ADN y Su Importancia en la Herencia

ADN y Su Importancia en la Herencia

ADN: El Material Gentico La Estructura del ADN Determinacin del Mecanismo de Replicacin del ADN Los Mecanismos Moleculares de la Replicacin del ADN Reparacin y Correccin del ADN Aplicaciones prcticas de la Replicacin del ADN

Un Poco de Historia
Charles Darwin, 1859
El Origen de las Especies Jean Baptiste Lemarck

Gregor Mendel, 1865

Leyes de la herencia Su trabajo solo fue apreciado hasta el comienzo de 1900s

Seguimos con un Poco de Historia

Francis Galton (primo de Charles Darwin) Considerado como el padre de la gentica moderna. Re-descubri las leyes de Mendel Nature/Nurture (Innatismo/Aprendizaje) la inteligencia es un factor determinado genticamente y no de crianza (ambiental) despus de estudiar a hombres eminentes y sus familias. Primer intento de genotipo-fenotipo

No tenemos la menor idea del proceso por el cual la similitud de los padres se transmite a la descendencia. Este proceso es tan misterioso para nosotros como un destello de luz lo es para un salvaje. No sabemos cual es el agente esencial en la transmisin de las caractersticas parentales, ni siquiera si es un agente material o no. No solo nuestra ignorancia es completa, sino que no tenemos la menor idea de cmo comenzar a trabajar en el problema.

Bateson

1865

Archibald Garrod 1909

Gentica Bioqumica Alcaptonuria: artritis acompaada de excrecin coloreada en la orina. Enfermedad metablica se hereda debido a la incapacidad de producir una enzima Padres sanos Algunos hermanos enfermos Desorden metablico congnito

1865

1920 - Frederic Griffith

Llev a cabo experimentos con dos cepas de Streptococcus pneumoniae. Descubri que un principio de transformacin qumico de una cepa podra causar un cambio heredable en la otra cepa.

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1944 - Avery, MacLeod & McCarty

1865

El DNA (sustancia viscosa presente en el ncleo) purificado como un factor de transformacin

El ADN de las clulas lisas transformaba a las rugosas

Colin MacLeod

Maclyn McCarty

Oswald Avery

ADN: El Material Gentico

Oswald T. Avery y sus colegas dedicaron varios aos a la identificacin del principio de transformacin. Ellos trataron el extracto de la cepa bacteriana S de varias formas para destruir algunos tipos de sustancias pero retener otros. Cuando el ADN fue destruido, la actividad transformante se perdi pero cuando el ADN permaneca intacto, la actividad transformante se conservaba.

1865

1952- Alfred D. Hershey y Martha Chase

Confirmaron al ADN como material gentico. El bacterifago T2 un virus que ataca a E. coli, consiste bsicamente de un ncleo de ADN empaquetado en capa de protenas. Cuando el bacterifago T2 ataca a la bacteria, parte, pero no todo el virus entra a la clula bacteriana. El experimento de Hershey-Chase determin que parte (protena o ADN) del virus ingresaba al interior celular.

Figura 11.2 T2 y el Ciclo Reproductivo del Bacterifago

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Figura 11.2 T2 y el Ciclo Reproductivo del Bacterifago

ADN: El Material Gentico

Algunos virus fueron marcados con azufre radioactivo; el azufre est presente en las protenas pero no en el ADN. Otros virus fueron marcados con fsforo radioactivo; el fsforo est presente en el ADN pero ausente en la mayora de las protenas. El azufre marcado (y por ende la protena viral) se separ de la bacteria pero el fsforo marcado (y por ende el ADN viral) permaneci dentro de la bacteria.

La Estructura del ADN

Los cientficos se propusieron determinar la estructura del ADN esperando encontrar respuestas a dos preguntas:
Cmo se replica el ADN en las divisiones nucleares? Cmo a partir de ADN se sintetizan protenas especficas?

1865

1953 - Franklin & Wilkins

Fotografa de la difraccin cristalogrfica del cristal de ADN

La naturaleza helicoidal del DNA

Rosalind Franklin

Film fotogrfico

Fuente de rayos X DNA cristalizado

Maurice Wilkins

Figura 11.4 Cristalografa de Rayos X: Revel la Estructura Bsica en forma de Hlice de la Molcula de ADN

La posicin de los tomos en una sustancia cristalina puede ser inferida del patrn de difraccin de los rayos X al atravesarlos.

La Estructura del ADN

El ADN es un polmero de nucletidos. Los cuatro nucletidos que constituyen el ADN difieren entre s en las bases nitrogenadas que los componen. Existen dos purinas (adenina y guanina) y dos pirimidinas (citosina y timina).

Leyes de Chargaff
En 1950, Erwin Chargaff not que en el ADN de distintas especies, la cantidad de adenina era igual a la cantidad de timina y que la cantidad de guanina igual a la de citosina.

La Estructura del ADN

El enlace es especifico: pirimidinas-purinas * Mecanismo para una replicacin exacta

Estructura qumica de los 4 nucletidos

La Estructura del ADN

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1953 - Watson & Crick

1865

Descripcin de la estructura tridimensional del DNA - HELICE DE DOBLE CADENA

Francis Crick & James Watson

 Francis Crick y James D. Watson establecieron la estructura general del ADN.

La Estructura del ADN

La Estructura del ADN

Los esqueletos de azcar-fosfato de cada hebra estn en la parte exterior de la hlice. Las bases nitrogenadas estn en el centro de la hlice. Los puentes de Hidrgeno entre las bases complementarias mantienes unidas a las dos hebras, as:
A siempre se aparea con T (dos puentes de hidrgeno). G siempre se aparea C (tres enlaces de hidrgeno).

La Estructura del ADN

Se sugera que la estructura del ADN consista en dos cadenas polinucleotdicas antiparalelas entre si.

Figura 11.7 El Apareamiento de las Bases en el ADN es Complementario

Figura 11.6 ADN es una Doble Hlice

Surco Mayor

La Estructura del ADN

Estructura helicoidal del ADN Surcos mayor y menor 10 radio y 20 dimetro 3.4 entre nucletidos 34 / 360 vuelta 10 pares nucletidos/ 360 vuelta

La Estructura del ADN

Enlaces de hidrogeno unen a los nucletidos Las cadenas opuestas son antiparalelas. Los carbonos en las ribosas definen los extremes 5' y 3 pirimidinas se unen con purinas T-A C-G

La Estructura del ADN

Las dos hebras del ADN son antiparalelas
Los enlaces fosfodiester (que unen los nucletidos) se hacen por reaccin de un grupo fosfato con un grupo OH Una hebra de ADN tiene un grupo fosfato en el extremo extremo 5, y un grupo hidroxilo en el otro extremo.

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La Estructura del ADN

El material gentico tiene cuatro funciones importantes:
Almacena toda la informacin gentica de un organismo. Es susceptible a mutacin. Debe ser replicado de forma exacta durante el ciclo de divisin celular. Es el responsable del fenotipo de un organismo.

REPLICACION DEL ADN

Determinacin del Mecanismo de Replicacin del ADN

Tericamente, el ADN podra servir en si mismo como templete de una de las siguientes formas:
Replicacin Semiconservativa usar cada hebra parental como templete para la nueva hebra. Replicacin Conservativa construir una hlice completamente nueva basada en el templete de la hlice doble vieja. Replicacin Dispersa usara fragmentos de la molcula original de ADN como templetes para el ensamblaje de dos molculas.

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Figura 11.8 Modelos de Replicacin de ADN

Modelo dispersivo

Determinacin del Mecanismo de Replicacin del ADN

Matthew Meselson y Franklin Stahl demostraron en 1957 que la replicacin del ADN es semi conservativa usando una tcnica llamada marcaje por densidad. Utilizaron ADN marcado con Nitrgeno pesado (15N).

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Figura 11.9 Experimento de MeselsonStahl

Determinacin del Mecanismo de Replicacin del ADN

Modelo de replicacin propuesto por Watson & Crick (1953) Modelo semiconservativo (la doble hlice nueva contiene 1 hebra templete y 1 hebra hija)

Determinacin del Mecanismo de Replicacin del ADN

El bioqumico americano Arthur Kornberg mostr que el ADN se puede replicar en un tubo de ensayo con la presencia de una enzima especfica (ADN polimerasa) y una mezcla de cuatro precursores (deoxiribonucleosos trifosfatos): dATP, dCTP, dGTP, y dTTP.

Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN

La replicacin del ADN tiene dos pasos:
Los enlaces de hidrgeno entre las dos hebras se rompen, haciendo que cada hebra est disponible como templete.
Los nucletidos nuevos son unidos covalentemente a la hebra naciente.

Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN

En la replicacin de ADN los nucletidos son adicionados por el extremo 3de la cadena que nace.

Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN Un complejo proteico muy grande cataliza la replicacin del ADN (complejo de replicacin). Este complejo de Replicacin reconoce un origen de replicacin sobre un cromosoma. El ADN es replicado en ambas direcciones desde el origen. En la replicacin del ADN, ambas hebras actan como templete.

Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN

Cromosomas pequeos, como los que hay en bacterias, tienen un slo origen de replicacin. La replicacin en bacterias produce dos ADNs circulares entrelazados que son separados por la enzima DNA topoisomerasa.

Figura 11.12 Replicacin en ADN pequeo y Circular

Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN

En cromosomas grandes pueden haber cientos de orgenes de replicacin. La replicacin ocurre en diferentes sitios de manera simultnea.

Figura 11.12 Replicacin en Cromosomas Grandes y Lineales

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Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN Requerimientos para la replicacin --- Romper los enlaces de H --- Separacin de hebras --- dNTPs disponibles (G, C, T, A) --- enzimas

Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN ADN Polimerasa iniciador o cebador (primer) como punto de partida. Es una hebra pequea de RNA complementario a la hebra de ADN molde. Una enzima llamada primasa es la encargada de hacer la hebra iniciadora.

Figura 11.15 Muchas protenas se Encargan de la Horquilla de Replicacin

Helicasa

Primasa DNA polimerasa III

Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN En la replicacin de ADN los nucletidos son adicionados por el extremo 3de la cadena que nace.

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Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN

Las nuevas bases son adicionadas por el extremo 3 de la hebra naciente. En el complejo de replicacin, se encuentra una hebra (la hebra lder) la cual esta en orientacin correcta para la adicin de nucletidos. La otra hebra (la hebra rezagada) esta en la orientacin contraria.

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Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN

Debido a que la orientacin es contraria, la hebra rezagada debe crecer en piezas relativamente pequeas y discontinuas, llamadas fragmentos de Okazaki. Cada fragmento de Okazaki requiere una hebra iniciador de RNA, el cual es formado por la RNA primasa. La ADN polimerasa III sintetiza ADN complementario desde el extremo 3 del nuevo iniciador y trabaja hacia el fragmento previo de Okazaki.

Mecanismos Moleculares de la Replicacin de ADN

Cuando la ADN polimerasa III alcanza al fragmento previo de Okazaki, sta es liberada. La DNA polimerasa I entonces reemplaza el iniciador RNA del fragmento previo de Okazaki con ADN. Finalmente, DNA ligasa cataliza la formacin de enlaces fosfodiester que unen los dos fragmentos de Okazaki.

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 http://www.youtube.com/watch?v=teV62zrm2P 0&feature=related replicacion

http://media.pearsoncmg.com/bc/bc_martini_a p_slim/assets/animations/ch08_replication.html

ADN y Su Importancia en la Herencia

Reparacin y Correccin del ADN

Aunque los errores en la replicacin del ADN (mutaciones) son esenciales para la evolucin, una gran mayora de estos errores son neutrales o letales. DNA polimerasa tiende a cometer errores 1 error cada 108 bases replicadas Aprox. 1000 mutaciones por divisin celular

Reparacin y Correccin del ADN

A medida que las polimerasas adicionan nucletidos ellas hacen una revisin de correccin Cuando la ADN polimerasa reconoce un error, remueve el nucletido errado y coloca el correcto. Esta funcin de correccin reduce la tasa de error global a 1 en 1,000,000,000.

Reparacin y Correccin del ADN

Para minimizar el nmero de errores existen tres mecanismos de reparacin:
Correccin de lectura (proofreading) Reparacin por falta de apareamiento (Mismatch) Reparacin por Escisin

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Reparacin y Correccin del ADN

La reparacin por falta de apareamiento (mismatch) es un mecanismo que escanea el ADN nuevo para detectar uniones equivocas de las bases. Este mecanismo de reparacin, opera antes que la nueva hebra de ADN sea metilada. Este mecanismo puede diferenciar entre un templado metilado y la hebra nueva no metilada. Por tanto, este mecanismo determina cual es la base correcta (la base en la hebra templado) y cual base debe ser reemplazada.

Reparacin y Correccin del ADN

La reparacin por escisin acta durante toda la vida de la clula. El ADN est sujeto a daos por qumicos, radiacin y reacciones qumicas espontneas. Las enzimas de ste sistema inspeccionan el ADN celular en busca de algn dao, luego cortan la hebra daada y la eliminan. Posteriormente, la DNA polimerasa y la DNA ligasa completan y sellan el fragmento que faltaba.

Aplicaciones Prcticas de la Replicacin del ADN

La tcnica de la Reaccin en cadena de la Polimerasa (PCR) es un mtodo simple para hacer mltiples copias de una secuencia de ADN en el laboratorio. Los ciclos de un PCR son:
Los fragmentos de ADN de doble cadena son denaturados (por calor) para producir hebras simples. Un iniciador corto (primer o cebador) es adicionado as como dNTPs (de las cuatro clases).

La DNA polimerasa cataliza la produccin de nuevas hebras de ADN.

Estructura qumica de los 4 nucletidos - dNTPs

Aplicaciones Prcticas de la Replicacin del ADN

ADN polimerasa Nucletidos cebadores Adenina Timina Guanina Citosina

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Aplicaciones Prcticas de la Replicacin del ADN

Con suficiente cantidad de primer, ADN polimerasa y dNTPs, y la repeticin del ciclo mltiples veces, el resultado de copias de esa secuencia se incrementa siguiendo un patrn geomtrico. El primer usualmente tiene una longitud de 15-20 bases y es sintetizada en el laboratorio. Esto requiere la secuenciacin de los primeros 15-20 bases en el extremo 3 de cada hebra complementaria.

http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/pcr/

Aplicaciones Prcticas de la Replicacin del ADN

La PCR no fue til hasta que se descubri una ADN polimerasa que es resistente a altas temperaturas y que puede sobrevivir al ciclo de denaturacin del ADN. Fue encontrada en una bacteria que vive en los termales de Parque Nacional Yellowstone. El bioqumico Kerry Mullis se gan el premio Nobel por desarrollar esta tcnica.

http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/pcr/

Aplicaciones Prcticas de la Replicacin del ADN

La tcnica de secuenciacin de ADN utiliza nucletidos modificados (ddNTPs). dNTPs contienen azcar 2-deoxiribosa. ddNTPs contienen azcar 2,3-dideoxiribosa. Al igual que los dNTPs, los ddNTPs son reconocidos por la ADN polimerasa y son adicionados a la cadena naciente.

Figura 11.21 Secuenciacin de ADN

Figura 11.21 Secuenciacin de ADN

 PERO: ddNTPs carecen del grupo hidroxilo en la posicin 3, de manera que despus de ser adicionado uno de estos nucletidos, no se puede adicionar otro.
La sntesis termina con la adicin de un ddNTP.

Aplicaciones Prcticas de la Replicacin del ADN

Este proceso empieza con la denaturacin del ADN.

Las hebras simples son mezcladas con DNA polimerasa, iniciadores cortos, los
substratos normales de dNTPs y pequeas cantidades de los cuatro ddNTPs, cada uno marcado diferencialmente con un marcaje fluorescente.

En solucin, la DNA polimerasa sintetiza hebras de ADN utilizando substratos dNTP normales la mayora del tiempo. Cuando al DNA polimerasa adiciona ddNTP, la reaccin se detiene. El resultado es una solucin con hebras templete de ADN y hebras ms cortas complementarias, cada una con un extremo marcado fluorescentemente (ddNTP.).

Aplicaciones Prcticas de la Replicacin del ADN

Las nuevas hebras son denaturadas de los templados y separadas por electroforesis, una tcnica que separa hebras por diferencia de longitud y tamao. Los fragmentos ms cortos deben ser una base ms larga que el templado. El color del marcaje fluorescente indicar que tipo de ddNTP fue adicionado. Si fue ddATP, por ejemplo, entonces la primera base del templado (despus de la secuencia iniciador) es T.