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DE
MICROORGANISMOS A
BAJAS T
Blacido Espinoza Leonardo
Graos Fernandez Aaron
Aislamiento primario
Microorganismo
viable
(gentica/fenotpo)
cultivo
Tipo de propgulo
Estado fisiolgico
Reactivacin
Almacenamiento
Proceso de conservacin
Liofilizacin (freeze-drying)
CRIOCONSERVACIN
Crioconservacin es la conservacin de
material
biolgico
muy
bajas
temperaturas
Rango -20 C a -196 C (nitrgeno
lquido)
El nitrgeno lquido es la temperatura
prctica mas baja disponible. A la
temperatura de equilibrio, la difusin
molecular es extremadamente lenta y la
probablilidad de que ocurran reacciones
qumicas es prcticamente nula
CRIOINJURIA
El proceso de congelamiento y descongelamiento produce cambios
en las cluas que pueden resultar letales
Los procesos perjudiciales son: formacin de cristales de hielo,
exosmsis, aumento de la solubilidad de gases, deshidratacin,
aumento de la concentracin de osmolitos, disminucin del pH,
alteraciones
de
la
actividad
enzimtica,
acumulacin
de
Hielo intracelular
Dao mecnico
CRIOPROTECCTORES(CPs)
Son sustancias que protegen a las bacterias que
se congelen lentamente mediante uno o mas de los
sig mecanismos:
Eliminando las elevadas concentraciones de
Reduciendo el encogimiento a una determinada t
Minimizando la formacin de hielo
La combinacin de varios crioprotecctores puede
producir un efecto sinrgico, provocando un
incremento de la viabilidad bacteriana.
CRIOPROTECCIN
El tipo de proteccin que ejerce el CPs depende de
su permeabilidad
Todos los CPs son altamente hidroflicos
CPs que permean totalmente ligan agua intracelular
y reducen el efecto soluto
CPs semipermeables; con bajo peso molecular,
forman entre la pared y la membrana celular una
capa que protejen la clula del dao mecnico.
Desplazan el agua intracelular evitando la formacion
de cristales de hielo.
principalmente
Principios de la liofilizacin
muestra +
protectores
en ampollas
manifold
-70 C - 5 C
congelamiento
etilenglicol + hielo seco (- 40 C)
etanol + hielo seco (-70 C)
trampa de agua
La muestra colocada en una ampolla estril con un plug de algodn, se congela entre
- 40 C y -70 C. Una vez colocada la muestra en el manifold del equipo se comienza
con el vaco y se retira el enfriamiento. La temperatuyra sube hasta -5 C. A esta
temperatura y con un vaco entre 30 y 60 militorrs, el secado es rpido. El tiempo es
variable y depende del volumen de muestra. Al finalizar el proceso se sella la ampolla
al vaco
L-Drying
Muestra
Impregnacin en
soporte
Ventajas
Desventajas
Agar
0.5-2
Aceite mineral
2-20
Mtodo
Congelamiento
4-5
N lquido
infinito
Suministro regular de N
lquido
Liofilizacin
15-20
Agua
1-5
L-drying
3-10
estabilidad gentica?