Introduo

MMP-1 -> endopeptidases -> degradao da

MEC

Cliva colgenos tipo I, II e III

Expresso aberrante do alto nvel de MMP-1:

-> processos de doenas degenerativas

Cascatas de sinalizao esto envolvidas na

secreo de MMP-1

 Alto nvel de expresso de MMP-1-> (SS- [2 2 ])

A expresso da MMP-1 dependente do equilbrio

redox -> regulada -> local de consenso no DNA

Ets- 1 e AP-1

 Elementos de transcrio no promotor da MMP-1

Sensibilidade do equilbrio redox do promotor da

MMP-1 -> regio distal (Ets-1 e AP-1)

 Modificaes da histona -> ativa a transcrio mxima

de gene
Histonas -> determinam o grau de compactao da
cromatina

Acetilao
Deacetilao
http://slideplayer.com.br/slide/1584486/

 Acetilao (HATs)-> solta a interao de

DNA/histona e o acesso de ativadores
transcricionais ao DNA

Deacetilao (HDACs) -> condensa a cromatina > impede a transcrio

http://www.jornaldepneumologia.com.br/detalhe_artigo.asp?id=449

 Alteraes no SS [2 2 ] -> melhora sinalizao da

quinase

Acetilao das histonas -> afetada pela presena de

ROS

Perxido de hidrognio -> acetilao das histonas

Modificaes nas histonas -> importantes para

ativao de MMP-1

Objetivo

Identificar os vrios fatores de

remodelao da cromatina e ativadores
da transcrio que controlam o gene
promotor da MMP-1 que so sensveis
ao equilbrio redox

 Tcnica
de
Imunoprecipitao
Cromatina (CHIP)

da

Interao DNA/ protena

Princpio -> anticorpo para identificar a

presena de ptns especficas associadas s
regies de DNA.

CHIP
Famlia HDAC -> deacetilam lisinas -> incio da
rebobinagem do DNA e silenciamento do
gene

CHIP -> ocupao do promotor de HDAC2

 Nveis das enzimas antioxidantes das

clulas.

Superexpresso de SOD2 -> expresso da

MMP-1

Imunoprecipitao controle
Anticorpo especfico -> IgG
Recrutamento de HDAC2 -> resposta a
superexpresso de SOD2

 Controle Negativo
regies de CHIP

nas

Sem alteraes na ligao

em HDAC dependentes do
equilbrio redox

Sem alteraes na ligao em

PCAF
dependentes
do
equilbrio redox

 Anlise CHIP -> acetilao da histona H3 nas regies

do promotor da MMP-1 dependente do equilbrio
redox
nmero de lisina com histonas acetiladas:

Superexpresso da SOD2
Co-expresso da Cat

 PCAF -> acetilao

Anlise CHIP -> Recrutamento de PCAF em
resposta:
-> Superexpresso de SOD2
-> Atenuao pela Co- expresso da Cat

Pontos discutidos
Acetilao -> Ativao da transcrio
nveis de HDAC
nveis de PCAF

Resultando em uma elevada acetilao responsiva

das histonas em promotores correspondentes

Resultados
A expresso de MMP-1 dependente do
equilbrio redox est associada diminuio
de HDAC e ao aumento do recrutamento de
HAT que acompanhado pelo aumento da
acetilao das histonas.

 Deficincia no recrutamento de HDAC2 do

promotor da MMP-1 -> papel de supresso ->
restringir a ativao do gene da MMP-1

*Clulas tratadas com TSA

Inibidor das HDACs

Observou-se :

Superexpresso de SOD2 -> dos nveis

da transcrio da MMP-1-> agravada
com o tratamento de TSA

Co- expresso da Cat -> inverso parcial

do TSA

Pontos discutidos
HDACs-> restringem a induo oxidante
dependente da expresso da MMP-1

Inibio -> aumenta a transcrio de

MMP-1

Resultados

A expresso de MMP-1 dependente

do equilbrio redox aumentada pela
inibio de HDAC

 Os decrscimos nos nveis de HDAC2 so

consequncias da sua degradao dependente
do equilbrio redox ?
-> Clulas tratadas com inibidor de proteassoma
MG-132

 Anlise da HDAC2 nuclear revelou que

a superexpresso de SOD2 diminui os
nveis de HDAC2, que so resgastados
com a co-expresso da catalase

 Inibio do proteassoma foi

ligeiramente
melhorada com a acumulao HDAC2 em
clulas que superexpressam SOD2 e com a coexpresso da cat

 Rotatividade de HDAC2 pode ser regulada por

uma poliubiquitinao e por uma iniciao da
degradao por uma oxidao proteassmica

Tratamento com MG-132 ->HDAC2

ubiquitinada sobre a superexpresso de
SOD-2 e no revertido com a coexpresso da Cat

 A depleo do fator nuclear (Nrf2) -> estresse

oxidativo e
nveis de HDAC2

Mediao de SOD2 aumentada no estado

estacionrio do 2 2 pode promover respostas
adaptativas de genes atravs Nrf2 e alterar a
expresso gnica

 HDAC2 tambm tem sido demonstrado que podem regular

negativamente a funo Nrf2 e a inibio de HDAC ativa Nrf2.
Anlise das respostas dos genes Nrf2-dependentes indicaram
que no houve alterao da sua expresso em resposta
expresso SOD2

Resultados

HDAC2 ubiquitinada e direcionada

para a degradao proteassomica em
clulas que superexpressam SOD2

 Ets-1 e Ap-1 so stios de ligao

proximais no promotor da MMP-1 que
so necessrios para a mxima
expresso dependente de 2 2 .

 Anlise de CHIP -> ligao de Ets-1, c-Jun,

c-Fos ao promotor distal e proximal da
MMP-1 dependente do redox.

 Aumento significativo no recrutamento em Ets1nos locais do promotor da MMP-1 em

resposta a elevaes na SS [H2O2] foi mediada
pela superexpresso de SOD2, que foi
parcialmente revertido pela remoo
de
2 2 pela catalase.

Resultados
Recrutamento aprimorado da trancrio
dos ativadores Ets-1, c-Jun e c-Fos para o
promotor da MMP-1

 JNK -> capacidade de resposta do equilbrio

redox do promotor da MMP-1

C-Jun principal alvo de JNK

Recrutamento para o promotor redox sensvel

 Avaliar se a perda de c-Jun tornaria o

promotor da MMP-1insensvel ao
equilbrio redox

 Avaliar os nveis secretados de MMP-1 tratados

com c-Jun siRNA que superexpressam SOD2

 Perda mediada por siRNA da protena c-Jun foi

associada com a reduo significativa da
expresso de MMP-1 dependente do equilbrio
redox

 Silenciamento
da
protena
c-Jun
foi
severamente prejudicado o equilbrio redox
dependente da expresso da luciferase
conduzido pelo promotor distal da MMP-1

Resultados
Indicam que c-Jun necessria para
a completa ativao da transcrio
dependente do equilibrio redox do
promotor da MMP-1

Concluso
Expresso aberrante da MMP-1 contribui para a
patognese de muitos processos de doenas
degenerativas que esto associadas com um aumento
de danos ou estresse oxidativos.

Estas descobertas identificam uma relao da

regulao redox da transcrio de MMP-1 que envolve
locais especficos do seu promotor que inclui os
fatores de ativao e enzimas modificadoras da
cromatina, que convergem para conduzir a expresso
mxima do gene da MMP-1.

Referncias bibliogrficas
Bickers, Oxidative stress and skin disease; 2006

Wenk J.;Brenneisen, Over expression of manganese superoxide

dismutase in mitochondria identifies hydrogen peroxide as a
major oxidant in theAP-1-mediated induction of matrix-degrading
metalloprotease-1. J. Bio;1999
Izabel Cristina Rodrigues Silva; Isolamento e anlise de regies da
cromatina nativa contendo segmentos de DNA na conformao Z
em diferentes tipos celulares; 2010