3º

1º INTRODUCCIÓN
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

CRISPR
Repeats
Clustered
Palindromic
Regularly
Short
Interspaced

Repeticiones palindrómicas cortas agrupada

y regularmente interespaciadas»
 3º
1º INTRODUCCIÓN
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

SISTEMA INMUNE
DE BACTERIAS Y
ARCHEAS
Edición genética
 3º
1º INTRODUCCIÓN
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

«Parte de la biología que estudia

los genes y los mecanismos que
regulan la transmisión de los
caracteres hereditarios»
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

• 1886 monje Gregor Mendell investigación sobre hibridación e

LEYES DE MENDELL
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

• 1915 Los principios básicos de la genética mendeliana

habían sido aplicados a una amplia variedad de
organismos

• 1925 Estudios sobre genética poblacional y genética de la

evolución

• 1933 Thomas Hunt Morgan y su grupo reciben el premio

nobel por sus estudios en la mosca Drosophila
melanogaster (mosca de la fruta)  Demuestran que los
cromosomas son los portadores de los genes

• 1941 Edward Lawrie Tatum y George Wells Beadle

 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

• 1944 Oswald Theodore Avery, Colin MacLeod y

Maclyn McCarty aíslan ADN como material genético

• 1946 Herman Muller descubrió que los genes podían

mutar con la radiación

• 1950 Erwin Chargaff muestra que los cuatro nucleótidos

no están presentes en los ácidos nucleicos en
proporciones estables, pero que parecen existir algunas
leyes generales. La cantidad de adenina (A), por ejemplo,
tiende a ser igual a la de timina (T)

• 1953 Watson y Crick describen el modelo de la doble

 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

• 1956 Joe Hin Tjio y Albert Levan determinan que es 46 el

número de cromosomas en los seres humanos.

• 1962 se produce el primer experimento de clonación con

éxito (renacuajo)

• 1970 Se descubren las enzimas de restricción, lo que

permite a los científicos cortar y pegar fragmentos de
ADN
«El ADN forma una copia de parte de su mensaje sintetizando una
1970 Francis
• molécula Crick enuncia
de ARN mensajero (proceso el dogma transcripción)(se
denominado central de la
biología
realiza en elmolecular:
núcleo), la cual constituye la información utilizada por
los ribosomas para la síntesis de una proteína (proceso de
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Dogma central de la biología molecular

 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

6
7
I - Replicación 4

7 5
3
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

II - Transcripción
1

4
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

II - Transcripción
1

2
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

III - Traducción
I - Activación de los aminoácidos
1

2
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

III - Traducción
2
3 4
II – Iniciación de la síntesis

1
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

III - Traducción 2
III – Elongación de la cadena polipeptídica y finalización de la síntesis

3
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

• 1972 Walter Fiers y su equipo fueron los primeros en

determinar la secuencia de un gen

• 1983 Kary Banks Mullis descubre la reacción en

cadena de la polimerasa (PCR)

• 1995 Se secuencia por primera vez el genoma de un

organismo vivo (Haemophilus influenzae)

• 2003 El Proyecto Genoma Humano publica la primera

secuenciación completa del genoma humano con un
99.99% de fidelidad
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Diagnóstico prenatal
Síndrome Down, espina bífida, Genética Clínica
síndrome Edwars, s. Patau… Oncología, hematología,
neurología…

Cribados neonatales
Hipotiroidismo congénito, la fenilcetonuria,
la MCADD, la fibrosis quística, la anemia Reproducción asistida
falciforme, la LCHADD, y la acidemia
glutárica tipo 1 Diagnóstico preimplantacional
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

DIAGNÓSTIC
O
Mitigar los síntomas

Conocer las mutaciones o alteraciones

 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Agosto 2017

El 83% de los participantes vieron como la

enfermedad remitía. Un año después, 2/3
seguían libres de cáncer.
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Noviembre 2017
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Terapia génica para curar la

Mapeado genético  Encontrar defectos gen.
afección (evitando terapias
Corregir el defecto antes del nacimiento sust…)

Evitar enfermedad y posibles abortos

 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Métodos de edición
genoma
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

I - Nucleasas con dedos de

Zinc (ZFNs)
- Finales de los 90´s.
- Enzimas restrictivas  Dominios de unió
- Dominios diseñados para unión a dia
- Muchas uniones fuera de diana
- Caro
- Largo tiempo para diseñar la enzima
- Solo una edición genómica a la vez.
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

II - Nucleasas tipo activadores de

transcripción (TALENs)
- Finales de los 00´s
- 2 dominios  DNA de unión y escisión
- Mas flexibles y mayor número de dianas

- Muy caro
- Solo una edición genómica a la vez
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

III – Virus adenoasociados

recombinantes (rAAVs)
- Virus no patogénicos  Introducen
- Sitios de introducción predecibles
- DNA del virus modificado
- Compatible con técnica CR
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Haloferax
mediterranei

IV – CRISPR
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Complem
gRN
Cas entario a
A DNA a
cortar

Endonucleasa que corta RNA formado

el DNA en las dos por
hebras Cr RNA tracrRNA
(maduración)
Reconoce secuencia
PAM
Forman un complejo que busca el DNA diana
gRNA busca la diana
Cas(9)corta la hebra por el sitio indicado.
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

gRNA
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

spCas9
saCas9 (< tamañ

gRNA creado Cas9 Cfp1 (otro PAM

Reconoce otro
PAM
Reconoce
dsDNA y
ssRNA
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

- Introducción DNA
foráneo
Gen Cas9 yo gRNA
del
propio plásmido
- Off Target
mutaciones
- DNA
Cas9 y gRNA
free
-Fragmentados
DNA free de
- Mejor eficiencia en
Cas9 y gRNA
la edición
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Especificid
ad de
tejidos

Distrofias
musculares
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º
4ºAPLICACIONES
APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

• Cura de cataratas causada por defecto genético en

ratones (Wu et al. 2013)

• Disminución permanente de los niveles de colesterol

alterando el gen PCSK9 (Ding et al. 2014)

• Supresión de crecimiento de células de cáncer de cérvix

in vivo (HPV16 +) (Zhen et al. 2014)

• Reemplazo del gen HBB causante de la β-Thalasemia

en embriones humanos (Liang et al. 2015).  MUCHA
CONTROVERSIA.
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º
4ºAPLICACIONES
APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

• Eliminar genes que provocan rechazo de organos de

cerdos para futuros xenotrasplantes (Feng W et al. 2015)

• Modificación de genes de los receptores CCR5 y CXCR4

evita la infección de linfocitos CD4 por VIH-1 (Lui et al.
2017)

• Cura de distrofia muscular de Duchenne en ratones (Zhu

et al. 2017)

• Detección de la replicación del VHB en ratones (Liu et al.

2018)
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º
4ºAPLICACIONES
APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

• Restauración del fenotipo “guardián” p53 en células

cancerosas (Sergiu et al 2018)

• Modificación de mosquitos Anopheles impide la

transimisión de la malaria (Dong Y. et al. 2018)

• Se esta trabajando en antibióticos selectivos para

especies multirresistentes.

• Investigando la posibilidad de knock out de los genes

de resistencia de MRSA, CRE…
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º
4ºAPLICACIONES
APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

• 2016 FDA aprueba cultivo sin regulación

de
setas de botón blanco modificadas mediante CRISPR
para evitar el enranciamiento.

• Creación cepa de trigo resistente al Oidio (hongo) (gao et

al. 2014)

Maíz, planta del tabaco, arroz, tomate,

patata…
• Creación de ratones, ratas y monos de laboratorio
Knock out (reducción de tiempo de meses a semanas)
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º
4ºAPLICACIONES
APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

¿Cura fibrosis quística?  Mutación un

par de bases
¿Cura anemia hereditaria  Mutación un par de
bases
¿Cura enfermedad de Huntington? 
Gen defectuoso
¿Cura esquizofrenia?  Factores
genéticos

¿Cura autismo?
¿Cura SIDA?
¿Cura Cáncer?
Tests genéticos
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º
4ºAPLICACIONES
APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

5 de enero de 2018

Identification of Pre-Existing Adaptive Immunity to Cas9 Proteins in

Humans. (Charlesworth et al. Jan. 5, 2018)

Presentamos respuesta inmune adaptativa frente a

 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º
4ºAPLICACIONES
APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Identification of Pre-Existing Adaptive Immunity to Cas9 Proteins in

Humans. (Charlesworth et al. Jan. 5, 2018)

Muestras de sangre de 34 individuos

22 bebes 12 adultos sanos

¿Presentan respuesta inmune a saCas9 o s

 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º
4ºAPLICACIONES
APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Identification of Pre-Existing Adaptive Immunity to Cas9 Proteins in

Humans. (Charlesworth et al. Jan. 5, 2018)

79% 65%
presentaro presentaro
n AC vs n AC vs
saCas9 spCas9

46% 0%
adultos adultos
presentab presentab
an LT vs an LT vs
saCas9 spCas9
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º
4ºAPLICACIONES
APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Identification of Pre-Existing Adaptive Immunity to Cas9 Proteins in

Humans. (Charlesworth et al. Jan. 5, 2018)

Los anticuerpos contra Cas9 pueden unirse a la enzima en

el torrente sanguíneo, antes de que haya tenido la
oportunidad de actuar. Y las células T que se dirigen a Cas9
podrían destruir las células en las que se expresa la
proteína, eliminando las células "corregidas" y
potencialmente desencadenando un peligroso ataque
generalizado a los propios tejidos del cuerpo.
SOLUCIONES

Búsqueda y desarrollo de En desarrollo Cas9 que

Alterar las Cas9 existentes
Cas9 de bacterias que no solo actúan una vez se
para que eviten el sistema
infecten o colonicen encuentran dentro de las
inmune
nuestro organismo células evadiendo el SI
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º
4ºAPLICACIONES
APLICACIONES 5º CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

De forma reversible
 3º
1º INTRODUCCIÓN 2º HISTORIA 4º APLICACIONES 5º5ºCONCLUSIONES
CONCLUSIONES
FUNCIONAMIENTO

Hasta la fecha, el sistema CRISPR/Cas9 es la

herramienta mas potente, sencilla, rápida,
segura y económica de edición genética hasta
la fecha. (65€ kit preparado)
Es además la herramienta mas prometedora
para acabar con enfermedades genéticas,
infecciosas, metabólicas...
Técnica mas importante para el completo
conocimiento del genóma y de funciones
biológicas básicas.
Hay varios ensayos clínicos en marcha (cáncer
pulmón y otros cánceres en china). En 2018 en
Europa comenzarán E.C. para beta talasemia o
anemia falciforme. Se espera que haya en 2020
varias decenas de ensayos clínicos en marcha.