Isolasi Enzim

adalah kegiatan untuk mengeluarkan/memisahkan enzim dari

sumbernya
Tujuan Metode Isolasi
Memekatkan enzim hasil
fermentasi Ekstraksi, koagulasi,
Mendapatkan enzim dalam sentrifugasi, filtrasi, dan
jumlah besar kromatografi

Tahapan Isolasi Enzim

(1) Menghilangkan bahan-bahan terlarut dari bahan baku
(2) Mengisolasi produk dari larutan encer yang dihasilkan untuk menghasilkan
lebih larutan pekat
(3) Memurnikan produk, menghilangkan spesies lain yang mungkin mirip
(4) Pemurnian akhir (polishing)
 Isolasi Enzim Lipase
Enzim lipase dapat diisolasi dengan metode pengendapan
protein melalui penambahan garam mineral (salting out)
Metode Ekstraksi*
Enzim lipase yang dihasilkan dalam bentuk cair
harus dipekatkan terlebih dahulu untuk
mendapatkan ekstrak enzim yang lebih pekat.
Pemekatan dilakukan dengan penambahan
Amonium sulfat pada kejenuhan 90% Amonium sulfat
Solubilitas dalam air tinggi
*Metode ekstraksi: memisahkan enzim Tidak mengandung toksik untuk
(protein) yang terkandung dalam larutan enzim
dengan menggunakan garam mineral, Harga relatif murah
sehingga enzim yang merupakan fraksi Dalam jumlah banyak dapat
berat akan terendapkan di bawah. bertindak sbg stabilisator enzim
itu sendiri
 Hasil fermentasi dipisahkan antara cairan dan cake-nya

Cairan ini dipekatkan dengan amonium sulfat hingga

kejenuhan 90%

Didinginkan sampai suhu di bawah 10oC

Sentrifugasi dengan putaran 15.000 rpm selama 20

menit pada suhu 4oC

Pengujian aktivitas lipase dan kandungan protein

Meningkatnya dengan metode Lowry
konsentrasi protein
diikuti dengan
meningkatnya
aktivitas lipase dari
0,9167 U/ml menjadi
4 U/ml, atau
peningkatan lebih dari
4 kali lipat.
 Purifikasi Enzim Lipase
Cairan yang telah didinginkan, dilakukan pengadukan
dengan sentrigasi selama 20 menit dengan kecepatan
15000 rpm. Lalu diuji aktivitasnya menggunakan
Metode titrimetri dan ditentukan kadar proteinnya
menggunakan Metode Lowry.
Tabel 3. Isolasi Enzim
Lipase
Total Konsentrasi Total Aktivitas Aktivitas Yield (%
Tahapan volume Protein protein lipase lipase aktivitas
(ml) (mg/ml) (mg) (U/ml) total (U) lipase)
Enzim lipase encer 100 0,52 52,4 0,92 91,67 100
Enzim lipase setelah dipekatkan
17 2,56 43,47 4 68 74,18
dengan (NH4)2SO4 hingga 90%
Keterangan: Yield merupakan perbandingan antara aktivitas lipase total sebelum dipekatkan dengan
aktivitas lipase total setelah dipekatkan, yang dinyatakan dalam persen.