Development and Validation

of Improved
Reversed Phase-HPLC
Method
for Simultaneous
Determination of Curcumin,
Demethoxycurcumin
and Bis-Demethoxycurcumin

Siti Hawa
Abstrak
– Metode kromatografi cair kinerja tinggi fase balik isokratis (HPLC)
menggunakan RP Kolom C18 dikembangkan untuk penentuan kurkuminoid
secara simultan. Fase gerak terdiri dari asetonitril: 0,1% asam trifluro-asetat
(50:50) dan laju alir 1,5 mL min) 1 dan elusi dipantau pada 420 nm.
– Validasi dalam kondisi yang dipilih menunjukkan bahwa yang dipilih metode
sensitif, selektif, tepat dan dapat direproduksi dengan respons linear
detektor untuk penentuan simultan kurkumin (C), demethoxycurcumin
(DMC) dan bis-demethoxycurcumin (BDMC).
– Batas deteksi adalah 27,99, 31,91 dan 21,81 ng mL) 1 untuk C, DMC dan
BDMC, masing-masing. Batas kuantisasi untuk C, DMC dan BDMC, adalah
84,84, 96,72 dan 66,10 ng mL) 1, masing-masing. Kisaran linear adalah 100
hingga 600 ng mL) 1. Mean ± SD persen pemulihan kurkuminoid adalah
99,87 ± 0,34, 100,09 ± 0,48 dan 100,10 ± 0,60% dari C, DMC dan BDMC,
masing-masing. Selanjutnya, metode ini digunakan untuk kuantisasi
kurkuminoid dari rimpang kunyit.
Pendahuluan
– Kunyit (Curcuma longa L. Famili: Zingiberaceae), sumber yang kaya
polifenolik
– Senyawa adalah aditif makanan terkenal. Terlepas dari
penggunaan sehari-hari di dapur sebagai bumbu dan rempah-
rempah, telah digunakan dalam pengobatan tradisional India
untuk pengobatan sejumlah penyakit seperti batuk, demam,
penyakit kuning, penyakit hati dan kencing, luka, masalah inflamasi
sendi, eksim , penyakit kulit parasit dan dingin [1]. Rimpang juga
telah ditemukan berguna dalam pengobatan anemia, infeksi
bakteri dan virus.
Pendahuluan
– Curcumin adalah konstituen kimia aktif utama rimpang kunyit. Secara
kimiawi itu diaryl heptanoid dan merupakan sekitar 4% dari kunyit
rimpang. Kurkumin yang tersedia secara komersial adalah campuran
alami curcuminoids yaitu. curcumin (C) (77%), demethoxycurcumin
(DMC) (18%) dan bis-demethoxycurcumin (BDMC) (5%).
– Curcumin telah dipelajari secara ekstensif untuk anti-inflamasi, anti-
oksidan, anti-Alzheimer, anti-mikroba, anti-kanker, hipoglikemik,
penyembuhan luka, imunomodulator dan aktivitas menginduksi
apoptosis. Dalam beberapa tahun terakhir kurkumin telah menjadi
subyek berbagai artikel ulasan
– Metode RP-HPLC dikembangkan untuk penentuan kurkuminoid secara
bersamaan dan divalidasi dalam kondisi yang dipilih. Metode ini dapat
digunakan untuk penentuan kurkuminoid dari ekstrak kunyit dan secara
komersial tersedia kurkumin.
Alat dan Bahan
– Pure Curcumin
– Solusi stok C, DMC, BDMC dan kurkumin komersial (campuran tiga
curcuminoids), mengandung 1 mg mL) 1 masing-masing disiapkan dalam
asetonitril dan disimpan dalam lemari es.
– Penyiapan Sampel
– Bubuk kunyit (1 g) diperoleh dari pasar lokal diekstraksi dengan
heksana (50 mL) dengan menggunakan ekstraktor Soxhlet untuk 1
jam. Ekstrak heksana dibuang, dan bubuk itu diekstrak kembali
dengan 50 mL metanol selama 2 jam. Satu mililiter solusi ini
dipindahkan ke 10 mL labu ukur, dan volume yang dibuat dengan
metanol.
Hasil
– RP-HPLC
– Untuk mengoptimalkan parameter HPLC, beberapa komposisi fase
gerak adalah dievaluasi. Pemisahan meningkat dengan jumlah air
dalam fase gerak tetapi itu memperpanjang waktu berjalan.
– Meskipun panjang lari lebih pendek pada proporsi asetonitril yang
lebih tinggi di fase gerak, miskin atau tidak ada resolusi teramati.
Kurkumin dan analog demetoksi yang terjadi secara alami adalah agen
pengompleks yang kuat, yang dapat membentuk ikatan antar-dan
intra-molekul. Oleh karena pemisahan kromatografi yang berhasil
sepenuhnya tergantung pada sejauh mana reaksi fase diam dengan
kelompok di-keton kurkuminoid yang sangat reaktif.
Kesimpulan
– Metode RPHPLC isokratik sensitif dan selektif dikembangkan dan
divalidasi untuk penentuan kurkuminoid secara simultan dari campuran
dan ekstrak metanol rimpang kunyit. Metode ini memberikan sensitivitas
yang signifikan (LOD dan LOQs adalah £ 32 dan £ 97 ng mL) 1, masing-
masing) untuk semua tiga curcuminoids yang diuji. Metode yang
diusulkan telah memberikan Rs> 2, menunjukkan pemisahan curcumin
yang efisien, demthoxycurcumin dan bis-dethoxycurcumin dari kurkumin
yang tersedia secara komersial (campuran C, DMC dan BDMC) dan
rimpang kunyit juga.