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Identificao de

Enterobactrias.

Dra. Tnia Mara Ibelli Vaz


Pesquisador Cientfico
Instituto Adolfo Lutz - So Paulo

Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia
Isolamento e identificao de enterobactrias
Aspecto das colnias
Identificao Bioqumica ( cultura pura)
Reao de VM e VP
Escherichia coli
Salmonella
Shigella
Klebsiella
Enterobacter
Serratia
Citrobacter
Proteus - Providencia - Morganella
Fluxograma BGN OXIDASE
Consideraes finais

ndice

Famlia Enterobacteriaceae

Introduo
Definio

Bacilos Gram negativos


AAF / Fermentadores da glicose
Oxidase negativa e catalase +
Mveis / imveis
Cresce em meios comuns

Habitat
Plantas, solo, gua, intestino do homem e animais

Famlia Enterobacteriaceae

Introduo
Nomenclatura e Classificao

Mtodos Fenotpicos
Moleculares novas espcies
reclassificao

Classificao
Gneros ( 42)
Espcies ( centenas )
biotipos e sorotipos
Complexos

Identificao de Enterobactrias

Classificao - patogenia
- Enteropatgenos
- Infeces nosocomiais - espcies importantes
- Outras espcies - raras em material clnico
isoladas em : meio ambiente
plantas
animais

Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia

Enterobactrias - principal componente da flora intestinal normal


do homem.
Infeces -intestinal, feridas e trato urinrio
Abcessos, pneumonia, meningites
Infeces nosocomiais

Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia

Infeces intestinais
Caractersticas

normalmente na comunidade

DTA doena transmitida por alimento

surtos / casos isolados

hospitalar
Patgenos entricos clssicos
Salmonella spp
Shigella spp
E.coli - categorias diarreiognicas
Yersinia enterocolitica

Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia

Infeces extra-intestinais
Comunidade
Hospitalar
Qualquer espcie
Fatores de risco:
Paciente
Veculos de transmisso
Alimentos contaminados

Espcies mais comuns


Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella oxytoca
Proteus mirabilis
Enterobacter spp
Salmonella ( sorotipos)
Serratia marcescens
Citrobacter spp
Providencia spp

Famlia Enterobacteriaceae
ISOLAMENTO E IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS

Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN


( 18 a 24h 1 mm de dimetro).
1- Exame macroscpico da cultura:
Aspecto morfolgico das colnias ( AS, MC,SS, TSA )
Tempo de crescimento e tamanho da colnia
Observar pureza da cultura
2-Exame microscpico da cultura:
Gram: tamanho, morfologia, reao tintorial, etc

Aspecto das colnias

Agar MacConkey

Aspecto das colnias

Salmonella.

E.coli

E.cloacae

Salmonella.

E. coli

E. cloacae

Aspecto das colnias

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Meios presuntivos
IAL (Pessoa e Silva)
EPM-MILI
TSI

IAL

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica
Srie completa - 47 testes

Provas complementares:
Fermentao de acares
LDC- ODC - ADH
CiSi
Pesquisa de enzimas
DNase
gelatinase,lipase, NAR, ONPGase

Gram

Oxidase

VM e VP

Famlia Enterobacteriaceae
Reao de VM e VP

Enterobactrias VP+

Enterobactrias VP -

Maioria das espcies dos outros Gneros


Salmonella
Shigella
E.coli
Proteus
Morganella
Providencia
Citrobacter
Kluyvera

Enterobacter
Klebsiella
Serratia

Escherichia coli

Diagnstico Diferencial

lac+
CISI -

K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+)


Citrato de Simmons

Prova

Citrobacter amalonaticus e C. diversus


( LDC-/motil.+CiSi+)
Marcadores Epidemiolgicos
Infec. Intestinais
Sorotipagem
Fatores de virulncia
Infec. Extra-intestinais
Sorotipagem
Met. moleculares

Glicose+/Gs+/sacarose+/urease*H2STDAindol+
LDC+/Motilidade+/- Aeromonas

Salmonella

Diagnstico diferencial

Citrobacter spp ( H2S + )


Proteus
Prova de
Fermentao

glicerol

Marcadores Sorotipagem
Fagotipagem
Moleculares

Glicose+/gs v
sac H2S +
ureaseTDA indol LDC +
Mov. +

CiSi+
Lac -

Shigella

Diagnstico diferencial

E.coli ( LDC - / Mov.-)


Lactose
Ci Christ.
Acetato Trab.

Citrato
Sdio

Marcadores Sorotipagem
Met.moleculares

Glic.+ /gs sac urease TDA H2S


indol v
LDC Mov. -

CiSi Lac -

Klebsiella

Diagnstico diferencial

Enterobacter ( LDC+ / Mov.-)


ADH
ODC
Fermentao

Marcadores Sorotipagem
Met. moleculares

Lac+
CiSi +

Enterobacter

Diagnstico diferencial
Enterobacter
Klebsiella
Serratia
LDC,ODC,ADH
Motilidade
DNase
Fermentao

E.cloacae
Marcadores Sorotipagem
Met. moleculares

Lac+
CiSi+

Serratia

Espcies de Serratia

LDC,ODC,
malonato,
fermentao , pigmento

Marcadores: Sorotipagem
Met.moleculares

Glic.+ / gssac. urease H2S TDA indol LDC +


Mov. +
DNase +
Gelatinase +
Lipase +

CiSi +
Lac -

Citrobacter

Espcies de Citrobacter

ODC, indol, H2S malonato


fermentao

Glic.+ / gssac =V
CiSi +
urease Lac +
H2S = V
TDA indol = V
LDC Mov. +

Proteus - Providencia - Morganella

Diagnstico diferencial
Proteus
Providencia
Espcies H2S +
BGN NF
Swarming
TDA, H2S, ODC,
gelatinase,
fermentao

Glic.+/ gs sac. urease +


TDA +
H2S = V
indol = V
LDC Mov. +
CiSi +
Lac +

Fluxograma

BGN Oxidase
Lac +

Lac -

gar Mac Conkey

IAL

IAL

E.coli
Enterobacter
Klebsiella
Kluyvera
Citrobacter

Shigella
Salmonella
Serratia
Proteus
Providencia
Morganella

Enterobacter
Klebsiella
Kluyvera
Citrobacter

VP +

Salmonella
Serratia
Proteus/Prov.(V)
+

Cit. Simmons

Cit. Simmons
-

E.coli

Shigella
Morganella

IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS

Enterobactrias em microbiologia clnica Poucas espcies


Espcies incomuns , novas espcies, espcies atpicas podem ocorrer
(isoladas de material clnico, ambiente, plantas e animais)

PROBABILIDADES

Tratar-se de uma espcie rara


Cepa contaminada
Uma ou mais testes no adequados na identificao ( turvao)
Manipulao errada ( concentrao do inculo)
Composio e quantidade do meio ( substrato presente)
Controle de Q

IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS

O que fazer?
Checar tudo:
Pureza da cultura
Repetir todos os testes no mesmo sistema ou utilizando
meios anteriormente utilizados
Repetir todos os testes em outro sistema de
utilizar partidas diferentes do meio.
Encaminhar para laboratrios de referncia

os

identificao ou

Consideraes finais

Importncia da caracterizao das espcies


Evitar falsos surtos
No identificao do surto
Ateno para cepas atpicas
Ateno para espcies raras
Ateno para pureza das culturas