HISTRIA DO DNA

GRANDES QUESTES:
Qual o seu aspeto?
Como funciona?
Como que a sua estrutura e funo foi
determinada ?

A descoberta do DNA ocorreu em 1869 e foi feita

pelo bioqumico alemo Johann Friedrich Miescher1
(1844 1895). Miescher buscava determinar os
componentes qumicos do ncleo celular e usava os
glbulos brancos contidos no pus para suas
pesquisas. Os glbulos brancos eram um bom
material pois so clulas que apresentam ncleos
grandes e fceis de serem isolados do citoplasma.
Alm disso, o ps era muito fcil de se conseguir na
poca em ataduras usadas em ferimentos.

Analisando os ncleos, Miescher descobriu a

presena de um composto de natureza cida que
era desconhecido at o momento. Esse composto
era rico em fsforo e em nitrognio, era desprovido
de enxofre e resistente ao da pepsina (enzima
proteoltica). Esse composto, que aparentemente
era constitudo de molculas grandes, foi
denominado, por Miescher, nuclena. Essa
substncia foi isolada tambm da cicatrcula da
gema do ovo de galinha e de espermatozides de
salmo.

A partir da, o material mais utilizado para

estudo e obteno do cido nucleico passou
a ser o timo de bezerro, cujo tecido
apresenta clulas com ncleos grandes. Foi
descoberto que a degradao do cido
nuclico do timo, chamado de cido
timonuclico, liberava quatro tipos de bases
nitrogenadas:

- dois tipos de bases pricas: adenina e guanina

- dois tipos de bases pirimdicas: citosina e timina

Foi demonstrado tambm que um outro

produto da degradao do cido nucleico era
um glcido com 5 tomos de carbono, uma
pentose, no caso uma desoxirribose. O
fsforo estava presente na forma de um
derivado do cido fosfrico, fosfato. Tinha-se
at o momento que o cido nucleico era
composto de bases nitrogenadas (pricas e
pirimdicas), de um glcido (pentose) e de
fosfato.

Em 1890, foi descoberto em levedura (fermento) um outro tipo

de cido nucleico, que possua uracilo ao invs de timina e
ribose ao invs da desoxirribose. Dessa maneira, foram
caracterizados dois tipos de cidos nucleicos, de acordo com o
glcido que possuam:
- cido ribonuclico (RNA)
- cido desoxirribonuclico (DNA)
Em 1912, Phoebus Levine (1869 1940) e Walter Jacobs (1883
1967) concluram que o componente bsico dos cidos
nuclicos era uma estrutura composta por uma unidade que se
constitua numa base nitrogenada ligada a uma pentose, e esta
por sua vez, ligada a um fosfato. Esta unidade foi denominada
de nucleotdeo.

Um
cido nucleico
seria
ento
uma
molcula composta por
vrios
nucleotdeos
unidos entre si, ou seja,
um polinucleotdeo.

Histria: DNA como material

hereditrio

A hiptese de que o DNA era a molcula que

continha as instrues hereditrias foi
levantada anos aps a descoberta de sua
existncia no ncleo das clulas. Duas
clssicas experincias contribuiram para isso.
A
primeira
delas
foi
a
identificao do material hereditrio em bactri
as
, que levou concluso, em 1944, de que o
princpio transformante das bactrias era o
DNA.

Identificao do material hereditrio

em bactrias

A primeira evidncia de que o DNA era o material hereditrio foi

obtida atravs de experincias realizadas com o pneumococo
Streptococcus pneumoniae.

1. Forma virulenta que causa a morte em

camundongos
por
pneumonia:
bactrias
encapsuladas, que crescem em meio de cultura
slido e formam colnias convexas lisas,
brilhantes, cremosas e com bordos regulares,
chamadas de colnias S (do ingls, smooth, liso).
2. Forma no virulenta, que no causa
pneumonia em camundongos: Variante mutante,
originada a partir da forma virulenta (S), mas que
no apresentam cpsula e que crescem em
meio slido formando colnias achatadas,
rugosas, opacas, friveis(Que pode reduzir-se
facilmente a fragmentos ou p. ) e com bordos
irregulares, chamadas de colnias R (do ingls,
rough, rugoso).

Streptococcus pneumoniae

Clonia lisa com cpsula

Colnia rugosa

Deste facto, podia-se ter

duas explicaes:
1. As bactrias S mortas
haviam ressuscitado, o que
seria um absurdo.
2. As bactrias R haviam
sido
transformadas
em
bactrias S por algum tipo de
substncia
termoestvel
libertada pelas bactrias
mortas.
Essa substncia foi chamada
de princpio transformante
e essa transformao das
bactrias R em S, foi
chamada de transformao
bacteriana.

O princpio transformante

No entanto, sua elucidao s aconteceu em 1944, aps anos

de estudos de Oswald Avery (1877 1955) e seus
colaboradores. Eles descobriram que a transformao das
bactrias ocorria tambm in vitro (em um meio de cultura, fora
do corpo do camundongo), e que, em uma cultura com bactrias
R e bactrias S (mortas pelo calor), apareciam clulas S vivas.

Em 1933, James Alloway (1900 1954) descobriu que

um extracto de bactrias S, tinha a capacidade de
transformar bactrias R em S. Descobriu tambm que
se lcool fosse adicionado ao extracto, um precipitado
espesso e viscoso se formava retendo a capacidade
transformante. Acreditava-se at o momento que o
poder transformante era das protenas. A partir de
ento, tinham-se novas perspectivas para a
purificao do princpio transformante.

Oswald Avery, Colin Macleod (1909 1972) e

Maclyn McCarty (n.1911) isolaram, a partir de 75
litros de Streptococcus, 25 miligramas de um
extracto com altssimo poder transformante. Eles
trataram esse extracto com diferentes substncias:

- amilase (enzima que degrada polissacardeos)

- protease (enzima que degrada protenas)
- ribonuclease (enzima que degrada RNA)
- dnase (enzima que degrada DNA)

O nico tratamento que fez o extracto perder

completamente o seu poder transformante foi o
tratamento com dnase.

Em 1952 Alfred Hershey e Martha Chase realizaram uma srie de

experincias para confirmar que o ADN a base do material gentico
(e no as protenas)

I
dentificao do material hereditr
io de fagos

virus bacterifago T2: Organismo muito simples, constitudo por

uma molcula de DNA envolvida por uma cpsula protica. O seu
ciclo de vida era bem conhecido na poca.

Um nico vrus pode infectar uma bactria e lis-la em cerca de 30

minutos, liberTando centenas de novos vrus que so cpias do fago
iniciante. A dvida na poca era qual dos dois componentes do vrus,
a cpsula de protenas ou o DNA, constituiam o material hereditrio.

Produzindo vrus marcados por radioatividade

marcando o DNA: Eles cultivaram bactrias em meio de

cultura com fsforo radioactivo, o que fez com que o DNA
das bactrias ficasse radioactivo. Ento, infectaram essas
bactrias com vrus, que se reproduziram e geraram novos
vrus que passaram a ter o DNA radioactivo.

marcando a cpsula proteica: Eles cultivaram bactrias

em meio de cultura contendo enxofre radioactivo. Assim,
as bactrias produziram aminocidos cistena e metionina
com o enxofre radioactivo, e suas protenas,
consequentemente, ficaram radioactivas Essas bactrias
foram infectadas com vrus, que se reproduziram e
geraram novos vrus que passaram a ter sua cpsula
proteica radioactiva.

Verificou-se que grande parte do

fsforo radioactivo que estava
nos fagos infectantes, era
transferida para o interior das
bactrias infectadas e aparecia
posteriormente nos novos fagos
gerados com a lise das bactrias.
J a radioactividade devida ao
enxofre tinha um destino diverso,
ela no penetrava na bactria
infectada e nem aparecia nos
novos fagos.

https://www.youtube.com/watch?v=fzzMYM3
0v0E

http://www.biomol.org/wp-content/assets/animacoes/infeccao1.htm

A descoberta de Chargaff

No perodo de 1949 a 1953, estudos realizados no

laboratrio de Erwin Chargaff (1905-2002), deram
uma contribuio importante para a elucidao da
estrutura do DNA.

Chargaff e colaboradores buscaram quantificar cada

um dos tipos de base nirogenada do DNA (adenina,
timina, citosina e guanina) de vrias espcies. Para
isso utilizaram mtodos de cromatografia..

(Processo de separar gases, lquidos ou slidos, em uma mistura

ou soluo, por adsoro. Enquanto a mistura flui sobre o meio
adsorvente, cada substncia vai-se dispondo nesse meio em nveis
ou faixas diferentes, muitas vezes coloridas, e depois
recuperveis.)

Resultados de Chargaff

Concluses
A composio em DNA variava de uma espcie para outra, mas era
constante dentro da mesma espcie

- Enquanto a proporo tre as bases varia entre as espcies, o

total de base pricas (A + G) igual ao total de bases pirimdicas
(T + C)

Anlises por difraco de

raios X

as fotografias obtidas por difrao de raios-x

indicavam estrutura helicoidal do DNA.
A seguir podemos ver uma imagem obtida
pela difrao de raios-x.

Figura 1: Reproduo parcial da figura original:

http://home.sandiego.edu/~cloer/bio182s02/dna_xray.gif

A descoberta de Watson e
Crick

Segundo o modelo proposto por Watson e

Crick, a molcula de DNA constituda por
duas cadeias polinucleotdicas dispostas em
hlice ao redor de um eixo imaginrio,
girando para a direita (uma hlice dupla).

Figura 5 - http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/books/bookres.fcgi/mga/ch2f3.gif

As
duas
cadeias
polinucleotdicas
mantm-se
unidas por pontes de hidrognio,
que se estabelecem entre pares
de bases especficos:

A ligao entre as duas cadeias

faz-se por pontes de hidrognio
que se estabelecem entre as
bases azotadas, verificando-se
uma complementaridade.

A adeninas emparelha com a

timina( por duas pontes de
hidrognio), enquanto que a
guanina s se liga citosina(por
trs pontes de hidrognio).

Por esta razo diz-se que as

bases so complementares.

Figura 2:
http://www.ocf.berkeley.edu/
~bsj/images/dna.gif

Figura 4 - http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/books/bookres.fcgi/mga/ch2f2.gif

ESTRUTURA DO DNA
- um polmero no ramificado
- Formado por monmeros chamados de nucleotdeos
- Cada nucleotdeo contm os seguintes elementos:

1) Estrutura primria
NUCLEOTDEO

1 Base orgnica nitrogenada

(Por que contm nitrognio na sua formao)
1 Acar chamado
DESOXIRRIBOSE
Possui 5 Carbonos na
sua molcula

5C
1C

4C
3C

2C

1 grupo fosfato (PO4-)

As Bases Nitrogenadas podem ser de dois tipos:

PRICAS
H
C
N

PIRIMDICAS
N

C
CH

HC

C
N

H
C

N
H

HC

CH
CH

ESTRUTURA QUMICA DA MOLCULA DO DNA

5
Desoxirribose

Carbono
5

CH2 O

Base
Nitrogenada

H H

Carbono
3

H
O H

Ligao
Fosfodieste
Grupo fosfato +
Grupo hidroxila
(OH) do Carbono 3

O-

O
CH2 O

Desoxirribose

Base
Nitrogenada

H H
H

H
O
O

P
O

H
O-

Como a ligao
entre uma desoxirribose
e outra desoxirribose
s pode ser feita
quando um grupo
fosfato liga-se no
Carbono 5do
primeiro acar e
no Carbono 3do
segundo acar dizemos
que a molcula
de DNA cresce em
direo 5 3
3

Antiparalelismo
Os nucletidos que formam uma
cadeia polinucleotdica ligam-se entre
si atravs de ligaes covalentes (tipo
fosfodister), que se estabelecem
entre o grupo fosfato e os carbonos 3
e
5
das
pentoses.
Cada
cadeia
polinucleotdica
apresenta nas extremidades uma
ponta livre, uma designada 3 e a outra
5.
Cada cadeia desenvolve-se em
sentidos opostos, iniciando-se na
extremidade 5 e terminando na
extremidade
3.
Assim extremidade 5 de uma
cadeia ir corresponder a extremidade
3
da
outra
cadeia.
Por esta razo as cadeias so
designadas antiparalelas.

Complementariedade
Cada base de uma fita pareada com a base complementar da outra
fita

A Dupla Hlice
Fatores que estabilizam a dupla
hlice:
interaes hidrofbicas Entre as bases
nitrogenadas
foras de van der Walls
pontes de hidrognio
Entre os grupos
fosfato do DNA e
interaes inicas
os ctions (Mg2+)
presentes na
soluo fisiolgica

A Dupla Hlice
A dupla hlice apresenta dois
tipos de sulcos aos quais se
ligam as protenas da cromatina
Sulco menor

Sulco maior

http://www.johnkyrk.com/DNAanatomy.pt.html
http://www.dnai.org/timeline/