Seeros

1822-1884

Ley de la uniformidad
1809-1882
Ley de la segregacin
Ley de la recombinacin
independiente de los factores

1866-1948
 el acceso al nivel molecular
1941: George Beadle y E. L. Tatum
introducen Neurospora como organismo modelo, con el que
establecen el concepto un gen-una enzima: los genes son
elementos portadores de informacin que codifican enzimas.
1944: Oswald Avery, Colin McLeod y Maclyn
McCarty: demuestran que el "principio transformador" es
el ADN.
1953: James Watson y Francis Crick
Estructura del ADN
 Genoma bacteriano I

ADN cromosmico y extracromosmico

N de cromosomas : 1
Pares de bases: 5.000.000 en 1.3 mm
Generalmente haploides
Genes estructurales codificadores (protenas)
Genes del ARN ribosmico
Genes promotores y operadores: controlan la
expresin de otros genes.
 Genoma bacteriano II

Operones: genes estructurales

expresados a partir de un promotor
esprecfico (ej: opern lac con la
secuencia promotora, represora y
estructural, permeasa y acetilasa)
Policistrones: operones con varios
genes estructurales
 Replicacin

Origen: OriC
Helicasa-Primasa-ADN polimerasa
Semiconservadora: se usan ambas
cadenas como plantillas
Topoisomerasas
 Transcripcin

Control negativo: los genes se expresan (no se

expresan si hay un represor)

Control positivo: los genes NO se expresan (se

expresan en presencia de un inductor)

Regulacin
 Topoisomerasas

Topoisomerasa Tipo Subununidades Genes

I I TopA topA
II (ADN girasa) II GyrA gyrA
GyrB gyrB
III I TopB topB
IV II ParC parC
ParE parE
Superenrrollamiento del ADN
Acidos nucleicos
ADN-ARN-Protenas
 Variaciones bacterianas

Fenotpica
Genotpica
Mutaciones
Recombinacin bacteriana: afecta
la informacin gentica por medio
del ADN cromosmico ,plasmdico,
ADN fgico o transposones
 Mutacin

Mutacin
 Mutacin

Espontnea
Inducida por mutgenos
Frecuencia de mutacin: proporcin de mutantes en
una poblacin
Grado de mutacin: probabilidad que la mutacin
ocurra durante un intervalo de tiempo particular
(Ej: una generacin bacteriana) . Se expresa como:
mutacin/clula/por divisin
 Mutaciones puntuales

TRANSICION
Purina reemplazada por otra purina o pirimidina por
otra pirimidina
5-bromouracilo; 2-aminopurina
TRANSVERSION
Purina reemplazada por pirimidina o pirimidina por
purina
Etil etanolsufonato
 Deleciones y Adiciones

Prdida y agregado de segmentos de ADN

Espontnea
Inducida: por rayos x, rayos UV,
tratamiento con cido nitroso
Recombinacin bacteriana

Conjugacin

Transduccin

Transformacin
TRANSFORMACION
 Pasaje de ADN
Transformacin
 Tipos de plsmidos

Plsmidos : conjugativos ( grandes , 60 - 120

kilobases ) y no - conjugativos ( pequeos , 1,5 - 15
kilobases )
- plsmidos de virulencia: infecciones, resistencia
- plsmido metablico: F'lac no presenta enzima que
degrada lactose , Rhizobium fijadora de Nitrgeno
CONJUGACION
 Pasaje de ADN

Conjugacin
 Factor de fertilizacin

1946: Lederburg y Tatum

Forma bsica del Factor F : plsmido
Clula con factor F: clula frtil
Plsmidos F con otros genes :plsmido F
Plsmido F puede integrarse al cromosoma

Otros plsmidos promotores de la transmisin del

ADN : plsmidos conjugativos
 Tipos de bacterias segn el factor F (factor de
fertilizacin)

F- Hfr
F-
F+
A B
F A B
C
Hfr E D ED C

F F+
A BC C D A B
C
D D
E E
 Factores de transferencia

F+ x F- = 2F+
Hfr x F- = Hfr +F-
F x F- = F x F diploides parciales
F frecuencia de transmisin elevada e integracin
espontnea mayor que la del factor F
TRANSDUCCION
Fago transductante
 Pasaje de ADN

Transduccin

Generalizada: cualquier segmento

Especializada: slo los adyacentes

 Un poco de historia
Mendel
Teora cromosmica de la herencia (hiptesis de
Walter Sutton y Theodore Boveri) 1902
Griffith 1928- Principio transformante (experiencia en
ratones con S.pneumoniae)
Avery, MacLeod y McCarty (1944-1946): aislaron el
principio de las bacterias muertas
Delbruck y Luria: trabajos con bacterifagos
Lederberg y Tatum: transferencia de material gnico
entre bacterias (1946 P.Nobel 1958)
Hershey y Chase (1952): marcacin radiactiva de
protenas
Arber, Nathans y Smith: enzimas de restriccin : 1978
P.Nobel
 ADN recombinante

Extraccin del ADN del organismo objeto de estudio

(donante)
Fraccionamiento con enzimas de restriccin Cortes
especficos
Insercin de los fragmentos del donante en pequeas
molculas capaces de replicacin autnoma (vectores)
Este ADN recombinante se utiliza para transformar
bacterias
Introduccin en el organismo adecuado para ser
amplificado
Proceso de amplificacin: clonacin
 Enzimas de restriccin

Tres categoras: I, II y III

Depende del tipo de secuencias que reconocen, la
naturaleza del corte y la naturaleza del enzima.
I y III cortan por puntos distintos al de
reconocimiento: patrones de corte aleatorio
II reconocen sitios especficos y cortan por esos
puntos (secuencias de bases inversamente
repetidas)
 Estrategias de clonaje

Generacin directa de extremos cohesivos

G--------------------------CTTAA
AATTC--------------------------G

Unin de extremos poli-dA/poli-DT

Unin de extremos romos
 Conjugacin

E.coli EstR
E.coli AmpiR

AmpR
EstR
+
 Resultado

Medio sin ATB Medio con Amp

Medio con Est Medio con Amp + Est

 Cambios en el ADN

Mutacin
Transicin: base por base igual
Transversin: una base por base diferente
Reparacin
Recombinacin
Elementos mviles: plsmidos, transposones,
bacterifagos
 Mecanismos de recombinacin

Transferencia de material gentico por:

Conjugacin
Transformacin
Transduccin

Homloga (legtima)
No homloga (ilegtima)
 Conjugacin
Acoplamiento bacteriano
Transferencia unidireccional de la dadora a la
aceptora
Pilus sexual
Presencia en la dadora de plsmido F
conjugativo (tiene los genes para su propia
transferencia )
Plsmido libre o unido al cromosoma
Transduccin y transformacin

Transduccin
Fago transductor
Especializada: fragmento adyacente a la
insercin del fago
Generalizada: almacenamiento accidental del
ADN de la bacteria en la cpside del fago
Transfomacin
ADN bacteriano
Bacteria aceptora
 Transposicin

Transposones: pueden transferir ADN

de una posicin a otra dentro de la
bacteria
Secuencias de insercin
Complejos
Asociados con fagos
 Ingeniera gentica

Vectores de clonacin
Enzimas de restriccin
ADN ligasa