TRASTORNOS

NEUROLGICOS POR
AMPLIFICACIN DE
TRIPLETES REPETIDOS
Pilar Mazzetti Soler y el Equipo de Investigadores del
Centro de Investigacin en Neurogentica
Instituto Nacional de Ciencias Neurolgicas1

peru.neurogenetica@gmail.com
genetica@icn.minsa.gob.pe
Enero 2014

TRIPLETES REPETIDOS

Gentica mendeliana: mutaciones trasmitidas

establemente de padres a hijos
Fenmeno de anticipacin: de generacin en
generacin, menor edad de inicio de una enfermedad
1918:

Fleischer, distrofia miotnica

1950 a 1990: Penrose, sesgo de observador, sesgo de la
familia
1991: gen responsable de XFRA con triplete repetido
inestable; expansin de unas docenas a ms de mil en una
generacin => mutacin dinmica, gentica no mendeliana

Repeticiones encontradas: Trinucletidos a

pentanucletidos o dodecmeros inclusive

Enero 2014

INESTABILIDAD DE TRIPLETES

Mutaciones dinmicas: tendencia a aumentar,

ocasionalmente tripletes disminuyen

Secuencias repetidas difieren en:

Tipo de secuencia, tamao del elemento que se repite,

localizacin (codante o no codante)

Paulson, AAN 2011

Enero 2014

INESTABILIDAD DE TRIPLETES

Repeticiones en regin codante: expansin pequea

(enfermedades tipo 1)
Repeticiones en regin no codante: expansin masiva
(enfermedades tipo 2))
Tamao: tractos ms grandes, mayores expansiones
Inestabilidad somtica

TIPO I

5-UTR

Exn

Enfermedad de Huntington
Enfermedad de Kennedy
SCA tipos 1,2,3,6,7 y 17
Atrofia dentorubropalidoluysiana
Distrofia muscular oculofarngea
Intrn
Ataxia de Friedreich
Enero 2014

Exn

TIPO II

3-UTR
Distrofia miotnica
4

Caractersticas

Regin codante (1)

Regin no codante
(2)

Genes

Diferentes genes, diferentes funciones,

diferentes estructuras

Tipo de secuencia

CAG

GAA, CTG

Tamao del elemento Decenas de

repeticiones

Centenas de
repeticiones

Menores expansiones

Mayores expansiones

Impresin del
genoma

Paterna

Materna, menor
fertilidad en varones
con gran amplificado

Tejidos

Uno, selectivo

Varios

Fenotipo en comn

No hay manifestaciones durante muchos

aos
A mayor amplificacin del triplete, menor
edad de inicio de la enfermedad
A mayor amplificacin del triplete, mayor
severidad y tasa de progresin de la
enfermedad
Enero 2014

MECANISMO

Kaplan S, PLoS Comput Biol 2010

Enero 2014

Se hereda un gen
mutado (AD) o
dos (AR)
Inicio y progresin
de enfermedad
determinada por
la tasa de
expansin del
trinucletido
repetido en
ciertas clulas del
cuerpo de la
persona afectada
6

Kaplan S, PLoS Comput Biol 2010

Enero 2014

CURVA DE INICIO EXPONENCIAL

(G) Tasa de expansin de un alelo en un momento dado del tiempo es

una funcin que se incrementa linealmente en relacin con el nmero
de repeticiones sobre el umbral de inicio. (I) Curva de inicio disminuye
exponencialmente: a mayor nmero de repeticiones, menor edad
de inicio.
Kaplan S, PLoS Comput Biol 2010

Enero 2014

RANGO DE EXPANSIN DE
TRIPLETES REPETIDOS
Efecto sobre
ARN de otros
genes
Efecto sobre
gen

Patolgico
Premutacin
Normal

Enero 2014

MECANISMOS DE EXPANSIN

Desplazamiento durante la replicacin del ADN

Alineamiento inadecuado y ulterior escisin y
reparacin
Crossing over desigual
Repeticiones largas forman estructuras en
fragmentos Okasaki que luego bloquean la
replicacin de la horquilla de replicacin y
aumentan probabilidad de expansin
Secuencias normales con tripletes interrumpidos
por otras secuencias con tripletes, CAT por
ejemplo, estabilizan tractos; al faltar,
contribuyen a inestabilidad
Enero 2014

10

IMPRESIN DEL GENOMA

Expansiones grandes: mayores en meiosis masculinas

Alelos transmitidos por mujeres: incremento
modesto
Especialmente claro para enfermedades con triplete
CAG (impresin paterna); espermatozoide: hasta seis
divisiones ms que ovocito
Expansiones muy grandes en regiones no
codificantes: evidencias de impresin genmica con
transmisin materna
En DM1 amplificacin grande en varones se asocia a
baja fertilidad mientras que en mujeres se mantiene
fertilidad
Enero 2014

11

IMPRESIN GENMICA
i: 63 aos

57 tripletes
i: 41 aos

i: adolescencia

90 tripletes 82 tripletes

i: adolescencia

Impresin del genoma

por lnea Paterna:
enfermedad de Huntington

i: desde el
nacimiento

Impresin del genoma por lnea

Materna: enfermedad de Steinert
Enero 2014

12

PATOGNESIS
Regin del gen
con
repeticiones

Efecto
primario de la
expansin

Efecto
secundario

Enfermedades

No codificante

Prdida de
funcin de la
protena

Control
traslacional,
sealizacin,
funciones
mitocondriales

FRAXA, FRAXE,
FRDA

No codificante

Alteracin de
funciones del
ARN

Interacciones
aberrantes
entre ARN y
protena

DM1, DM2,
FXTAS

Codificante

Alteracin de
funciones de la
protena

Transcripcin

HD, SCAs,
SBMA, DRLPA

Enero 2014

13

ENFERMEDADES TIPO 1

Ocurren en regiones del gen que codifican para

protenas con propiedades nuevas neurotxicas
La mayora = tripletes CAG, codifican para
tractos poliglutamina en protena; repeticiones
de corta extensin, herencia AD
Enfermedades progresivas neurodegenerativas
con inclusiones intraneuronales, a menudo
intranucleares
Tipos:
AD: Huntington, DRPLA, SCA 1,2,3,6,7 y 17
Ligada a Xr: atrofia muscular bulbar y espinal
(enfermedad de Kennedy)
Distrofia muscular culo-farngea: expansin de GCG con
tracto de polialanina en protena

Enero 2014

14

INESTABILIDAD DE TRIPLETES Y
ENFERMEDAD

Mecanismos:
Interrupcin

de secuencia CAG
Mecanismos de reparacin diferentes
Elementos que flanquean la secuencia
Metilacin CpG
Posicionamiento del nucleosoma y del punto de origen de la
replicacin

Diagnstico de recuento de tripletes repetidos anormales en

sangre perifrica:
No

toma en cuenta existencia de secuencias intermedias

No toma en cuenta amplificacin diferente en tejido cerebral

Enfermedad en triplete con escaso margen de amplificacin =

escaso margen para cambio en protena, protena ms
patolgica => ms letalidad
Enfermedad en triplete con amplio margen de amplificacin =
protena con mayor tolerancia a variacin => menor letalidad.
Enero 2014

15

ENFERMEDADES TIPO 2

Expansiones de CTG, GAA, GCC, CAG o CGG en

regin no codificante.
Ocasionan enfermedad por diferentes
mecanismos:
Procesamiento

aberrante del ARN, silenciamiento de

genes adyacentes (Steinert)
Asociacin de hipermetilacin que lleva a que el gen
no sea transcrito (FRAXA, FRAXE, epilepsia mioclnica
tipo 1)

Tipos:
AD: CTG en Steinert o distrofia miotnica tipo 1; CTG en
SCA 8; CAG en SCA 12.
AR: GAA en ataxia de Friedreich.
Ligada a Xr: GCC en FRAXA; CGG en FRAXE

Enero 2014

16

ENFERMEDAD DE FRIEDREICH

Ataxia recesiva ms frecuente, triplete GAA en cromosoma

9; inicio en adolescencia, ataxia y polineuropata;
demencia, miocardiopata, escoliosis asociado a
amplificaciones mayores

Maring, J. Physical Therapy, 2007

Enero 2014

17

EXPANSIN GAA RESPONSABLE DE

ATAXIA DE FRIEDREICH
Exn 1

Exn 2

6 - 40

66 - >1500
GAA

Gen FRDA, protena frataxina, secuencia repetida GAA con 6 a 40

repeticiones; ataxia con expansiones de 66 a ms de 1,000 genera
deficiencia de protena.
Frataxina: protena mitocondrial esencial que liga hierro.
97% con expansin de los dos alelos.
3% expansin de un alelo + mutacin puntual asociada.

Enero 2014

18

ENFERMEDAD DE FRIEDREICH
Padre y Madre no afectados
Portadores
15/135
Ana Mara
ataxia, neuropatas
sensitiva, diabetes,
escoliosis, demencia

19/148
Jorge
Ataxia y neuropata
sensitiva

756/500

198/243

1. Cul es el patrn de herencia?

2. Qu cuadro clnico
presentan los portadores?
3. Como aplicar el concepto de
Anticipacin en este caso?
4. Qu riesgo hay para los descendientes
de los afectados?

Enero 2014

19

ENFERMEDAD DE STEINERT
En edad de inicio:
cada vez menor

i: infancia
?

e in

cua
dro

Luca y Ramn, los hijos

Cuadro:
Miotona y
Debilidad marcada,
retardo mental,
Hipersomnia,
miocardiopata

i: 41 aos

c l n

Qu sucede con la
edad de inicio en
esta familia?
Qu sucede con el
cuadro clnico?
Qu podra pasar
con el nio por
nacer en la cuarta
generacin?

Ma
yor

En cuadro clnico:
cada vez ms
importante

ed a
dd

Cuadro:
Calvicie, miotona
y debilidad, BAV1

Me
nor

Oscar, el padre

i: 63 aos

ico

Cuadro:
Cataratas

icio

Jorge, el abuelo

Fotos con autorizacin

Enero 2014

20

ENFERMEDAD DE STEINERT

Disminucin de sntesis de la miotonincinasa no

explica cuadro clnico amplio
Mecanismo de toxicidad del ARN
DM1 (DMPK) y DM2 (ZNF9) tienen similitudes
bioqumicas y clnicas pero los genes respectivos
no tienen relacin funcional aparente
ARN forma inclusiones nucleares con tractos
expandidos
Asociacin de splicing alternativo anormal en
relacin con proteina muscleblind like (MBNL)
Desarrollo de modelo animal en ratones
Enero 2014

21

ATAXIAS AUTOSMICAS
DOMINANTES

Amplificacin anormal de tripletes repetidos

en muchas mutaciones SCA.
Secuencias CAG dan lugar a secuencia
poliglutamina en protena.
Poliglutamina en exceso: adquisicin de
nueva funcin txica.
Protena anormalmente plegada que genera
depsitos (cuerpos de inclusin) en
citoplasma o ncleo de neuronas.
Desencadena estrs oxidativo o apoptosis
prematura (funcin nueva y txica de la
protena).
Enero 2014

22

EXPASIONES RESPONSABLES DE
ATAXIAS DOMINANTES
5UTR

(CAG)
SCA12

Enero 2014

Exn codante

3UTR

(CAG)
(ATTCT)
(CTG)
Ataxias PoliQ
SCA10 SCA8
(SCA 1-3, 6, 7, 17)

23

ATAXIAS AUTOSMICAS
DOMINANTES

Diagnstico gentico disponible para 11

cuadros SCA de las 27 existentes.
Diagnostican el 75% de casos familiares.
Disponibles comercialmente: SCA 1, 2, 3, 6,
7, 8, 10, 12, 14, y 17, DRPLA.
Tambin disponible FA.
Servicio de Neurogentica INCN: SCA 3, SCA1,
SCA6
Ataxia dominante ms frecuente en el Per:
SCA10
Enero 2014

24

SCA 3 (MACHADO- JOSEPH)

Expansin de un tracto CAG, MJD1 locus 14q32.1; de 56 a

86 repetiones relacionado con enfermedad

Dos haplotipos ancestrales:

TTACAC: Islas Flores, relacionado con el 70% de casos
GTGGCA: Portugal

Ataxia dominante ms comn en el mundo

Protena ataxina 3

Takiyama et al 1993; Kawaguchi et al 1994

Enero 2014

25

DIAGNSTICO
MOLECULAR DE
SCA3
Alelo patolgico
40 repeticiones,
lmite superior normal

Paciente

Alelo normal

Enero 2014

Controles
sanos

26

ENFERMEDAD DE HUNTINGTON

Herencia autosmico dominante

Efecto fundador: mutacin en gen
de la Huntingtina en el
cromosoma 4, con triplete
repetido CAG (glutamina).
Efecto txico de la Huntingtina
con exceso de glutamina.
Movimientos involuntarios,
demencia subcortical, trastornos
psiquitricos.
Valle de Caete
Enero 2014

27

ENFERMEDAD DE HUNTINGTON

Expansin anormal del

triplete CAG, exn 1 del
gen HD, brazo corto del
cromosoma 4.

Protena huntingtina,
secuencia de
poliglutamina creciente.

Mutacin que da
ganancia de funcin con
prdida de las neuronas
espinosas del estriado.

> 39
36-39
< 36
Exn 1

Disfuncin cadena respiratoria

Radicales libres
Excitoxicidad
Alt. ubiquitina-proteosoma
Apoptosis

Mutacin Completa
Pre-mutacin
Normal
Gen EH (67 exones)

Neurodegeneracin
selectiva

Imgenes TAC y corte: Departamento de Neuropatologa, INCN

Enero 2014

28

Poliglutamina

ENFERMEDAD DE HUNTINGTON

Poblacio
n en
Riesgo*

12

Pre
mutacin

Sanos
27
35 36
No Portadores (Sanos)

Mutacin

39 40
Portadores (Enfermedad)

No afectado

12-35 repeticiones CAG

*Poblacin Reservorio en Riesgo

27-35 repeticiones CAG

Premutacin (Penetrancia Reducida)

36-39 repeticiones CAG

Mutacin (Penetrancia Completa)

Semaka A y Col. American Journal of Medical Genetics . 2009
Enero 2014

40

repeticiones CAG

29

+
+

N=153

60

R = -0.6919, P=0.00

40

50

Correlacin inversa
es significativa,
a mayor numero
de tripletes, la
edad de inicio es
ms precoz

30

Nmero de Repeticiones CAG

70

CORRELACIN ENTRE
EDAD DE INICIO Y ALELO MAYOR

20

40
edad_inicio

80

Valor
Fittedajustado
values

alelo_mayor

Registro de EH Servicio de Neurogentica INCN

60

Enero 2014

30

CAMBIO DE CONDICIN CLNICA

POR GNERO
Curva de sobrevida de Kaplan-Meier

0.75

1.00

p=0.02
Kaplan-Meier survival estimates, by sexo

El cambio de
condicin clnica es
significativamente
mas temprano en
varones que en
mujeres

0.50

N=75

0.00

0.25

N=78

20

40
analysis time
F

Femenino

Registro de EH Servicio de Neurogentica INCN

60

80

Masculino

Enero 2014

31

DISTRIBUCIN DE PERSONAS
PORTADORAS SEGN SU NACIMIENTO
Lima

34.4 %

Caete

21.6 %

Junn

9.4

Huancavelica

La libertad

Ancash

4.4

Ayacucho

4.4

Cajamarca

3.3

Apurimac

2.2

Arequipa
Tacna

2.2
1.6

C. de Pasco

RegistroEnero
de EH2014
Servicio de Neurogentica INCN

%
1.1

Ica

1.1

Amazonas

0.5

Ucayali

0.5

Loreto

0.5

M. de Dios

0.5

Piura

0.5

Cusco

0.5

32

%
%

ENFERMEDAD DE HUNTINGTON
Cuadro: Corea
i: 52 aos
42 tripletes

Cuadro:
Psicosis,
i: 40 aos

Corea, Psicosis,
i: 37 aos
47 tripletes

Corea, Psicosis,
demencia
i: 32 aos
45 tripletes

57 tripletes
Parkinsonismo, corea y
retardo
i: 07 aos i: 15 aos

90 tripletes 82 tripletes

1. Cul es el patrn de Herencia?

2. Hay anticipacin en este caso?
Enero 2014

33

ENFERMEDAD DE HUNTINGTON
Cuadro: Corea
i: 52 aos
42 tripletes

Cuadro:
Psicosis,
i: 40 aos

Corea, Psicosis,
i: 37 aos
47 tripletes

Corea, Psicosis,
demencia
i: 32 aos
45 tripletes

57 tripletes
Parkinsonismo, corea y
retardo
i: 07 aos i: 15 aos

90 tripletes 82 tripletes

1. Siempre hay aumento en el nmero de tripletes?

2. Cundo se presentan casos infantiles o juveniles?
Enero 2014

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ORIENTACIN GENTICA

Problema particular:
Inicio

luego de tener descendencia

Anticipacin e impresin de genoma
Ausencia de centros especializados y de
seguimiento sistematizado
Desorganizacin familiar

Necesidad sentida por familias, en especial

generaciones ms jvenes y con acceso a
informacin
para saber, para no pasarle esto a mis
hijos, para saber si los voy a poder cuidar
Enero 2014

35

Muchas Gracias !!

Enero 2014

36