TEST DE

ANTIGLOBULINAS
(TEST DE COMBS)
 HISTORIA
1908 : Moreshi, Define el Principio
1945 : Coombs, Mourant y Race; Acs Rh
1946 : Coombs y Co. Sensibilizacin in vivo
1949 : Reactivos sujetos a reglamentacin
1957 : Dacie y Co; fracciones Complemento
1985 : Ultima enmendadura por FDA

1
9/19/2017
 LA PRUEBA DE
ANTIGLOBULINA HUMANA
FINALIDAD
* Deteccin de Anticuerpos No Aglutinantes
(Incompletos) Adsorbidos a la membrana
del Glbulo Rojo.
 LA PRUEBA DE
ANTIGLOBULINA HUMANA
FINALIDAD
* Deteccin de Fracciones de Complemento
Fijados en la membrana del Glbulo Rojo.
C3d C3d

C3d C3b
C3b
 LA PRUEBA DE
ANTIGLOBULINA HUMANA
FUNDAMENTO
Basado en el uso de:
* Anticuerpos Anti-Inmunoglobulina Humana
: Anti -

* Anticuerpos Anti-complemento
Anti -
:
 LA PRUEBA DE
ANTIGLOBULINA HUMANA
FUNDAMENTO
* Evidenciacin mediante la
formacin de Puentes de Unin:

Anti - Anti -
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
PRODUCCIN DE REACTIVOS DE ANTIGLOBULINA
HUMANA (Suero de Coombs)
Sueros de Coombs Sueros de Coombs
MONOESPECFICOS POLIESPECFICOS

Antisuero (Anti - )
Policlonal (Anti C3b, C3d) Antisuero
Policlonal
Antisuero (Anti - ) (IgG-C3d)
Policlonal (Anti IgG)

IgG
Humano
Antisuero
C3b, C3d
Antisuero (Anti - ) Policlonal-
Humano
Monoclonal (Anti IgG) Monoclonal
(IgG-C3d, C3b)
Antisuero (Anti - )
Monoclonal(Anti C3b, C3d)
REACTIVOS REACTIVOS
MONO - POLI -
ESPECFICOS ESPECFICOS
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
REACTIVOS DE ANTIGLOBULINA HUMANA (Suero de Coombs)

REACTIVO COMPOSICIN
Reactivo Policlonal de Conejo.
Policlonal Contiene Anti-IgG y Anti-C3d.
POLI - (Puede tener otros Ac. Anti-Ig
ESPECFICOS y/o Anti-Complemento.)

Policlonal- Reactivo Policlonal-Monoclonal.

(Anti - )
Monoclonal Contiene Anti-IgG humana policlonal
+
(Anti IgG)
de conejo y Anti-C3b y -C3d
monoclonal murino.
(Anti - )
(Anti C3b, C3d)

Reactivo Monoclonal.
Monoclonal Contiene Anti-IgG, Anti-C3b y -C3d
monoclonal murino.

Segn FDA
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
REACTIVOS DE ANTIGLOBULINA HUMANA (Suero de Coombs)

REACTIVO COMPOSICIN
Reactivo Policlonal de Conejo.
Policlonal Contiene Anti-IgG sin Anti-
complemento.(no necesariamente
especfica de cadena gamma).
MONO
ESPECFICOS Monoclonal
a cadenas Reactivo Monoclonal.
(Anti - ) pesadas de Contiene Anticuerpos contra
(Anti IgG)
IgG cadenas pesadas de IgG .

Monoclonal Reactivo Monoclonal.

Contiene Anti-IgG monoclonal murino.

Segn FDA
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
REACTIVOS DE ANTIGLOBULINA HUMANA (Suero de Coombs)

REACTIVO COMPOSICIN

Policlonal
Anti C3b/C3d Contiene solo anticuerpos
Anti C3d/C4b/C4d
Anti-Complemento;
MONO -
ESPECFICOS - solamente contra el (los)
(Anti - )
(Anti-Complemento)
Monoclonal componente(s) designados
Anti C3d
Anti C3b/C3d - No contiene Anti-Ig

Segn FDA
LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
ROL DEL COMPLEMENTO
EN LA PRUEBA DE COOMBS

COMPLEMENTO:

* Nomenclatura: C1, C2, C3, C4 .C9

y Pr- inhibidoras

* Protenas sricas envueltas en el proceso de

lisis celular (GR)
* Activados por: (va clsica)
- Anticuerpos fijadores de complemento
- Complejos inmunes
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
ROL DEL COMPLEMENTO
EN LA PRUEBA DE COOMBS

COMPLEMENTO:
* GR sensibilizados
* Inmunoglobulinas adsorbidas en memara del GR
* Complemento fijado en la membrana del GR

* GR sensibilizados Hemlisis Intra o Extra-

vascular (destruccin del GR)

* En membrana del GR sufren degradacin

Fracciones de Complemento (C3b, C3d, C4b, C4d )
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
ROL DEL COMPLEMENTO
EN LA PRUEBA DE COOMBS

COMPLEMENTO:

* Unico indicador de sensibilizacin del GR en

ciertos casos:
- Presencia de Acs. fros (IgM) no aglutinantes
pero fijadores de complemento.
- Sndrome de anticuerpos fros.
- Algunos casos de AHAI por Acs. calientes
(niveles muy bajos de Ig).
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA (PAD)

o TEST DE COOMBS DIRECTO (TCD)

FINALIDAD
* Deteccin de GR sensibilizados in vivo.

- Anticuerpos y/o Complemento fijados en la

membrana del GR en el torrente sanguneo.
LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA (PAD)
o TEST DE COOMBS DIRECTO (TCD)

Suero de Coombs
poliespecfico
GR sensibilizados (Anti-IgG
Anti-C3d) REACCIN
in vivo POSITIVA
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA (PAD)

o TEST DE COOMBS DIRECTO (TCD)

TCNICA
1.- 01 gota de GR (paciente) lavados, al 3-5%
2.- 02 gotas de Suero Antiglobulina Humana
(poliespecfico o monoespecfico IgG)
3.- Centrifugar segn las normas
4.- Lectura
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA (PAD)

o TEST DE COOMBS DIRECTO (TCD)

APLICACIONES DEL TEST DE COOMBS DIRECTO (TCD)

1.- Investigacin de Reacc. Hemolticas

Transfusinal.
2.- Investigacin de EHRN.
3.- Investigacin de Auto-anticuerpos.
4.- Investigacin de Anemias Hemolticas
Inmunes por Drogas.
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA (PAI)

o TEST DE COOMBS INDIRECTO (TCI)

FINALIDAD

* Deteccin de GR sensibilizados in vitro.

- Anticuerpos y/o Complemento libres
en suero, los cuales se incuban con GR
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA (PAI)
o TEST DE COOMBS INDIRECTO (TCI)

GR
Incubacin
+ =
Lavado Suero de Coombs
poliespecfico
(Anti-IgG
GR sensibilizados
Anti-C3d) REACCIN
Acs in vitro
(Suero) POSITIVA
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA (PAI)
o TEST DE COOMBS INDIRECTO (TCI)

TCNICA
1.- 01 gota de GR (de laboratorio) lavados, al 3-5%.
2.- 02 gotas de Suero (paciente).
3.- Centrifugar segn las normas, leer y anotar
resultados.
4.- Incubar a To Amb. por 15 min.
5.- Centrifugar, leer y anotar resultados.

* GR de Laboratorio: GR de paquete globular

GR de gentica conocida (Clulas
Pantalla o Panel)
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA (PAI)
o TEST DE COOMBS INDIRECTO (TCI)

TCNICA
6.- Aadir 02 gotas de Albmina Bovina al 22%.
7.- Centrifugar, leer y anotar resultados.
8.- Incubar a 37o por 15 min.
9.- Centrifugar, leer y anotar resultados.
10.- Lavar 4 veces con SSF y decantar bien.
11.- Aadir 02 gotas de Suero Antiglobulina Humana
(poliespecfico o monoespecfico IgG)
12.- Centrifugar, leer y anotar resultados.
13.- Cel. Cont. Coombs si fuera necesario.
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA (PAI)

o TEST DE COOMBS INDIRECTO (TCI)

APLICACIONES DEL TEST DE COOMBS INDIRECTO (TCI)

1.- Investigacin y titulacin de Anticuerpos.

2.- Deteccin e Identificacin de Anticuerpos
contra GR, en suero.
3.- Fenotipificacin de Antgenos de GR.
4.- Pruebas de Compatibilidad.
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

TTULO Y SCORE DEL TEST DE COOMBS

IMPORTANCIA DEL TTULO Y SCORE

* Relacin directa entre el Ttulo de la prueba de

Coombs y la cantidad de molculas de Ig y
complemento fijados en membrana del GR.
* Evaluacin del grado de hemlisis o destruccin
de GR en pacientes con AHI (AI).
* Uso de reactivos policlonales y/o monoclonales.
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

TTULO Y SCORE DEL TEST DE COOMBS

IMPORTANCIA DEL TTULO Y SCORE

* Grado de Aglutinacin Potencia del Ac (aprox.)

* Score Resultado ms til (Semicuantificacin)
* Uso del Ttulo asociado al Score:
- Evaluacin de la respuesta al tratamiento.
- Comparar la potencia de dos o ms anticuerpos.
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

TTULO Y SCORE DEL TEST DE COOMBS

EQUIVALENCIA ENTRE EL
GRADO DE AGLUTINACIN Y EL SCORE

Grado de Aglutinacin Score

4 + 10
3 + 8
2 + 6
1 + 4
1/2 + visibles a simple vista 3
1/2 + visible al microscopio 1
0 o ausencia de aglutinacin 0
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
TTULO Y SCORE DEL TEST DE COOMBS

IMPORTANCIA DEL TTULO Y SCORE

Caso 1
TTULO del test de
128 256 512 1024 2048 4096 SCORE
Coombs (Anti-IgG)

MUESTRA 1 4+ 4+ 3+ 3+ 2+ 1+ 46
MUESTRA 2 3+ 3+ 2+ 1+ 0 0 26
Caso 2
TTULO del test de SCORE
Coombs (Anti-IgG) 128 256 512 1024 2048 4096

MUESTRA 1 4+ 4+ 3+ 3+ 2+ 1+ 46
MUESTRA 2 3+ 3+ 2+ 2+ 1+ 1+ 36
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

FACTORES QUE AFECTAN

LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

FASE DE SENSIBILIZACIN IN VITRO

* Temperatura.
* Tiempo de incubacin.
* Medio de reaccin (SSF-Albmina-LISS).
* Proporcin Suero/Clulas.
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

FACTORES QUE AFECTAN

LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

FASE DE LAVADO
* Tiempo de lavado.
* Volumen de SSF.
* Decantacin de la SSF.
* Contaminacin.
* Elucin (durante el procedimiento).
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

FACTORES QUE AFECTAN

LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

FASE DE CENTRIFUGACIN Y LECTURA

* Tiempo y velocidad de centrifugacin.

* Tcnica de lectura.
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
FUENTES DE ERROR
FALSOS POSITIVOS

Dependientes del reactivo y/o reactantes

* Contaminacin bacteriana de los GR, suero
o SSF usada en el lavado.
* GR TCD (+) empleados en TCI.
* GR poliaglutinantes - Poliaglutinacin.
* SSF contaminada por metales pesados o slice
coloidal de los envases en que se almacenan.
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
FUENTES DE ERROR
FALSOS POSITIVOS

Dependientes de la tcnica
* Centrifugacin excesiva.
* Mala tcnica de lectura.
* Habilidad del profesional.

Dependientes del material

* Uso de materiales mal lavados y/o contaminados.
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
FUENTES DE ERROR
FALSOS NEGATIVOS

Dependientes del reactivo y/o reactantes

* Muestras guardadas por mucho tiempo o mal
conservadas y/o contaminadas.
* Cantidad insuficiente de Ig o complemento.
* Reactivo de Antiglobulina inactivada por
contaminacin y/o vencimiento.
* Tipo de Reactivo usado (mono/poliespecfico).
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
FUENTES DE ERROR
FALSOS NEGATIVOS

Dependientes de la tcnica

* Mala tcnica de lectura.

* Mala tcnica de lavado y decantacin.
* Lisis de GR durante el procedimiento (BM).
* Omisin de algn componente (suero, coombs).
* Habilidad del profesional.
 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

ESTANDARIZACIN Y CARACTERSTICAS DE
LOS REACTIVOS DE ANTIGLOBULINA

* Proporcionar una sensibilidad adecuada del

reactivo de antiglobulina humana.
* Control de Calidad del Reactivo en el laboratorio.
* Uso de reactivos poli/monoclonales estndares.
* Uso de Clulas Control de Coombs (CCC).
* Sensibilidad del reactivo de antiglobulina humana:

100 - 500 molculas de IgG o C3.

 LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

OTRAS TCNICAS DE ANTIGLOBULINA HUMANA

* ELISA
* CITOMETRA DE FLUJO
* AGLUTINACIN EN MICROCOLUMNA
(Microesferas de vidrio-Gel).
* MICROPLACAS
* AUTOANALIZADORES
* USO DE ENZIMAS O ADITIVOS (x ej. Polibrene).
* Otros.
Botn Botn
solido solido
de GR de GR

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Fondo claro Fondo turbio