Bacteriología

MICROBIOLOGIA
Generalidades de microbiologa 1
1.1- MICROBIOLOGA
MICROBIOLOGA
Estudio de microorganismos:
Visibles a travs del microscopio

Tamao en m (10-6 m)
MICROBIOLOGA
CLASES DE MICROORGANISMOS
Bacterias
Hongos
Virus
Parasitos
BACTERIOLOGA
MICOLOGA
VIROLOGA
PARASITOLOGA
MICROORGANISMOS
Ejemplos de patologas
BACTERIA
Infecciones urinarias, Diarrea

Tuberculosis, Difteria, Tetanos
HONGOS
Micosis, Tinea
VIRUS
HIV, Hepatitis C,B, Rubeola
PARASITOS
Toxoplasmosis, Malaria, Tenia

(gusanos en cinta)
MICROORGANISMOS
Hongos :
Hongos miceliales
(dermatofitos, hongos filamentosos)
Ej : Penicillium, Aspergillus
Levaduras
Ej: levaduras para fermentacin (Saccharomyces),
polvo de hornear
Ej.: Candida, Cryptococcus
Tamao: 10 m
MICROORGANISMOS
Virus:
- Tamao < 0.1 m
- DNA o RNA
- Sin enzimas: necesitan las del husped (Ojo:
retrotranscriptasa)
- Reproductcin por replicacin
Bacterias:
- Tamao: 1 m
- DNA y RNA
- Enzimas: biosntesis
- Reproduccin por fisin
1.2 ESTUDIO DE BACTERIAS
DONDE?
En el ambiente :
Saprfitos
En humanos :
Flora Normal
= Flora Comensal
Donde ?
En el medio ambiente:
Suelo
Aire
Agua
Alimentos
DONDE ?
EN PERSONAS SANAS
NO
SI
Boca
Orejas
Tracto respiratorio
Tracto intestinal
Tracto genital
Piel....
Flora Normal:
Contacto con ambiente
Sangre
Lquido cefaloraqudeo
(LCR)
Orina
Siempre esteril :
Cavidades cerradas
PATOGENIA
En pacientes infectados:
Patgenos estrictos:
Multiplicacion y diseminacin dentro del organismo

Resistencia al sistema inmune
Secrecin de enzimas: lesiones en tejidos del
husped
Secrecin ocasional de toxinas
PATOGENIA
Bacterias toxignicas
La bacteria no abandona el sitio de infeccin. Es su
toxina la que se disemina en el organismo y causa la
enfermedad
Ej.:
- Clostridium tetani (tetanos)

- Corynebacterium diphteriae (difteria)
Intoxicacin alimentaria:
- Staphylococcus aureus
- Clostridium botulinum
Botulismo: ingestin de alimentos en los que C. botulinum ha
desarrollado su toxina (no eliminatada en el tracto digestivo)
paralisis despus de ataque neuromuscular
PATOGENIA
Patgenos oportunistas:
Qu bacterias?
bacterias
Bacterias Saprfitas o de flora normal
Generalmente no patgenos
Cundo?
Immunodepresin del husped
Rotura de la barrera natural
Ej : E. coli, presente en flora normal y potencial causante de

infecciones urinarias, septicemia
PATOGENIA: EJEMPLOS
BACTERIAS PATOGENAS
FLORA NORMAL
CAVIDAD OROFARNGEA:
Estreptococos,
Enterococos
Neisseria
Corynebacteria
Anaerobios...
Streptococcus A, Neumococos
Corynebacterium diptheriae
Staphylococcus aureus
Haemophilus influenzae
TRACTO DIGESTIVO:
Enterobacteriaceae
Enterococos
Levaduras
Anaerobios...
Salmonella, Shigella
E. coli, Yersinia, Campylobacter
Vibrio cholerae
Toxina : Clostridium, S. aureus
PATOGENIA
FLORA NORMAL
BACTERIAS PATOGENAS
PIEL:
Staphylococcus epidermidis
Corynebacteria
Propionibacterium acnes...
Streptococcus A
Pasteurella
Bacillus...
CAVIDADES GENITALES:
Lactobacillus
Anaerobios
Flora cutnea...
(Mycoplasma)
Gonococos
Streptococcus B
Gardnerella vaginalis
Treponema pallidum
Haemophilus, Chlamydia...
MORFOLOGA
COCOS
BACILOS
COCO-BACILOS
CARACTERSTICAS DE AGRUPAMIENTO
COCOS
diplococos
grupos
cadenas
BACILOS
diplobacilos
cocobacilos
ESTRUCTURA
capsula (facultativa)
membrana citoplasmtica
ribosomas
Pared
celular
flagelos
(facultativos)
citoplasma
DNA
MOVILIDAD
1- Sin flagelos:
Bacterias inmviles
2- Un flagelo:
bacterias mviles
Movimiento:
3- Muchos flagelos:
bacterias mviles
Movimiento:
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES
Requerimientos bsicos
Para la sntesis de los distintos constituyentes de la bacteria
C, N, O, H, sales minerales...
Requerimientos de azcares
Para los requerimientos energticos de la bacteria
glucosa , lactosa
Requerimiento de factores de crecimientos

Para el desarrollo de las bacterias de difcil crecimiento
vitaminas, aminoacidos...
REQUERIMIENTOS
RESPIRATORIOS
Oxgeno requerido
Menor cantidad de O2
requerida
Sin oxgeno
CO2 requerido
Aerobios
Microaerfilos
Anaerobios
Capnfilos
MULTIPLICACION
Division cada
20 minutos
MULTIPLICACION
Velocidad de multiplicacin depende de la temperatura:
Velocidad
Temperatura
4C
37C
65C
1.3 EL LABORATORIO DE
BACTERIOLOGA CLNICA
OBJETIVO
Encontrar el tratamiento adecuado para el

paciente
?
Cmo?
Aislamiento de la bacteria responsable de la

infeccin
Identificar esta bacteria

Probar la resistencia a los diferentes antibiticos
LOS DIFERENTES PASOS EN EL

DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
Recoleccin de la muestra
Examen microscpico
Cultivo
Identificacin
Tests de sensibilidad antibitica
RECOLECCION DE LA MUESTRA
RECOLECCIN DE MUESTRA
MUESTRA
MODO DE
RECOLECCIN
PATOLOGA
Orina
Infecciones urinarias
Heces
Diarrea
Intoxicacin
alimentaria
Genital
Hisopado
Vaginitis, cervicitis,
prostatitis,
uretritis,ETS
Supuracin
Hisopado o jeringa
Absceso, lquido
peritoneal,
Infecciones de piel
LCR= Lquido cfalo-raqudeo

Muestra polimicrobianas:
Muestras :
cutaneas
digestivas
vaginal, uretral
Tracto respiratorio...
Observacin de muchos tipos bacterianos
Flora normal +
Patgeno
Muestras monomicrobianas:
Muestras : LCR, sangre, orina
Observacin de un nico tipo bacteriano
Slo patgeno
Condiciones de recoleccin
Uso de material estril

Desinfeccin del sitio de recoleccin antes de la
toma de muestra
(Ej: Limpiar localmente antes de recolectar la muestra de orina)
TRANSPORTE DE MUESTRAS
Inocular la muestra inmediatamente

o
Usar medio de transporte
POR QU?
Las bacterias son microorganismos vivientes! Es

necesario:
1- Mantenerlos viables
2- Evitar su multiplicacin
CUNDO? Los laboratorios que estn lejos del sitio de
recoleccin: recoleccin al pie de la cama del paciente

TRANSPORTE DE MUESTRAS
Si la inoculacin en el medio de cultivo no es inmediata,
Almacenamiento de las muestras durante el transporte:
4C
Orina, heces
37C y/o medio de transporte
Muestras genitales, LCR, sangre, pus
?
Sin multiplicacin
bacteriana
Posibilidad de
bacterias lbiles
Posibilidad de
bacterias
anaerobias
El medio de transporte previene la desecacin de las muestras

EXAMEN MICROSCPICO
EXAMEN MICROSCPICO
1 Examen directo
Primer paso
1 gota entre porta y cubreobjeto :

Lente de x 40, (seco)
INTERES:
Presencia y conteo de bacterias

Morfologa y caracteristicas de agrupamiento
Movilidad
Citologa: observacin de clulas
Ej.: Leucocitos (signo de infeccin)
EXAMEN MICROSCPICO
2 Tincin de GRAM
Es la tincin ms comnmente usada en bacteriologa
Usada para clasificar bacterias

Gram +
Violeta
Gram -
Rosa
EXAMEN MICROSCPICO
Tincin de Gram: Principio
Basado en la diferencia de permeabilidad de la pared celular bacteriana
1 Violeta de Genciana o Cristal - Violeta

Atraviesa la pared celular y colorea toda la bacteria
2 Solucin iodada o Lugol

Favorece la fijacin del colorante
3 Decoloracin con alcohol acetona

Bacterias Gram (-) pierden su color
Bacterias Gram (+) permanecen violetas
4 - Fucsina o safranina
Coloracion de bacterias Gram (-) en rosado
Re
Objetivo x 100 con aceite de inmersin

EXAMEN MICROSCPICO
3 Otras tinciones:
Coloracin con azul de metileno
Para visualizar bacterias intraleucocitarias

Ej : gonococos
Giemsa
Para parsitos sanguneos o intracelulares
Ziehl - Neelsen
for Mycobacteria
Naranja de acridina
Fluorescencia para muestras con bajo recuento
bacteriano
CULTIVO
CULTIVO
Para obtener un crecimiento bacteriano, es
necesario:
Cumplir con los requerimientos bacterianos en
lo que se refiere a:
Agar Nutritivos
Atmsfera correcta
Temperatura correcta
CULTIVO
Eleccin del medio de cultivo correcto:

Depende de la bacteria que ser buscada
depende de la muestra
?
Medio bsico?
Medio
enriquecido?
Medio
Cromognico?
Medio Selectivo?
CULTIVO
Diferentes tipos de medios de cultivo
Medio bsico:
bsico
nutrientes mnimos
Medio enriquecido:
enriquecido
medio bsico+ factores de

crecimiento (Ejemplo: sangre)
Medio selectivo:
selectivo
Adicin de antibiticos u otros
Medios cromognicos:
cromognicos Adicin de sustratos cromognicos
que conducen a la aparicin de
colonias coloreadas
Los medios pueden ser selectivos y enriquecidos, o selectivos y
cromognicos
CULTIVO
Crecimiento en medio slido:
En una placa
Las bacterias inoculadas en una superficie de agar nutritivo
se multiplicarn y formarn una agrupacin visible al ojo
desnudo:
colonia = 1 milln de bacterias
= 20 generaciones
PARA AISLAMIENTO
CULTIVO
Crecimiento en medio lquido:
Caldo
Las bacterias son colocadas en un caldo nutritivo donde se
multiplicarn, y se observar un enturbiamiento en el medio
(visible al ojo desnudo).
Los caldos de cultivo no permiten diferenciar un crecimiento
polimicrobiano de uno monomicrobiano.
PARA ENRIQUECIMIENTO
Ej.: Caldo cerebro corazn, caldo tripticasa soya...
CULTIVO: Ejemplos
Orina :
CPS ID 3
Heces :
Selenito
Agar Sangre
Muestra
genital :
Hektoen
Chocolate
BCP
Yersinia CIN
Sangre ANC Candida ID 2
Campylosel
Mac Conkey
CULTIVO
Eleccin de la temperatura adecuada:
- Bacteria : 37C
- Hongos : 30C
Incubador?
30C
37C
CULTIVO
Diferentes tipos de respiracin

1
CULTIVO
1 Aerobios estrictos
Requiere la presencia de Oxgeno
Su energa es obtenida a travs de una metabolismo
oxidativo: respiracin
Ej: Pseudomonas, Micobacterias
2 Anaerobios facultativos
Desarrolla con o sin oxgeno pero la mayor parte de la
energa producida proviene de la fermentacin
Ej: Enterobacteriaceae
CULTIVO
3 Anaerobios estrictos
Slo pueden desarrollar en ausencia de Oxgeno, ya que es
txico para este tipo de bacterias. Toda la energa producida
proviene de la fermentacin (metabolismo fermentativo)
Ej.: Fusobacterium, Eubacterium
4 Bacterias microaerfilas
Prefieren una atmsfera con cantidad reducida de O 2
Ej.: Campylobacter, Mycoplasma
5 Bacterias Capnfilas
Algunas bacterias prefieren atmsferas enriquecidas en CO 2,
es esencial para otros.
Ej.: Neisseria gonorrhoeae
CULTIVO
Elegir la atmsfera adecuada:

- Aerobios
- Aero-anaerobios
Jarra
sin generador
generador de
- Bacterias -aerfilos
- Anaerobios
- Bacterias capnfilas
microaer
generador de anaer
generador de CO2
CULTIVO
Fases de crecimiento Bacteriano
Recuento
bacteriano
3
2
1
Tiempo
24Hrs
48Hrs
CULTIVO
Fases del crecimiento bacteriano:
1. Fase de latencia:
Metabolismo reducido: adaptacin de la poblacin bacteriana a las nuevas
condiciones de cultivo.
2 Fase de crecimiento exponencial
Crecimiento extremadamente activo.
3 Crecimiento negativo y fase estacionaria
Comienzo de acumulacin de productos txicos, disminucin de los
nutrientes disponibles.
4 Fase de Declinacin
Autolisis bacteriana
IDENTIFICACION
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
Requerimientos : Obtener un cultivo puro (si la muestra
es polimicrobiana)
Primer paso : AISLAMIENTO

Inoculacin del germen en un agar nutritivo
1 bacteria
1 colonia
Aislamiento
1
2
3
4
Aislamiento
1
2
3
4
Segundo paso: IDENTIFICACION

Las bacterias se clasificacan de acuerdo con:
Familia
Gnero
Especies
Ejemplo:
Micrococcaceae
Staphylococcus
aureus
Ejemplo: Enterobacteriaceae
Escherichia
coli
S. aureus
E. coli
Examen microscpico:
Cocos o bacilos
Caractersticas de agrupamiento
Gram + o Gram
Observacion de colonias en las placas:
Tamao, color, aspecto, olor (!)

Hemlisis en agar sangre
(Streptococci... )
HEMOLISIS
-Hemolisis : hemlisis parcial
(halo verdoso alrededor de la colonia)
Ej. : Pneumococci
-Hemolisis : hemlisis total

(halo transparente alrededor de la colonia)
Ej. : Streptococci grupo A, B ...
-Hemolisis : no hemolisis
Ej. : Enterococcus faecalis, faecium

Tests de Orientacion:
Deteccin de enzimas respiratorias
Catalasa : Destruccin de perxido de hidrgeno

2 H2O2 2 H2O + O2
catalasa
Oxidasa : TMPD
incoloro
oxidized TMPD
oxidasa
rosa-violeta
(TMPD = N Tetra metil - para - fenilen - diamina)
Resultados de tests de Orientacion:

Morfologa
Gram
Catalasa, oxidasa
widefinirn la familia o el gnero, y nos permite elegir
la tira de identificacin correcta
Ejemplos :
Cocos, Gram +, Catalasa + Staphylococci
Cocos, Gram +, Catalasa Streptococci
Bacilos, Gram -, Oxidasa - Enterobacteriaceae
Estudio de caractersticas bioqumicas:
Estudio del metabolismo bacteriano (enzimas...)
Ejemplo :
Glucosa
Fermentacion de glucosa
Produccin de cido
Enzima
pH
Cambio de Color
TEST (+)
Sin enzima
TEST (-)
PRUEBAS BIOQUMICAS
Metabolismo de glcidos
Oxidacin o fermentacin de azcares:
glucosa, lactosa, sacarosa, arabinosa...
Metabolismo de protenas
Protenas: gelatina, leche, sangre...
proteasas, ureasa, desaminasas, decarboxilasas
Metabolismo de lpidos
lipasa, lecitinasa...
Aplicaciones
Medios de identificacin en tubos
20
15
14
25
10
19
13
24
18
12
23
17
30
11
22
29
16
28
21
27
26
Tiras de identificacin
Ej : Galera API, ID 32, tarjetas VITEK 1 / 2

Estudio de caractersticas antignicas
Reaccin inmonolgica: antgeno - anticuerpo
Ac fijos a partculas de ltex
Aglutinacin en presencia del antgeno correspondiente (bacteria...)
AGLUTINACION
bacteria
- latex
usando
aisladas
concolonias
Acs
- o usando
directamente las muestras.
Ventaja: rapidez (reaccin inmediata)
Identificacin en medios cromognicos:

Identificacin directa de bacterias en la placa: colonias
coloreadas
Para muestras comunes

Para baterias frecuentemente
encontradas
Ej.: CPS ID 3
Urina (E.coli, Proteus, Strepto. D)
Inters: ahorro de tiempo y dinero

Identificacion usando biologa molecular:
Identificacion de bacterias por fragmentos de DNA
especficos
usando colonias
o directamente usando la muestra
Ej : Gen Probe
Mycobacteria, Gonococci, Chlamydia...
Interes : Especificidad, ahorro de tiempo
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBITICA
Recuperacin
rpida
Objetivo:
Encontrar un tratamiento
efectivo para el paciente

1. Estudio In vitro de la actividad antibitica sobre una
bacteria aislada
Se realiza slo sobre patgenos
(no, sobre flora normal)
2. Interpretacin In vivo de la actividad antibitica:
Riesgo potencial del xito o falla del tratamiento

ANTIBIOTICOS
agentes antibacterianos
1928: Descubrimiento de la penicilina por

Sir A.Fleming

ANTIBIOTICOS
Origen:
- biologico: desarrolladas por microorganismos:
hongos, bacterias
- Qumico: producidos por sntesis
Accin: variable dependiendo de la familia de ATB

- inhibicin de la sntesis de la pared bacteriana
- alteracin de la membrana citoplasmtica
- accin sobre la sntesis proteica
- inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos

Los resultados que se informan a los
mdicos se clasifican como:
Sensible
Resistante
Intermedio

RESULTADOS
Bacteria Sensible: S
Bacterias que no crecen en presencia del ATB
El tratamiento con ese ATB resultar exitoso
Bacteria Resistente: R
Bacterias que crecen en presencia del ATB
El tratamiento con ese ATB resultar en falla
Intermedio: I
Resultado Intermedio
xito del tratamiento in vivo variable
Resistencia bacteriana
Natural:
Resistencia siempre encontrada en la msima especie bacteriana:

Mecanismo conocido
Ej.: Proteus mirabilis resistente a Tetraciclina
Adquirida:
Resistencia adquirida por una mutacion gentica, traspaso desde otra

bacteria, adquisicin de plsmidos, etc
Mecanismo presente slo en algunas cepas de dicha especie.
Debido a la posible presencia de resistencias adquiridas,

los tests de sensibilidad deben ser realizados para cada
bacteria identificada

Estudio de la CIM:
CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA
La menor concentracin de ATB capaz de inhibir el desarrollo visible de
la cepa estudiada.
Mtodo de dilucin en medio lquido
Ej :
MIC = 1g/ml
0
0,5
Concentracin antibitica (g/ml)
Diferentes tcnicas
Difusin en Agar (discos)

Galeras ATB
Tarjetas de sensibilidad Vitek
Tcnica de difusin en agar

Uso de un disco de papel de filtro impregnado
en el antibitico que se desea estudiar
Inocular total la superficie del gar con una

suspensin antibitica.
Colocar los discos sobre la superficie de la
placa.
Los ATBs difundirn en el gar.
Despus de una incubacin por 20 hs., la zona

de inhibicin de crecimiento aparecer
alrededor del disco. El tamao de la zona es
proporcional al valor de CIM.
Media de los dimetros de

inhibicin para cada
antibitico
F
E
Este dimetro se
corresponde con el valor
de la CIM
El diametro define el
informe como S, R, I
dependiendo de los
dimetros oficiales dados
por comites de expertos
Para poder ser confiable, el mtodo debe estar

estandarizado
ESTANDARIZACION DE:
- inculo: cantidad de bacterias
- Agar Mueller-Hinton:
Mueller-Hinton composicin del medio
- Espesor del agar: difusin del ATB
- Carga antibitica del disco

Galerias ATB:
Cada ATB (A, B, C,
D) es evaluados en
2 concentraciones
diferentes (c y C)
= Sin crecimiento
bacteriano
= Crecimiento
bacteriano
c
0
C
Control de crecimiento

Concentraciones crticas
Para cada antibitico, los comits internacionales de sensibilidad
antibitica fijan un rango crtico para saber si el ATB ser efectivo
in vivo o no ( a las dosis teraputicas)
C : Concentracin crtica Mxima

c : concentracin crtica Mnima
Concentraciones fijadasde acuerdo con la farmacocintica:
- unin a protenas,
- penetracin a varios sitios de accin,
- absorcion, metabolismo, y excrecin

Cepa sensible: MIC < c
El antibiotico testeado es activo sobre esa bacteria
Cepa con sensibilidad Intermedia: c < MIC < C

Las bacterias no seran afectadas por tratamientos en
dosis habituales, pero pueden verse afectadas por
altas dosis intravenosas o tratamientos locales.
Rango de riesgo
Cepa resistente: MIC > C

La bacteria resiste a las ms altas concentraciones de
ATB. El antibitico no ser activo in vivo.

Mtodos automatizados:
Estudio del crecimiento bacteriano en un medio
lquido o semislido en presencia de una o varias
concentraciones de antibitico
- ATB Expression
- mini API
26
21
16
11
27
22
17
12
28
23
18
13
29
24
19
14
30
25
20
15
10
- VITEK 1 and VITEK 2
RESUMEN
1.
2.
MUESTRA
EXAMEN MICROSCOPICO
3.
4.
CULTIVO
TESTS DE ORIENTACION
5.
Catalasa
Oxidasa
IDENTIFICACION
6.
Examen Directo
Gram
Manual : GALERAS API

Semi-automticos: ATB Expression - mini API
Automatizacin total: VITEK1 y VITEK2
Difusin en agar (discos)

Medio semislido (galeras ATB)
Medios lquidos (tarjetas VITEK1 Y VITEK2)
1.4 Principales muestras
Principales muestras en bacteriologa
1 - Orina
2 - Materia fecal
3 - Muestras genitales
Seguimiento de acuerdo con las
infecciones esperadas
INFECCIN URINARIA
INFECCIN URINARIA
Presencia de bacterias en orina

(normalmente estril)
Pathologa = cistitis, pielonefritis ...
Orina: es la muestra ms frecuentemente

recibida en el lab de bacteriologa
80% en mujeres
INFECCIN URINARIA
Bacterias patgenas:
Escherichia coli
Proteus
Enterococcus faecalis
Klebsiella
Pseudomonas
otross ....
S. saprophyticus
Streptococcus B
La distribucin de las bacterias difiere entre pequeos

laboratorios y laboratorios de hospitales.
INFECCIN URINARIA
Diagnstico de laboratorio:
Recuento:
Cantidad significativa de bacterias:
bacterias >105 bacterias / ml
Presencia de leucocitos: indican inflamacin

Presencia de glbulos rojos: si hay lesin de la mucosa
del tracto urinario
Identificacin
Prueba de sensibilidad ATB
Con tratamiento antibitico efectivo:
esterilizacin de la orina en menos de 48 hs
INFECCIN URINARIA
Da 1
Da 2
Colonias
Da 3
Resultados
Identificacin
- Aspecto de la
orina
- Examen
microscpico
- Cultivo
Inoculacin:
Tests de sensibilidad
1- Tiras de
identification
2- Tests de
sensibilidad
Cultivo estril:
Resultado negativo
DIARREA INFECCIOSA
FLORA INTESTINAL NORMAL
Bacterias comensales
Flora residente:
E.coli, otras Enterobacteriaceae

Enterococci, Lactobacilli, levaduras, anaerobios...
Flora de trnsito:
trnsito provenientes de la comida
Staphylococci, Bacillus, Pseudomonas ...
DIARREA INFECCIOSA
Bacterias patgenas:
Salmonella
Shigella
Campylobacter
Escherichia
Yersinia
Vibrio ...
La diarrea no es siempre es causada por bacterias:

virus y parsitos tambin son causas frecuentes
DIARREA INFECCIOSA
Examen macroscpico:
- Consistencia y aspecto de las heces
Examen microscpico:
- Deteccin de glbulos rojos y leucocitos
- Deteccin de bacterias mviles (Campylobacter, Vibrio..)
- Tincin de Gram: deteccin de un desbalance en la flora
DIARREA INFECCIOSA
Da 1
Da 2
Colonias
Da 3
Resultados
Identificacin
- Aspecto de la MF
- Examen
microscpico
Si hay scolonias
sospechosas, inocular:
1- Tiras de ID
Tests de
sensibilidad
2- Tests de sensibilidad
- Cultivo
Sin colonias
sospechosas:
cultivo negativo
INFECCIONES GENITALES
Flora normal:
Lactobacilli, Staphylococci, Corynebacteria,
Anaerobios...
Flora patgena:
Bacteria : N. gonorrhoeae, Treponema pallidum
(syphilis), Mycoplasma, Chlamydiae, Candida
albicans ...
Virus : Herpes genital
Parsitos : Trichomonas vaginalis
Muy patgenos en embarazadas:

Listeria, Streptococcus B
PATOLOGAS:
En mujeres:
- vaginitis, uretritis, cervicitis, salpingitis ..
- lesiones : chancro, lceras
En hombres:
- sindrome uretrogenital
- Lesiones de piel y mucosas
- Prostatitis
- Portador asintomtico
Examen macroscpico
- Aspecto de la muestra
Examen microscpico:
- Deteccin de GR, leucocitos y clulas epiteliales
- Deteccin de microorganismos mviles (Trichomonas)
- Deteccin de bacterias intracelulares (Gonococci)
- Tincin de Gram: deteccin de un desbalance en la flora
- Cantidad de bacilos de Doderlein (Lactobacilli)
Da 1
Da 2
Colonias
Da 3
Resultados
Identificacin
Si hay scolonias
sospechosas, inocular:
- Examen
microscpico
1- Tiras de ID
Tests de
sensibilidad
2- Tests de sensibilidad
- Cultivo
Sin colonias
sospechosas:
cultivo negativo
INFECCIONES HOSPITALARIAS
Infecciones adquiridas en el hospital 48hs despus de
la admisin:
infecciones urinarias, neumona, infecciones despus de una
ciruga...
Microorganismos resistentes al medio y a los ATBs

comnmente usados
Los ms frecuentes:
E. coli, S.aureus, Enterococos, Pseudomonas aeruginosa, Serratia,
Klebsiella, Acinetobacter, Enterobacter, Candida...
multirresistentes
El personal del hospital juega un rol muy

importante en la diseminacin de la epidemia
1.5 PRINCIPALES FAMILIAS DE

BACTERIAS
Clasificacin simplificada
GRAM +
- Staphylococci
COCOS
GRAM -
- Neisseria
- Streptococci
- Enterobacteriaceae
BACILOS
- Listeria
- No Enterobacteriaceae
- Corynebacteria
- Haemophilus
- Campylobacter
ESTAFILOCOCOS
Cocos Gram + en grupos, Catalasa +

20% de las bacterias aisladas en la rutina
Principales especies:
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophiticus
Patogenicidad:
Supuraciones, infecciones urinarias, septicemia, neumona, endocarditis, meningitis
Intoxicaxin por alimentos

Muestras:
pus, orina, hisopado farngeos, MF, LCR, sangre

Medios de cultivo:
No-selectivos: Agar sangre
Selectivos: Agar manitol salado
ESTREPTOCOCOS
Cocos Gram + en cadenas, Catalasa 9% de las bacterias aisladas en rutina
Principales especies y patogenia:
- Streptococcus pyogenes (A) : angina
- Streptococcus agalactiae (B) : meningitis de los RN
- Enterococcus faecalis, facium (D) : infecciones urinarias
- Streptococcus pneumoniae : otitis, neumona meningitis
- Streptococci spp: endocarditis
Muestras:
- orina, farngeos, esputo, muestras genitales, LCR, sangre
Medio de cultivo:
- No-selectivos: agar sangre
- Selectivos: Columbia CNA
Atmsfera de CO2 o ANA
ENTEROBACTERIACEAE
Bacilos Gram -, Oxidasa 60% de los aislamientos de rutina

Saprfitos o bacterias comensales (tracto digestivo...)
Principales gneros:
- Escherichia coli , Klebsiella, Proteus, Providencia
- Citrobacter, Enterobacter, Serratia
- Salmonella, Shigella, Yersinia
Patogenia: variada
Muestra:
- Todo tipo
Medio de cultivo:
- No-selectivo: Agar lactosa prpura
- Selectivos : Mac Conkey, Drigalski
NO ENTEROBACTERIACEAE
= No fermentadores de glucosa
Bacilos Gram - , Oxidase +/6% de los aislamientos
Bacterias saprofitas: patgenos oportunistas
Principales gneros:
- Pseudomonas aeruginosa
- Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobacter : Ox - Aeromonas, Chryseobacterium, Pasteurella
- Vibrio cholerae
Patogenia:
- Infecciones urinarias, supuraciones, septicemia, meningitis...
Muestras:
- orina, genitales, pus, sangre, LCR
Medio de cultivo:
- No selectivos : Agar lactosa purpura
CAMPYLOBACTER
Bacilos Gram -, Oxidase +
Bacterias muy mviles
Fuente de contaminacin: pjaros, pollo, cerdo
Contaminacin por ingestion de alimentos contaminados con
suelos
Patgenos oportunistas

- Helicobacter pylori : lcera gstrica
- Campylobacter coli, jejuni, fetus :
Infecciones intestinales, septicemia...
Muestra:
- heces, sangre
Medio de cultivo:
- No-selectivos : Agar sangre
- Selectivos : Campylosel
Atmsfera microaerfila
CORINEBACTERIAS
Bacilos Gram +, en letras chinas, Catalasa +

Flora normal de piel y mucosas
Grmenes ambientales: patgenos oportunistas
- Corynebacterium diphtheriae (patgeno estricto): Difteria
- Corynebacterium urealyticum : infecciones urinarias
- Corynebacterium jeikeium : endocarditis, septicemia
Muestras:
- orina, hisopados farngeos, pus, sangre
Medios de cultivo:
- No-selectivos: agar sangre
LISTERIA
Bacilos Gram +, Catalasa +

Bacterias ambientales: patgenos oportunistas
Principal especie:
- Listeria monocytogenes
Patogenia:
- Intoxicacion alimentaria (leche, queso crudo, carne...)
- Meningitis, encefalitis, abortos, septicemia...
Muestras:
- Sangre, LCR, (muestras genitales)
Medios de cultivo:
- No selectivos: agar sangre ( -hemlisis)
NEISSERIA
Diplococos Gram -, Oxidasa +
- Neisserias comensales: tracto respiratorio
- Patgenos estrictos:
Neisseria gonorrhoeae (Gonococos) : infeccin genital
Neisseria menigitidis (Meningococos) : meningitis, septicemia
Muestras:
- genitales, LCR, sangre
Medios de cultivo: bacterias fastidiosas

- No-selectivos: agar chocolate
- Selectivos: agar chocolate VCAT3
Atmsfera de CO2
HAEMOPHILUS
Cocobacilos Gram -, Oxidasa +

Flora Normal: comensales de rinofarnge
Principales especies:
- Haemophilus influenzae
- Haemophilus parainfluenzae
Patogenia:
- Otitis, respiratorios, ocular, infecciones genitales,
meningitis, septicemia...
Muestras:
- farngeos, esputo, muestras genitales, LCR, sangre
Medio de cultivo: bacterias fastidiosas

- No-selectivos: agar chocolate
- Selectivos: agar chocolate Haemophilus
Atmsfera de CO2
ANAEROBIOS
Bacilos o cocos Gram - Gram +, (algunos
esporulados)
Bacterias ambientales o flora normal (bucal,
vaginal, intestinal, cutnea)
Principales gneros:
- Clostridium
- Bacteroides
Patogenia:
- Pus, peritonitis, neumonia, abscesos, infecciones genitales,
septicemia...
Muestras:
- pus, genitales, sangre...
Medios de cultivo:
- No-selectivos: Agar sangre, Schaedler
- Selectivos: Schaedler Neo-Vanco agar
Atmsfera anaerbica

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MICROBIOLOGIA

Visibles a travs del microscopio

Infecciones urinarias, Diarrea

HIV, Hepatitis C,B, Rubeola

Toxoplasmosis, Malaria, Tenia

1.2 ESTUDIO DE BACTERIAS

Multiplicacion y diseminacin dentro del organismo

- Clostridium tetani (tetanos)

Ej : E. coli, presente en flora normal y potencial causante de

Requerimiento de factores de crecimientos

Encontrar el tratamiento adecuado para el

Aislamiento de la bacteria responsable de la

Identificar esta bacteria

LOS DIFERENTES PASOS EN EL

LCR= Lquido cfalo-raqudeo

Uso de material estril

Inocular la muestra inmediatamente

Las bacterias son microorganismos vivientes! Es

recoleccin: recoleccin al pie de la cama del paciente

37C y/o medio de transporte

Muestras genitales, LCR, sangre, pus

El medio de transporte previene la desecacin de las muestras

1 gota entre porta y cubreobjeto :

Presencia y conteo de bacterias

Usada para clasificar bacterias

1 Violeta de Genciana o Cristal - Violeta

2 Solucin iodada o Lugol

3 Decoloracin con alcohol acetona

Objetivo x 100 con aceite de inmersin

Para visualizar bacterias intraleucocitarias

Eleccin del medio de cultivo correcto:

medio bsico+ factores de

Adicin de antibiticos u otros

Sangre ANC Candida ID 2

Diferentes tipos de respiracin

Elegir la atmsfera adecuada:

Primer paso : AISLAMIENTO

Segundo paso: IDENTIFICACION

Observacion de colonias en las placas:

Tamao, color, aspecto, olor (!)

-Hemolisis : hemlisis total

Ej. : Enterococcus faecalis, faecium

Catalasa : Destruccin de perxido de hidrgeno

(TMPD = N Tetra metil - para - fenilen - diamina)

Resultados de tests de Orientacion:

Estudio del metabolismo bacteriano (enzimas...)

Medios de identificacin en tubos

Ej : Galera API, ID 32, tarjetas VITEK 1 / 2

Identificacin en medios cromognicos:

Para muestras comunes

Urina (E.coli, Proteus, Strepto. D)

Inters: ahorro de tiempo y dinero

Mycobacteria, Gonococci, Chlamydia...

Interes : Especificidad, ahorro de tiempo

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBITICA

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1928: Descubrimiento de la penicilina por

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