UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

INMUNOLOGA
SEMINARIO No 1:
OBTENCIN Y PURIFICACIN DE GAMMAGLOBULINAS POR
PRECIPITACIN CON SULFATO DE AMONIO

SANGRE
Tejido

conjuntivo lquido.

Elementos

formes.
Plasma sanguneo.
Representa

Medio

el 18% del peso corporal.

de transporte mas importante del

organismo.

Funciones:
Transporte.
Homeostasis.
Autoproteccin

Defensa.

PLASMA SANGUINEO

Solucin acuosa compuesta de:

Electrolitos.

Nutrientes.

Metabolitos.

Protenas.

Vitaminas.

Oligoelementos.

PROTEINAS PLASMTICAS

Mayor parte de la fraccin soluble del plasma

sanguneo.
Su concentracin es de 60-80g/L

Funciones:
Transporte

de sustancias.

Regulacin

del equilibrio hdrico.

La

hemostasia

Proteccin

contra agentes patgenos.

PLASMA
Albmina

100 proteinas

Globulinas

CARACTERSTICAS

Albumina

Protena ms
abundantes.

Globulinas:

y transporte de
lpidos, vitaminas y de
los iones metlicos.
anticuerpos solubles
(inmunoglobulinas)

ELECTROFORESIS

Protenas y
macromolculas con
carga elctrica.
Separacin de protenas
del suero por
electroforesis (acetato
de celulosa).
Tincin con colorantes
(visualizar las bandas).

GAMMAGLOBULINAS

Llamadas inmunoglobulinas (Ig).

Formada por subunidades ( dos cadenas pesadas y

dos ligeras).

Enlaces disulfuro.

Zonas constantes.

Zonas variables.

Zonas hipervariables.

TIPOS DE GAMMAGLOBULINAS

CLASIFICACIN:
Protena ms
abundante.

IgG

Se adhiere a los
macrfagos.

Aumenta la
fagocitosis.

TIPOS DE GAMMAGLOBULINAS

CLASIFICACIN:
Se encuentra en secreciones.

IgA

Defensa contra la entrada de

m.o por membranas externas

Establece un sinergismo para

destruir a ciertos m.o.

TIPOS DE GAMMAGLOBULINAS

CLASIFICACIN:
Denominada
macroglobulinas.

IgM

Adoptan forma de
anillo.

Anticuerpo muy
eficiente.

TIPOS DE GAMMAGLOBULINAS

CLASIFICACIN:
No se conoce su
funcin.

IgD
Presente en la
superficie de los
linfocitos del recin
nacido.

TIPOS DE GAMMAGLOBULINAS

CLASIFICACIN:
Se encuentra en
concentraciones
bajas.

IgE
Responsable de las
reacciones de
hipersensibilidad.

PRECIPITACIN SALINA

La solubilidad de las
protenas depende
de la fuerza inica
Fenmenos:
Salting in
Salting out

DILISIS

Basado en la
imposibilidad de que
las protenas
atraviesen los poros
de una membrana
semipermeable.
Se utiliza para
eliminar compuestos
de bajo PM o
cambiar el medio en
que se encuentran.

FILTRACIN EN GEL

Tambin llamada
cromatografa de
permeacin en gel.
Separa las protenas
segn su tamao y
su forma.

ELECTROFORESIS EN GEL SDS

En la electroforesis
las protenas se
desplazan en un
campo elctrico
La velocidad de
corrida depende de:
Tamao
Forma
Carga elctrica.

FUNDAMENTO DE (NH4)2SO4
Fenmeno de salting out
La precipitacin representa una
competicin entre la protena y la sal
respecto al agua.

FACTORES QUE AFECTAN LA

PRECIPITACIN SALINA
Efecto de fuerza inica
Temperatura
Concentracin

pH

PRECIPITACION CON SULFATO DE AMONIO

VENTAJAS

DESVENTAJAS

La solubilidad es modificada
muy poco por la temperatura.

La sal debe ser removida por

dilisis

El efecto de desnaturalizacin
es menor

Contaminacin bacteriana

No requiere ajuste de pH

Reacciones de oxidacin

MTODOS DE SEPARACIN Y
PURIFICACIN DE GAMMAGLOBULINAS

GENERALES O INESPECIFICOS
Precipitacin salina
Mtodo de Cohn
Precipitacin con iones de metales pesados
Precipitacin con lactato de etacridina 0.4%
Electroforesis (resina de polivinilo,
poliuretano)
Cromatografa de intercambio inico
(DEAEcelulosa, CM-celulosa)

ESPECFICOS
Se basan en una reaccin serolgica
especfica del anticuerpo con su
antgeno o hapteno
Inmunoabsorbentes
(p-aminobencilcelulosa)

UTILIDAD DE PRODUCTOS OBTENIDOS

Tratamiento en
inmunodeficiencia
Inmunomodulador
en enfermedades:
autoinmunitarias
Antisueros

REFERENCIAS

Barret T. James. Introduccin a la inmunoquimica y la

inmunologa. Mxico : Nueva Editorial Interamericana. 1981
Berrn R., Espinosa F., Mrquez M., Sainos A.,Marfil J., Mogica D.,
Lima V., Hernndez V., Espinosa S.,Ayometzi M., Berrn A.,
Gonzlez V. Consenso de expertos en el uso teraputico actual
de la inmunoglobulina intravenosa. Revista Alergia Mxico
2005;52(1):42-50
Rendina George. Tcnicas de Bioqumica aplicada. Mxico. Nueva
editorial interamericana. 1974 pp 46-50