MACROMOLCULAS

BIOMOLCULAS
Protenas, cidos nucleicos, carbohidratos y
lpidos.
 Enlaces
La presencia de molculas a base de C, N, O y H,
permite que estas exhiban caractersticas qumicas
como los diferentes tipos de enlace o interacciones
moleculares, que condicionan tanto las propiedades
fsicas, qumicas, funcionales y estructurales. Estas
caractersticas son el punto de partida para el estudio,
anlisis e identificacin de las diferentes
macromolculas en el laboratorio.
 SEPARACIN DE
MACROMOLCULAS

Centrifugacin
Decantacin

(Tamao molecular y diferente solubilidad)

 CENTRIFUGACIN
Una de las propiedades fsicas de las
macromolculas es que por su alta densidad
tienden a sedimentarse en medio acuoso, lo que
permite que se formen diminutos grnulos. Esta
caracterstica fsica hace posible separar
macromolculas con alto peso molecular mediante
la centrifugacin.
 DECANTACIN
La decantacin es un mtodo fsico de separacin de
mezclas especial para separar mezclas heterogneas,
estas pueden ser exclusivamente lquido - lquido
slido - lquido. La decantacin se basa en la diferencia
de densidad (fsica)|densidad entre los dos
componentes, que hace que dejados en reposo, ambos
se separen hasta situarse el ms denso en la parte
inferior del envase que los contiene. De esta forma,
podemos vaciar el contenido por arriba.
 Solubilidad
Modificadas por:

Cambios de pH Sales
Carga elctrica solventes orgnicos

Pruebas qumicas
Separadas
especficas
 OBJETIVOS
Extraer y reconocer macromolculas presentes
en la clula de levadura Saccharomyces
cerevisiae
 DISCUSIN
Maceracin: Material abrasivo, arena.
cido tricloroactico: (cambios en el solvente pH y
carga elctrica acenta la diferencia de solubilidad -
precipitacin)
Decantacin: (mtodo de separacin, diferencias de
solubilidad)
Centrifugacin: Masa (tamao molecular) y la densidad
(determinada por su estructura).
Esta separacin se hace en orden ascendente de masa
y densidad. Primero se purifica la de menor masa y
densidad: Glucogno.
 DISCUSIN
Despus de sedimentar? Precipitado? Sobrenadante?
Glucgeno + etanol: Disminuir la constante dielctrica?
Constante dielctrica del etanol oscila entre 1 -10.
Por qu el etanol fro? Por que se quiere evitar que la
constante dielctrica aumente con el aumento de la
temperatura y a temperaturas bajas la energa cintica
es menor y es ms fcil precipitarla.
Centrifugar
Precipitado se le agrega LUGOL.
PURIFICACIN E IDENTIFICACIN DEL
GLUCOGENO
MOLCULA DE GLUCOGENO
 DISCUSIN
Sedimento inicial:

NaCl 10%
calentamiento
Centrifugacin

Las protenas se precipitan o muestran mnimo de

solubilidad cuando su pH corresponde al pH isoelctrico,
al que la molcula no posee carga elctrica?
 DISCUSIN
pH isoelctrico:
La sal: Aporta aniones y cationes que producen la
ionizacin de los grupos R disociables, equilibrando las
cargas elctricas, en estas condiciones no existe
repulsin electrosttica entre molculas de protenas
vecinas y tienden aglomerarse y precipitar (Lehninger 1987).
 Discusin
Calentamiento: Contribuye con el proceso de
precipitacin, las protenas pierden su estructura
terciaria y secundaria, conservando intacta la primaria.
El calor incrementa la cintica de las molculas
individuales, los enlaces que les confieren su
ESTRUCTURA se rompen, hacindolas ms solubles,
fenmeno conocido como DESNATURALIZACIN.
(Lehninger 1987).
 Discusin
Despus de la centrifugacin: Sedimento de
protenas y un sobrenadante de cidos
nucleicos y solucin de NaCl.
Porqu no precipita primero el ADN que tiene
mayor masa?
 Discusin
Los cido nucleicos no se sedimenta, por que al
desnaturalizarse no se rompen los enlaces
covalentes entre el azcar y la base
nitrogenada, pero si se abre la estructura
duplohelicoidal(Lehninger 1987).
 Discusin
Al sobrenadante con los cidos nucleicos y la
solucin de NaCl se le agrega el etanol fro.
Centrfuga
Sedimento estn los cidos nucleicos.
Adiciona amortiguador salino pH 7: regule el pH
y mantenga un estado inico ptimo de las
molculas.
Se adiciona reactivo de ORCINOL (reaccin de
color verde es positiva): ARN.
 Prueba de orcinol o prueba de Bial
OH
OH
Cl Cl
3FeCl3
3HCl
H3C OH
H3C OH
Cl
 Discusin
Sedimento de protenas: se agrega una
solucin de NaCl para redisolverlas.
Agrega NaOH y solucin de sulfato cprico:
BIURET.
La prueba de Biuret detecta la presencia de
enlaces peptdicos y es positiva cuando estn
presentes dos o ms.
 Discusin
Elalcal sirve para convertir el complejo
en una solucin de sodio soluble. El color
se debe a la presencia de un complejo de
coordinacin con Cu+2 en el cual el enlace
peptdico de las protenas conduce al
complejo estable en el cual se forman de
dos a cinco miembros (Plummer, 1981)
BIURET
REACCIN DE BIURET
Parte de cadena peptdica de protenas
R R R R

CH CH CH CH

N C N C N C N C

H O H O H O H O

Complejo Purpura
R R R R

C C C C

N C N C N C N C

Cu O
Cu O Cu O Cu O
 BIBLIOGRAFIA
Caicedo, L.D. Gua de Laboratorio de Bioqumica General1, Prctica de laboratorio 2.
Macromolculas.
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MATHEWS4, C. K, VAN HOLDE, AHERN, K.G. Bioqumica. Tercera Edicin, Prentice Hall,
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BROCK. Biologa de los Microorganismos. 10 Edicin, Prentice Hall, Madrid, Paginas: 52.
Microsoft Encarta 2007 [DVD]. Microsoft Corporation, 2006. "Hongos.", Levadura,
Hidratos de carbono, ARN, Protenas, Carbohidratos, cidos nuclicos.

http://es.wikipedia.org/wiki/Gluc%C3%B3geno
 La estructura y la polaridad de la molcula de agua hacen que esta sea un
disolvente capaz de reducir las fuerzas de atraccin que existen entre
partculas de cargas opuestas (o de reducir la repulsin entre partculas de
cargas iguales). La constante dielctrica no tiene unidades, pero es una
medida de esa reduccin y se define como:

El punto isoelctrico es el pH al que una sustancia anftera tiene carga

neta cero. El concepto es particularmente interesante en los aminocidos y
tambin en las protenas. A este valor de pH la solubilidad de la sustancia
es casi nula.
Las molculas complejas, tales como las protenas, se combinan con los
iones hidrgeno y con otros iones presentes en la disolucin, dando lugar a
la carga neta de la molcula. A la concentracin de iones hidrgeno, o al
pH, para el cual la concentracin del ion hbrido de una protena es mxima
y el movimiento neto de las molculas de soluto en un campo elctrico es
prcticamente nulo, se le denomina punto isoelctrico.