area de alimentos

Cuatro tecnologias:
Autoanalizadores Inmunoensayos (ELISA) Tiras reactivas

Biosensores

Analisis con autoanalizadores

Seguimiento de la reaccion por espectrofotometria Cambios en la absorcion molar NAD+/NADH. Determina reactantes < 20 M
Etanol + NAD+
Alcohol deshidrogenasa

Acetaldehido + NADH + H+

Reaccion 1 Glucosa + ATP

Hexoquinasa

Glucosa-6-P + ADP

Reaccion 2

Glucosa-6-P +

NADP+

Glucosa 6-P-deshidrogenasa

6-P-gluconato + NADPH + H+

Inmunoensayos - ELISA

Tiras reactivas
Analisis de glucosa en orina y sangre Estimacion de colesterol Test de embarazo

Transformaciones enzimaticas
Preparacion de productos tales como: - L-aminoacidos - Grasas modificadas - Edulcorantes artificiales

Biotransformaciones industriales

Produccion de penicilinas semisinteticas

Produccion de L-aminoacidos

Produccion de Aspartame

Produccion de detergentes
Ventajas del uso de enzimas - Bajas temperaturas de lavado - Evitar el uso de sustancias blanqueadoras y polifosfatos - Mejorar la calidad del color de la ropa Enzima tipica de lavanderia : - pH 10 -11 - 40 60 C - Agentes blanqueadores (perborato + activadores TAED) - Agentes tensioactivos/agitacion

Produccion de detergentes
Enzimas usadas y sus funciones Proteasas (siempre): Lipasas (frecuentemente) Amilasas (frecuentemente) Celulasas (algunas veces)

Alimentos y areas relacionadas Fabricacion de leche libre de lactosa

Lactosa (galactosa+glucosa) gal(1-4)glc -galactosidasa

Galactosa

Glucosa

Lactasa microbiana

Leche UHT Transporte de leche Leche libre de lactosa (Industria Consumidor final lechera)

Fabricacion de cerveza light

-Cerveza normal tiene alto contenido calorico
alcohol y polisacaridos no hidrolizados en los procesos de malteado y produccion de mosto -Aadir una enzima 1,6 exoglucanasa (Pululanasa) disminuye la cantidad de polisacaridos : contenido alcoholico -Cerveza debe ser diluida hasta alcanzar el grado alcoholico requerido - Cerveza de 30% menos en calorias

Fabricacion de vinos y jugos

pectinasas

pectinasas

Fabricacion de papel

Enz ligninoliticas
celulasas xilanasas

Pulpa de papel Celulasas en clarificacion

Enzimas en el tratamiento de cueros

Proteasas

Pelambre Remojo de cuero Desgrasado

Lipasas

Produccin anaerobica de enzimas a partir de bacterias extremofilas

Produccin anaerobica de enzimas a partir de bacterias extremofilas

Produccin aerbica de enzimas a partir de hongos

23% proteasas

17% amilasas

19% pectinasas

16% celulasas

13% lipasas

7% xilanasas

5% enzimas ligninolticas