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Kiiski JI, Pelttari LM, Khan S, Freysteinsdottir ES, Reynisdottir I, Hart SN, Shimelis H, Vilske S, Kallioniemi A,
Schleutker J, Leminen A, Btzow R, Blomqvist C, Barkardottir RB, Couch FJ, Aittomki K, Nevanlinna H.
Cncer de mama
Cncer ms comn que afecta mujeres en todo el mundo.
Principal causa de muerte en cncer en mujeres, sumando el 14% de muertes por
cncer.
La etiologa del cncer de mama es multifactorial, y el riesgo depende de varios
factores como edad, historia familiar, y factores reproductivos, hormonales y dieta.
Portadores de mutaciones en
Bsqueda de genes
involucrados en la
reparacin de ADN
implicados en la
susceptibilidad de
cncer de mama
Ruta de Fanconi/
BRCA
La anemia
de Fanconi es un raro
desorden
gentico causado por
una
mutacin biallica en
genes FA que participan
en la reparacin de
ADN.
Por lo menos 15 genes
FA han sido
identificados.
Materiales y mtodo
Muestras
Secuanciacion del exoma: Se seleccionaron 24 pacientes
mama BRCA1/2 negativos de 11 familias finlandesas
con cncer de
Fase II
552controles
Fase III
1,730 pacientes con cncer
(no seleccionados), 233
pacientes BRCA1/2 negativos
y un total de 1,274 controles
Variantes
Se usaron diferentes criterios de filtrado para seleccionar las variantes del
exoma que se secuenciaron para su genotificacin.
Variantes con una media menor a 15 fueron excluidos. .
Variantes comunes (>1% frecuencia) se realizaron usando el Proyecto de
los 1000 genomas, NHLBI Exome Sequencing Project y datos del exoma de
144 muestras de finlandeses sin cncer.
Genotipado
De las 22 variantes seleccionadas
de 21 genes que participan en la
reparacin del DNA, se analizaron
con
el
sistema
Sequenom
MassARRAY,
qPCR
o
secuenciacin Sanger
Degradacin de ARNm
mediada por secuencias
sin sentido
Se utiliz RT-PCR
para alelos
especficos FANCM con extracto
de RNA de clulas linfoblastoides
de portadores heterocigotos.
Anlisis estadstico
Los valores de P fueron calculados con la prueba de Pearson(chi-square)
mediante Fisher ,si el nmero esperado de clulas era cinco o menos.
Para el meta-anlisis, se combinaron las estimaciones de Helsinki y
Tampere con un modelo de efectos fijos mediante el mtodo de la
varianza ponderada inversa.
Para la correccin de mltiples pruebas, se utiliz el mtodo de Bonferroni,
y la heterogeneidad entre ER positivo y para los subgrupos Tn se
determinaron dos muestras mediante la prueba z.
La edad media de FANCM fc.5101C> T portadores de la mutacin y
no portadores se compar con la prueba T de Student.
Resultados
Se utilizo :
Annovar (programa bioinformtico) para anotar las
variantes.
Integrative Genomics Viewer : se analiz protenas
truncadas (variaciones sin sentido, insercin o
deleccin del marco de lectura y sitios de
empalmamiento-splice site)
RikuRator, herramienta para eliminar
artefactos.
posibles
2 indel--Secuencias Sanger
+ Endonucleasa NEIL1 c.314dupC
+ Helicasa SHPRH c.3577_3580delCTTA
FASE III:
1730 N/S, 233 fam. (BRCA1 /2 negativos.)
1274 Ctr., 570 N/S de CO.
Los SNV`s en CO (n = 569) a partir de la regin de Helsink.
NEIL1 c.314dupC ---TaqMan PCR tiempo real.
FANCA c.4228T>G--- no se observo en ningn paciente genotipificado de
fase 3
FANCM c.5101C>T anlisis estadstico
RUVBL1 c.950G>A y MPG c.401G>T, adicionalmente en cncer de seno y
de ovario
SLX4 c.2484G>C, FANCM c.5101C>T, y NEIL1c.314dupC ms de 10
Discusin de resultados
Poblacin finlandesa
Cncer de mama
Identificacin de alelos asociados
Identificacin de genes de susceptibilidad a cncer de ovario
22 variantes
Secuenciacin
previa
Grandes conjuntos
de datos de
pacientes
Poblaciones
control
Casos de cncer
de ovario.
c.5101C>T
96 pacientes cncer
mama
Histopatologa:
F de ER negativo que
positivo
Estos
hallazgos
sugieren que FANCM=
gen de susceptibilidad
al cncer de mama,
las
mutaciones
confiere una fuerte
predisposicin
para
TNBC
12 pacientes cncer de
ovario
Curiosamente, el cambio de
sentido CHEK2 I157T es un alelo de
menor riesgo sin embargo se
asocia especficamente a mayor
riesgo de cncer de mama
lobular
(aproximadamente
4
veces)
FANCM
Protena mas
conservada dentro de la
via FA.
Actividad de
translocasa y
endonucleasa
(estructuras de
reparacin de ADN)
Funcin principal:
respuesta ante
dao a DNA
durante la
replicacin.
c.5101C>T truncamiento de
la protena FANCM, ubicada en
el exn 20
Consistentes
Deficientes de FANCM
Cncer
CONCLUSIONES
La mutacin sin sentido de la FANCM esta asociada a riesgo a cancer de
mama en la poblacin finlandesa.
La F de la mutacin y fuerte asociacin a riesgo de cncer de mama fue
observado en pacientes con TNBC, implicaciones futuras con el DNA de
reparacin en la etiologa.
El descubrimiento de la variante c.5101C> T en FANCM es esencial para la
evaluacin del riesgo de cncer de mama y el diagnstico precoz.